Trabajo presentado

Determinación de hormonas esteroideas y tiroideas en plasma
de pez por LC/MS/MS
M.L. Fernández-Cruz,1* M.D. Hernando,1 C. Gerke,1 F. Torrent,2 J.M. Navas,1
1 Departamento de Medio Ambiente, Instituto Nacional de Investigación y Tecnología
Agraria y Alimentaria, Madrid, España 2 ETS Ingenieros de Montes, Universidad
Politécnica de Madrid, España
*fcruz@inia.es
La presencia de contaminantes con actividad endocrina en el agua o en los
piensos puede afectar los niveles plasmáticos normales de hormonas esteroideas y
tiroideas de peces. Por ello es importante disponer de técnicas analíticas que nos
permitan cuantificar estas variaciones. Los ensayos por ELISA (enzyme-linked
immunosorbent assay) o por radioinmunoensayo (RIA) han sido los métodos utilizados
con mayor frecuencia para determinar niveles hormonales. Sin embargo estos
métodos presentan ciertos inconvenientes tales como, falta de especificidad por la
posibilidad de producirse reacciones cruzadas, su elevado coste y la aplicabilidad a
una única hormona por ensayo. Recientemente se han desarrollado métodos multiresiduo para el análisis químico de hormonas esteroideas en muestras de agua o de
hormonas tiroideas en plasma humano. No obstante, no existen métodos para
determinar simultáneamente niveles de hormonas tiroideas y esteroideas en plasma
de pez.
En el presente estudio, se ha validado un método por cromatografía líquida
acoplada a espectrometría de masas con analizador de triple cuadrupolo (LC/MS/MS)
para la determinación simultánea de quince hormonas en plasma de pez. Inicialmente
se ha utilizado plasma de trucha común (Salmo trutta) para la validación del método.
La separación cromatográfica se ha realizado en una columna C18 utilizando un
gradiente de fase móvil acetonitrilo-agua. El método ha permitido detectar estas
hormonas a niveles de 0.5 - 5 ng hormona / ml plasma de trucha. El propósito es
validar este método en diferentes especies de peces adultos para determinar
simultáneamente los niveles plasmáticos de las hormonas triiodotironina (T3), tiroxina
(T4), hidrocortisona, aldosterona, progesterona, 11-ketotestosterona, 17αmetiltestosterona, 4-androsten-11-β-ol-3,17-diona, adrenosterona, testosterona, 4androsten-3,17-diona, estrona (E1), estriol (E3), 17α-estradiol (αE2) y 17β-estradiol
(E2). Para ello, se han recogido muestras de sangre por punción caudal en diferentes
especies de pez a lo largo de varios meses.