LlPOBllOQUlMlCA COMPARADA Estudio de Iípidos y lip~oproteínasen diversas especies animales " Dr. AUGUSTO COROMINAS VILARDELL (Barcelona) A mi padre y maestro, doctor J . M . Corominas Planellas, miembro corresponsal de esta Real Academia desde 1952. 1. INTRODUCCION 1. OBJETO Y MOTIVACION DE LA 1NVESTIGAC:ION En esta investigación de Lipobioquímica comparada hemos efectuado una prospección biológica, en el sentido de estudiar la composición de 1ípidos plasmáticos en diversas especies animales, siempre comparándolas con la especie humana. Si bien es un trabajo de índole zoológico o veterinario está siempre enfocado con la mentalidad de un médico. Personalmente hemos estudiado la composición lipídica del suero humano en condiciones normales y en dislipemias. También hemos investigado los lípidos de orina, LCR, seinen, derrames, heces, saliva, bilis.. . A nivel tisular hemos estudiado la composirión lipídica de cerebro, arteria, pulmón, riñón, hígado, músculo esquelético, miocardio, grasa epiploica, médula ósea, etc. También hemos investigado la composición lipídica de alimentos y bebidas para establecer el régimen ideal en casos particulares de hiperlipemias. Por todo ello nuestras investigaciones han sido hasta el momento exclusivamente clínicas, pero igualmente como se ha demostrado una ontogenia para los lípidos cerebrales, este trabajo se ha iniciado con objeto de demostrar si existe una filogenia para los 1ípidos séricos, es decir, si los lípidos varían de acuerdo con la escala zoológica. Este trabajo es el primero de una serie que estamos desarrollando y en él hemos escogido aquellos animales que nos han sido más fácil, como: ca- * Premio "Anales de Medicina y Cirugía" del Concurso 1971 de la Real Academia de Medicina de Barcelona. - Lema: Monosioaloga~gliósido. 98 ANALES DE MEDICINA Y ClRUGlA ballo, cabra, cerdo, cobayo, cordero, conejo, gallina, perro y vaca, habiendo comparado sus lípidos séricos con los humanos. El estudio ha sido complejo y tiene un valor limitado puesto que se han escogido en general, 10 animales de cada especie procurando que sean machos y hembras, de la misma edad, sanos, de los que se ignoraba la comida del día anterior y si habían ingerido antes del sacrificio. La estadística es reducida, pero la presentamos a título de prospección biológica y considerando que las técniras no han sido empleadas en sueros animales, realizada de una forma lo más rigurosa posible dentro de nuestra condición de médico y nuestras posibilidades de obtención de muestras. Por otra parte, manejamos una gran cantidad de parárnetros lipídicos, lo que da mayor validez a la investigación. Este trabajo está distribuido en seis Vol. L11. N? 228 capítulo. E n el primero revisamos brevemente la bioquímica de Iípidos y lipoproteínas. E n el segundo, de matcrial y métodos, consideramos las condiciones en las que se ha verificado la extracción de la sangre y un resumen de los métodos químicos, elcctroforéticos y cromatográficos empleados en la investigación. En el capítulo 111 consideramos los resultados obtenidos en los distintos animales ordenados por orden alfabético. Al final desarrollamos los lípidos séricos de personas normales. E n el capítulo IV planteamos una discusión bioquímica y metabólica. En el V exponemos un resumen y las conclusiones obtenidas. Finalmente, en el VI, desarrollamos la Bibliografía consultada. Agradecemos la valiosísima colaboración técnica prestada por las señoritas Mercedes Roigé, Juana María Palomes, Ana Roigé, Miki Abril y María Clarós. ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA Abril-Junio TABLA 1 I. LIPIDOS SIMPLES M onoglicéridos - Glicéridos Diglicéridos Triglicéridos - Céridos - Esteres de colesterol - Acidos biliares 11. LIPIDOS COMPLEJO'S - Fosfolípidos i Glicerofosfolípidos Acido fosfatídico Cefalina Lecitina Serinf osf átido Lisolecitina i ~sfin~ofosfolí~idos - Esfingomielina - Glucolípidos i Cerebrósidos i Sulfátidos m Gangliósidos 111. DERIVADOS DE LOS LIPIDOS Saturados - Acidos grasos Hidroxiácidos Cíclicos - Prostaglandinas - Alcoholes i Glicerol i Esfingosina i Colina i Etanolamina i Serina i Inositol i Colesterol 100 2. ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA BIOQUIMICA DE LOS LIPIDOS A) Definición Son un grupo de principios inmediatos que poseen C, H, O, N y ocasionalmente S y P que se agrupan por presentar las siguientes propiedades comunes : a) Insolubilidad en agua. b) Solubilidad en los llamados disolventes de las grasas como éter, benceno, cloroformo, tetracloruro de carbono.. . c) En general son ésteres de ácidos grasos superiores con distintos alcoholes. A 20" C los glicéridos pueden ser sólidos o líquidos, llamándose respectivamente grasas o aceites. Son un componente importante de la dieta, teniendo un importante poder calorífico. En los maimíferos forman sustancia de reserva, acumulándose en el panículo adiposo. Algunos lípidos complejos forman parte de las complicadas estructuras del tejido nervioso. Ligados a las proteínas forman las membranas celulares y de las mitocondrias. Clasificación. En la tabla 1 presentamos la clasificación de los lípidos que seguiremos, modificada de la que expuso BLOOR. Los Iípidos simples poseen ácidos grasos y un alcohol. En los glicéridos el alcohol es glicerol, en tanto en los ésteres de colesterol, éste actúa como alcohol; en las ceras los alcoholes son de gran número de C, los lípidos complejos tienen, además de un alcohol y ácidos grasos otros grupos químicos, como ácido fosfórico (fosfolípidos) o moléculas glucídicas (glucolípidos). Vol. LII. N.O 228 a) Lípidos simples. a,) Glicéridos son ésteres de glicerina con ácidos grasos superiores. Scgún el número de OH de la glicerina esterificada, pueden dividirse en mono, di y triglicéridos. El radical ácido de los monoglicéridos pueden estar enlazados con el carbono alfa o beta (llamados también 1'2) del glicerol. v HOCH I H,COH H COH *1 B) monoglicérido (2-monoglicérido) Los diglicéridos tienen dos grupos ácidos esterificando los hidróxilos del propanotriol. Los diglicéridos que se encuentran en la naturaleza son: alfa, beta diglicéridos. Los ácidos grasos de los diglicéridos pueden ser iguales o distintos. En los triglicéridos están esterificados los OH de la glicerina por tres ácidos grasos. Si estos ácidos grasos 4 * ANALES DE MEDICINA Y ClRUGlA Abril-Junio son iguales se llaman triglicéridos simplcs. En caso de que sean distintos se llaman triglicéridos mixtos, siendo en este caso frecuente la presencia de uno o dos ácidos de cadena no saturada. 