Laboratori de Referència de Catalunya S.A. Información Clínica LINFOCITOS T CD8 INTRODUCCION El CD8 es un antígeno de superficie celular expresado por los linfocitos T supresores, también denominados citotóxicos y algunos linfocitos “natural killer”(NK). La inmunidad celular está mediada por los linfocitos T, que son los responsables del rechazo de trasplantes y de la defensa del organismo contra células neoplásicas, infecciones víricas, por hongos y por algunos tipos de bacterias. Los linfocitos T expresan diferentes antígenos de superficie y por estos marcadores se pueden dividir en 2 subgrupos principales: linfocitos T colaboradores(CD3+CD4+CD8-) y linfocitos T supresores(CD3+CD4-CD8+). Ambos subgrupos de linfocitos T regulan la inmunidad humoral controlando la producción de anticuerpos (inmunoglobulinas) por los linfocitos B. Los linfocitos T CD4+ son los máximos responsables de la inmunidad celular. Los linfocitos T CD8+ son activados por los linfocitos T CD4+ y ejercen una regulación negativa de la inmunidad celular mediante la inhibición de la activación y de la producción de citocinas por los linfocitos T CD4+ Algunas enfermedades autoinmunes e inmunodeficiencias pueden deberse a alteraciones de la función de los linfocitos T CD8+. Un ejemplo es la diabetes mellitus tipo 1, una enfermedad autoinmune crónica causada por la destrucción de las células β del páncreas productoras de insulina en la que los linfocitos T CD8+ no consiguen suprimir los linfocitos T CD4+ autorreactivos. La enfermedad por citomegalovirus (CMV) en pacientes inmunodeficientes se correlaciona con un déficit de linfocitos T citotóxicos CD8+ específicos para CMV. La reacción inmune de linfocitos T contra los antígenos HLA-I del trasplante es el mecanismo principal de rechazo agudo del mismo. Los linfocitos reactivos con las células que expresan HLA-I son generalmente linfocitos T CD8+ y producen rechazo del trasplante por mecanismo citotóxico directo. La inmunidad celular antitumoral esta mediada por linfocitos T CD8+ citotóxicos y linfocitos NK. Entre los linfocitos circulantes en sangre periférica existen poblaciones de células T, B y NK. Las proporciones normales son: células T (CD3+):60-80%; linfocitos B (CD19+):10-20%; linfocitos NK CD3-CD56+: 5-10% A su vez, las proporciones normales de los subtipos de linfocitos T son: linfocitos T CD4+:60- 21/08/2006 11:31 1 Laboratori de Referència de Catalunya S.A. Información Clínica 70%; linfocitos T CD8+:30-40% El cociente normal de linfocitos T CD4/CD8 es >2. UTILIDAD CLINICA Causas de linfopenia de linfocitos T CD8 1. Inmunodeficiencias congénitas: Inmunodeficiencia combinada severa, deficiencia de adenosindesaminasa, deficiencia de purina-nucleósidofosforilasa, Disgenesia reticular, síndrome de Wiskott-Aldrich, Ataxiatelangiectasia, síndrome de Di George, deficiencia de HLA-clase I, deficiencia de ZAP-70, síndrome linfoproliferativo autoinmune,etc. 2. Disminución de la linfopoyesis: aplasia medular, período post-trasplante de progenitores hematopoyéticos, etanol, déficit de zinc. 3. Destrucción linfocitaria: corticoides, síndrome de Cushing, radioterapia, quimioterapia con agentes alquilantes (ciclofosfamida, azatioprina)y análogos de las purinas (fludarabina, etc), globulina antitimocítica. 4. Pérdida linfocitaria: enfermedad de Whipple, insuficiencia cardíaca derecha, linfangiectasia intestinal, obstrucción linfática, plaquetaféresis. 5. Infecciones: tuberculosis miliar, fiebre tifoidea, neumonía, sepsis, gripe, hepatitis, rubéola congénita, sarampión, varicela, infección por citomegalovirus (CMV), mononucleosis infecciosa, infección fúngica grave. 6. Neoplasias: linfoma de Hodgkin, , tricoleucemia, carcinoma terminal. 7. Enfermedades autoinmunes: reumatoide, miastenia gravis. lupus eritematoso sistémico, artritis 8. Miscelánea: sarcoidosis, insuficiencia renal, diabetes mellitus, síndrome de Down, malnutrición, déficit de vitaminas y de minerales, enteropatía con pérdida de proteínas, síndrome nefrótico, distrofia miotónica, drepanocitosis, quemaduras, post-cirugía, hepatitis crónica activa, cirrosis enólica, envejecimiento. Otras situaciones en las que es útil la cuantificación de linfocitos T CD8: 1.Seguimiento de la reconstitución de la inmunidad celular tras trasplante de progenitores hematopoyéticos con tratamiento mieloablativo e inmunosupresor. 