nº1/04 - Izasa

LA REVISTA DEL GRUPO INDUSTRIA E INVESTIGACIÓN N
: 1/04
O
IZASA LAB
www.izasa.es
Editorial
Durante las primeras semanas de 2004 están produciéndose novedades interesantes en nuestra organización. De entre estas novedades cabe destacar las
siguientes:
En nuestra División de Ciencias de la Vida destaca el nuevo acuerdo firmado con la compañía HAMILTON Bonaduz AG para distribuir en nuestro país
sus sistemas de manipulación de líquidos Microlab® de su División de
Robótica y de prestaciones tan interesantes para este sector. Este acuerdo incluye, entre otros, los modelos Microlab STAR, Microlab AT Plus y Microlab
FAME así como sus accesorios, consumibles y mantenimiento. HAMILTON es
una de las compañías líderes en tecnología de sistemas automáticos para la
manipulación de líquidos con unos altísimos estándares de calidad desde hace
más de 45 años.
Foto portada: Copo de nieve (7x). Differential Interference
Contrast (DIC).
En nuestra División Analítica destaca el nuevo acuerdo firmado con la firma
suiza CAMAG Chemie-Erzeugnisse & Adsorptionstechnik AG fundada en
1958 en Muttenz y que lidera desde hace décadas el mercado de la
Cromatografía Plana también conocida como Cromatografía en Placa Fina
(TLC) que es un método potente, fiable y económico para análisis cualitativo y
cuantitativo en sectores tales como farmacéutico, biotecnológico, toxicológico,
cosmético y alimentación, especialmente en productos naturales e ingredientes
de plantas.
Sumario
Teléfonos de interés
Departamento de Atención al Cliente
(DAC)
Tfno: 902 20 30 80 • Fax: 902 20 30 81
Centro de Recepción de Avisos (CRA)
Tfno: 902 12 04 89 • Fax: 934 01 03 30
Departamento de Suministros
Tfno: 902 20 30 90 • Fax: 902 22 33 66
Tecnología y servicio
Edita:
Redacción: División Analítica GII
Supervisión y edición: APRIORI
❀ Papel ecológico
2
Identificación de diferentes especies de Valeriana por Cromatografía Plana (HPTLC)
3
Cromatografía Plana: CAMAG
4
Niveles de detección de ppt en el campo de los PAH mediante GCMS
6
Reducción del tiempo de Análisis de Volátiles con el GCMS-QP2010 de SHIMADZU
8
Aumento de Sensibilidad en GC y GCMS. Análisis de Pesticidas
10
Software IRSolution de SHIMADZU para trabajo en FTIR
12
Nuevos Sistema de Fluorescencia
14
Imagine la Perfección en Imagen Digital. Microscopios de Iinvestigación ECLIPSE 80i
16
Imagine la Microscopía en perfecto Confort…
18
aliQuot dispensador automático en Microplaca para pequeños volúmene, de GENETIX
19
Novedades en Análisis Térmico
20
Color en Cítricos y Tomates (aprobado por la USDA) con HUNTERLAB
21
AA-6300. Análisis Multielemental y validación del sistema
22
Normativa FDA 21 CFR parte 11 aplicada a valoración
24
Fraccionamiento de células en microplacas por ultrasonidos
25
Preparación de Muestras para Proteómica. Digestión directa sobre membranas de PVDF
26
Bombas de Jeringa serie D de alta precisión de la firma ISCO
28
Validacion de temperatura Multi Vaso con la nueva sonda digital de HANSON
29
La Microscopía Electrónica de Transmisión , Túnel y de Fuerzas, en trabajo simultáneo
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CROMATOGRAFÍA PLANA
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Identificación de
diferentes especies de Valeriana por
Cromatografía Plana (HPTLC)
En este artículo se detalla el procedimiento experimental para la
identificación de diferentes especies de Valeriana mediante su
huella dactilar por Cromatografía Plana de Alta Eficiencia (HPTLC)
empleando diferentes condiciones de detección
bandas de 10 mm, espaciadas 6 mm,
a 8 mm desde el borde inferior del
plato.
Preparación de muestras
Se toman 0.2 g de Valeriana triturada recientemente. Se agita en 5 ml
de CH2Cl2 durante un minuto, se deja
reposar durante 5 minutos y se filtra.
El filtro se lava con 2 mL de CH2Cl2.
Se evapora el filtrado junto con el
lavado hasta sequedad. Se disuelve
el res¡duo en 0.2 mL de CH2Cl2.
El desarrollo del cromatograma
se lleva a cabo en una cámara de
desarrollo vertical de 10 x 10 cm de
fondo doble, saturada con fase móvil
en filtro de papel durante 10 minutos.
La distancia de desarrollo es de 55
mm.
La detección se realiza empleando un sistema de documentación
(CAMAG
DigiStore,
CAMAG
VideoStore).
La Figura 1 muestra el cromatograma observado con luz UV 254
nm.
Las Figuras 2 y 3 muestran el cromatograma tratado con spray de
reactivo HCl-acético, secado en aire
frío, calentado a 110 ºC durante 5
minutos. Inspeccionado bajo luz visible (Figura 2) y luz UV 366 nm
(Figura 3).
La Figura 4 muestra el cromatograma tratado con spray de reactivo
anisaldehído, secado en aire frío,
calentado a 120 ºC durante 2 minutos y observado bajo luz visible.
Las pistas en los cromatogramas
corresponden a:
1)
Valeriana officinalis
(autentificada)
2)
Valeriana officinalis
(Pacífico)
3)
Valeriana officinalis
(Holanda)
4)
Valeriana radix (PHH8)
5)
Ácido valeriánico
6)
Valeriana stichensis
7)
Valeriana wallichi (India)
Opcionalmente puede prepararse
un patrón disolviendo 1 mg de ácido
valeriánico en 0.5 mL de CH2Cl2.
Preparación de reactivos
Reactivo anisaldehído: se mezcla
en un baño de hielo 9 mL de H2SO4,
85 mL de metanol, 10 mL de ácido
acético y 0.5 mL de anisaldehído.
Reactivo HCl-Acético: se mezclan
20 mL de ácido acético con 80 mL de
HCl.
Figura 1. Detección UV 254 nm
Figura 2. Tratamiento con reactivo HCl-acético y
detección con luz visible.
Figura 3. Tratamiento con reactivo HCl-acético y
detección con luz UV 366 nm.
Figura 4. Tratamiento con reactivo anisaldehído
y detección con luz visible.
Condiciones cromatográficas
Como fase estacionaria se emplean platos HPTLC de gel de sílice 60
F254 de 10 x 10 cm (Merck o equivalente).
Como fase móvil se emplea una
mezcla de hexano, acetato de etilo y
ácido acético (65:35:0,5).
La aplicación de muestra se realiza empleando un aplicador automático (CAMAG Linomat 5 ó ATS4). Se
aplican 3 µL de muestra o patrón, en
Hoja respuesta Ref. 1
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Cromatografía Plana: CAMAG
La compañía Suiza CAMAG está plenamente dedicada a la Cromatografía Plana. Desde 1961
desarrolla y produce sofisticados instrumentos y software para esta utilísima técnica analítica.
Ventajas de la Cromatografía
Plana
La Cromatografía Plana (TLC Thin-Layer Chromatography, HPTLC
- High Performance Thin-Layer
Chromatography) es una técnica
separativa moderna aceptada universalmente
como
un
método
extraordinariamente flexible, fiable y
económico. Incluso si se usan de
forma rutinaria otras técnicas, como
HPLC o electroforesis capilar, la
Cromatografía Plana tiene un lugar
en el laboratorio. En muchos casos,
ofrece la mejor solución, y además
puede emplearse como método de
confirmación.
Aplicaciones
La Cromatografía Plana encuentra aplicación en campos muy diversos, siendo de especial relevancia:
• Industria Farmacéutica, donde
es especialmente adecuada
para test de uniformidad de con
tenido y otros ensayos de control de calidad.
• Alimentación.
• Productos naturales, extractos
vegetales, hierbas (Figura 1).
• Cosméticos.
• Medioambiente, pesticidas en
aguas potables.
• Investigación bioquímica.
• Toxicología, análisis forense y
de doping.
Figura 3. CAMAG Linomat 5 para aplicación semiautomática de muestra en bandas por spray.
• Derivatización.
• Evaluación densitométrica del
cromatograma.
• Documentación del
cromatograma.
Aplicación y dosificación de
muestra
Figura 1. Identificación de diferentes especies de
Valeriana.
Las características más destacables de la Cromatografía Plana incluyen:
• Enorme flexibilidad.
• Análisis paralelo de muchas
muestras.
• Extrema claridad, ya que permite el examen visual de todas las
muestras y sus componentes.
• Preparación de una muestra
simple, dado que la fase estacionaria solo se usa una vez.
• Posibilidad de evaluación múltiple del plato con diferentes
parámetros, dado que todas las
fracciones de la muestra quedan
almacenadas en el plato.
4
Figura 2. CAMAG Nanomat 4 para aplicación manual
de muestra en puntos.
¿Qué instrumentación se
requiere?
La selección de la técnica de aplicación de muestra y del dispositivo a
emplear depende del volumen de
muestra, número de muestras a aplicar y de la precisión y grado de automatización requeridos. La oferta de
CAMAG incluye sistemas sencillos
La clave del éxito está en contar
con un sistema completo e integrado
de instrumentos y software, seleccionado en función de los requerimientos analíticos. CAMAG dispone de
instrumentos y herramientas para
todos los pasos en Cromatografía
Plana:
• Platos TLC/HPTLC.
• Aplicación y dosificación de
muestra.
• Desarrollo del cromatograma.
Figura 4. CAMAG ATS4 para aplicación automática de
muestra en puntos, bandas o rectángulos.
Hoja respuesta Ref. 2
CROMATOGRAFÍA PLANA
manuales para aplicación de muestra en puntos (CAMAG Nanomat 4 Figura 2), equipos semi-automáticos
para aplicación de muestra en bandas por spray (CAMAG Linomat 5 Figura 3) y sistemas completamente
automáticos para aplicación de
muestra en puntos, bandas o rectángulos, así como derivatización precromatográfica y adiciones (CAMAG
ATS4 - Figura 4).
Figura 7. Densitómetro CAMAG TLC Scanner 3
Evaluación densitométrica y
documentación del cromatograma
Figura 5. Cámaras de desarrollo vertical.
En todos los tipos de densitometría, la señal de una fracción del cromatograma se compara con la señal
de fondo del plato. Para análisis
cuantitativo, se compara la señal de
una muestra desconocida con la de
patrones de calibración desarrollados en el mismo plato.
tal (CAMAG DigiStore -Figura 9-,
CAMAG VideoStore). La adquisición
digital de imágenes ha reemplazado
en gran medida a los sistemas fotográficos tradicionales con fines de
documentación de cromatogramas,
dadas las ventajas en cuanto a facilidad de archivo y posterior recuperación de la imagen sin cambios.
Desarrollo del cromatograma
El desarrollo del cromatograma
puede realizarse en tanques de
vidrio verticales (Figura 5) o en
cámaras de desarrollo horizontal.
Estas últimas permiten diferentes
configuraciones: saturado, no saturado, pre-acondicionado y sandwich.
También existen equipos automáticos en los que todos los parámetros
quedan bajo control, aumentando
por tanto la repetibilidad (CAMAG
ADC) o para el desarrollo en gradientes (CAMAG AMD 2 - Figura 6).
Figura 6. CAMAG AMD 2 para desarrollo de cromatogramas en gradientes.
Hoja respuesta Ref. 2
Figura 8. Vista 3D del barrido de una pista a 31 longitudes de onda diferentes.