101 capa fina de Silicagel impregnada con aceite de parafina halla los siguientes triglicéridos de suero. - Trioleína. - Linoleodioleína. - Oleodilinoleína. O l - Trilinoleína. - Triglicérido no HC-O-C--F? 1 1 La denominación de los triglicéridos está en relación con los ácidos grasos que lo constituyen. Un triglicérido compuesto por tres moléculas de ácido palmítico se denomina tripalmitina. La oleoplmitoestearina es un triglicérido mixto compuesto por los ácidos oleico, palmítico y esteárico. HJC-(CH~)X- C-O--CHz 1 H~C-(CH~~~-C-O--CH &C-(CH2lZ I 4o -C-O --CH2 Triglicérido mixto e a*) Estéridos: Son ésteres de esteroles; lo que más nos interesa considerar son los ésteres de colesterol. Este, tanto en su forma libre como en la esterificada es una de los componen lipídicos más importantes del suero y de tejidos humanos. CH, 1!0 4o 40 identificado. Los triglicéridos de los depósitos grasos de los animales tienen ácidos palmítico, esteárico y oleico. L,a grasa de los depósitos adiposos humanos posee los siguientes ácidos grasos: ácido palmitico 25 %, ácido esteárico 6 %, palmitoleico 7 %, oleico 50 %, Iinoleico y linolénico 8 % otros ácidos grasos esenciales 2 %. MICHALEC, mediante cromatografía en El colesterol comprende alrededor del 20 % de los lípidos cerebrales, encontrándose casi totalmente en el animal adulto en forma libre. Los ácidos grasos de la pequeña concentración de ésteres de colesterol cerebrales difieren de los éteres de colesterol plasmáticos. En el cerebro predominan ésteres de ácidos grasos saturados y monoenoicos. En el animal en fase temprana de desarrollo una considerable proporción del colesterol del SNC puede ser esterificada. Además del colesterol en el tejido nervioso pueden encontrarse otros esteroles como colestanol, A-7 colestanol y 7 dehidrocolesterol (COOK1958). 102 Vol. LII. N." 228 ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA En el suero humano el colesterol se presenta en un 30 % en forma libre y el resto en forma esterificada. Por cromatografía en capa fina pueden separarse los éstere:; de colesterol que están en la siguiente según ZOLLNER proporción : Esteres saturados (palmitato, estearato) 16 I4'0. Monoenoicos (oleato) 23'6 I 3'4. Dienoicos (linoleato) 46'7 +4'8. Tri y tetraenoico (linolenato y araquidonato) 11,8I 3,4. Polienoicos 2,O 1 1,O. a3) Acidos biliares: Los ácidos biliares son derivados del núcleo de colesterol. Se eliminan por la bilis, los más importantes son: Acido cólico 3 alfa, 7 alfa, 12 alfa trihidroxicolánicc. Acido desoxicólico 3 alfa, 12 alfa dihidroxicolánico. Acido quenodesoxicólico 3 alfa, 7 alfa dihidroxicolánico. o amidas de ácidos grasos con diversos alcoholes y además tienen otros grupos químicos. Se distinguen dos grupos fundamentales : 1." Glicerofosfolípidos que poseen glicerol y ácido fosfórico y 2." Esfingolípidos que tienen una base de larga cadena parafínica de 18 C. con un doble enlace, dos grupos hidróxilo y un grupo amínico (esfingosina). bl) Glicerofosfolípidos : En este grupo uno de los hidróxilos de la glicerina está esterificado por ácido fosfórico, se describen : alfa) Acidos fosfatídicos: Están constituidos por glicerol, dos moléculas de ácidos grasos y una molécula de ácido fosfórico. o Il O H,C-OC-R, II R2-CO-CH I 1 7 H,C-O-P-OH l OH Los ácidos fosfatídicos son productos intermediarios en la síntesis de fosfolípidos y triglicéridos en los tejidos animales. Acido cólico Todos estos están en la bilis combinados con la glicina o con la taurina. Los ácidos biliares pueden separarse mediante cromatografía en capa fina y en fase gaseosa. b) Lípidos complejos: Son ésteres Los ácidos alfa-lisofosfatídicos difieren de los anteriores en que carecen del ácido graso 'que esterifica al li Abril-Jiinio 1 ~ * l P ANALES DE MEDlCINA Y ClRUGlA hidróxilo del carbono beta de la glicerina. beta) Lecitinas: (Fosfatidilcolinas) son semejantes a los ácidos fosfatídiros cn los que el ácido fosfórico esterifica además una molécula de colina. De acuerdo con los ácidos grasos pueden distinguirsc múltiples clases de lecitinas. Al parecer el radical ácido que esterifica en posición alfa es de cadena saturada, en tanto que el que lo hace en posición beta es de ca- 103 dena no saturada. Las lecitinas están ampliamente difundidas en la naturaleza. En el cuerpo humano se encuentran especialmente en cerebro o hígado. E n el suero existe una proporción de un 63 % en relación con el total de fosfolípidos. Mediante la combinación de técnicas cromatográficas en capa fina y fase gaseosa, VITELLIy cols. (1968) encuentran la siguiente propor:ión de ácidos grasos esterificando las lecitinas séricas. 1. fosfatidiletanolamina 1. fosfatidil-serina Acido mirístico " " " " " " " palmítico palmitoleico esteárico oleizo linoleico linolénico araquídico Las lisolecitinas son semejantes a las lecitinas, pero carecen del ácido graso no saturado situado en posición beta. Las lisolecitinas se encuentran en la mayoría de los tejidos orgánicos. En el suero humano se halla en una proporción del 9 % en relación con el total de fosfolípidos, los ácidos grasos más importantes constituyentes de las lisolecitinas son palmítiro, esteárico, oleico y linolénico. 104 ANALES DE MEDICINA Y CIRUGlA gamma) Cefalinas (fosfatidiletenolamina y fosfatidilserinas). Son glicerofosfolípidos semejantes a las lecitinas pero en lugar de colina tienen etanolamina (colamin-cefalinas) o serina (serin-cef alinas). Las cefalinas fueron aisladas en el En el suetejido nervioso por FOLCH. ro humano se encuentran en una proporción de un 6 % en relación con los fosfolípidos totales. VITELLI y COIS.(19á8) mediante CCF y CFG encuentran la siguiente proporción de ácidos grasos en las cef alinas séricos: Vol. LII. N.O 228 Acido mirístico " " " " " " " palmítico palmitoleico esteárico oleico linolénico linoleico araquídico Las alfa-lisocefalinas difieren de las cefalinas en que carecen del ácido gra- Cardiolipina so que esterifica el glicerol en posición beta. delta) Cardiolipina: Se ha obtenido del corazón. Tiene interés, puesto que se utiliza en el diagnóstico de la sífilis. Posee dos ácidos fosfóricos, tres moléculas de glicerol y cuatro ácidos grasos. epsilon) Plasmalógenos: Son semejantes a los compuestos lecitina o cefalina con la particularidad de tener en posición alfa o beta un aldehido graso unido a la glicerina en forma de éter enolico. dseda) Inositol fosfátidos : Son semejantes a las lecitinas y cefalinas que tienen como base el inositol en lugar de lecitina o colaniina. Según el nú- mero de fosfóricos de la molécula se clasifican en monofosfoinositoles, difosfoinositoles y fosfoinositoles complejos. b2) Esfingolípidos. Reciben este nombre los lípidos complejos que tienen esfingosina (Derytho-1,3dihidroxi, 2 amino, 4 trans- CAPSULAS La administración matutina de 1-2 capsulas trabaja en ritmo sincronizado con la secreción suprarrenal fisiológica. l NYECTABLE Vía i. m. (efecto sistémico), intra o periarticular e infiltración intradérmica o intralesional STERISONE PRONTOTARD cubre todas Ias lndieaciones de le corticoterapia frente a reainiatbsmos, asma, eslagenosic, hemopatías, dermatosis graves, alergias, etc. 11ADE STERISONE P R O N T O T A R D Cápsulas Fco/lO, 98,40 pts. STERISONE PRONTOTARD lnyectable Fco-vial 2 cc.. 73.60, d liofilizado antiurémico I acción rápida e intensa PRESENTACION lnyectable Gotas vía oral F r a s c o de 60 C.C. F r a s c o de 120 C.C. L 125'90 P t a s . 