2.Linfocitosis reactivas asociadas a primoinfecciones víricas o por parásitos (síndrome de mononucleosis): virus de Epstein Barr, CMV, Toxoplasma gondii, 21/08/2006 11:31 2 Laboratori de Referència de Catalunya S.A. Información Clínica rubéola, virus de la hepatitis A y B, herpes virus tipo 6, virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), virus herpes simple, adenovirus, etc. Pueden cursar con inversiones transitorias del cociente de linfocitos T CD4/CD8 (<1). 3.La presencia y el incremento del porcentaje de linfocitos T CD4+ ó CD8+ en el lavado broncoalveolar de pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica se asocia a progresión de la enfermedad. 4.Seguimiento del tratamiento con ciclosporina, anticuerpos monoclonales antiCD3 u otros fármacos inmunosupresores que producen una inversión del cociente CD4/CD8 como efecto terapéutico y que se utilizan generalmente en el rechazo de trasplantes o en patología autoinmune. Linfocitos T CD8 e infección por VIH 1. El VIH 1 y 2, el agente etiológico del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), infecta y deplecciona selectiva y progresivamente los linfocitos T CD4, produciendo generalmente una inversión del cociente CD4/CD8 . 2. En la infección reciente por el VIH, se produce generalmente un descenso de la replicación viral (VIH-ARN) que se asocia a la activación y la inducción de linfocitos T citotóxicos y de memoria CD8+ específicos para el VIH. Esta activación se asocia a un descenso más lento de los linfocitos T CD4+ X 109/L por lo que parece que puede retrasar la evolución a SIDA. 3. En pacientes con un recuento de linfocitos T CD4+ <0.2 X 109/L , la mayoría de los linfocitos infectados por el virus son los linfocitos T CD8, observándose una relación inversamente proporcional entre el recuento de linfocitos T CD8 X 109/L y la frecuencia de linfocitos T CD8 infectados por el VIH. La infección de los linfocitos T CD8 por el VIH puede contribuir al descenso de este subgrupo de linfocitos T en fases avanzadas de la enfermedad y a la aparición de linfopenia de linfocitos T CD8(<0.25 X 109/L). 4. En el subgrupo minoritario de pacientes que permanecen con unas cifras normales de linfocitos T CD4 tras años de infección por el VIH, se observa una fuerte respuesta inhibitoria de la replicación viral (VIH-ARN) mediada por linfocitos T CD8 específicos para VIH. METODO Para obtener el recuento absoluto de linfocitos T CD8 X 109/L se realizan 2 procedimientos analíticos diferentes: 1. Citometría de flujo con triple marcaje de las células mononucleadas( linfocitos, monocitos, blastos) de la muestra( sangre, lavado broncoalveolar, etc) con anticuerpos monoclonales anti-CD3, CD4 y CD8 marcados con fluorocromos( fluoresceína, ficoeritrina, etc) para establecer el porcentaje de células positivas para cada uno de estos marcadores. Se aplica 21/08/2006 11:31 3 Laboratori de Referència de Catalunya S.A. Información Clínica sistemáticamente el triple marcaje para diferenciar los linfocitos T colaboradores(CD3+CD4+) de los monocitos (CD3-CD4+) y para verificar que la suma del porcentaje de linfocitos T CD4+ ó CD8+ se corresponda con el porcentaje total de linfocitos T(CD3+). 2. El recuento absoluto de linfocitos totales ( linfocitos x109/L). El porcentaje de linfocitos T CD8+ obtenido por citometría de flujo se aplica al recuento absoluto de linfocitos totales ( linfocitos x109/l) obtenido a partir del hemograma para calcular el recuento absoluto de linfocitos T CD8+ x109/L PROTOCOLO DE ANALISIS Se recomienda el control seriado con una periodicidad al menos trimestral de el recuento absoluto de linfocitos T CD4 y CD8 x109/l y de la carga viral (VIHARN) en pacientes con infección por el VIH. Para determinar el recuento absoluto de linfocitos T CD8 x109/L debe realizarse simultáneamente el recuento de linfocitos totales (código de prueba 5509) y el recuento absoluto de linfocitos T CD4 x109/L (código de prueba 5510). INTERFERENCIAS ANALITICAS Errores en la determinación del recuento absoluto de linfocitos (sangre coagulada, blastos, déficit de mieloperoxidasa en analizadores que calculan la fórmula leucocitaria por citoquímica), ausencia de exclusión de los monocitos en el contaje de células CD4+. BIBLIOGRAFÍA 1. Kipps TJ. Lymphocytosis and lymphocytopenia. En: Williams Hematology. 6ª ed. 2000. 2. JJ Ortega. Inmunodeficiencias congénitas o primarias. En: Manual práctico de Hematología Clínica( MA Sanz, E Carreras). 2ª edición.2005. 3. Herold KC et al. Anti-CD3 monoclonal antibody in new-onset type 1 diabetes mellitus. N Engl J Med 2002;346:1692-8. 4. Walter EA et al. 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