SÍNTESIS DEL PROGRAMA INTERREGIONAL VERSIÓN ACTUALIZADA EN FEBRERO 2014 Decaimiento de la Syrah: los últimos avances INTRODUCCIÓN Detectado desde el año 1990 en el sur de Francia (Gard y Hérault), el decaimiento de la Syrah afecta actualmente a la totalidad del área de cultivo de esta variedad. El porcentaje de cepas afectadas y el avance del decaimiento varían de manera importante de una parcela a otra Síntomas Este síndrome se caracteriza por grietas en la zona de injerto (Figura 1) y puede ser asociado un enrojecimiento foliar en otoño (Figura 2). Una cepa que presenta ambos síntomas morirá en un corto plazo, generalmente no superando la poda invernal. La aparición de las grietas precede siempre al enrojecimiento foliar, muchas cepas agrietadas pueden mantenerse verdes y productivas durante varios años. Las grietas, verticales u oblicuas, se evidencian mediante la eliminación de la corteza en la zona del anillo del injerto. El resto de la madera de la cepa, sea hacia arriba o hacia abajo del punto de injerto, permanece lisa (Figura 1). A veces se pueden observar grietas distantes de la zona de injerto, sobre el tronco o en el pliegue de los sarmientos, a menudo próximas a grandes heridas de poda (Figura 3). Síntomas similares han sido identificados en Syrah plantado en pie franco en Argentina y Chile. Crevasses localisées dans la zone de greffe Figura 1: detalle de la zona de injerto agrietada: la corteza ha sido parcialmente retirada para hacer aparecer las invaginaciones profundas y localizadas. Las grietas aparecen en la zona en la que la planta se divide durante la poda del primer año, 4 ó 5 años después de la misma. Esto es lo que parece indicar que la lesión es un factor desencadenante (Figura 4). Figura 3: grietas fuera del área del injerto 02 Figura 2: enrojecimiento foliar observado en otoño (Hérault, 2010) Figura 4: grietas localizadas sobre una Syrah a pie franco (Chili, 2009) Observación de disfunciones celulares en la zona de grietas Figura 5: vista general (obj x 1,25) Figura 6: detalle (obj x 10) Grietas Análisis detallados (a nivel de tejidos) han puesto en evidencia que las grietas son el resultado de una disfunción localizada del cambium, tejido originario de la formación de los vasos conductores. La atrofia localizada del cambium se asocia a un problema de diferenciación de tejidos, a una acumulación de polifenoles y al desarrollo de necrosis (Figuras 5 y 6). 2 cm écorce corteza necrosis nécrose tissuindiferenciado indifférencié tejido cambium Ep El enrojecimiento foliar se expresa hacia el final del verano o en otoño, varios años después de la aparición de las grietas (Figura 2). Ello no debe confundirse con otros enrojecimientos vinculados a las virosis (virus del enrollado de la vid), carencias, traumatismos mecánicos… En el caso del deterioro de la Syrah, el enrojecimiento está siempre asociado a la aparición de grietas. Los análisis celulares han mostrado, en las hojas enrojecidas, una acumulación anormal de almidón y de polifenoles (Figura 7). Po Am Figura 7: corte transversal del limbo de una hoja enrojecida (coloración específica) Ep: epidermis de la hoja; Am: granos de almidón coloreados en rosa; Po: polifenoles Situación actual a nivel internacional Este síndrome ha sido identificado en casi todos los países vitivinícolas en donde se cultiva la Syrah, en condiciones medio ambientales muy diferentes y particularmente en los principales países productores como lo son Argentina, España, África del Sur, Estados Unidos (California) y Chile. La pregunta sigue en pie para Australia, en donde, según nuestra información, tales síntomas nunca se han manifestado. Impacto del modo de injertar La aparición de grietas se observa en los diferentes modos de injerto “en mesa”, independientemente de las concentraciones de hormonas utilizadas en las pruebas realizadas. Por lo tanto, podemos decir que el injerto omega o el uso de hormonas no son originarios del síndrome. Los injertos realizados en terreno y las estacas herbáceas parecen retrasar la aparición de los síntomas, pero no permiten evitarlos totalmente. 