La densitometría clásica emplea
un haz de luz de longitud de onda
seleccionable para barrer las pistas
del cromatograma, mientras se mide
la luz difusa reflejada. Es posible trabajar en absorbancia o en fluorescencia. El densitómetro CAMAG TLC
Scanner 3 (Figura 7) opera en el
rango espectral desde 190 nm hasta
800 nm, con alta selectividad espectral. Además es posible la identificación de las fracciones del cromatograma obteniendo su espectro de
absorción.
También es posible realizar la
evaluación
del
cromatograma
mediante un sistema de imagen digi-
Figura 9. Sistema de evaluación y documentación
CAMAG Reprostar 3 con cámara digital.
Software
El software CAMAG “winCATS Planar Chromatography Manager”
está basado en un nuevo concepto
que integra todas las funciones
necesarias para la Cromatografía
Plana. Los módulos individuales pueden combinarse de acuerdo a las
necesidades. Durante el análisis,
todos los pasos llevados a cabo por
instrumentos controlados desde el
software winCATS se ejecutan automáticamente y quedan documentados.
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Extraordinaria sensibilidad en el
análisis de PAH con el nuevo GCMS QP2010 de SHIMADZU.
Niveles de detección de ppt en el campo de los PAH
El nuevo QP2010 es el cromatógrafo de gases con detector selectivo de masas con cuadrupolo más
sensible. Esta gran sensibilidad se debe a tres factores fundamentales:
1.- Nuevo diseño de la fuente de
iones, que favorece la generación de
iones y facilita el acceso para el mantenimiento.
Tabla 1.- Respuesta del análisis de la patrón con una concentración de 500ppt
(tiempo de retención, ión utilizado para calcular el área, área)
2.- Sistema de vacío formado por
dos bombas turbomoleculares de
260 l/s y 65 l/s, y una bomba rotatoria. Este sistema asegura un vacío
extremadamente bajo y estable,
hasta con flujos de columna de 15
ml/min.
3.- Nuevo detector con prefiltro
para el aumento de la sensibilidad.
En la siguiente aplicación se
muestra la alta sensibilidad de este
equipo en el análisis de hidrocarburos policiclicos aromáticos (PAH)
conforme al método 525.2 de la EPA.
Equipamiento
El GCMS utilizado para esta aplicación es el QP2010, el cual incorpora el cromatógrafo de gases GC2010 con control avanzado de flujo
de última generación. Para la inyección demuestras se han utilizado: el
inyector AOC20i y el carrusel de
muestras AOC20s con capacidad de
hasta 150 muestras.
El portal de inyección es el SPL2010 se trata del inyector split-splitless que incorpora de serie el GCMS
QP2010. Este viene equipado con un
liner de 3,4 mm de diámetro interno.
La columna de la firma Resteck tiene
unas dimensiones: 30m x 0.25mm x
0.25 micras.
Figura1.- Cromatograma del patrón diluido hasta 500ppt en el GCMS-QP2010.
El software utilizado para controlar el equipo y tratar los datos obtenidos es el GCMSsolutions, el cual pertenece a la plataforma LabSolutions
de Shimadzu. Se trata de un software de 32 bit orientado al control del
GCMS-QP2010 con un diseño intuitivo y fácil de manejar. La aplicación
muestra gráficamente los procedi6
Hoja respuesta Ref. 3
CROMATOGRAFÍA / GCMS
Figuras 2 a 5.- Cromatogramas del patrón con una concentración de 50ppt.
mientos operativos en una barra de
asistencia que, junto con las funciones Wizard, simplifican la entrada de
los parámetros necesarios para trabajar con el equipo.
La operación automática es posible ya que el software es capaz de
realizar controles de parámetros
introducidos por el usuario en base a
los resultados de los análisis, gracias
a las funciones de control de calidad.
De este modo, el equipo se puede
parar automáticamente en el caso de
que los resultados obtenidos no se
ajusten a los valores esperados (i.e.
rango de concentración). Con el fin
de satisfacer los requerimientos de
las GLP (Good Laboratory Practice),
las condiciones del equipo en el
momento del análisis, así como los
datos, son almacenados en un solo
fichero de datos.
Patrones
Los patrones proceden de
AccuStandards Inc. Las muestras se
prepararon por dilución desde 0.5
microg/ml (500 ppb) hasta 0.0005
microg/ml (500 ppt).
Condiciones del espectrómetro de
masas
El método de trabajo del QP2010
se definió para un rango de masas
entre 45 y 400. La velocidad de barrido se definió para obtener entre 10 y
15 puntos para el pico mas estrecho
del cromatograma.
Condiciones del cromatógrafo de
gases
En el GC-2010 se definió la curva
de temperatura y con el control avanzado de flujo (AFC) se ajustó el programa de presiones para obtener
una velocidad lineal constante del
gas portador en la columna. Con el
equipo puesto a punto el último pico
sale en menos de 28 minutos.
Resultados
Como resultados se muestran los
cromatogramas obtenidos para los
análisis de 500 ppt junto con una
tabla con los tiempos de retención,
ión utilizado para el cálculo de área y
el área (figura1 y tabla 1). También se
muestran los análisis realizados con
diluciones de 50 ppt (figuras 2 a 5).
Hoja respuesta Ref. 3
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Reducción del tiempo de Análisis de Volátiles
con el GCMS-QP2010 de SHIMADZU
¿Es posible acortar el tiempo de análisis y alcanzar niveles de detección de ppt en el análisis de
VOC? El sistema de muestreo por espacio en cabeza (Head-Space) es la forma más habitual de
analizar y cuantificar los compuestos orgánicos volátiles en muestras de agua. Normalmente este
sistema de inyección se acopla a un equipo de cromatografía de gases con detector de masas.
Dada la importancia que está
adquiriendo el análisis de las aguas,
la duración de estos análisis se convierte en un punto en el que se
podría mejorar para aumentar la productividad del laboratorio.
La duración de los análisis se
puede reducir de varias formas: reduciendo la longitud de la columna,
aumentando el flujo de gas portador,
aumentando la temperatura del
horno y las rampas de temperatura,
pero estos modos de acelerar los
análisis dan lugar al empeoramiento
significativo de la resolución.
El mejor modo de aceptar los análisis es disminuyendo el diámetro
interno de la columna. Aun así, la
resolución del flujo de gas portador
en un sistema de HS-GCMS, provoca la reducción de la sensibilidad
debido a la disminución de la cantidad de gas introducido en la columna, y por otro lado el ensanchamien-
Figura 1.- Cromatograma de los VOC (2ppb).
Figura 2.- Cromatograma del Bromoformo en modo SIM (0.1ppb y blanco).
to de los picos del cromatograma. El
agua introducida en el espectrómetro
se puede convertir en un problema
debido a que puede afectar a las condiciones de vacío y por tanto provocar fluctuaciones en la sensibilidad.
El GCMS-QP2010 de SHIMADZU
ofrece alta sensibilidad y tiene una
capacidad de vacío extraordinaria
gracias a las dos bombas turbomoleculares (260L/s y 65L/s). Estas
características permiten reducir los
Figura 3.- Curvas de calibración de los trihalometanos.
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Hoja respuesta Ref. 4
CROMATOGRAFÍA / GCMS
En la tabla 3 están los resultados
de repetibilidad para 3 análisis consecutivos de los 4 trihalometanos
(Cloroformo, bromodiclorometano,
dibromoclorometano y bromoformo)
con concentraciones de 0.1 microg/l
(0.1ppb).
Figura 4.- Repetibilidad de los cromatogramas.
Curvas de calibración
tiempos de análisis con columnas de
diámetro interno pequeño.
ellos. La duración del cromatograma
es de tan solo 9 minutos.
Esta aplicación muestra el ejemplo de la reducción del tiempo en un
ciclo completo, desde 30 hasta 15
minutos entre dos análisis, cuando
se analizan muestras de compuestos
orgánicos volátiles, en este caso 23
analitos.
Sensibilidad y repetibilidad
Separación
El bromoformo es el compuesto
de esta serie que presenta la menor
respuesta, es el pico más pequeño
de cromatograma, y aun así se
puede detectar en concentraciones
por debajo de las ppb.
La figura 1 muestra el cromatograma en modo SIM de una solución
de los VOC con una concentración
de 2microg/l (2ppb) de cada uno de
En la figura 2 se presenta el cromatograma en modo SIM del patrón
de Bromoformo con una concentración de 0.1 microg/l (0.1ppb), y un
blanco.
Tabla 1.- Condiciones analíticas del equipo.
Las curvas de calibración (figura
3) corresponden a los trihalometanos
antes mencionados en concentraciones que van de los 0.1 a los 20
microg/l. Las curvas de calibración
se ajustan a una recta con un coeficiente de correlación superior al
0.9995 en todos los casos, lo cual
demuestra la extraordinaria sensibilidad y estabilidad del GCMSQP2010.
La estabilidad en el tiempo también se muestra en la figura 4, donde
se han representado 3 cromatogramas tomados en distintos momentos
de una secuencia de 20 análisis de
muestras reales de agua, en los que
se ha intercalado un patrón de 2
microg/l (2ppb).
Tabla 2.- Lista de los VOC estudiados.
Tabla 3.- Repetibilidad de trihalometanos.
Hoja respuesta Ref. 4
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Aumento de Sensibilidad en los Equipos de GC y GCMS gracias
a la Inyección múltiple de grandes volúmenes.
Aplicación al Análisis de Pesticidas
En algunas ocasiones surge un deseo cuando se trabaja con equipos de GC y GCMS: “¡Si pudiera
aumentar la cantidad de muestra inyectada en el equipo para aumentar la sensibilidad!”
En general cuando se inyecta
líquido, éste se evapora y se produce una rápida expansión del volumen. Si inyectamos gran cantidad de
líquido, corremos el riesgo de saturar
el inyector y la columna, provocando
la perdida de muestra y de resolución.
El AOC20i es el inyector adecuado para resolver el problema mencionado gracias a sus funciones:
se realizaron con la inyección sucesiva de 200 microl de una solución de
2 ppb de una mezcla de 7 pesticidas.
Para alcanzar los 3000 microl de
volumen final, se realizaron 15 inyecciones consecutivas de 200 microl
con el AOC20i.
La figura 1 muestra el resultado
de la inyección múltiple con un volumen final de 3000 microl. Con este
método evitamos el ensanchamiento
de picos característico de las inyecciones de grandes volúmenes y
aumentamos la cantidad absoluta de
analitos buscados.
Figura 1.- Cromatograma de 3000 microl de pesticidas inyectados con el AOC20i en el modo de inyección múltiple.
- Permite la inyección múltiple.
- Compatible con jeringas de gran
capacidad (250 microl)
- Permite la inyección a baja velocidad.
- Permite ajustar la velocidad del
émbolo.
En los ejemplos siguientes se
muestran análisis con el AOC20i en
el modo de inyección múltiple. Este
modo permite la inyección de grandes volúmenes por la inyección repetitiva cuando la cantidad necesaria
para la detección supera la capacidad de la jeringa.
Figura 2.- Cromatograma del extracto de pimiento verde en el modo de
inyección múltiple del AOC20i.
En los ejemplos se utiliza el
inyector
PTV
(Programmed
Temperature Vaporizer) con un inserto de vidrio con un relleno gracias al
cual, podemos inyectar cantidades
superiores a los 1000 microl (1ml) de
muestra líquida, y podemos detectar
cantidades por debajo de las ppb en
el detector FPD.
