LD opt. (LDH PL)

LD opt. (LDH P-L)
Lactato Deshidrogenasa
MANUAL
RX MONZA
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS
REACTIVOS
R1a. Tampón/Sustrato
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8°C.
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de Lactato
Deshidrogenasa (LDH) en suero y plasma. Este producto es
adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza.
R1b. NADH
Reconstituir un vial de NADH R1b con 3 ml adecuado
de Tampón/Sustrato R1a. Estable durante 4 días entre
+2 y +8°C ó 5 horas entre +15 y +25°C.
Cat. No.
LD 401
20 x 3 ml
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón/Sustrato
NADH
R1a. Tampón/Sustrato
R1b. NADH
1 x 70 ml
20 x 3 ml
METODO UV(1)
Este es un método estándar optimizado según las
recomendaciones de la Deutsche Gesellschaft für Klinische
Chemie.
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Suero de Calibración Randox Nivel 3 (No. Cat. CAL 2351)
PRINCIPIO
MUESTRA
Suero, plasma heparinizado ó EDTA-plasma.
PROCEDIMIENTO PARA RX MONZA
Aspirar agua dulce doble destilada (ddH2O) y llevar a cabo una
calibración de ganancia en modo de flujo de células.
Seleccione el programa LDH en le pantalla ejecutar
prueba y lleve a cabo un blanco de agua como indican
las instrucciones.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Pipetear en tubos de ensayo:
Componentes
Muestra
Reactivo
LDH
Piruvato + NADH + H+
R1a. Tampón/Sustrato
Tampón fosfato
Piruvato
R1b. NADH
L-lactato + NAD+
Concentraciones en la prueba
50 mmol/l, pH 7,5
0,6 mmol/l
0,18 mmol/l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se
requieren al manejar reactivos de laboratorio.
La solución R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la
piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua
abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos
llamar inmediatamente a un médico.
La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías,
lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este
reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la
formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas
con hidróxido sódico al 10%.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si
se desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado
cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas
de laboratorio.
0.01 ml
0.50 ml
Mezclar inmediatamente y aspirar en Rx Monza.
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Se recomienda para esta calibración el uso de Solución Salina y
Serum de Calibración Randox Nivel 3 La calibración se
recomienda con cada cambio de lote o como se indica en los
procedimientos de control de calidad.
PROCEDIMIENTO MANUAL
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medida:
340 nm (Hg 334 nm ó Hg 365 nm)
1 cm de espesor
25°C, 30°C, 37°C
frente al aire
Pipetear en la cubeta:
25°C/30°C
Macro
Semi Micro
Muestra
Reactivo
0,1 ml
3,0 ml
0,04 ml
1,0 ml
37°C
Macro Semi Micro
0,05 ml
3,0 ml
0,02 ml
1,0 ml
Mezclar, leer la absorbancia inicial al cabo de 0.5 min y
empezar a cronometrar el tiempo simultáneamente. Leer de
nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min.
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MANUAL LD 401
CALCULOS
Para calcular la actividad de la LDH utilizar las fórmulas
siguientes:
Macro
25°°C/30°°C
U/l = 4921 x A 340 nm/min
U/l = 4127 x A 340
nm/min
U/l = 4207 x A Hg 334
nm/min
U/l = 7647 x A Hg 365
nm/min
U/l = 5016 x A Hg 334 nm/min
U/l = 9118 x A Hg 365 nm/min
Macro
Semi Micro
U/l = 9871 x A Hg 334 nm/min
U/l = 17941 x A Hg 365 nm/min
PRECISION
Precisión Dentro del Análisis
Nivel 2
Media (U/l)
422
DE
16.3
CV(%)
3.86
n
20
Nivel 3
728
13.1
1.80
20
Precisión Entre Análisis
37°°C
U/l = 9683 x A 340 nm/min
LINEALIDAD
Este método es lineal hasta 1191 U/l. Si la concentración de la
muestra excede este valor, diluir la muestra 1+9 con 0,9%
Solución NaCl y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por
10.
Semi Micro
U/l = 8095 x A 340
nm/min
U/l = 8252 x A Hg 334
nm/min
U/l = 15000 x A Hg 365
nm/min
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y
Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles
distintos de controles al menos una vez al día. Los valores
obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si
los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye
error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
Nivel 2
422
16.9
3.99
20
Nivel 3
728
20.2
2.78
20
CORRELACIÓN
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 0.92 X + 34.5
y un coeficiente de correlación r = 0,9829
Se analizaron 45 muestras de pacientes con valores de entre
210 y 941 U/l.
REFERENCIAS
1. Rec. GSCC (DGKC); J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1970),
8: 658; (1972), 10: 182.
2. Weisshaar, H.D., et al, Med. Welt. (1975), 26: 387.
VALORES NORMALES EN SUERO(2)
Adultos
25°C
30°C
37°C
120-240 U/l
160-320 U/l
230-460 U/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de
la población.
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante
un analizador Rx Monza en funcionamiento a 37ºC con el
volumen de aspiración fijado a 500 µl.
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de LDH con un nivel
aceptable de precisión se determinó en 55,1 U/l.
Revisado 15 Sep 10 bm
Rev. 001
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