227'50 P t a s . ~ Apartado 400-ZARAGOZA ~ \ urea M I 1 Abril-Junio sotadequeno), dihidroxiesfingosina, fitoesfingosina o deshidrofotiesfingosina. La esfingosina está siempre unida a un ácido graso de larga cadena, formando una amida llamada ceramida. Se han demostrado más de 50 ácidos grasos saturados, no saturados o hidroxilados, unidos a la esfingosina, cuya longitud de cadena oscila entre 14 y 30 átomos de carbono. Las múltiples combinaciones posibles entre los diferentes tipos de ácidos grasos y de esfingosina son a menudo características para un determinado esfingolípido. es la esfingosina, está esterificado por un grupo fosforilcolina. Las esfingomielinas se encuentran en su mayoría en los tejidos orgánicos, especialmente en el tejido nervioso. En el suero por CCF pueden separarse dos esfingomielinas. Se encuentran en una propoxión del 22 % en relación con el total de fosfolípidos. VITELLI y cols. mediante cromatografía en fase gaseosa demuestran los siguientes ácidos grasos en las esfingomielinas séricas : Acido mirístico " " " " EII la fórmula de más abajo puede observarse la estructura de la ceramida. En la parte superior está la esfingosina, cuyo hidróxilo terminal servirá para el enlace con otros compuestos, como fosforilcolina (esfingomielinas) hexosas u oligosacáridos (Glucolípidos). En las mol6culas de 4- 1 O5 ANALES DE MEDICINA Y CZRUGZA esfingolípidos existirán, por tanto, una parte lipófila constituida pos la ceramida y una porción hidrófila, el oligosacárido. alfa) Esfingomielinas. Son ceramidas en las que el hidróxilo terminal " " " palmítico palmitoleico esteárico oleico linoleico linolénico araquídico Cl4: O Cl5: 0 C16:0 C16: 1 Cl7: 0 Cl8: 0 Cl8: 1 Cl8: 2 C18: 3 CzO:O 2,61 % 0,89 % 48,61 % 1,27 % 1,97% 26,50 % 5,50 % 3,40 % 8,47 % beta) Glucoesfingolípidos. En los glucoesfingolípidos el grupo hidroxilo terminal de la esfingosina está sustuitido por una hexosa o por un oligosacárido. Se consideran 4 grupos fundamentales dentro de los glucoesfingolípidos: cerebrósidos, sulfátidos, ceramidas plihexósidos y gangliósidos, todos ellos de gran importancia en la formación de estructuras lipídicas del tejido nervioso. Los cerebrósidos se caracterizan por tener una molécula de galactosa unida por un enlace glucosídico al hidróxido terminal en la esfingosina de la ceramida. ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA 106 H H OH -. . Según el ácido graso de la ceramida se distinguen cuatro cerebrósidos: Cerasina Acido lignocérico Frenosina Acido cerebrónico Nervona Acido nervónico Oxinervona Acido oxinervónico Por hidrolisis allcalina del enlace peptídico con hidróxido básico se consigue la separación del ácido de los cerebrósidos obtenidndose una molécula de psicosina foirmada por esfingosina-galactosa. Ceramida B glucosa (4 Vol. LII. N.O 228 En la enfermedad de GAUCHER existe un acúmulo de cerebrósidos, El enlace éster se establece en el hidroxilo del carbono 3 de la galactosa. Los sulfátidos se localizan en la sustancia blanca cerebral. Aumentan anormalmente en la leucodistrofia metacromática (sulfatidosis). Las ceramidas-polihexósidos se diferencian de los cerebrósidos en que tienen otras moléculas glucídicas ligadas a la galactosa. STOFFELdistingue los siguientes: - Ceramida dihexósidos aislados de bazo y eritrocitos. Aumenta en la enfermedad de FABRY. SU estructura es la siguiente: ...... 1) B-galactosa Las ceramidas trihexósidos han sido anti A y anti B están constituidos por aisladas del riñón, hígado y suero. YA- ceramida polihexósidos cuya estructuMAKAWA aisló cerainidas tetrahexósira se ha dilucidado recientemente. dos en los eritrocitos denominándolos En la sustancia gris cerebral Suzuglobósidos : KI v cols. estudian en tres controles Ceramida-glucosa (4 ...... 1) gal la concentración de ceramidas hexósi(4 .. .... 1) gal (6 ...... 1) gal dos. Los resultados están expresados N. acetilgalactosamina en porcentaje de la cantidad total de Se ha demostrado que los grupos lípidos. Ceramida hexósidos 2,s meses 3 8 años años Monohexósido Glucósido Galactósido Dihexósido Trihexósido Tetrahexósido Sulf átido Indicios 0,65 0,30 0,19 0,27 0,79 O 1,55 0,23 0,32 0,09 0,45 o 1,90 Indicios Indicios Indicios 1,40 Abril-Junio ANALES DE MEDICINA Y ClRUGIA - Los gangliósidos son un grupo de glucoesfingolípidos que se encuentran en el tejido cerebral. Difieren de los cerebrósidos y de las ceramidas polihexósidos en que aquéllos poseen ácido N-acetil neuraminico (NANA). La estructura de los gangliósidos debido a su-gran número es compleja, en la figura 1 exponemos la fórmula del GMl, la nomenclatura es asimismo muy confusa. Cada autor que ha estudiado el problema tiene la suya, la cual ocasiona la natural confusión cuando se comparan resultados. La que tiene quizás una mayor aceptación es la de SVENNERHOLM, cuya modificación propuesta por KOREYexponemos en la tabla 11. SUZUKI y COIS. (1970) encuentran la siguiente proporción de gangliósidos de sustancia gris y blanca cerebral. SUBSTANCIA GRIS Figura 1. Fórmula GM2. o 11 H02C- C--CH2- 107 SUBSTANCIA BLANCA Estos valores están expresados en procentajes de total de N-acetilneuramínico en gangliósidos individuales. y 7 PH /)H /H C-CC-C-C-CH20H I I I I I H NH, OH H H AC. NEURAM~NICO En la enfermedad de TAY-SACHS C) Derivados de los lípidos. Son existe un aumento de GM2 en el ce- los compuestos orgánicos obtenidos rebro. por hidrólisis de los lípidos. Interesa ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA 108 destacar, por una parte, los alcoholes, y por otra los ácidos grasos. Vol. LIL. N.O 228 C1) Alcoholes. Los más importantes biológicamente es la glicerina (Propanotriol). Tabla 11 CLASIFICACION DE GANGLIOSIDOS Monosialogangliósidos G6 (GMJ Gs (GMJ G, (GM,) ................................. R - G ~ -uGal NANA .................................R - Glu - Gal - N NANA .................................. R - Glu - Gal- N ác. gal ác. gal- Gal NANA G3 (GD,,) ................................. R - Glu - N G, (GT,) ................................. R - Glu - Gal - N ác. gal- NANA NANA G2 (GDIb) ................................. R - Glu - Gal- N ác. gal- Gal NANA-NANA ' ác. gal- NANA NANA - NANA R = Ceramida. N ác. gal = N acetilgalactosamina. Glu = Glucosa. Gal = Galactosa. NANA =N acetilneuramínico CH20H l CHOH Con dos alcoholes primarios y otro secundario. Son los constituyentes del mono, di y triglicéridos y también de los glicero-fosfolípidos. Por deshidratación se produce la acroleina, sustancia a la cual se le ha atribuido un cierto papel en la patología de algunas enfermedades autoinmunes. Podemos citar también los alcoholes de las ceras; saturados de [cadenaslar- gas: láurico (Ci2) de la lanolina, mirístico (CI4) y araquílico (C2,,) de ceras de insectos, carnaubílico (CIJ de la cera de las abejas. Un ejemplo de su constitución lo tenemos en el alcohol cerílico. CH3 - (CH& -CH20H Podemos nombrar también los alcoholes de los lípidos compuestos. Abril-Junio Colina ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA HO -H2C-- CH2-N - CH, \ CH3 Colamina HO-C-C-NH2 I I H: H Serina HO-C-C-COOH I I H H C,) Acidos