* Análisis de 3000 microl de residuos de pesticidas por inyección
múltiple
El inserto del inyector PTV se
rellenó con TENAX-TA y los análisis
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Hoja respuesta Ref. 5
CROMATOGRAFÍA / GCMS
Figura 3.- Correlación de área de picos frente al volumen de inyección (nº de inyecciones).
* Análisis del extracto de pimiento
verde con el AOC20i en modo
inyección múltiple.
La figura 2 muestra el cromatograma del extracto de pimiento verde
en el que se han añadido 7 pesticidas organofosforados. Este análisis
es el resultado de la inyección múltiple hasta un volumen final de 1000
microl (1ml).
* Linealidad de las áreas respecto
al número de inyecciones en cada
análisis.
La figura 3 muestra la curva de
calibración de una muestra de 10
ppb de cada uno de los tres pesticidas. Cada inyección, desde 1 hasta
15, introduce un volumen de 40
microl.
Tabla 1. Condiciones analíticas
Instrumento:
GC-17Av3
Columna:
DB1 (0.25mm x 30m)
T. Horno:
50º(5min) --- 20º/min --- 160º --- 5º/min --- 280ºC
T. Detector:
280ºC
Presión de He:
50kPa --- 50kPa/min --- 150kPa
Relleno del inserto:
Tenax TA
Inyección:
Modo inyección múltiple sobre PTV
T. PTV:
70º(1min) --- 30º/min --- 100º(1min) --- 250º/min --- 280ºC --- 250º/min --- 280ºC
Detector:
FPD (detección de fósforo)
Hoja respuesta Ref. 5
11
ESPECTROMETRÍA FTIR
Software IRSolution de SHIMADZU para
trabajo en FTIR
El software IRSolution es un paquete de software de 32 bits
basado en Windows para control de los espectrómetros FTIR de
Shimadzu. Con el IRSolution, las operaciones para el análisis FTIR
se realizan de forma fácil y rápida utilizando pantallas de análisis
dedicadas.
Medidas y seguimiento de
estado
Todos los parámetros de medida
se disponen en cinco ventanas de
diálogo fácilmente visibles. La medida
arranca con un sólo clic mostrándose
el espectro a tiempo real durante la
misma. Los ajustes de hardware:
selección de fuente, divisor de haz,
detector y accesorios, se muestran
por pantalla en el seguimiento de
estado. Además del modo de acumulación normal, también hay opción
para evaluar barridos, barrer de
forma continua y corrección atmosférica eliminando los efectos de la
humedad y el dióxido de carbono.
ne de funciones tales como detección
de picos, resta espectral, conversión
Kubelka Punk, corrección de ATR
para búsqueda espectral y cuantificación, etc. Los resultados del proceso
se pueden importar dentro de ficheros Word o Excel.
Cuantificación: además de la calibración multipunto, el IRSolution ofrece MLR (regresión Multilineal) y
opcionalmente
PLS
(Mínimos
Cuadrados Parciales) que es muy útil
para las medidas en NIR.
Búsqueda Espectral: El IRSolution
permite la creación de bibliotecas de
Conformidad con GLP/GMP y
FDA 21 CFR Parte 21
Desde hace poco, la fiabilidad y
seguridad del software que controla
un instrumento así como su toma de
datos se ha convertido en algo de
suma importancia. En el IRSolution
se incluyen las siguientes características:
•
Seguridad y función de registro con nombre de usuario y contraseña.
•
Restricción de derechos de
usuario por grupo de usuarios.
•
Preservación de datos brutos
que incluye el interferograma y
espectro de referencia antes de aplicar la FFT (Trasformada Rápida de
Fourier).
•
Firma
trónica
usuario a partir de espectros adquiridos y la búsqueda espectral en bibliotecas de usuario y comerciales.
elec-
También hay disponibilidad de documentación IQ/OQ si
es menester.
Generador de Informes
Modo Visualización
Todos los datos que se
adquieren se pueden visualizar a
tamaño normal y aumentar con
zoom para un mejor examen de
ciertas áreas o para comparar
con otros espectros.
Capacidad de personalizar informes usando o creando plantillas
donde volcar los datos que pueden
ser espectrales, curva
de calibración, resultados de
cuantificación
tablas de
Procesos de datos: cuantificación y búsqueda
Una vez acabada la adquisición,
se puede extraer una gran variedad
de información específica de cada
espectro medido. El IRSolution dispo12
picos, etc. Se
puede configurar
el color, el espesor
del gráfico, el tamaño, etc.
Hoja respuesta Ref. 6
P
M
G
Cu
P mple
/
L
G
El
El Rey
Rey ha
ha muerto.......
muerto....... ¡Viva
¡Viva el
el Rey!
Rey!
El
El que
que fue
fue Líder
Líder Mundial
Mundial en
en su
su Clase,
Clase, el
el UV-1600,
UV-1600, da
da
paso
consigue 1 nm de
de Resolución
Resolución
paso al
al nuevo
nuevo UV-1700 yy consigue
• Especificaciones y funciones
(exactitud de longitud de onda,
resolución, exactitud fotométrica, etc.) según Farmacopeas
Europea, USA y Japonesa.
• Diseño compacto
tamaño aproximado de A2.
18 kg de
peso que
puede
transportar
una persona.
• Trabajo sencillo
con teclas
dedicadas.
Gran senci-
• IQ/OQ .
• Referencia
de auditoria,
integridad de los datos
y
seguridad.
El beneficio de tener 1nm de Resolución
Las sustancias con anillo aromático muestran perfiles espectrales
de resolución afilada en torno a los 250nm. En tales casos, una
diferencia de 1nm en resolución, nos da un perfil completamente
claro. El gráfico de arriba muestra dos espectros de benceno en
etanol, uno visto con un UV-1700 (en rojo) y el otro con un instrumento de 2nm de resolución (en negro). Nos confirma la diferencia espectral patente al trabajar con una resolución no adecuada. (Gráfico obtenido con el Software UVProbe).
El UV-1700 consigue confortablemente la resolución en longitud
de onda que prescribe la Farmacopea Europea. Esta demanda un
ratio de 1,5 entre el valor del pico cercano a 269nm y el valor del
valle cercano a 266nm para una disolución de tolueno en hexano.
Este ratio es 2,23 en el gráfico mostrado arriba con el UV-1700.
(Gráfico obtenido con el Software UVProbe).
IZASA - C/ Aragoneses, 13 - Pol. Ind. de Alcobendas. 28108 Madrid - Tel.: 902 20 30 80 - Fax: 91 663 05 45 - www.izasa.es - E-mail: dac2@izasa.es
Características especiales
Nuevos
Sistema de Fluorescencia
La compañía SYNGENE, líder de mercado en sistemas de
documentación de geles, lanza sus nuevos sistemas y mejoras en
el campo de la fluorescencia Estos avances consolidan a SYNGENE
como la compañía fabricante de sistemas de documentación más
versátil del mercado, con una gama de productos muy extensa
que, en el ámbito de la fluorescencia, permiten al usuario
disponer de equipos desde 3.000 euros a 50.000 euros.
Este año, las innovaciones pasan,
dentro de los equipos de fluorescencia, por los nuevos sistemas GENEFLASH y DIGIGENIUS, ambos a precios muy asequibles y con un rango
de calidades y resultados que los
hacen imprescindibles para usuarios
que necesiten sistemas de fotodocumentación rápidos, sencillos e intuitivos en su uso.
Nuevo GENEFLASH
Sin duda, el sistema con mejores
expectativas de venta para el 2004,
dentro de la gama sencilla de
SYNGENE, será el nuevo sistema
GENEFLASH. Este nuevo instrumento, permite al usuario captar imágenes de geles de cualquier tipo,
(geles de agarosa o acrilamida teñidos con SYBr Green, SYBR Gold o
bromuro de etidio, de proteínas 1D2D teñidos con coomassie o plata,
TLC, GFP, autorradiografías, placas
de Elisa, etc.), con la particularidad
de no necesitar PC.
Efectivamente, el GENEFLASH
incorpora una pantalla a color de
LCD 6” para visualizar en TIEMPO
REAL las imágenes, grabando éstas
con sólo pulsar un botón en una tarjeta compact flash de 32 MB, en formatos TIFF, JPG y BMP . Asimismo,
el GENEFLASH se suministra con un
lector de tarjetas apto para cualquier
PC o MAC que se conecta directamente vía USB por si el usuario prefiere guardar sus imágenes en ordenador.
GENEFLASH usa la última tecnología en vídeo digital combinada con
la posibilidad de guardar las imágenes en uno de los formatos de última
generación como son las COMPACT
FLASH, las cuales se han convertido
hoy en día en la forma estándar de
almacenamiento de datos digitales.
El sistema presenta un nuevo
estilo ergonómico de cabina oscura
con puerta corredera para un completo acceso sin restricciones y sin
ocupar espacio adicional en el laboratorio cuando se abre. Posee también un completo panel de control en
el frontal de la cabina con el objeto
de controlar, visualizando en la pantalla, todas las funciones de la cámara CCD de 8 bits que incorpora
(zoom, exposición, iris, enfoque), así
como las opciones de configuración y
almacenamiento en la tarjeta.
Una de las características únicas
de este instrumento es que funciona
con cualquier transiluminador que el
usuario pueda tener en el laboratorio
previamente, dentro de las medidas
estándares de la cabina, lo que
puede significar una reducción significativa en el coste.
Otra característica es la posibilidad de imprimir directamente la imagen visualizada en la pantalla LCD, a
través de la impresora térmica que
se incluye, con lo que, para casos
determinados en los que no es necesario almacenar la imagen para su
posterior uso, esta opción ahorra al
usuario un tiempo crucial.
Opciones de pantallas convertidoras
SYNGENE ha adoptado una
nueva tecnología en pantallas de fósforo que permiten la conversión de la
luz UV en diferentes rangos de longitudes de onda. Seleccionando la
correcta combinación, SYNGENE es
capaz de suministrar pantallas de
conversión para diferentas tipos de
aplicaciones:
* UV-Blanca: Convierte la luz del
transiluminador en luz blanca para su
uso con autorradiografías, coomassies, geles de proteínas, etc.
* UV-Azul: Produce un área uniforme y de alta intensidad a 480 nm,
ideal para el trabajo con GFP, SYBR
Gold y SYBR Green
Softwares
En la línea que SYNGENE viene
manteniendo desde su creación, el
GENEFLASH se suministra opcionalmente con una licencia del software de análisis y cuantificación
GENETOOLS. Todos los softwares
Especificaciones
Cámara
Resolución
Pantalla
Lentes
Sensibilidad
Señal/ruido
Apertura
Panel de control
Formato de grabado
Compact Flash 32 MB.
Lector de tarjetas
14
CCD 8 bits. Tiempo Real
768 x 582 pixeles
LCD 6” color activo matrix
8 to 48mm zoom manual + lente 2x
Less than 0.1ng of DNA
>56db
f1.2
Apertura, enfoque, zoom y tiempo de exposición
(0,1 a 10 seg) Sharpening, inversión, saturación.
TIFF, BMP
Hasta 70 imágenes.
Incuído y válido para PC o MAC, vía USB
Hoja respuesta Ref. 7
CIENCIAS DE LA VIDA
de SYNGENE son actualizables de
forma gratuíta y de por vida para el
usuario, directamente desde Internet.
Garantías
Todos los sistemas de SYNGENE
están garantizados por tres años.
Nuevo DIGIGENIUS
El DIGIGENIUS es el sistema de
documentación de geles más sencillo de Syngene, sin embargo, no por
ello deja ser uno de los más versátiles y más usados en el mercado, con
una sensibilidad de detección de
< 20 pg de ADN de doble cadena.
