Crioconservación de embriones somáticos de Alnus glutinosa (L.) Gaertn M.C. San José1, M.T. Martínez1, S. Valladares2, M.J. Cernadas1, R. Montenegro1, E. Corredoira1 1 Instituto de Investigaciones Agrobiológicas de Galicia. CSIC. Avda de Vigo s/n, 15705 Santiago de Compostela 2 BIOMIVA, Ctra M-501, vía de servicio de Vilaviciosa de Odón a Boadilla del Monte, Vilaviciosa de Odón, 28670 Madrid La embriogénesis somática (ES) es actualmente uno de los principales métodos biotecnológicos para la propagación en masa de material vegetal y con un gran potencial en los programas de mejora genética. La combinación de la ES con la crioconservación de los cultivos embriogénicos puede evitar los efectos perjudiciales que se producirían durante el mantenimiento de los cultivos, como la contaminación, variación somaclonal o pérdida de la competencia embriogénica. El uso integrado de la embriogénesis somática y la crioconservación permitirá el almacenamiento a largo plazo y la recuperación de los clones obtenidos. Grupos de embriones somáticos de Alnus glutinosa (2-5 mm) mantenidos en cultivo mediante embriogénesis secundaria fueron precultivados durante 3 días en medio MS con los macronutrientes reducidos a la mitad (MS1/2; Murashige y Skoog 1962) suplementado con 0.3 M de sacarosa y posteriormente tratados con una mezcla de 2M de glicerol y 0.4 M de sacarosa durante 20 minutos a temperatura ambiente. Los embriones somáticos fueron entonces deshidratados con la solución de vitrificación PVS2 (Sakai et al. 1990) durante distintos periodos de tiempo (0-90 min), obteniendo los mejores resultados cuando el PVS2 fue aplicado durante 60 min a 0ºC. Después del tratamiento con PVS2 los embriones fueron directamente introducidos en los tanques con nitrógeno líquido a -196ºC durante al menos 2 horas, descongelados en un baño de agua a 40ºC durante 2 minutos y transferidos a MS1/2 con 0.1 mgl-1 benciladenina. Los cultivos se mantuvieron en oscuridad durante una semana y posteriormente fueron transferidos a una cámara de crecimiento con fotoperiodo de 16h/8h. Los porcentajes de supervivencia obtenidos mediante esta técnica superan el 90% y no se observaron modificaciones en las plantas desarrolladas a partir de los embriones somáticos crioconservados. Murashige T, Skoog F (1962) Physiol. Plant. 15: 473 Sakai et al. (1990) Plant Cell Rep. 9: 30