grasos. Se llaman ácidos grasos a los áridos carboxílicos que forman parte de las moléculas lipídicas. En general son de cadena lineal larga y habitualmente con un número radical carboxílico. En la Tabla 111 podemos observar una seric de ácidos grasos de importancia bioquímica. Acidos grasos Glicéridos Fosfolipídico Esteres de colesterol La cadena de ácidos grasos puede ser saturada con uno o más dobles enlaces. En el organismo donde los podemos encontrar combinados con los Iípidos (esterificación o formación de enlaces amídicos) o bien en forma libre. PEZOLDestudia la proporción de los diferentes ácidos graTos que se combinan con los lípidos que forman las lipoproteínas. Palmítico Esteárico % % 31 34 1O BLUTONy COIS. (1965) nnediante el técnicas electroforéticas y cromatográficas en capa fina y fase gaseosa, estudia la composición de los ácidos grasos del suero, tanto en su forma libre como en la esteriíicada, en el individuo adulto normal, encuentra 110s porcentajes siguientes : 14 (12 (15 (16 (16 (18 (18 (18 (20 : O) :O) : 0) : 1) : 1) : 1) : 2) : 4) Oleico Linoleico Araquidónico % % % 38 11 17 16 21 55 - 0,5 % l,o % palmítico 22,9 % palmitoleico 5,6 % esteárico 7,8 % oleico 22,8 % linoleico 31,3 % araquidónico 5,2 % Acido láurico Acido Acido Acido Acido Acido Acido 1O 6 ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA 110 Vol. LII. N." 228 TABLA 111 ACIDOS GRASOS Acético Butírico Caproico Caprífico Cáprico Láurico Palmítico Esteárico Lignocérico Cerebrónico Acidos grasos saturados CH3-COOH Fermentación acética CH3(CH2)2-COOH Mantequilla CH,(CH2),-COOH Mantequilla, aceite CH3(CHZ),-COOH Mantequilla, aceite CH3(CH2),-COOH Mantequilla, grasa CH3(CHJlo-COOH Grasa CH3(CH2)i4-COOH Grasas animales y vegetales CH3(CH2)16-COOH Grasas animales CH3(CHZ),,-COOH Lípidos complejos CH3(CH2)21-CH-COOH Lípidos complejos OH Oleico Nervónico Linoleico Oxinervónico Acidos grasos no saturados CH3-(CH2),-CH =CH-(CH,),-COOH CH3-(CHz)i3-CH =CH-(CH2),-COOH @H,-(CHJ7-CH=CH-CH2-CH=CH-(CH,),-COOH CH,-(CHZ),~-CH =CH-(CH2)6-CH-COOH OH En el suero hay un total de 200 a 400 mg de ácidos grasos, 30 a 60 mg de libres y el resto de esterificados. Las proporciones de ácidos grasos libres en el suero son los siguientes: Acido Acido Acido Acido Acido mirístico 1,5 % miristoleico 0,5-1 % palmítico 21-27 % palmitoleico 2-10 % esteárico 2-16 % Grasas Cerebrósidos Grasas y aceites Cerebrósidos Acido oleico 25-50 % Acido linoleico 5-20 % Acido araquidónico 2-5 % Además de los ácidos grasos mencionados tiene también gran interés considerar la estructura del ácido fitánico, que está aumentado en la enfermedad de REFSUM,tanto en su forma libre como esterificando glicerina, colesterol y fosfolípidos. Su estructura es la siguiente (3.7.11.15 tetrametil hexadecanoico): C3) Prostaglandinas. a partir de glándulas vesiculares. Actualmente el número de compuestos Las prostaglandinas son sustancias de este tipo aislados es muy numerocon destacada acción hormonal aisla- so, sin embargo, todos derivan del áciy SJOVALL do prostanoico. das en 1957 por BEKGSTROM Abril-Junio 10 ANALES DE MEDICINA Y CIRUGZA B E 9 7 11 13 5 3 Es un ácido graso con 20 átomos de carbono con un ciclo pentagonal; los 'dos átomos de hidrógenos ligados a los carbonos 8 y 12 están en posición trans. Las llamadas prostaglandinas primarias tienen los siguientes nombres con sus estructuras químir,as : 1 dzO 15 17 19 AC PROSTANOICO PGE,: PGE2: PGE3: PGF,: PGF2: PGF3: 11 alfa - 15 - dihidroxi - 9 - 0x0 - 13 ácido prostaenoico 11 alfa - 15 - dihiclroxi - 9 - 0x0 - 5 - 13 protadienoico 11 alfa - 15 - dihidroxi - 9 - 0x0 - 5 - 13 - 17 prostatrienoico 9 alfa - 11 alfa - 15 trihidroxi - 13 prostaenoico 9 alfa - 11 alfa - 15 trihidroxi - 5 - 13 prostadienoico 9 alfa - 11 alfa - 15 trihidroxi - 5 - 13 - 17 prostatrienoico Se han descrito además ocho prostaglandinas más en el líquido seminal humano. La acción primordial de las prostaglandinas radica en su acción sobre los múscullos lisos y contracción del músculo uterino. 3. 111 LIPOPROTEINAS Los Iípidos plasmático~sno son lo - Alfa-Lipoproteínas . - Beta-Lipoproteínas . - Prebeta-Lipoproteínas . - Quilomicrones . . . . . . suficientemente polares para circular en forma libre, por lo cual es preciso la unión con proteínas, resultando unas macromoléculas llamadas genéricamente lipoproteínas. Existen cuatro tipos fundamentales de lipoproteínas, resultando unas macromoléculas que reciben diversos nombres de acuerdo con el método de estudio. High density lipoprotein (LDH) Low density lipoprotein (LDL) Very low density lipoprotein (VLDL) Estos cuatro grupos fundamentales mo las alfa* globulinas; está compueshan sido demostrados por medio de ta de 45 a 55 % de proteína (llamada técnicas como precipitaciónn salina, apoproteína A), 30 % fosfolípidos y precipitación por alcohol, inmunopre- 18 % colesterol. Su peso molecular cipitación, electroforesis, ultracentri- se estima entre 165.000 y 400.000 fugación y cromatografn'a (FREDRICK- comparada con la beta-lipoproteína tiene relativamente más colesterol esteriSON y COIS.1967). La alfa-lipoproteína, tiene una mo- ficado y fosfolípidos. vilidad electroforética sobre papel coMediante ultracentrifugación se ha 112 ANALES DE MEDICINA Y ClRUGlA conseguido aislar dos lipoproteínas de distintas densidades, una con densidad 1.062-1,12 llamada HDL2 (también alfaLPA) y otra entre 1,12 y 1,21 llamada HDL3 (alfaLPB). Las concentraciones plasmáticas de estos dos tipos de alfalipoproteínas varían en ciertos trastornos metabólicos y pueden determinarse mediante la ultracentrifugación analítica. Solamente una forma inmunológica da alf alipoprotcínas consigue separar en el plasma fresco. La otra forma antigénica (alfaLPB) se consigue detectar después de la deslipidación del suero. Esta migra más lentamente que la (alfaLPA HDLJ y probablemente es un polímero más pequeño que ésta, poseyendo las dos la misma subunidad polipéptica. La betalipoproteína migra sobre papel, como las beta globulinas (tiene una densidad que oscila entre 1.006 y 1.063 y un peso molecular que se estima entre 1,3 y 3,2 X lo6. Mediante electroforesis se consigue, empleando suero antibeta-lipoproteínas, un inmunoprecipitado, en la zona de depósito del suero. Las lipoproteínas alfa y beta se sintetizan en el hígado, lo que se ha demostrado administrando aminoácidos marcados CI4en la perfusión del hígado de la rata, observando beta-lipoprotehas de densidad 1.062. Se ha demostrado que la síntesis tiene lugar en Vol. LII. N.O 228 los microsomas de las células hepáticas (FREDRICKSON y cols.) La forma de transporte de los glicéridos en el plasma depende de su origen, si bien procedentes de la dieta grasa, vehiculizándose mediante los quilomicrones, bien procedentes de la síntesis endógena y en este caso están transportados por la prebeta-lipoproteína. Las lipoproteínas prebeta (Very low density) tienen una densidad que oscila entre 1.006 y 0,93. Migración electroforética sobre papel entre alfa y beta. Los lípidos representan el 85 % del peso