Para el año 2004 se han actualizado
las posibilidades de este fotodocumentador con el fin de hacerlo, por
un lado, muy accesible por precio al
cliente y por otro con el de dotarlo de
una nueva cámara digital capaz de
capturar imágenes de cualquier tipo
de gel con una resolución y rapidez
incomparables actualmente en el
mercado.
La posibilidad que ofrece de controlar todas las funciones de la cámara desde el PC atraves de su “TWAIN
DRIVER” especial, permite al usuario
capturar tantas fotos como desee,
almacenarlas en el PC y posteriormente analizarlas, sin tener que
tocar en ningún momento la cámara,
con lo que el riesgo de contaminación por agentes como el Bromuro de
Etidio utilizado en la tinción de los
geles, es prácticamente nulo.
deo. Esta cámara funciona a 24 bits
para las imágenes a color o a 8 bits
en blanco y negro, lo que se traduce
en 256 niveles en la escala de grises.
Asimismo tiene una pantalla a color
de LCD que posibilita el uso de la
cámara no sólo para el laboratorio,
sino para el uso en fotografía general. La cámara se suministra con
cables y software de apoyo.
Autofocus
Sencillos zoom y enfoque automáticos para la captura rápida de imágenes de geles de cualquier tamaño.
Gracias a esta función es muy rápido y
sencillo el capturar imágenes de un gel
con sólo apretar un botón.
incluso establecer patrones de
semejanza entre bandas de diferentes calles con la opción de matching
del programa. Cada uno de los resultados tiene la opción de ser directamente exportado a Excel.
Aplicaciones y Garantía.
Escoja entre análisis de geles,
spot blots, colonias, placas, autorrads y más dentro del mismo software de análisis GeneTools….siempre contando con los tres años de
garantía que SYNGENE ofrece así
como las actualizaciones de los softwares de manera gratuita para sus
clientes de forma permanente.
Filtros, Transiluminador y Hood
Soporte para filtro y filtro estándar
para UV. Transiluminador de 302 nm
opcional y Hood compacto de 20cm x
26 cm acoplado a la cámara digital
que permite el análisis de geles de
21cm x 26 cm.
Acceso directo al Software de análisis Gene Tools.
No se necesita Hardware adicional ni otro software aparte. Conecte
directamente su DigiGenius al PC,
Laptop o MAC gracias a su puerto
USB. Incluído Software de documentación de geles Gene Tools.
GeneTools es el más rápido y eficaz sistema de análisis de geles del
mercado, el cual le permite procesar
imágenes y detectar automáticamente datos de calles y bandas, cuantificación, pesos moleculares e intensidad en pocos segundos. Es posible
Especificaciones
Cámara digital
Este sistema se presenta con la
nueva cámara digital CANON
POWER SHOT G5 con una resolución de 5 Megapíxeles, lo que permite crear imágenes de alta definición,
muy ùtiles cuando se trabaja con
geles de baja discriminación de banHoja respuesta Ref. 7
Captador CCD
Apertura
Medición
Luz
Balance de blancos
Obturador
Modo ráfaga
Modo Vídeo
Sensibilidad
Pantalla LCD
Resolución
Interface
Peso
Dimensiones
Accesorios
5.0 megapixles
f2/-/3.0
TTL AF 9 zonas o 1 punto al centro
Evaluativa, spot, centro
Auto, pre-reglajes y maual
15-/2000 seg
Sí, 2 imágenes por segundo
Sí, hasta 3 minutos
Auto, 50, 100, 200, 400 ISO
TFT color PSI 1,8 pulgadas
2595x1944,1600x1200, 1024x768, 640x480 píxeles
USB y Vídeo
410 gr
121x73,9x69,9mm
Cámara, batería Li-ion, adaptador/cargador, cables USB y
vídeo, telecomanda, tarjeta compact flash 32mb.
15
Imagine la Perfección en
Imagen Digital. Microscopios de Investigación ECLIPSE 80i
Atendiendo a las necesidades del investigador en Biomedicina, Nikon nuevamente ha establecido
estándares de nuevas tecnologías para satisfacer las demandas técnicas del mercado. El microscopio ECLIPSE 80i es el primer microscopio con óptica especialmente dedicada a imagen digital.
Construido para una óptima fotodocumentación digital, incorpora un
amplio rango de nuevos accesorios y
funciones avanzadas recientemente
desarrolladas para expandir las prestaciones, ergonomía y versatilidad de
la microscopía digital de investigación. Centrado en conceptos de estabilidad y precisión mecánica, Eclipse
80i alcanza además nuevos niveles
de prestaciones en fluorescencia,
incorporando una nueva óptica Plan
Apocromática VC con corrección de
amplio espectro (hasta 405 nm), y
ofrece el mayor rango de configuraciones de investigación disponible en
el mercado.
• Portaoculares para campo visual
de hasta 25 mm y ángulo de inclinación de 25º.
• Módulo divisor de haz con doble
salida para cámaras digitales, módulos confocales y detectores espectrales.
• Función Zoom integrada para permitir una perfecta equiparación de la
resolución óptica de la serie de objetivos CFI60 a la resolución digital de
las cámaras digitales Nikon recomendadas, así como las de otros
fabricantes.
alcanzan tanto un alto contraste
como una excelente resolución.
- Iluminador “Ojo de Mosca” para
una iluminación transmitida completamente homogénea y 1,6 veces más
luminosa que el sistema previo.
Basándose en encuestas hechas
a usuarios, Nikon ha diseñado un sistema de Nomarski totalmente nuevo
para el Eclipse 80i, permitiendo
seleccionar entre capacidades de
imagen de alto contraste y alta resolución, críticas para muchas aplicaciones en investigación biológica.
Construido para Imagen Digital
- Nuevo Cabezal de Imagen
Digital que permite la equiparación
de la resolución óptica de los objetivos con la resolución digital de las
cámaras a utilizar.
- Epifluorescencia integrada con
torreta para seis bloques de filtros.
- Puertos de salida dual de imagen
- Zoom continuo 0,8X – 2,0X en la
salida posterior.
El nuevo Cabezal de Imagen Digital
DIH es una unidad integrada que
incluye:
• Sistema de epi-fluorescencia interconstruido con 6 posiciones para bloques de filtros y un obturador motorizado de control remoto
16
Avances significativos en
Fluorescencia
- El epi-iluminador de fluorescencia de nuevo desarrollo – Sistema de
Fluorescencia Hi S/N – incorpora un
novedoso
dispositivo
“Noise
Terminador” que permite la obtención
de relaciones señal/ruido cinco veces
superiores a los sistemas de fluorescencia previos, extrayendo lo último
en imagen de fluorescencia de baja
señal.
Se ofrecen prestaciones mejoradas
mediante el nuevo sistema de iluminación transmitida y la revolucionaria
matriz multifacetada “Ojo de mosca”,
que ofrece una intensidad homogénea que llena completamente la
apertura posterior del objetivo y satiface las demandas más estrictas de
la imagen digital en alta resolución.
Combinando todos los factores, junto
con un nuevo condensador universal,
se constituye una perfecta plataforma óptica y digital para captura de
imágenes críticas.
DIC totalmente nuevo
- Obtención de imágenes con
coloración de fondo uniforme a cualquier aumento, mientras que se
Hoja respuesta Ref. 8
MICROSCOPÍA ÓPTICA
Nuevos objetivos VC Plan APO
- Corregidos en rango más amplio
de longitudes de onda – hasta la
línea h – obteniendo así imágenes
más vívidas en imagen digital
- Expansión de prestaciones ópticas en la periferia, mejora en la
corrección de aberraciones y nuevo
diseño especificado para aplicaciones críticas de imagen digital.
- Imágenes más vividas y limpias a
lo largo de un amplio rango de condiciones de observación.
Expansibilidad
- El más amplio rango de sistemas
configurables por el usuario.
- Desde el laboratorio básico de
diagnósticos hasta la investigación
de máximo nivel.
toria avanzada, ideal para aplicaciones que requieran un centraje profesional y giro de platina para orientaciones precisas de la muestra.
Avances en ergonomía
De creciente importancia son los
aspectos de ergonomía y confort
de usuario. El microscopio Eclipse
80i puede configurarse con el nuevo
Portaoculares Telescópico-Basculante,
inclinable y extensible, que asegura
una óptima altura de oculares y una
posición confortable de observación
independientemente de las características físicas del usuario, resultando en una reducción del esfuerzo
sobre nuca y hombros a lo largo de
horas de observación. El mando de
la platina del Eclipse 80i permanece
en posición fija durante su manejo,
permitiendo a la mano y cuerpo quedar inmóviles y alineadas con el instrumento. Existen disponibles versiones de platina de mando a la izquierda o a la derecha, ambas construidas con recubrimiento ultraduro de
Alumita para ofrecer una superficie
resistente y de alta durabilidad.
Especificaciones
Iluminación
Lámpara halógena 12V 100W
Detección automática de alimentación 100 – 240V (Voltaje Universal)
Iluminación optimizada para imagen digital “Ojo de Mosca”
Filtros encastrados
NCB11, ND8, ND32
Sistema óptico
Sistema Óptico Infinito CFI60
Aumentos Totales
10 - 1500X
Portaoculares
Cabezal de Imagen Digital DIH
Trioculares UW “T” y “F”
Nuevo Portaoculares Ergonómico con salida digital DSC (opcional)
El microscopio Eclipse 80i es
también una plataforma versátil con
el más amplio rango de expansión
nunca conseguido, desde un laboratorio básico hasta el más alto nivel de
investigación, incorporando todas las
configuraciones y técnicas de
microscopía. Existen dos modelos de
estativos disponibles del Eclipse 80i:
Uno, el estándar básico, incluye una
subplatina estándar con su soporte
de platina. El segundo, avanzado,
posee otra subplatina centrable para
ser utilizada junto con la platina gira-
Binocular
Oculares
10X FN22; UW10X FN25; 15X FN14,5
Enfoque
Macrométrico 14 mm por vuelta
Micrométrico 0,1 mm por vuelta
Precisión de lectura 1 µm en mando izquierdo
Dureza de giro en macrométrico ajustable
Función de re-enfoque (limitador de desplazamiento)
Platina
Recubrimiento de Alumita extraduro
Manejo de mando XY sin desplazamiento propio antero-posterior.
Dimensiones 159 x 243 mm, con rango de desplazamiento 78 x 54 mm
Posición seleccionable del mando XY
Giro de platina centrable (opcional)
Revólver
Séxtuple o séxtuple con alojamientos para DIC
Accesorios
Iluminador de epi-fluorescencia (6 bloques; epi-fl y reflexión)
Sistemas de co-observación
Módulo de doble salida para cámaras.
Módulo de aumentos intermedios.
Técnicas
Campo claro
Campo oscuro
Contraste de fases
Epi-fluorescencia
Nomarski DIC
Polarización simple
Epi-DIC
Epi-campo oscuro
Hoja respuesta Ref. 8
17
MICROSCOPÍA ÓPTICA
Imagine la
Microscopía en perfecto Confort…
Los nuevos microscopios Nikon Eclipse 50i/55i representan lo último
en ergonomía. La nueva serie de microscopios Nikon Eclipse
50i/55i incorpora toda una serie de características que hacen que
el manejo de los mismos sea realmente muy confortable.
La platina ha sido rediseñada
totalmente. Su mando XY permanece en una posición fija durante su
manejo permitiendo a la mano y
cuerpo del usuario quedar inmóviles
cuando se maneja el microscopio.
El nuevo portaoculares telescópico/basculante, inclinable y extensible, permite que cualquier usuario,
independientemente de sus características físicas, pueda adoptar una
posición confortable de observación.