03 El material vegetal El porta-injerto Todos los porta-injertos son afectados, sin embargo R 110 y R 99 se distinguen por una acentuada sensibilidad y, por lo tanto, se desaconseja su uso si es posible otra opción de porta-injerto. Cuando la situación agronó- Impacto del clon mica lo exige (terreno secano, terreno esquistoso, suelos ácidos), R 110 se puede utilizar con clones de muy poca sensibilidad, el efecto del clon dominando el del porta injerto. Se ha observado un “efecto clon” muy marcado y los 12 clones actualmente autorizados pueden ser clasificados en 3 categorías de sensibilidad, desde muy poco sensibles a sensibles. Sobre los 12 clones aún autorizados, • Los clones 470, 524, 747, 1140, 1141 y 1188 son muy poco sensibles • El clon 471 es poco sensible • Los clones 100, 174, 300, 525 y 877 son sensibles Solo los seis clones muy poco sensibles (470, 524,747, 1140, 1141, 1188) bajo la marca ENTAV-INRA son hoy aconsejables para la plantación. La diferencia clonal La observación ampelográfica no permite identificar los clones de Syrah. Para fines de trazabilidad, puede ser interesante disponer de una herramienta fiable que permita verificar la identidad de los clones. Se han identificado 3 marcadores genéticos (microsatélites) que permiten clasificar los clones en diferentes grupos genéticos. Los 12 clones autorizados en 2014 se dividen en 3 grupos (Tabla 1). El uso de estos tres marcadores permite identificar dos grupos de clones de sensibilidad mínima: el primero consiste en los clones 470, 1140, 1141, 1188 y el segundo en los clones 524 y 747. Tabla 1 : diferenciación clonal sobre clones de Syrah con 3 marcadores genéticos (microsatélites). Este análisis puede ser realizado sobre hojas o madera (laboratoire@vignevin.com). Sensibilidad I Grupos genéticos Sensibilidad 470, 1140*, minima 1141*, 1188* Poco sensibles II IV IIIi V 524, 747 471 100,174, 300, Sensibles 525, 877 Muy sensibles 73, 99, 381, (excluidos) 382, 383, 585 301 *: 3 nuevos clones autorizados en 2012 : En el grupo III sólo están presentes clones no autorizados i Clones en curso de selección Se está llevando a cabo un nuevo programa de selección clonal con la colaboración del IFV, integrando el criterio de “no sensible” al decaimiento de la Syrah. Se han preseleccionado 28 clones: no presentan ningún síntoma en las parcelas observadas (antiguas colecciones de estudios, conservatorios de especies) y se mantienen sanos para la totalidad de virosis analizadas. Con el fin de verificar su buen comportamiento en un número más importante de individuos y en 04 condiciones diferentes de suelo y clima, se han instalado nuevas colecciones de estudio en diferentes emplazamientos (Drôme, Vaucluse, Pyrénées-Orientales, Gard). Los primeros clones generados a partir de estas nuevas colecciones de estudio fueron autorizados en 2012. La continuación de estos trabajos de selección permitirá, en un plazo determinado, disponer de una gama variada de clones muy poco sensibles o no sensibles. Marcador histológico Dado que la manifestación de grietas es progresiva, se necesitarán entre 7 y 10 años tras la plantación para confirmar la ausencia de sensibilidad de estos clones preseleccionados. La investigación ha permitido identificar, 18 meses después del injerto, un marcador celular del síndrome de «grietas» en la ausencia de exteriorización visual de las mismas. Los clones que están siendo seleccionados serán próximamente probados con este marcador para verificar su buen comportamiento con respecto al decaimiento y agilizar su solicitud de aprobación. ¿Qué oculta el efecto clon? Un origen patológico La identificación de las causas del decaimiento de la Syrah tiene un lugar preponderante en nuestros estudios, incluyendo particularmente la investigación de patógenos potencialmente implicados. Se han realizado importantes investigaciones en el tema: han permitido excluir hongos, bacterias, fitoplasmas y viroides. Los trabajos sobre los virus han permitido excluir la participación de 23 de los principales virus capaces de infectar a la vid. Paralelamente no se ha observado transmisión a otras variedades en pruebas que específicamente se han implementado para este fin (transmisión por injerto). Como se específica en la figura 8, las grietas se limitan a la parte Syrah (ejemplo de un doble trasplante). Syrah Por tanto, parece muy poco probable que la causa del decaimiento de la Syrah sea patológica. Cabernet Sauvignon 110 R Figura 8: prueba de transmisión: las grietas permanecen localizadas sobre el injerto correspondiente a la Syrah Un origen genético Uno de los tres marcadores genéticos utilizados para la diferenciación clonal demostró una fuerte correlación con el decaimiento sobre las 368 accesiones testeadas (Tabla 