total del complejo proteínico y lipoproteínico (apoproteína C.p.m. 834.000) 2-1 5 % . Los glicéridos ocupan 60-80 %, el colesterol 10-20 % y los fosfolípidos 10-20 % del peso molecular lipídico total. El término quilomicrón se propuso en 1920 para señalar las partículas visibles en la linfa y sangre despuCs de la ingestión de una comida grasa. En el plasma mediante electroforesis sobre papel, permanecen en el origen. Empleando gel de almidón migran con alfaz (partículas primarias) o con beta (partículas secundarias). Las proteínas representan un 0,s95 % del peso molecular. Entre los lípidos, los glicéridos representan el 79-95 %, el colesterol 2-12 % y los fosfolípidos 3-15 %. Y ir T * TABLA 1V bis CLASIFICACION ZOOLOGICA DE LOS ANIMALES ESTUDIADOS Cordero. C1. Mamíferos: SC1. Euterios: O. Artiodáctilos: $9 Cabra. S. O. Rumiantes: G. Ovis: Ovis Aries 9, G. Capra Capra sp. G. Bos: Bos domesticus S. O. Suiformes: F. Suidos G. Sus: Sus Scrofa Equus caballus Toro-Vaca. , Cerdo. Y, . Caballo. Perro. Conejo. $9 Cobayo. O. Perisodáctilos: S. O. Hipomorfos: F. Equidos: G. Equus: O. Fisípedos: F. Cánidos: G. Canis: Canis sp. O. Lagomorfos: F. Lepóridos: G. Oryctolagus: Oryctolagus cunículus O. Roedores: G. Cavia: Cavia sp. G. Gallus: Gallus sp. Gallina. C1. Aves: hlula. Híbrido F, de un asno macho y una yegua. C1. =Clase S. C1. =Subclase C. = Orden S. O. = Suborden G. = Género F. = Familia SC1. Cerinadas : O. Galliformes : 2i k & b tri 5t; 2 5 114 ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA 11. MATERIAL Y METODOS A) Material. - La sangre de los animales estudiados se ha obtenido en el momento de su sacrificio en el Matadero Municipal de Barcelona y de Aves de Bañolas (gallináceas y conejos). En los perros, la sangre se ha obtenido por punción en la arteria femoral, los cobayos han sido sacrificados en nuestro propio laboratorio. La sangre se ha dispuesto en un Erlenmeyer que en general contenía heparina y que posteriormente se ha centrifugado, por tanto en la mayoría de los casos hemos trabajado con plasma. Desconocemos si el animal había ingerido algún tiempo antes de su sacrificio. Creemos que hubiera sido preferible obtener la sangre de los animales por punción en el establo, por considerar la posible acción de las caterocolaminas sobre el metabolismo lipídico. Si bien aquello hubiera sido preferible en el plano bioquímico, en el plano técnico no hubiera sido posible desarrollar este trabajo por dificultades en la extracción y en la obtención de animales. ,En la Tabla IVa exponemos la clasificación zoológica de los animales estudiados. El suero humano se ha obtenido por punción venosa y posterior centrifugación de individuos de ambos sexos, no obesos, que afirmaron no haber padecido enfermedad alguna un año anterior a la extracción y tenían normal Vol. LII. N.O 228 el hemograma y velocidad de sedimentación globular. Casi todas las personas son gente joven, que trabajan en nuestro laboratorio. En otro trabajo hemos desarrollado el concepto de persona "clínicamente normal" y "bioquímicamente normal". Para la estadística de los lípidos de la -especie humana hemos solamente considerado individuos bioquímicamente normales, en número ligeramente superior a los de las especies animales estudiadas. Sin einbargo, para la estadística de glicéridos y glicerol libre, manejaremos datos más numerosos procedentes de trabajos personales y publicados en otro lugar. 3 % En los animales hemos valorado solamente las medias en los distintos parámetros lipídicos estudiados, por considerar que la muestra es insuficiente para el cálculo de la desviación standard. B) Métodos de estudio. - Los métodos aplicados al estudio de los lípidos son numerosos. En la Tabla IV se consideran los de mayor interés en lipobioquímica. Personalmente, para este trabajo hemos desarrollado tres grupos de métodos : - químicos - electroforéticos - cromatográficos que consideramos sucintamente. 7 ANA!LES DE MEDICINA Y CIRUGIA Abril-Junio TABLA IV METODOS DE ESTUDIO DE LOS LIPIDOS A. Métodos químicos Lípidos neutros de ZOI.LNER de KUNKEL Gravimétrico Colesterol total - Método de RAIJPAPORT - Método de So1.s Colesterol libre Glicéridos - Método de EGGSTEIN - Método de VANHANDEL Fosfolípidos - Método de ZILVERMIT Acidos grasos libres - Método de DUNCOMBE Acidos grasos totales Lípidos fecales - Método de VANDE KAMER - Método - Método - Método B. Crornatografía en capa fina 1. Separación lípidos neutros 2. Separación ésteres de colesterol 3. Separación fosfolipidos 4. Separación triglicéridos 5. Separación ácidos grasos 6. Separación prostaglandinas 7. Separación ácidos biliares C . Cromatogvaf ía en colurnna D. Crornatografía en fase gaseosa - Esteres metílicos de ácidos grasos - Triglicéridos - Colesterol - Acidos biliares - Prostaglandinas - Esfingosina E. Métodos espectroscopia infrarioja F . Espectrometría de masas G. Métodos electroforéticos e inmunológicos H. Métodos radioisotópicos 116 ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA 1. Métodos químicos Vol. LII. N.O 228 de 0,5 C.C.de suero son precipitadas con solución de ácido sulfúrico, con lo que el colesterol liberado de las proteínas forma un cromógeno (reacción de LIEBERMANN). Lectura a 630 mp. c) Glicéridos. Método de EGGSTEIN.- Con este método se determina el glicerol libre del suero, tras saponificar se determina el glicerol total y restando el libre se obtiene el glicerol esterificado con ácidos grasos, el cual se transforma en glicéridos multiplicado por el peso molecular medio de éstos (885). La reacción transcurre en tres etapas : a) Lípidos totales. - Entre los numerosos métodos descritos para la valoración de lípidos totales (gravimétricos, turbidimétricos, fotométricos.. .) hemos adaptado en nuestro laboratorio, dada la sencillez de ejecución y su reproductibilidad, la técnica de ZOLLNER y KIRSCH.Este método consiste en valorar fotométricamente el color rosado que producen los lípidos de suero al ser tratados con una solución de ácido fosfórico y vainillina. b) Colesterol total. Método de RAPPAPORT (1960). - Las proteínas 3 i + ATP Pimvatokinasa glicerol 1P + ADP Fosfoenolpiruvato + ADP Glicerokinasa Piruvato + ATP Piruvato -t NADH + H+LDH Lactato + NAD Glicerol > > ___) Determinado el NAD (test óptico de WARBURG) se conoce el glicerol y de éste se deducen los glicéridos presentes en el suero. d) Fosfolípidos. Método de ZILVERMITT y DAVIS(1950). - Las técnicas más usuales para la valoración de fosfolípidos se basan en la determinación del fósforo lipídico, los resultados se expresan en fósforo de fosfolípidos. La técnica empleada consiste en precipitar las proteínas del suero con ácido tricloroacético tratándose directamente con ácido perclórico para efectuar la digestión del precipitado. Después de calentar a 180-200" C en baño de arena o de silicona. Añadir solución de molibdato amónico en áci- do sulfúrico y posteriormente vanadato amónico en ácido nítrico. Lectura a 405 my. Para los cálculos se multiplica el fósforo de fosfolípidos por 25, obteniéndose