Si a todo esto añadimos el hecho
que los microscopios Nikon Eclipse
50i/55i están equipados con la afamada óptica Nikon CFI60, significa que
usted no solamente podrá obtener el
mejor rendimiento óptico de su
microscopio sino que además tendrá
la libertad de configurar el microscopio
con todos aquellos accesorios que
mejor se adecuen a sus necesidades.
Ambos microscopios van asimismo equipados con un revólver séxtuple lo que aumenta en gran manera
su flexibilidad al poderse disponer en
un solo microscopio de diferentes
objetivos de muy diversos aumentos.
Microscopio Nikon Eclipse 55i
A diferencia del microscopio
Nikon Eclipse 50i que dispone de un
sistema de iluminación tradicional
mediante lámpara de halógeno de 6V
30W, el microscopio Eclipse 55i dispone de un novedoso sistema de iluminación por luz fría mediante LED.
Este sistema de iluminación, totalmente blanco, no genera calor y
mantiene constante la temperatura
de color lo que le hace perfecto para
ver muestras en campo claro.
Asimismo el consumo energético de
los sistemas de iluminación LED es
mínimo lo que convierte al Eclipse
55i en un microscopio portátil al
poder ser éste alimentado mediante
baterías, independientemente de la
red eléctrica.
Ergoview
Este nuevo sistema de citodiagnóstico es adaptable a los modelos
Eclipse 50i y 55i. Permite cambiar
entre los objetivos 10x y 40x automáticamente mediante un
pulsador. Permite asimismo el marcaje de la
muestra al mismo tiempo
que se observa a través
de los oculares.
Microscopio Nikon Eclipse 55i equipado con el sistema
de citodiagnóstico “Ergoview”
señal/ruido cinco veces superior a los
sistemas de fluorescencia previos.
Pensados para la era digital
Ambos microscopios (Eclipse
50i/55i) han sido diseñados pensando en la era de la fotomicrografía
digital.
El nuevo puerto triocular para el
portaoculares telescópico/basculante
le permitirá documentar digitalmente
sus imágenes mientras las observa
confortablemente a través de los
oculares.
Nueva epi-fluorescencia
Microscopio Nikon Eclipse 50i con portaoculares ergonómico triocular y la
cámara digital Nikon DS-5M-L1
18
Los
microscopios
Nikon Eclipse 50i/55i
pueden ser también equipados con un nuevo epiiluminador de fluorescencia que incorpora un
novedoso
dispositivo
“Noise Terminador” que
permite la obtención de
imágenes con menos
fondo y con una relación
Microscopio Nikon Eclipse 50i/55i equipado con epifluorescencia
Hoja respuesta Ref. 9
CIENCIAS DE LA VIDA
aliQuot dispensador automático en
Microplaca para pequeños volúmenes de
GENETIX
El aliQuot es un sistema de dispensación de alta precisión para
volúmenes pequeños de líquido. Llena dos placas de 1536 por
minuto. Puede dispensar líquidos, células, bolas, etc... y es fácil
de limpiar con partes autoclavables.
El sistema incluye un cabezal de
16 puntas para placas de 384 pocillos, una botella de 500ml y un juego
de tubos resistentes al DMSO.
Precisión
• Resultados al dispensar 1 ul de
PBS en una placa de 1536 pocillos
- Volumen Dispensación: 1.018
Opcionalmente se puede instalar
dos stackers con capacidad para 40
placas. Este sistema de stackers es
el único que incluye la retirada de las
tapas de las microplacas de forma
automática.
- CV pocillo a pocillo: 6.19%
- Precisión: 1,9%
- Variación Placa a Placa: <0.2%
Puede emplear microplacas de
96, 384 y 1536 pocillos. El aliQuot es
un sistema optimizado para la dispensación de volúmenes de 1 – 10ul.
siendo estos volúmenes definidos
por el usuario, que también puede
seleccionar la botella del reservorio
dependiendo de la aplicación con
tamaños de botellas de 60ml a 2L.
La alta precisión es lograda gracias al control a través de un microprocesador en todo momento de la
presión del reservorio, ajustando los
volúmenes de dispensación a dicha
presión.
Además, el aliQuot ha sido diseñado para dispensar de forma precisa líquidos de distintas viscosidades
compensando la densidad del fluido
a dispensar. El equipo también es
compatible con soluciones de
DMSO.
Es un equipo rápido y preciso,
capaz de dispensar 1ul con un CV
inferior al 10% y a una velocidad de
aprox. 100 placas por hora.
Cuando la dispensación ha finalizado, el reactivo sin usar puede ser recuperado del cabezal y los tubos y ser
devuelto al reservorio, aspecto importante al trabajar con reactivos caros.
Hoja respuesta Ref. 10
Especificaciones
Volumen dispensación
Incrementos
Precisión
Velocidad
Volumen muerto
Compatibilidad química
Tamaño
Peso
Conexiones eléctricas
1-10ul (placas de 1526)
1-140ul (placas de 384)
2-350ul (placas de 96)
1ul.
1536: <10% CV pocillo a pocillo (dispensando 1ul de agua a 25ºC)
<1% CV placa a placa (dispensando 5ul de agua a 25ºC)
<2,5% CV pocillo a pocillo (dispensando 5ul de agua a 25ºC)
<30 segundos en llenar una placa de 1536 con 10ul de agua por pocillo.
<20 segundos en llenar una placa de 384 con 10ul de agua por pocillo
<15 segundos en llenar una placa de 96 con 10ul de agua por pocillo
3ml (recuperable)
Soluciones acuosas, DMSO.
30 X 30 X 20 cm
9Kg
210-240V AC 45-66 Hz
19
ANÁLISIS TÉRMICO
Novedades en Análisis Térmico
El Análisis Térmico es la técnica que mide los efectos que
producen los cambios de temperatura en los materiales. Los
métodos principales son Calorimetría Diferencial de Barrido
(DSC), Análisis Termogravimétrico (TGA), Análisis TermoMecánico (TMA) y Análisis Dinámico-Mecánico (DMA).
Calorimetría Diferencial de
Barrido (DSC)
El Shimadzu DSC-60 es uno de
los equipos más versátiles disponibles. Es un calorímetro de barrido de
tipo flujo de calor capaz de analizar
materiales en el rango de -140ºC a
620ºC. El diseño único de la celda de
medida, horno y sistema de refrigeración proporciona una gran flexibilidad
de operación, mayor que cualquier
otro analizador.
dor de 24 posiciones integrado en la
unidad.
Análisis Termo-Mecánico (TMA)
El Shimadzu TMA-60 incorpora la
última tecnología en análisis termomecánico en un equipo flexible y
modular. Trabaja en el rango de 140ºC a 1500ºC, en modo tensión,
compresión y elongación. El nuevo
módulo de generación de carga permite la carga estática y dinámica de
El rango de frecuencias de medida va desde 0 hasta 600 Hz. Se pueden seleccionar hasta 100 frecuencias en un solo experimento. El
rango de temperatura de medida va
desde -190 ºC hasta 400 ºC, pudiendo realizar rampas de temperatura
controlada entre 0.1 y 20 ºC/min.
El DSC-60 permite incorporar un
automuestreador integrado, así
como diferentes opciones de refrigeración.
Análisis Termogravimétrico (TGA)
El Shimadzu DTG-60 es un analizador simultáneo TG/DTA (termogravimétrico y análisis térmico diferencial). El control de atmósfera es programable, así como las rampas de
calefacción y enfriamiento entre temperatura ambiente y 1600ºC.
Al igual que el DSC-60, el DTG-60
pueden incorporar un automuestrea-
Analizador termo-mecánico Shimadzu TMA-60.
Analizador simultáneo termogravimétrico (TGA) y térmico deferencial (DTA) Shimadzu DTG-60.
El diseño único del Tritec 2000
permite múltiples orientaciones de la
cabeza de medida. La orientación
puede ser horizontal, vertical, o a
cualquier ángulo. La posición vertical
es útil para realizar medidas con la
muestra inmersa en un fluido. La
posibilidad de cambiar la orientación
también facilita la colocación de la
muestra.
muestras hasta 5N en pasos de
0.1N. Se detectan cambios dimensionales dinámicos de hasta 10mm con
una precisión de 10nm mediante un
sistema de detección LVDT independiente de la temperatura.
Análisis Dinámico-Mecánico (DMA)
Calorímetro diferencial de barrido Shimadzu DSC-6
20
El analizador Dinámico Mecánico
Tritec 2000 de Triton Technology Ltd.
es el sistema más avanzado y original disponible actualmente. Permite
operar en diferentes modos de deformación, incluyendo inclinación en un
punto, cizalla, tensión, compresión e
inclinación en tres puntos.
Analizador dinámico-mecánico Tritec 2000 DMA de
Triton Technology.
Hoja respuesta Ref. 11
ESPECTROMETRÍA/COLOR
Color en Cítricos
y Tomates (aprobado por la USDA)
con HUNTERLAB
Medida de color en tomates (equipo aprobado por la USDA) y
derivados así como en cítricos con objetividad, reproducibilidad y
sencillez cumpliendo con la normativa.
actual. Así, el sistema virtualmente
puede medir también el color reflejado de cualquier líquido opaco o
translúcido.
El sistema viene con un soporte
para tubos, estante, abrazadera y
patrón O.J. de plástico calibrado. La
forma de trabajar es vertiendo la
muestra de zumo en un tubo de
ensayo. Este se inserta en el soporte
y con sólo apretar un botón del equipo se efectúa la medida. Los índices
CN (Citrus Number), CR (Citrus
Red) y CY (Citrus Yellow) se muestran por pantalla simultáneamente.
Se le puede incluso conectar una
impresora si necesitamos copia
impresa de la medida.
en esmalte sobre base de acero.
Según recomienda la USDA, es trazable a la UC Davis master standard.
La muestra del producto del tomate a
medir se coloca en una cápsula que
a su vez queda en un portamuestras
sobre el equipo y presionando un
botón del equipo se efectúa la medida. Los scores se muestran por pantalla simultáneamente. Se puede,
incluso, conectar una impresora si
necesitamos copia impresa de la
medida.
Especificaciones
Intervalo
400-700nm
Resolución
10nm
Paso de banda
<12nm
Vida lámpara
>5.000.000 de lashes.
Pantalla
2,5” x 2.5”
Escalas de color HunterLab, CIE
L*a*b*, CIE l*c*h*, XYZ.
Índices Tomato
Catsup Score, Paste Score,
Sauc Score, a/b.
Índices Citrus
ColorFlex‚ Tomato Color Meter
(Aprobado por la USDA)
ColorFlex‚ Citrus Color Meter
El objetivo principal de este aparato se centra en los zumos de cítricos. Mide el Citrus Number, Citrus
red y Citrus Yellow. Estos índices que
originariamente se necesitaban para
puntuar el zumo de naranja concentrado en la práctica se han utilizado
además para zumos de pomelo y de
limón. El Citrus Meter elimina la subjetividad de los métodos visuales y
proporciona medidas objetivas reproducibles. Además de los valores cítricos el equipo puede medir, además,
en términos de la escala HunterLab
así como cualquiera de las otras
escalas de color de amplio uso
Hoja respuesta Ref. 12
En este caso, el objetivo principal
del aparato se refiere al tomate y sus
distintos scores: Tomato Juice Score,
Tomato Catsup Score, Tomato Paste
Score, Tomato Sauce Score y relación a/b.