2). La identificación del “efecto clon” asociado al descubrimiento del marcador nos conduce a considerar la hipótesis de un origen genético del síndrome. Basados en esta diferencia de sensibilidad clonal, se pueden utilizar diferentes vías para buscar los genes implicados en el decaimiento. Los trabajos de investigación se centran sobre 2 clones muy sensibles (383 y E2662) y uno muy poco sensible (470): • La fenotipificación (evaluación de la sensibilidad) de la población resultante de la autofecundación y de cruces hechos entre el clon 470 y el 383 debería permi- expresión de los genes en diferentes condiciones. tir confirmar la naturaleza hereditaria del síndrome y estimar el número de genes implicados. Se están estudiando estas tres líneas de investigación. La comparación de la expresión de genes en plántulas injertadas en E266 y en 470 ha mostrado que, a pesar de un muestreo dirigido (en la región cambial sobre la zona de grietas en E266), más de 5000 genes fueron diferentemente expresados: ninguna vía de biosíntesis • La re-secuenciación del genoma de los clones 470, 383 y E266 permitirá identificar las diferencias de secuencias entre los clones a fin de correlacionar estas diferencias a su mayor o menor sensibilidad, • El análisis transcriptómico consiste en comparar la aparece alterada. Los múltiples genes implicados no han permitido identificar, por el momento, los genes más interesantes: se debe proseguir con los análisis. La verificación cruzada de todos estos datos debería permitir la confirmación de la hipótesis genética e identificar, en un plazo determinado, los genes implicados en la sensibilidad al decaimiento. Tabla 2 : clasificación de 368 accesiones probadas* según su perfil genético y su sensibilidad. El porcentaje de correlación entre la sensibilidad y el perfil genético es de 88%. Clasificación de injertos Muy poco sensibles analizados según su sensibilidad perfil obtenido con el marcador genético sensibles / muy sensibles a 276 39 b 7 46 *: Conservatorios de especies, colecciones de estudio, clones autorizados. 2 E266: clon modelo muy sensible: todas sus cepas son agrietadas. 05 De grietas a la muerte de cepas Diferentes niveles de mortalidad se observan en las parcelas que tienen un porcentaje de grietas idénticas y similares en términos de edad y de material vegetal, lo que supone la existencia de factores que aceleran la muerte de la cepa, denominados «factores agravantes”. La comprensión de los mecanismos que llevan a la muerte de la cepa y la identificación de estos factores agravantes permitirían una eventual intervención para reducir la mortalidad de las parcelas establecidas. La muerte se produce debido a un agotamiento progresivo de las reservas de la cepa De una cepa "agrietada verde" a una cepa muerta: un deterioro progresivo del vigor (Figura 9). Se ha realizado un seguimiento del crecimiento y la producción durante 3 años en una parcela de 11 años plantada con un clon muy sensible. Del paso del estado de agrietadas verdes al de agrietadas rojas y debilitadas, las cepas sufren un deterioro progresivo de su vigor relacionado con la disminución de las reservas en las raíces. Se manifiesta inicialmente por un retraso en el crecimiento estival, seguido de un reducido crecimiento. La producción no es afectada hasta la etapa de debilitamiento. (Grafico 1). provisión de reservas insuficientes Incremento de grietas 10 10años ans ans 22oà 33 años Promedio de las poblaciones de cepas agrupadas de acuerdo a la gravedad de su estado de decaimiento al otoño de 2011 (llevados a valores de cepas sanas). Evolución del crecimiento y de la producción por cepa durante 3 años en lotes de cepas con diferentes estados de decaimiento en el otoño de 2011 Sin grietas : 6 cepas (testigo) El injerto débil no es apto para pasar el invierno y muere. El porta-injerto puede recuperarse. 