el valor como fosfátidos expresados como lecitina. e) Acidos grasos libres (DUNCOMBE 1964). Se verifica inicialmente una extracción con cloroformo, tratándose a continuación con nitrato de cobre. Después de una intensa agitación automática se forman dos fases (acuosa y clorofórmica). La fase clorofórmica se trata con dietilditiocarbamato que reacciona con los ácidos grasos libres y desarrolla un color amarillo. Lectura a 486 mp. T * l Abril-Jiinio 2. ANALES DE MEDICINA Y CZRUGIA Métodos electroforéticos. Las lipoproteínas de suero pueden estudiarse mediante diferentes métodos : a) Métodos electroforéticos. - Electroforesis en papel. - Electroforesis en acetato de celulosa. - Electroforesis en gel de agarosa. - Electroforesis en gel de almidón. - Electroforesis en gel de acrilamida. b) Métodos inmunológicos. - Inmunodifusión radial simple. c) Métodos inmunoelectroforéti- cos. - Empleo de antisueros totales. - Empleo de antisueros específicos. Antialfa y antibeta lipoproteína. En este trabajo hemos empleado la técnica de electroforesis sobre acetato de celulosa cuya metódica es la siguiente: f - Se emplea la cubeta AC/4 con puente 8,5 cm. - Tampón veronal sódico 8,24 gr/ b litro. - Voltaje 200 voltios suministrados por una fuente de corriente continua (ATOM Elphor o Argemi) durante 35 minutos. - Después de las electroforesis se 117 sumergen las tiras más de 3 horas en la solución siguiente 100 mg. Rojo Ciba y 60 C.C. etanol puro y 70 C.C.de NaOH 5 %, se agita fuertemente, se coloca el colorante en una cubeta, la cual debe permanecer tapada. Con esta técnica se separan: - Alfa - lipoproteínas (frecuentemente subdivididas en 2 fracciones) - Prebeta-liproproteínas - Beta lipoproteínas - Quilomicrones, cuando existen. 3. Métodos cromatográficos. La técnica cromatográfica en capa fina la hemos desarrollado in extenso en otras publicaciones. Aquí solamente resumiremos estos métodos. Se ha usado la CCF sobre Silicagel G, en placas de 250 mM, preparadas por nosotros, bien manualmente, bien con el extensor automático Stratomat. Hemos verificado tres tipos de cromatogramas distintos : a) Cromatogramas de lípidos neutros. Solventes éter de petróleo, éter etílico, ácido acético (90/10/1). Distancia recorrida 15 cm. Tiempo 30 m. Se separan perfectamente. - Esteres de colesterol Rf 0,83 - Triglicéridos Rf 0,32 - A.G.L. Rf 0,14 - Colesterol libre Rf 0,05 - Fosfolípidos Rf O b) Cromatogramas de ésteres de colesterol. Solventes éter de petróleo- 118 ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA cloroformo 90/ 10. 4 recorridos. Distancia recorrida d,el solvente 10 cm. Tiempo de cada desarrollo 25 minutos. Se separan: - Esteres saturados Rf 0,63 - Esteres monioenoicos Rf 0,57 - Esteres dienoicos Rf 0,50 - Esteres trienoicos Rf 0,39 - Esteres polienoicos Rf 0,33 c) Cromatograma de fosfolípidos. Solventes cloroforino-metanol-acéticoagua (60/30 1/6). Distancia recorrida 14 cm. Tiempo 40 minutos. Se visualizan: - Cefalina Rf 0,60 - Lecitina Rf 0,40 - Esfingomieliiias Rf 0,32 - 0,20 - Lisolecitinas Rf 0,10 En todos los casos la tinción se ha verificado con solución etanólica de ácido fosfomolíbdico al 10 %. Se han valorado las placas por referencia a un standard de suero humano normal. 111. RESULTADOS 1. CABALLOS (Equus Caballus) Son mamíferos, de la subclase Euterios, orden Perisodáctilos, Suborden Hipomorfos, Familia Equidos, Género Equus. Se han estudiado un total de 10 équidos, una hembra y 9 machos, de los cuales 2 eran caballos y 7 mulos. (Híbrido F, de un asno macho y una Vol. LII. N." 228 yegua). Las edades comprendidas entre 10 y 12 años (véase tabla V). a) Estudio bioquímico. Lípidos totales: En la hembra el valor de lípidos totales han sido de 829 mg % c.c. En los machos el valor medio obtenido ha sido de 412 con un valor mínimo de 307 y un valor máximo de 500. Colesterol total: La cifra de colesterol total obtenida en la hembra ha sido de 170 mg %. En los 9 machos el valor promedio ha sido de 85 mg %, con un mínimo de 74 y un máximo de 96. Glicerol libre: La concentración de glicerol libre en la hembra ha sido de ó,25 mg %, en los machos el valor medio obtenido ha sido de 0,21 con un mínimo situado en 0,10 y un máximo de 0,47 mg % . Glicerina de glicérido: El valor obtenido en la hembra ha sido de 48,58 mg %. En los machos el valor promedio obtenido de glicerina ha sido de 6,39 con un valor mínimo de 2,23 y un valor máximo de 11,32. Gli'céridos: En la hembra el valor obtenido de glicéridos ha sido de 464,93 mg %, en los machos el valor medio ha sido de 59,39 con un mínimo de 20,lO y un valor máximo de 107,55. Fósforo lipídico: El valor obtenido en la hembra ha sido de 6,l mg % , en los machos el valor promedio obtenido ha sido de 5,O mg % con un mínimo de 3,2 y un valor máximo de 7,s. Fosfolípidos: El valor obtenido en la hembra ha sido 152,5 mg %. En TABLA V ESTUDIO LIPIDICO E N EQUUS CABALLUS LIPIDOGRAMA Nombre Sexo Edad L. Totales F . Lip. - Fosfol. - CABALLO 1 10 años 829 6,l 152,s CABALLO 2 10 años 358 7,s 195 CABALLO 3 10 años 375 5,4 135 MULO 1 10 años 500 8,4 210 MULO 2 10 años 479 4,8 120 MULO 3 12 años 448 3,7 92 no valorado MULO 4 12 años 358 3,4 85 10 MULO 5 12 años 461 4,7 117 no valorado MULO 6 12 años 307 4,l 102 11,6 MULO 7 12 años 423 3,2 80 MACHOS M HEMBRAS H TOTALES 453 93 0,22 10,61 - 90 88,s no valorado 1 l A i Y A L E S D E M E D I C ' I N A Y CIRUGIA 120 Vol. 1-11. N." 228 FOSFOLIPIDOS LIPIDOS NEUTROS R r --- I . ) ' ~ b 9 Q P st *SS* ---o - n P I I P C l l O P P \t ESTERES D E COLESTEROL ! rq I I g g \ P Figura 2. gi P P st Lípido? plasmáticos de Equus caballus. Cromatograma de Iípidos neutros con 20, 40 y 60 h de problema y 20 h de standard de suero hiirn;ino. Esteres de colesterol 10 y 20 h de problema y 5, 10 h de standard. Fosfolípidos 50 y 80 h de problema, 50 X de standard. 4 infeccione UROHUBBER GRAGEAS Pielitis. Pielonefritis. Cistitis. Nefritis intersticiales. Nefritis agudas exudativas. Nefritis supuradas. Antrax renal. Nefritis intersticial crónica y esclerosis intersticial. Pielitis gravídica. Pionefrosis. Perinefritis. Uretritis y uretrotrigonitis. Epididimitis. Enfermedades infecciosas del aparato uro-genital de cualquier etiología. Frasco con 36 grageas, conteniendo cada una: Eritromicina base (en forma de lauril sulfato del éster propiónico) 75 mg; Clorhidrato de tetraciclina 125 mg; Nitrofurantoína 25 mg; Metil bromuro de escopolamina 0,5 mg; Tripsina (2.500 u. N. F./mgl 5 mg; Alfaquimotripsina (1.000 u. N. F./mgl 3 mg; Excipientes C.S. Siempre, según criterio facultativo. Por vía oral, como dosis media, 2 grageas en los adultos, cada 6 horas. En los niños, una gragea cada 6 a 8 horas. LABORATORIOS HUBBER, EL A. Fábrica y Laboratorios de Productos Biológicos y Farmacéuticos Berlín, 38-48 - Teléf. "321 72 00 - BARCELONA-15 [España] Abril-Junio ANALES DE Mj EDZCINA Y CIRUGIA los machos el valor medio obtenido ha sido de 126,O con un mínimo situado en 80 y un valor máximo de 210. Acidos grasos libres: En la hembra el valor obtenido de ácidos grasos libres