Juice Score,
Citrus Number,
Citrus Red, Citrus Yellow
Otros índices
delta E*, delta E, delta Ecmc,
blancura, amarillamiento
Iluminantes
A, C, 65, TL84, F, para
observadores a 2º y 10º
Tamaño
16x12,7x36 cm
Peso
4,5K
Al igual que el anterior, el Tomato
Meter, elimina la subjetividad de los
métodos visuales y proporciona
medidas objetivas reproducibles no
sólo en el tomate y sus derivados y
con los índices o scores correspondientes sino en términos de la escala
HunterLab así como cualquiera de
las otras escalas de color de amplio
uso actual. Puede medir el color
reflejado de cualquier líquido desde
opaco a translúcido, semisólidos,
molturados y sólidos.
El sistema, en este caso, viene
con un patrón calibrado para tomate
21
AA-6300
Análisis Multielemental y validación del sistema
El nuevo AA-6300 de Shimadzu es un espectrómetro de Absorción Atómica completamente
automático. En este artículo se detalla la medida de cadmio, cobre, arsénico, plomo y manganeso, así
como la validación completa del sistema.
La determinación cuantitativa de
elementos principales, de transición y
trazas forma parte de la rutina diaria
en multitud de laboratorios de control.
Este tipo de análisis se realiza en la
actualidad empleando espectrómetros modernos de absorción atómica,
como el Shimadzu AA-6300.
Un criterio importante para alcanzar un volumen de muestras analizadas alto es el grado de automatización del sistema. El AA-6300 permite
la determinación automática de hasta
20 elementos en 60 muestras, tanto
en llama como en cámara de grafito.
Las secuencias largas de análisis
requieren una validación periódica de
los resultados.
Instrumentación
Todo el trabajo experimental descrito se llevó a cabo empleando un
Shimadzu AA-6300 equipado con
cámara de grafito GFA-EX7i y estación de preparación de muestra automática (Figura 1). El espectrómetro
opera en el rango de 185 a 900 nm,
y consiste en un monocromador
Czerny-Turner con una red de difracción holográfica de 1800 líneas/mm.
El sistema de detección consiste
en un fotomultiplicador para el rango
185 - 600 nm y detector de Si para el
rango 600 - 900 nm. Esta configuración ofrece un rendimiento superior y
está diseñado para el análisis de trazas.
Para atomización en llama, el
nuevo AA-6300 está equipado con un
quemador de titanio, bola de impacto
cerámica, capilar de Pt/Ir y cámara
de nebulización de polipropileno con
superficie optimizada. El sistema es
por tanto resistente a todos los ácidos, disolventes orgánicos y reactivos
22
Figura 1. Espectrómetro de absorción atómica Shimadzu AA-6300 equipado con cámara de grafito GFA-EX7i y estación de preparación / automuestreador.
empleados normalmente en espectroscopia de absorción atómica.
Corrección de fondo
El AA-6300 posee dos métodos
estándar de corrección de fondo para
la determinación fiable de elementos
traza en matrices complejas. Ambos
métodos pueden aplicarse tanto en la
medida en cámara de grafito como
en llama.
• El método de deuterio corrige
interferencias espectrales causadas por absorción molecular y
dispersión de luz por partículas.
• La técnica autorreverso de alta
velocidad corrige interferencias
causadas por solapamiento de
líneas de absorción y por fondos
con estructura.
muestra los parametros instrumentales para la determinación cuantitativa
de cadmio y cobre. Ambos conjuntos
de parámetros se cargan de forma
automática en el sistema y se ejecutan de forma secuencial. El método
de corrección de fondo se selecciona
en función del elemento a medir:
• Para cobre se emplea el método
de deuterio.
• Para cadmio, la conocida interferencia espectral producida por el
hierro provoca sobrecompensación en el método de deuterio.
Por lo tanto, se emplea el método
autoreverso.
Determinación de cadmio y cobre
El nebulizador de alta eficiencia
unido al sistema óptico estable produce excelentes resultados, con
valores de 0.350 Abs para una solución de Cu de 2 mg/L, y un límite de
detección de 0.0015 mg/L. La tabla 1
Figura 2. Curva de calibración para Cd en llama entre
0.04 mg/L y 0.1 mg/L.
Hoja respuesta Ref. 13
ESPECTROMETRÍA/AA
Element
Cd
Cu
Wavelength (nm)
228.8
324.8
Slit width (nm)
1.0
0.5
Atomisation
Flame
Flame
Lamp current D2 BGC*(mA)
-
8
Lamp current SR BGC**(mA)
8/100
-
Acetylene (L/min)
1.9
1.8
Tabla 1. Parámetros instrumentales para la determinación de cadmio y cobre en llama.
Element
Pb
As
Wavelength (nm)
283.3
324.8
Mn
279.5
Slit width (nm)
0.7
0.7
0.2
Atomisation
Furnace
Furnace
Furnace
Lamp current D2 BGC*(mA) --
-
10
Lamp current SR BGC**(mA) 8/300
12/400
-
Ashing (*C)
800
600
800
Atomisation (Cº)
2400
2200
2200
Matrix Modifier
Pd (NO3)2
Pd (NO3)2 -
1000 mg/L 1000 mg/L
Tabla 2. Parámetros instrumentales para la determinación
de plomo, arsénico y manganeso en cámara de grafito.
La curva de calibración para cadmio en un rango de concentración de
0.04 a 0.1 mg/L se muestra en la
Figura 2.
Alta sensibilidad!
Determinación de arsénico, plomo
y manganeso
El método de cámara de grafito
se ha empleado con éxito durante
muchos años para el análisis de trazas de metales pesados, por ejemplo
arsénico, cadmio, plomo y manganeso. El control digital de temperatura
de la nueva cámara de grafito GFAEX7i permite la optimización de las
características del sistema proporcionando señales de alta intensidad
y excelente reproducibilidad.
El sistema puede ajustar la velocidad de calentamiento para cada temperatura seleccionada en el programa. Por ejemplo, en la medida de
plomo, la temperatura sube lentamente hasta 800 ºC, después muy
rápidamente hasta 2.400 ºC. La temperatura de atomización se alcanza
Figura 3. Curva de calibración para Pb en cámara de
grafito entre 5 µg/L y 20 µg/L.
Hoja respuesta Ref. 13
en una fracción de segundo. La
Figura 3 muestra la curva de calibración obtenida para plomo en el rango
desde 5 µg/L hasta 20 µg/L.
El salto desde la temperatura de
calcinación hasta la temperatura de
atomización debe ser lo más rápido
posible para evitar la expansión de la
nube atómica dentro del tubo de grafito. El control digital de gases consigue parar el caudal de gas inerte
durante los últimos segundos de la
fase de calcinación y durante la
fase de atomización de manera
reproducible.
De esta forma se evita la salida
prematura de la nube atómica fuera
del tubo de grafito y se aumenta el
tiempo de residencia de los tomos en
el haz de luz. Los parámetros instrumentales pueden verse en la Tabla 2.
La Figura 4 muestra los picos de
señal obtenidos en la medida por
duplicado de un patrón de As de
6 µg/L usando la cámara de grafito
con control digital. En rojo puede
verse la señal de absorbancia y en
azul la señal de fondo.
Figura 4. Pico de absorción para 6µg/L As.
dija de 1 nm, se registra el perfil de la
línea seleccionada y se confirma la
posición del máximo de energía. En
la Figura 5 puede verse la comprobación de exactitud en longitud de
onda en 640.20 nm. La desviación
obtenida es de 0.02 nm, dentro de
los límites de tolerancia aceptables.
Validación
La absorción atómica es una técnica relativa para la cuantificación de
concentraciones de elementos, de
modo que se debe obtener una curva
de calibración antes del análisis de
muestras desconocidas. La calidad
de la calibración se puede controlar
durante el análisis de muestras de
rutina empleando materiales de referencia como patrones de control. El
control regular durante la secuencia
de análisis con patrones de control
es una función estándar del software.
Otros parámetros críticos que se
pueden chequear incluyen la estabilidad del sistema. La deriva de la
energía suministrada por las fuentes
de luz, para medida de elementos y
corrección de fondo, no puede exceder unos umbrales determinados
para poder garantizar la alta calidad
de los resultados analíticos.
Asimismo es posible realizar una
validación del sistema en sí. Se chequean todos los parámetros instrumentales importantes como exactitud en longitud de onda, ruido y deriva de línea de base, o datos de análisis de ciertos elementos en llama o
cámara de grafito, así como el cálculo de los límites de detección.
Un requerimiento básico para
obtener medidas exactas es el ajuste
preciso en las longitudes de onda
seleccionadas. Empleando una ren-
Figura 5. Validación de la exclavitud en longitud de
onda del espectrómetro AA-6300.
23
ELECTROQUÍMICA
Normativa
FDA 21 CFR parte 11 aplicada a valoración
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
En una sociedad que avanza a velocidades vertiginosas, los sistemas de registro electrónico son ampliamente empleados, y los
legajos de hojas manuscritas han quedado atrás. Tan sólo sobrevive el hecho de que la autenticidad de un documento sigue siendo una asignatura pendiente en muchos sistemas a la hora de
comprobar la autoría de un documento mientras que la firma
manuscrita es siempre válida. Para cambiar esta situación la FDA
(Food & Drugs Agency) publicó la norma FDA 21 CFR parte 11.
Tras su publicación en 1997, la
normativa FDA 21 CFR parte 11,
donde hace mención a las firmas
electrónicas y sus requisitos de validación, ha generado un importante
debate que hasta día de hoy no ha
dado como resultado sistemas de
registro adecuados a las pretensiones de la misma. RadiometerAnalytical ha puesto su granito de
arena en el cumplimiento de la
misma en el caso de los análisis por
valoración, este es el caso de los sistemas Titramaster85 FDA. Un paquete de software que interactúa con los
valoradores automáticos de la misma
firma y que en sus modalidades bi y
mono direccional permite el registro
automatizado de datos de acuerdo a
las especificaciones de la agencia
federal norteamericana.
Un registro manuscrito ha de asegurar una trazabilidad completa,
aparte de los datos de usuario, del
equipo con que se efectuó, de calibración del instrumento, y un largo
etcétera, se ha de asegurar que cualquier modificación posterior sea perfectamente trazable hasta el primer
documento original que se realizó del
análisis registrado. Este proceso
genera una cantidad de tiempo,
esfuerzo y papeles que llevan a una
lógica evolución a buscar respuesta
en las nuevas tecnologías, donde los
sistemas de registro electrónico permiten realizar copias del documento
original y llevar a cabo la modificación de datos diversos, conservando
el original para su posterior trazabilidad. Ahora bien, en una unidad lógica, la firma no es trazable como es la
manuscrita si no se protegen los
datos y se establecen unas normas
para asegurar la fiabilidad de la
misma.
Para este paso, lo primero es proteger el acceso de los usuarios
mediante contraseña, y limitar las
funciones de los mismos. Estas funciones están repartidas en los niveles
de acceso al sistema, como son un
operador, que tan solo cuenta con
permisos de lectura, un supervisor,
que posee permisos de lectura y
escritura y un firmante o certificador,
que se encuentra autorizado a firmar
los registros.
Un sistema extra de seguridad en
cuanto a la política de accesos del
sistema se encuentra en la característica de la caducidad de contraseñas de acceso. Los códigos de acceso tienen una caducidad de 90 días,
o inferior a definir por el usuario;
periodo tras el cual el usuario propietario del acceso debe cambiarlo por
otro distinto, prohibiéndose por el sistema emplear un código repetido en
el plazo de dos años. De este modo
se impide el acceso por apropiación
de un código ajeno.
