Función de la Cortactina en la Regulación de RhoA y ROCK en Células Endoteliales Rodolfo Ismael Cabrera Silva. Centro Universitario de Ciencias de la Salud, Universidad de Guadalajara, cabreraismael2@gmail.com. Asesor Michael Schnoor, Centro de Investigación y de Estudios Avanzados del Instituto Politécnico Nacional. mschnoor@cinvestav.mx. Planteamiento del Problema: La cortactina es una proteína ya conocida por su importancia en la regulación de los filamentos de actina que forman parte del citoesqueleto de la célula. Se ha visto involucrada en la re-estructuración de la célula durante procesos inflamatorios. Datos preliminares muestran que en ausencia de cortactina hay un aumento en la expresión y activación de ROCK, una cinasa que inhibe a la fosfatasa de las cadenas ligeras de miosina (CLM) y fosforila CLM directamente, permitiendo que se unan a la actina y formen actomiosinas (fibras de estrés) que contraen a la célula y rompen las uniones intercelulares, aumentando así la permeabilidad. Debido a la gran importancia que tiene la preservación de la permeabilidad del endotelio para mantener la hemostasia, nos interesó comprender cómo la cortactina regula la activación de ROCK, para ello evaluamos la expresión y la principal vía de activación de ROCK: RhoA, una GTPasa de la superfamilia de Ras. Metodología: Se empleó como modelo la línea celular HMEC-1 (Human Microvascular Endothelial Cells) cuya expresión de cortactina fue depletada empleando un vector lentiviral que codifica un “small hairpin” RNA (shRNA) específico para cortactina. Se utilizó PCR-Inversa para observar los niveles de expresión de RNAm de cortactina, RhoA y ROCK1. Los niveles de expresión proteica se detectaron con el método de western-blot (WB). Se empleó el método “pull-down” con el péptido rhotekin y Glutation-S-Transferasa (GST) como bandera para precipitar solo RhoA-GTP (RhoA activo) que se detecta posteriormente por medio de WB. Para observar los cambios morfológicos se empleó la inmunoflorescencia (IF) con anticuerpos contra actina y cadherina vascular endotelial (VE-cadherina). Resultados: El proyecto no ha finalizado, pero los datos ya nos permiten concluir que cortactina es un regulador importante de la permeabilidad endotelial. Con PCR y WB se pudo demostrar la depleción de cortactina, de igual manera se detectó la presencia de RhoA y un incremento de ROCK1 y CLM fosforilada. Estos datos se confirmaron con una IF donde se observó un aumento de fibras de estrés y una reducción de VE-cadherina. Estamos en proceso de analizar los niveles de RhoA activa.