ha sido de 0,43, en tanto en los machos el valor medio está situado en 0,24 con un mínimo de 0,13 y un valor máximo de 0,30 mEq/l. Como podemos observar en las cifras anteriores se ve en la hembra estudiada una franca diferencia de las concentraciones lipídicas en relación a los maohos, observándose, en todos los parámetros lipídicos estudiados una mayor concentración en la hembra que en los machos, destacándose especialmente los glicéridos. El estudio de los lípidos de las yeguas es de todas formas insuficiente con un solo caso para adoptar conclusiones de las diferencias bioquímicas entre los dos sexos, sin embargo, en este pnmer estudio parece ser que existe una marcada diferencia entre las hembras y los machos estudiados. b) Estudio cromatográfico (fig. 2). bl) Lípidos neutros: El estudio de los Iípidos neutros de los équidos nos demuestra la separación de ésteres de colesterol, tnglicéridos, ácidos grasos libres, colesterol libre y fosfolípidos en una proporción inferior, en los machos, a la especie humana. b2) Esteres de colesterol: El cromatograma de ésteres de colesterol nos demuestra la presencia de ésteres saturados monoenoicos, dienoicos y trienoicos. En este cromatograma destaca la mayor notable proporción de éstedes dienoicos sobre los monoenoicos 121 y saturados, el cromatograma contrasta visiblemente con los obtenidos de suero de la especie humana. bj) Fosfolípidos: El cromatograma de fosfolípidos de los equidos demuestra la presencia de cefalina, lecitina, 2 esfingomielinas, a la concentración empleada no se observa lisolecitina. Destaca como en el hombre que la fracción mayoritaria corresponde a la lecitina, seguida de la cefalina y a continuación 2 esfingomielinas. c) Lipoproteínas. Hemos realizado 9 lipidogramas de suero de Equus Caballus, de los cuales solamente hemos podido valorar 6. Se observan dos lipoproteínas, una con movilidad alfa y otra con movilidad beta. La porción de lipoproteína alfa oscila entre 8,6 y 25 %. La fracción beta está entre un mínimo de 75,O % y un máximo de 91,4 %. La tinción de las lipoproteínas oscila, debido probablemente a la menor proporción que en la especie humana, es más débil que en los lipidogramas séricos humanos. 2. CABRAS (Capra Sp.). Son mamíferos de la subclase Euterios, del Orden Arteriodáctilos, Suborden Rumiantes y género Capra. Se han estudiado un total de 9 machos y una hembra, 6 de los machos con edad comprendida entre 3 meses y 4, los otros tres tenían una edad situada entre 25 y 30 días, la hembra que ha sido posible estudiar tenía de 25 a 30 días (Tabla VI). Ahril-Jiinio • ANALES DE MEDICINA Y C I R U G I A a) Estudio bioquímico: Los lípidos totalcs de los machos oscilan entre 484 y 900 mg %, con una media de 641 mg %. En la hembra estudiada el valor obtcnido ha sido de 248 mg%. La media obtenida para la especie es de 601 mg %. Realmente parece observarse una mayor proporción en la cifra de lípidos totales en el macho que cn la hembra, sin embargo ello puede ser debido a que la hembra tiene solanicnte 25-30 días y en cambio los niachos tienen una edad más avanzada. Refcrcntc al colesterol total la cifra iníni~naobtcnido ha sido de 175 mg % y la máxima de 288 mg %, con una media situada en 21 6 mg %. En la hembra cstudiada el valor total del colcsterol obtenido es de 67 mg %. El valor medio para el conjunto de machos y hembras cstudiados está en 201 mg %. e 4 123 a la que se observa en la especie humana. El fósforo lipídico solamente lo hemos estudiado en 6 machos y éstos nos han dado un valor de 5,1, el valor máxima es de 7,8 con una media de 6,0, media por otra parte que corresponde al total. Referente a los fosfolípidos el valor medio obtenido es de 127 y el máximo es de 198 con una media para los machos de 151 mg % . En cuanto los ácidos grasos libres se han estudiado en 4 machos y 1 hembra, los valores oscilan entre 0,88 y 1,53 con una media de 1,29 m. Val. para los machos, en la hembra los ácidos grasos libres encontrados han sido de 0,61. b) Estudio cromatográfico (fig. 3). b,) Lípidos neutros: E n el cromatograma de Iípidos neutros comparados con el extracto de suero humano se observa la presencia de ésteres de En glicerol libre cl valor mínimo ob- colesterol, triglicéridos, ácidos grasos tenido en machos es de 1,28 mg % libres, colesterol libre y fosfolípidos. y el ináximo 2,84 con una media de Destaca una notable disminución de 1,78. En la hembra el valor obtenido triglicéridos en relación con el suero es dc 0,93 y el promedio para la es- humano y probablemente un aumento pccie es de 1,69. El glicerol de glicé- de ácidos grasos libres. ridos para los machos oscila entre 2,29 b2) Esteres de colesterol: E n el y 6,71 con una media dc 3,60, en la cromatograma de ésteres de colesterol hembra estudiada el valor está en 1,84 se observan ésteres saturados, monoen el total la cifra obtenida es de enoicos, dienoicos, trienoicos y polie3,42. noicos, con la particularidad de que La cifra iníni~iiade glicéridos obte- aproximadamente los 4 primeros están nida es de 7,88 y la cifra máxima es en la misma proporción en tanto los 47,81 con una media de 17,53. E n la polienoicos están disminuidos. b,) Fosfolípidos: En el cromatohembra cl valor medio es 8,66. La media obtenida para la especie está grama de fosfolípidos se observan ceen 16,64 valor a todas luces inferior falina, lecitina, 2 esfingomielinas y una 124 ANALES D E MEDICII\'A Vol. 1-11. N.O 228 Y CIRIJGIA 1,IPIDOS NEUTROS BD-(I JYr ID - - l!@ * - n n ESTERES D E COLESTEROL 8 , 'y g Pi - - - o 111* P a*.>% P P st ñplarB FOSFOI-IPIDOS m ,"&p. P P zt 1 @.m- st rir m m u P P st 4 Figiira 3. Lípidoi plasrnáticoi de Capia Sp. Crornatograma de Iípidoi neutros con 20, 40 y 60 h de extracto. Standard, extracto de suelo humano 20 h. Esteres de coleiterol 10 y 20 h de problema, 5 y 10 h de standard. Fosfolípidos 50 y 80 h de problema. 50 h de standard. Abril-Jiinio ANALES D E MEDICINA Y CIRUGIA lisolccitina, cn proporción scmcjante o qiiizlí superior a la que se observa en la cspecie humana. Dcstaca coino siemprc cl componente fosfolípido mayoritario dcl suero cs Ic lecitina y le sigucn cn importnncia las csfingomiclinas y 1;i ccfalinn, cn último tCrniino la lisolecitina; parece obscrvarsc por dcbajo de la ccfalina una fracción no 125 un valor mínimo de 412 y un valor máximo dc 512. El valor obtenido en la hembra ha sido de 443. El valor medio obtenido para todos los individuos de la especie estudiados ha sido de 464. El valor mcdio en los niachos de colesterol total es de 133 mg % con un Iímitc inferior de 100 y un límite supcrior dc 168 mg %. En la hembra identificada. el valor ha sido dc 105 mg %, el vac) 1,ipopiotcínns. lor mcdio para la espccie cs dc 130 Hcnios ohscrvado los lipidogramas mg %. plnsniiticos cn los 10 animales cstuEn gliccrol libre el valor medio cs diados. En los lipido$ranias dcstacan de 1,94 con un mínimo situado en tres fraccioncs, una de movilidad albú1.67 y un máximo de 2,02. E n la mina. otra alfa globulina y otra bcta hembra cl valor ha sido de 2,12. El