La escritura de registro de datos
es realizada por el sistema de forma
automática, y para asegurar la trazabilidad, en caso de que un registro
deba sufrir alguna modificación, el
registro original no es modificado ni
eliminado, es copiado bajo un nombre relativo al mismo. Los registros,
de este modo, no pueden ser modificados ni eliminados.
A la hora de pasar una auditoría
FDA, el sistema puede generar
copias exactas y completas de los
registros en formato EXCEL, los cuales no pueden ser modificados al
hallarse protegidos por contraseña
en modo “sólo lectura”.
Del mismo modo permite el seguimiento auditable de las diversas operaciones de la base de datos.
En su modo bidireccional, permite
al usuario operar directamente desde
un PC bajo sistema operativo
Windows®.
De este modo, con el nuevo
Titramaster85 FDA, la integración de
esta normativa en laboratorios para
análisis de valoración se convierte en
una simple operación de instalación
del software y una formación al usuario en el sentido de la política de contraseñas del mismo.
Para encontrar más información
puede consultar en la página web de
la FDA, www.fda.gov; y en el centro
de información en valoración de
Radiometer-Analytical, www.titration.com.
Todo producto agroalimentario o
farmacéutico que se desee exportar
hacia los E.E.U.U. debe cumplir con
las directrices de la agencia, especialmente desde el 12 de diciembre
de 2003, en que fue aprobada el
“Acta de bioterrorismo”, la cual hace
especial hincapié en los controles a
seguir en los productos importados
en los Estados Unidos.
La primera premisa de la normativa con respecto a las firmas electrónicas es que estas han de tener la
misma validez que las firmas manuscritas, para ello ha de existir un sistema que asegure que el registro electrónico de la firma pertenece a la
misma mano que en el caso de una
manuscrita, por así decirlo, que se
eviten falsificaciones.
24
Hoja respuesta Ref. 14
CIENCIAS DE LA VIDA
Fraccionamiento
de células en microplacas por ultrasonidos
Los efectos de las intensas ondas de sonido de alta frecuencia
viajando en un líquido fueron conocidos por los químicos Word y
Loomis en 1927. Ellos publicaron sus trabajos sobre los efectos de
los ultrasonidos en la emulsificación, dispersión de coloides,
fragmentación de cuerpos pequeños y frágiles y fraccionamiento de
glóbulos rojos sin la utilización de enzimas o detergentes lisantes.
Aunque sus trabajos generaron gran interés, no fue hasta mediados
de los 50, con la fabricación a gran escala de los transductores
piezoeléctricos de alta eficacia, cuando los equipos de ultrasonidos
de alta potencia y bajo coste llegaron a ser alcanzables para las
aplicaciones de la investigación y la industria.
Los dos principales productos que
utilizan tecnología piezoeléctrica
para aplicaciones de ultrasonidos de
alta intensidad son los baños de
ultrasonidos y los procesadores de
líquidos
por
ultrasonidos
(Sonicadores). Los baños trabajan
muy bien para la aplicación para la
que están pensados, limpieza; sin
embargo su baja, fija y poco homogénea intensidad limitan el alcance
de su utilización. Los Sonicadores
por otro lado, son más versátiles y son los equipos idóneos para aplicaciones que
requieren energía de ultrasonidos de alta intensidad.
implosiones. Aunque este fenómeno,
conocido como cavitación, dura unos
pocos microsegundos y la cantidad
de energía liberada por cada burbuja
individualmente es mínima, la cantidad acumulada de energía generada
es extremadamente alta.
Los Sonicadores son ampliamente utilizados en los laboratorios.
Aplicaciones típicas incluyen: desintegración de células y tejidos, estu-
Para conseguir una gran
reproducibilidad, es crucial que la
intensidad en cada célula sea
uniforme y previsible.
Los Sonicadores se componen de tres componentes
principalmente: Una fuente
de alimentación de ultrasonidos (generador), un convertidor y una sonda.
La fuente de alimentación
de ultrasonidos convierte la
tensión de la red de 50/60Hz
a alta frecuencia de 20kHz.
Este voltaje se aplica al cristal piezoeléctrico del interior
del convertidor donde se
producen pequeñas vibraciones
mecánicas. Las vibraciones longitudinales del convertidor son amplificadas por la sonda y transmitidas al
líquido como ondas de ultrasonidos
que consisten en compresiones y
extensiones alternativas. Estas variaciones de la presión causan burbujas
microscópicas (cavidades) que se
expanden durante las presiones
negativas e implosionan violentamente durante las presiones positivas. Al colapsarse las burbujas, millones de ondas de choque se arremolinan y se generan presiones y temperaturas extremas en los puntos de las
Hoja respuesta Ref. 15
te en meter manualmente una sonda
de ultrasonidos en un tubo de ensayo o pocillo, llega a ser muy tediosa y
larga cuando se trabaja con microplacas. Para resolver este problema,
hace varios años se aplicaba el
método de procesar las muestras
indirectamente, transmitiendo la
energía a través de las paredes de la
microplaca por medio de un baño de
ultrasonidos. Mientras que el procedimiento procesaba todos los pocillos
idénticamente y simultáneamente,
los investigadores eran menos entusiastas con la capacidad de reproducir los resultados. Esto es debido al
hecho que la mayor parte de la energía es absorbida por las paredes de
la microplaca, y la composición y
tolerancias de las microplacas varían
grandemente de uno a otro fabricante. Para aumentar la productividad y
reproducibilidad de los resultados,
SONICS & MATERIALS introdujo
una sonda de cuatro elementos.
Recientemente para resolver la gran
demanda requerida por los laboratorios de Genómica y Proteómica esta
compañía ha desarrollado dos
nuevas sondas multielemento.
dios de toxicidad, preparación de
muestras, técnicas ELISA, purificación de proteínas, enzimología, purificación de proteínas para marcaje
de ARN, DNA, y PCR, hibridación,
estudios de unión de receptores, preparación de liposomas, microemusión, extracción, disgregación, disolución, catálisis de reacciones químicas y producción de nanopartículas.
La ejecución de estas aplicaciones con ultrasonidos, representa un
gran salto en productividad frente a
los procedimientos anteriores. Sin
embargo la metodología que consis-
Las sondas multielemento
de la figura 1, que consisten en
un acoplador de 20kHz y micropuntas, han sido diseñadas
para procesar microplacas de
12, 24, 48 y 96 pocillos, microtubos de 1,5 a 2,0ml y tubos de
ensayo de 10ml. Un sistema
automático típico incorpora un
sonicador de 750 W controlado
por
microprocesador,
una
sonda multielemento y un sistema de posicionado X-Y. Un ciclo
de proceso incluye el posicionado de la placa, sonicación durante el
tiempo predeterminado y repetición
del proceso hasta que todos los pocillos hayan sido procesados. El sistema ocupa un mínimo espacio y una
vez que la metodología sea la correcta, tiene la virtud de funcionar automáticamente sin la presencia del
usuario. Debido a que la duración del
proceso, nivel de intensidad y profundidad de inmersión están muy controlados, la energía transferida a
cada pocillo es idéntica y la repetibilidad muy alta y así asegurando una
gran reproducibilidad de la preparación de muestras y por lo tanto de los
resultados.
25
Preparación de Muestras para Proteómica.
Digestión directa sobre membranas de PVDF. Una alternativa
real a la “digestión en Gel”
Una de las causas del retraso de la Proteómica frente a la genómica, ha sido históricamente la
dificultad para la obtención de cantidades significativas de péptidos y proteínas, con la pureza
necesaria para su posterior análisis y caracterización. A día de hoy, este sigue siendo el principal
“cuello de botella” en proteómica.
La electroforesis 2D sigue siendo
una de las herramientas más populares para la separación de extractos
complejos de proteínas, a pesar de
los problemas de reproducibilidad de
la técnica. Una vez identificadas las
manchas de interés en el gel, hay
que recortarlas una a una, transferirlas a tubos o pocillos de microplaca,
desteñirlas y limpiarlas antes de proceder a las digestiones enzimáticas,
seguidas a su vez de un nuevo paso
de limpieza, para retirar los restos de
tampones, que puedan interferir en el
análisis de masas, como ultimo paso
del proceso de identificación (Peptide
Mass Fingerprinting, por sus siglas
PMF) Existen en la actualidad diversos sistemas, con mayor o menor
grado de robotización, que pueden
automatizar uno o mas pasos de este
sistema.
En la actualidad, una mancha en
un gel de proteínas, se corta completamente. Dependiendo de cómo sea
de abundante la citada proteína, se
digiere en su totalidad o se conserva
una fracción para ulteriores análisis.
El primer problema es la perdida de
la muestra original, en ocasiones irre-
petible (como sucede con algunas
muestras de interés clínico). En este
tipo de procesos, además se reduce
enormemente el número de posibles
tratamientos químicos y enzimáticos
que pudiesen resultar interesantes,
no solamente para la identificación,
sino también para el estudio de modificaciones postraduccionales (glicosilaciones, fosforilaciones…) La automatización y optimización de estos
procesos, incluyendo la drástica
reducción de los volúmenes de
muestras y reactivos necesarios para
llevar a cabo este tipo de análisis,
supone en la actualidad uno de los
retos tecnológicos más importantes,
de cara a impulsar aun más las crecientes tecnologías en Proteómica.
Chemical Inkjet Printer (ChiP)
Como consecuencia de la colaboración entre Shimadzu-Biotech y
Proteome
Systems
(The
Proteomics Alliance) se ha presentado al mercado un concepto revolucionario en el tratamiento de los productos de electroforesis 2D para su
posterior análisis de masas. El ChiP
(“Chemical Inkjet Printer”) ofrece, por
primera vez la posibilidad de realizar
todos los procesos necesarios para
la identificación de manchas de un
gel 2D sin necesidad de escindir la
muestra del gel, realizando todos los
análisis directamente sobre las manchas transferidas e inmovilizadas
sobre una membrana de PVDF.
La utilización de una tecnología
similar a la que se emplea en algunas de las actuales impresoras de
chorro de tinta (Figura1) hace posible
que se puedan depositar micro-gotas
con una extremada precisión (ver
Figura 2). El empleo de boquillas piezoeléctricas permite dispensar reactivos en volúmenes muy pequeños
(80-100 pL) directamente sobre las
manchas de proteínas transferidas a
una membrana de PVDF.
La ventaja de las digestiones en
fase sólida por este procedimiento,
es que, como se observa en las imágenes, tan solo se emplea una
pequeña porción de la muestra. El
resto, permanece inalterado para
posteriores análisis o confirmaciones. Esto tiene una importancia
especial si se considera que de este
modo, y con posterioridad al análisis,
disponemos de un sistema de almacenamiento estable a largo plazo, lo
cual cobra aún mayor importancia en
casos como el empleo de muestras
irrepetibles o de alto valor.
Químicas múltiples
Fig 1. Punta de uno de los dispensadores piezoeléctricos, con una gota de 100 pL de reactivo . Cada reactivo
se puede dispensar de modo exacto y reproducible. Este
tipo de deposición de reactivos por “impresión” no
requiere contacto con la muestra, eliminando las contaminaciones cruzadas.
26
Fig 2. Reproducibilidad y exactitud son las dos caracteristicas del sistema ChiP. En la columna 1 se imprimen
cinco puntos por el dispensador 1 seguidos de cinco
puntos por el dispensador 2. En la columna B se repite
el proceso a la inversa. En todos los casos la distancia
entre puntos es de 200 µm.
En un ensayo típico de PMF, la
membrana obtenida por electrotransferencia, se fija directamente
sobre un porta muestras de un
MALDI-TOF utilizando un cinta adhesiva electro-conductora, antes de
Hoja respuesta Ref. 16
CIENCIAS DE LA VIDA
cha. Este es tan solo un ejemplo, el
empleo de múltiples químicas sobre
la misma muestra es, por ejemplo,
expansible al empleo de más de una
proteasa.