11año an Muerte Mort Figura 9: La cepa verde y agrietada vive varios años sin alteración perceptible de su funcionamiento, hasta que las grietas se intensifican, causando enrojecimientos y una declinación gradual del vigor hasta llegar a un estado de debilitamiento y de improductividad. La cepa muere en uno o dos años. Debilitamiento creciente Agrietadas verdes : 126 cepas Agrietadas rojas sin debilidad : 62 cepas Agrietadas rojas debilitadas: 13 cepas Muertes en 2011 : 15 cepas Oct. 2008 Decaimiento Mayo 2009 Crecimiento Dic. 2009 Poda Mayo 2010 Crecimiento Sept. 2010 Cosecha Dic. 2010 Poda Mai 2011 Crecimiento Sept. 2011 Cosecha Oct. 2011 Decaimiento Grafico 1 Figura 10 06 El enrojecimiento, consecuencia de la interrupción de la sabia provocada por las grietas. Se realizaron incisiones anulares (consistentes en remover completamente un anillo de corteza) sobre cepas sanas de un clon poco sensible, sobre los sarmientos, los brazos o arriba del punto de trasplante en la «etapa granos guisante». Sobre las tres modalidades, las cepas intervenidas han enrojecido de la misma forma que cepas deterioradas próximas a aquellas. El control no tratado permaneció verde. En paralelo, los análisis han mostrado que el follaje era el punto de acumulación de azúcares tanto en las cepas con incisión como en las cepas con decaimiento. En consecuencia, en la etapa de enrojecimiento de la cepa, las grietas actúan como una incisión anular, impidiendo el descenso de azucares y de otros compuestos hacia las raíces, los cuales se acumulan en las partes aéreas provocando enrojecimientos. (Figura 10). Detección: El enrojecimiento y una baja en el peso de la madera de poda son dos señales de alteración fisiológica de la cepa. Pueden ser utilizadas para detectar individuos en principio de decaimiento. Este sondeo puede ser posicionado justo antes de la caída de las hojas, por ejemplo. depósito=follaje productor de azúcar etado eservas e raíces co do depósito=follaje productor de azúcar filtraciones= racimos y brotes en crecimiento Grifo=tronco agrietado grifo=tronco agrietado ¿Qué factores agravantes aceleran la mortalidad? ¿Cuáles son las posibles soluciones? balde=reservas de raíces El estado final del decaimiento de la Syrah es, por lo tanto, un problema de recarga de reservas en las raíces debido a una mala circulación de la savia alterada por las grietas. Es como si se tratara de llenar un balde (= reservas de las raíces) utilizando un grifo obstruido por el calcáreo (= tronco agrietado) a partir de un depósito más o menos lleno (= volumen de azúcares producidos por las hojas) y que presenta filtraciones (= azúcares desviados por los racimos y los brotes). Las reservas son restituidas, en tanto que se produce azúcar en exceso con respecto ción 3: agravación de necesidades las grietas a las de la cepa (fruto, crecimiento de la veito=follaje getación) y que las grietan ctor de ón 3: agravación lo depermiten. las grietas =follaje r de ronco maduración o mal e Situación 3: agravación de las grietas Sin embargo, varias situaciones pueden perturbar la buena provisión de reservas, permitiendo identificar factores que agravan la inminente muerte de la cepa: Situación 2: gran pro o exceso de crecim Cepa agrietada verde: funcionamiento normal • Finalmente, los factores que agudizan las dificultades de transporte de la savia, no muy conocidos y que son desfavorables para la síntesis de las conexiones del floema (situación 3). filtraciones= racimos y brotes en crecimiento filtraciones= racimos y brotes en crecimiento rvas íces depósito=follaje productor de azúcar depósito=follaje productor de azúcar • La falta de agua o un mal estado del follaje, lo que frena la producción de azúcares (situación 1), • Una gran producción o un exceso de crecimiento vegetativo penalizando los azúcares disponibles para las reservas (situación 2), balde de ra filtraciones= racimos y brotes en crecimiento grifo=tronco agrietado grifo=tronco agrietado balde de raí balde=reservas de raíces Figura 11 Situación 1: falta de agua durante la maduración o mal estado del follaje depósito=follaje Situación 1: productor de azúcar falta de agua durante la maduración o mal estado del follaje filtraciones= racimos y brotes en crecimiento depósito=follaje grifo=tronco productor deagrietado azúcar grifo=tronco agrietado balde=reservas de raíces filtraciones= racimos y brotes en crecimiento balde=reservas Situación 2: gran producción de racimos de raíces o exceso de crecimiento vegetativo Cepa agrietada verde: funcionamiento normal ¿Soluciones para las depósito=follaje Cepa agrietada verde: funcionamiento normal productor de azúcar parcelas en deterioro? filtraciones= racimos y brotes La depósito=follaje comprensión de las causas de muerte permite en crecimiento generar grifo=tronco hipótesis productor de azúcaracerca de las soluciones para retraagrietado sar la mortalidad de parcelas establecidas. Estas pisfiltraciones= tas solo se pueden aplicar a las parcelas