A
En la mayoría de los intentos de
identificación por PMF, se emplea
principalmente Tripsina para obtener
los patrones de péptidos a identificar.
El conjunto de los péptidos recuperados cubren una mayor o menor parte
de la secuencia de la proteína. El
empleo de una segunda endoproteasa, no solo permite una confirmación
independiente de la identificación,
además permite cubrir una mayor
parte de la secuencia de la misma, y
por tanto incrementar el grado de fiabilidad de la identificación.
B
Como se muestra en las imágenes de la figura 3, el tamaño de cada
punto de digestión esta típicamente
comprendido entre las 200 y las 300
µm. La conclusión inmediata de este
hecho es que el sistema permite la
aplicación de diversos tratamientos
químicos sobre una misma mancha
(fig4), en la figura 5 se muestra un
ejemplo de mapeo de sitios de NGlicosilación sobre una única man-
TRAS PARA PROTEÓMICA
¸
Cortado y digestión automática de geles
¸
Digestión directa en
membrana
¸
LC/MALDI
MALDI-TOF
¸
Fig 3. Detalle de una impresión sobre membrana PVDF
proceder a la digestión con endopeptidasas. El sistema ChiP recuerda y
transfiere al MALDI las coordenadas
precisas en la que se hace cada
imprimación, de modo que una vez
transferido el conjunto de placa y
membrana al masas, el análisis se
efectúa directamente sobre la propia
zona de tratamiento.
PREPARACION DE MUES-
Tubos lineales y con reflectrón PSD sin empalmes
MALDI-TRAMPA
IONICA-TOF
Fig 6. Procesamiento de una membrana de PVDF en
un sistema ChiP de Shimadzu-Kratos
El empleo de sistemas cada vez
más automáticos, si bien encarece
notablemente los equipamientos
necesarios, esta conduciendo a un
rápido desarrollo de la proteómica,
permitiendo la obtención de mejores
resultados a partir de muestras cada
vez mas pequeñas. Sin duda, el futuro de estas técnicas seguirá este
camino.
Tel.: 902 20 30 80
Fig 4. La resolución del sistema Chip permite la aplicación de diferentes tratamientos químicos dentro de una
misma mancha, sobre una membrana de PVDF obtenida por electro-transferencia a partir de un gel 2D-PAG
Hoja respuesta Ref. 16
Fig 5. Mapeo de sitios de N-Glicosilación empleando
químicas múltiples sobre una única mancha en una
membrana de PVDF obtenida por electro-transferencia
de un PAG 2D
Fax: 91 663 05 45
27
BOMBA DE JERINGA
Bombas de Jeringa serie D
de alta precisión de la firma ISCO
Las bombas de jeringa serie D de Isco son bombas de gran precisión y exactitud que proporcionan un flujo predecible y un control de presión notables a lo largo de su intervalo de trabajo. Las
bombas de la serie D no muestran pulsaciones ni anomalías en el
flujo asociadas normalmente a otro tipo de bombas. Están diseñadas específicamente para manejar líquidos acuosos y orgánicos,
disoluciones corrosivas, fluidos calientes, gases licuados, fluidos
viscosos y, además, papillas y pastas. Todo se puede medir con
gran exactitud.
Cinco elecciones
suavidad y potencia.
Cinco distintos tamaños proporciona velocidades de flujo desde submicrolitros/minuto hasta más de
400ml/minuto a presiones que van
desde la atmosférica a 10.000 psi.
Las bombas de Isco pueden trabajar
en modo independiente (una sola
bomba) o de forma dual (dos bombas) para suministro continuo.
Inclusive en grupos de tres para una
mayor flexibilidad.
El material estándar de los cilindros, pistones, y cápsulas es Nitronic
50, auténtico acero inoxidable con
notable fuerza y resistencia a la
corrosión. Las juntas estándar son de
grafito recubierto de teflón de larga
vida a pesar de las condiciones hostiles que puedan asociarse a su trabajo.
Características mecánicas fuera
de lo normal
Las bombas de Isco usan un circuito digital de servo control de seguimiento de la posición para precisión a
bajo flujo a cualquier presión además
de un motor DC de alta velocidad con
Probados y certificados
Cada bomba de jeringa de la serie
D se prueba en fábrica antes de su
suministro. Todas las bombas son
certificadas UL a normas UL 3101 y
En 61010-1. Están en lista UL y cumplen norma CE.
El transductor incorporado de presión asegura una excelente estabilidad y repetibilidad. El mecanismo de
tracción está diseñado con componentes antifatiga y engranajes autolubricados para asegurar una vida
larga y un mantenimiento bajo.
Controlador “Smart”
Hasta tres bombas se pueden
gobernar de forma independiente con
un mismo controlador. Los parámetros para cada bomba se muestran
por pantalla de forma individual.
100DM
100DX
260D
500D
1000D
100 ml
100ml
260ml
500ml
1000ml
Presión
10,000 PSI
10,000 PSI
7,500 PSI
3,750 PSI
2,000 PSI
Flujo
0.01 ul/min
a 30 ml/min
0.01 ul/min
a 60 ml/min
1.0 ul/min
a 107 ml/min
1.0 ul/min
a 204 ml/min
100 ul/min
a 408 ml/min
Puerto de
Conexión
1/8” Valco
1/8” Valco
1/8” Valco
1/8” NPT
1/4” NPT
Volumen
del Cilindro
28
Hoja respuesta Ref. 17
GALÉNICA
Ya puede contar desde ahora con
validacion de temperatura Multi Vaso con
las nuevas sondas de temperatura
digitales de HANSON RESEARCH
La mayoría de las sondas de temperatura son dispositivos
analógicos sujetos a fluctuaciones en el voltaje y el consiguiente
ruido, lo cual puede afectar a la exactitud en los informes de
temperatura.
Las nuevas sondas de Hanson
Research son robustos dispositivos
digitales y de un diseño inteligente e
impenetrable al ruido analógico.
• Cada sonda lleva su firma y
número impreso en su memoria.
• Los datos de calibración de las
•
•
•
•
•
•
•
sondas están retenidos en
memoria.
Posibilidad de calibrarlos en el
propio laboratorio.
Hechas con material resistente a
agentes químicos.
Se montan en las sondas de
muestreo de montaje en cabeza
de los baños de disolución SR8Plus.
Máximo número de sondas: 8.
Resolución de pantalla: 0,01ºC.
Intervalo de medida: 30-40ºC
(típico).
Exactitud +/- 0,1ºC (30-401ºC).
La tecnología exclusiva del “sensor digital” (pendiente de patente)
asegura una resolución de temperatura precisa que queda patente en el
informe y documento de validación.
Cada sonda de Hanson lleva una
firma electrónica única así como su
número de serie y registro de calibración para tener así un perfecto cumplimiento de USP / FDA / 21CFR11.
Con un fácil cambio en todos los
sistemas SR8-Plus de Hanson estas
sondas proporcionan gran cantidad
de datos de temperatura de múltiples
vasos, incluyendo datos estadísticos
de temperaturas máxima, mínima y
media.
Las sondas de temperatura digital
se usan para seguir la temperatura en
cada uno de los vasos de cualquier
baño de disolución SR8-Plus. Estas
sondas se acoplan a las sondas de
muestreo de montaje en cabeza quienes cargarán la sonda de temperatura dentro del vaso de disolución. La
sondas de temperatura se moverán
hacia adentro sumergiéndose en el
medio de disolución para obtener las
lecturas de temperatura.
Características:
• Sensor digital (pendiente de
patente).
• Registro individual de temperatura de cada vaso de disolución
que incluye temperaturas máxima, mínima y promedia para
cada ensayo de disolución.
Hoja respuesta Ref. 18
29
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
La Microscopía Electrónica de
Transmisión , Túnel y de Fuerzas, en
trabajo simultáneo
El desarrollo de nuevos accesorios para TEM está proporcionando un
amplio abanico de posibilidades en las técnicas de análisis In Situ.
NanoFactory ha desarrollado una
nueva serie de portamuestras para
TEM que incorpora un dispositivo de
microscopía de proximidad (STM,
AFM).
Este nuevo dispositivo abre las
puertas a las técnicas actualmente
desarrolladas en AFM, STM y
Nanoindentación. Un sistema AFM o
STM se instala en el portamuestras
TEM de manera que la punta puede
barrer la muestra y proporcionar una
imagen AFM o STM de la zona que
previamente ha sido seleccionada
con la imagen TEM. El estudio de
procesos dinámicos, el test de objeto
a escala nanométrica, y la correlación de imágenes TEM con medidas
de fuerzas / eléctrica, son aplicaciones directas de estos dispositivos.
Los procesos dinámicos se realizan en tiempo real y permiten la
monitorización de cualquier modificación espontánea o inducida en la
muestra.
La posibilidad de obtener información
estructural
(imagen
TEM/AFM/STM) y eléctrica /mecánica de modo simultáneo, permite
correlacionar propiedades físicas con
estructura utilizando información de
alta resolución.
Tres sistemas son posibles:
STM In Situ
- Posicionamiento 3D de la sonda
a escala namométrica.
- Sonda eléctrica (conductividad,
túnel)
- Curvas I-V, I-Z
- Multi-modo STM
- T1000 Single Tilt TEM-STM
system
- ST1500 Double-Tilt TEM-STM
system
Incluye sistema de control y PC.
Emisión de campo, modulación de
señal y correlación de imagen son
las opciones de este sistema.
AFM In Situ
-
Posicionamiento 3D de la sonda.
Ensayos mecánicos.
Curva de fuerza.
Imagen multi-modo.
SA2000 Singel-Tilt TEM, AFM system
Incluye sistema de control y PC.
Correlación de imagen en opción.
Nanoindentación In Situ
- Control avanzado del movimiento de la sonda para realizar múltiples indentaciones en forma
normal o automatizada.
- Imagen TEM real de muestra y
de la huella de deformación.
- SA2000N TEM – nanoindentación system.
Una nueva y potentísima herramienta para el estudio y caracterización de los nuevos materiales y la
nanotecnología.
Esquema del dispositivo
30
Hoja respuesta Ref. 19
Cámara Digital de ultra-alta calidad para fotomicrografía
Captura imágenes en
fluorescencia de alto contraste
Con imágenes de hasta 12 millones de píxeles de resolución la
nueva cámara digital Nikon DXM1200F consigue resultados
inmejorables.
Gracias al diseño original Nikon de bajo ruido electrónico así
como a su nuevo CCD de sensibilidad más del doble que la de
su predecesor, la cámara DXM1200F captura imágenes en
fluorescencia de una claridad superior y sorprendente contraste.
Sus magníficas prestaciones y su fácil manejo hacen que la
DXM1200F sea la mejor elección para los profesionales.
IZASA - C/ Aragoneses, 13 - Pol. Ind. de Alcobendas. 28108 Madrid - Tel.: 902 20 30 80 - Fax: 91 663 05 45 - www.izasa.es - E-mail: dac2@izasa.es
MICROLAB STAR
R
La Revolución en Manipulación
Automática de Líquidos
Automatización de
cultivos celuláres
Cristalización
de proteínas
Preparación
muestras MALDI
Digestión
en Gel
Aislamiento de
plásmidas
Preparación
de ELISA
Preparación de
reacciones de PCR
Reordenamiento
de pocillos
Extracción
de DNA
Screening de
compuestos
secundarios
Purificación de
productos de PCR
Validación de
moléculas diana
¿Que le gustaría
automatizar?
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