plantadas racimos y brotes con clones sensibles y aún jóvenes .La limitación de en crecimiento grifo=tronco la carga agrietado en uva mejora el estado de las cepas mientras las grietas no son muy severas, pero esto no es aceptable económicamente en el caso de muchas balde=reservas bodegas. Esta opción es reservada para los viñedos de raíces de mayor valor añadido. El riego es la pista más interesante a seguir. Está fundamentado por las observaciones de mortalidad hechas en dos ensayos « balde=reservas riego « Syrah por las que la mortalidad parece estar de raíces vinculada al nivel de suministro de agua: a más estrés hídrico, se observa una mayor mortalidad. Falta aún concretar las modalidades. ¿Existe un itinerario hídrico « ideal « dirigido a la provisión de reservas en las raíces que permita retrasar el agotamiento y la muerte de vides: el riego después de la cosecha? depósito=follaje Situación 2: gran producción de racimos productor de o exceso de crecimiento vegetativo azúcar filtraciones= racimos y brotes en crecimiento grifo=tronco depósito=follaje agrietado productor de azúcar grifo=tronco agrietado balde=reservas de raíces filtraciones= racimos y brotes en crecimiento balde=reservas de raíces Situación 3: agravación de las grietas depósito=follaje productor de azúcar Grifo=tronco agrietado filtraciones= racimos y brotes en crecimiento balde=reservas de raíces 07 Cepa agrietada verde: funcionam Conclusión Toda la información recopilada permite proponer un esquema que involucra a tres grupos de factores: el primero « detonador», el segundo «promotor» de la aparición de grietas y el tercero «de agravamiento», llevando a las plantas con grietas a la muerte. ISBN 2-906417-61-0 - Créditos de fotos: IFV - A.S. Spilmont, M. Claverie - DR La lesión seguida de una mala reorganización celular (factor detonador) generaría la formación de grietas en la cepa de Syrah predispuesta (clon sensible). Los mismos mecanismos aplicados a una Syrah no predispuesta (clon muy poco sensible) no conducirían a la formación de grietas .El factor detonante podría, por tanto, corresponder a la poda (plantas a pie franco) o al injerto, con un efecto modulador de este último en función del tipo de injerto y de los mecanismos celulares causados. Es lógico pensar que la reorganización celular generada por el injerto puede ser diferente según los porta-injertos, lo que explicaría el aumento de la sensibilidad observada con alguno de ellos (R 110 y 99R). En el viñedo, todas las causas de mal almacenaje de reservas (rendimientos elevados, suministro de agua deficiente...) podrían constituir los factores agravantes. Consejos prácticos: Para las nuevas plantaciones, solo los seis clones muy poco sensibles (470, 524,747, 1140, 1141, 1188) bajo la marca ENTAV-INRA son hoy aconsejables. Permiten tener la seguridad de obtener un paquete con una tasa de «deterioro» muy baja a largo plazo. Cabe señalar que el clon 470, muy poco productivo, no es adecuado para todas las situaciones. Para las parcelas establecidas, la sustitución de cepas deterioradas puede conseguirse a través de la plantación de plantas injertadas o por medio de re-injertado, debiendo en todo caso utilizar clones muy poco sensibles. Tanto el re-injertado como la reinserción de plantas con injertos son técnicas bastante costosas, con tasas variables de recuperación y entrada en producción. Su interés específico debe estudiarse caso por caso. Actualmente se está trabajando para conseguir referencias técnico-económicas más detalladas. Trabajos experimentales realizados con el apoyo financiero de : FranceAgriMer, de las regiones Languedoc-Roussillon, Provence-Alpes-Côte d’Azur, Rhône-Alpes, d’Inter Rhône y del Centro del vino rosado. Colaboraciones técnicas y científicas Estos resultados fueron obtenidos gracias a la colaboración de varios socios técnicos y científicos : - Camaras de Agricultura (Ardèche, Aude, Drôme, Gard, Hérault, PyrénéesOrientales, Rhône, Vaucluse), SGVCDR, SPBPVV, GRAB - INRA (Montpellier, Colmar, Dijon), CIRAD y UMR System. Para ampliar la información sobre el decaimiento de la Syrah www.vignevin.com anne-sophie.spilmont@vignevin.com marion.claverie@vignevin.com y sobre la marca ENTAV-INRA laurent.audeguin@vignevin.com Traducción y compaginación realizadas en el marco del proyecto WINETech PLUS WINETech Plus es un proyecto europeo cofinanciado por la UE en el marco del programa Interreg IV B SUDOE