o prchcta. valor mcdio de glicerol para la espc1-a fracción de liporilbúmina oscila cie cs dc 1,96 mg %. cntrc O y 6,- 96. Las alfa lipoprotcínas El glicerol de glicéridos tiene un vavarían cntrc 44.2 y 78.7. Las bctalor mínimo cn machos de 2,37 y un lipoprotcínns cstin ciitrc 18,5 y 49,s. valor máximo de 5,92 con un valor Al rcvk de lo quc ocurre en cl sucmedio dc 4.64. En la hembra el varo Iiuniano la fracción mayoritaria color obtenido ha sido 6,12 el promedio rrcspondc n alfa-lipoprotcínas. Asimisobtenido para la cspecie es de 4.79 iiio cs riotahlc la proporción de lipoing % . ~ilhúmina. En glicéridos hemos obtcnido una cifra mínima dc 6,44 mg % y un valor máximo de 33,18 mg % con un 3. CERDOS (Sus Scrofa). valor medio de 22,78. En la hembra el valor mcdio obtenido ha sido dc 38,86 Son maniífcros, subclasc Euterios, ing %. El valor mcdio ohtenido para Orden .Artcriodactilos, Suhordcn Suila espccie cs dc 24,39 mg % como formes. Faiiiilia Suidos, Géncro Sus. pucde observarse la cifra de glicéridos Hciiios estudiado un total dc 10 ceres muy inferior a la que se observa cn dos, tlc los cuales 1 es hcmbra y los condicioncs normales en la espccie huotros 9 son ninclios. Las edades osciiiinna. Ian todas cllas cntrc 6 y 7 mcses. La cifra iiicdio de f6sforo lipídico ci de S,? con un valor mínimo de 4,2 a) Estudio bioquíiiiico (Tabla VI]). El valor medio de Iípidos totalcs ob- y un valor máximo de 7.8. En la hemtenidos para los machos es de 466. con bra cl valor obtcnido ha sido 2 mg %. TABLA VI1 ESTUDIO LIPIDICO EN SUS SCROFA .Vombre Sexo Edad L . Totales C . T. G . L. G. G. G. N. CERDO 1 H 6-7 meses 443 105 2,12 6,12 38,86 CERDO 2 M 6-7 meses 428 139 1,70 2,37 6,44 CERDO 3 M 6-7 meses 434 105 1.76 5,21 CERDO 4 M 6-7 meses 512 168 2,02 4,10 CERDO 5 M 6-7 meses 457 124 1,49 5,92 CERDO 6 M 6-7meses 495 144 2,14 CERDO 7 M 6-7 meses 468 120 CERDO 8 M 6-7 meses 479 134 CERDO 9 M 6-7meses 412 100 CERDO 10 M 6-7 meses 512 464 F. Lip. 2 Fo'fol. A . G . L. 50 0,25 4,2 105 0,17 33,18 5,l 127 0,44 6,3 20,OO 7,8 195 0,30 10,6 13,75 5,l 127 0.25 10,s 38,4 4.42 21,93 5.2 130 0,23 9,3 35,l 1,89 4,10 21,26 4,9 124.5 0,15 8.9 32,3 1.67 4.89 30.97 6,s 152,s 0,30 9.6 37,7 2,74 5,37 25.30 4,3 107 0,15 10,4 33,7 163 2.10 5,45 32.22 5,4 134 0,44 10.6 33.8 130 1.96 4,79 24.39 5 125.2 0.26 MACHOS HEMBRAS TOTAL Alfa 10,l Preb. Befa Abril-Jiinio A N A L E S D E MEDIC'INA Y C l R U G l A 127 NEUTROS ESTERES DE COLESTEROL Figiirir 4. Lípidos plasmáticos de Sus Scrofa. Crornatograma de Iípidos neutros con 20, 40 y 60 h de extracto probIema, 20 A. de control. Esteres de colesterol 10 y 20 h de problema, 5 y 10 h de control. Fosfolípidos 50 y 80 h de problema y 50 h de control. 128 ANALES D E MEDICINA Y CIRUGIA La mcdia obtcnido para toda la especic ha sido dc 5 mg %. Los fosfolípidos oscilan cntrc 105 y 195 con una media dc 133,s. En la hembra los fosfolípidos obtenidos han sido de 50 m2 96. El valor medio para la especic está en 125,2 mg. 96. Los ácidos grasos libres oscilan entre 0,17 y 0,44 con un valor medio de 0,27. En la hembra el valor obtenido ha sido 0,25, el valor obtenido para la cspecie híi sido de 0,26 mVal. b) Estudio cromatogrtlifico (fig 4). b,) E n el cromatograma dc lípidos neutros comparados con la cspecie humana se observa: ésteres de colestcrol, triglicéridos, ácidos crasos libres, colestcrol libre y fosfolípidos. A igualdad de concentración destaca una notable disininución de triglicéridos y en ácidos grasos libres aproximadamente igual a la quc sc observa cn el suero humano. bz) Esteres de colesterol: En el cromatograma de Csteres de colesterol se observan éstcrcs saturados, monocnoicos, dienoicos y trienoicos. b3) Fosfolípidos: En el cromatograma dc fosfolípidos se observan: cefalina, lecitina, 2 e~fingomiclinasy una lisolecitina. La proporción de fosfolípidos es infcrior a la que se obscrva en la espccic humana. C) Lipoprotcín;is. En los lipidogrnmas de los machos se scparan tres fracciones lipoalbúmina, alfalipoprotcína y betalipoproteína. La lipoalbúmina oscila cntre 6,3 y 10,6 %. La alfalipoproteína varía entrc 30,3 y 38,4 5%. La bctalipoproteína cstá en- Vol. LII. N: 228 trc un mínimo de 51,s y un mtliximo de 58,8. E n la hembra hemos observado una alfa de 21.8, una prebeta dc 30,9 y una beta de 47,3 %. 4. COBAYO (Cavia Sp.) Son mamíferos, subclase Euterios, orden Roedores, género Cavia, nombre Cavia Sp. Se han estudiado un total dc 1 0 cavias, 6 machos y 4 hembras, todos cllos dc 1 año de edad. a) Estudio bioquíinico (Tabla VIII). El valor incdio obtcnido de Iípidos totales ha sido cn los machos de 188 mg % con un máximo de 248 y un mínimo de 116. En las hcrnbras cl valor medio es dc 372 con un máximo de 900 y un niínimo de 136. El valor medio total ha sido dc 261 mg % . La concentración media de colesterol total en los machos es de 47 mg % con un máximo de 82 y un mínimo de 30. En las hembras los resultados son de 56 de media, un máximo de 90 y un mínimo dc 18. La mcdia total para la especie resulta dc 50mg %. El gliccrol librc cn los machos, oscila cntre 0,10 y 1,68 con un valor mcdio de 0.67 mg 96. En las henibras el valor mcdio cs dc 1 2 2 con u11 máximo de 2,03 y un mínimo dc 0,26. La media total resulta dc 0,89 mg 5%. Los glic6ridos cn los machos varían cntrc 1,92 y 108,32 nig %, con una nicdia dc 40,8. En las hcrnbras los rc- EN LA GAMA TERAPEUTICA CASPRIUM APARECE UNA NUEVA FORMA v I ~ Reumatismos. Artritis reumatoide Traumas. Quemaduras. Heridas Odontalgias. Cefaleas Cuadros febriles Gripe. Enfriamiento. Dismenorrea 4 (T.LlADE ,IUIYIII~O~ CASPRIUM SUPOSITORIOS ADULTOS "1000 C a j a s d e 10 y 20 Supos P V P 40 30 y 62 70 CASPRIUM SUPOSITORIOS NIROS "300 C a j a s de 10 Cupos P V P 36.30 CONESTRON '¡NTRAVENOSO (Registrado en U.S.A con el nombre de PREMARIN) El hemostático fisiológico que controla con eficacia rapidez la hemorragia espontánea capilar y reduce al mlnimo las pérdidas hemáticas durante y después de cualquier tipode intervención quirúrgica. #"#,by Se ha inyectado más de 3.000.000de veces sin haberse observado ni un solo caso de toxicidad ni de formación de trom bos. MM" $4" CONESTRON INTRAVENOSO Reduce al mlnimo la hemorragia durante la intervención. Mantiene despejado el campo operatorio. Atenúa la frecuencia de hemorragia postoperatoria. Puede también administrarse por vla intramuscular. INIBSA 8 - BARCELONA Por licencia de: Loreto, AYERST LABORATORIES NEW YORK, N. Y. TABLA VI11 ESTUDIO LIPIDICO EN CAVLA SP Nombre Sexo Edad L . Totales C. T. G . L. G . G. G. N . F Lip. 1 46,27 2 COBAYO 2 33,67 1,5 COBAYO 3 1 año 40,88 4,1 COBAYO 4 1 año 48,67 2,s COBAYO 1 año 9,62 1 3 3,l COBAYO 5 COBAYO 6 1 año 1.92 COBAYO 7 1 año 43,29 32 COBAYO 8 1 año 108,32 3,4 COBAYO 9 1 año 512,07 5,O COBAYO 10 1 año 75,03 2,9 MACHOS 1 año HEMBRAS 1 año TOTAL Fosfol. 130 ANALES D E MEDICINA Y ('IKUGlA Vol. 1.11. N."228 FOSFOLIPIDOS LlPlDOS NEUTROS P P P C P P C ESTERES DE COLESTEROL Figiira 5. Lípidos séricos de Cavia Sp. Lípidos neutros 20, 40 y 60 h tle extracio p;.ohleni;i. 20 h de control. Esteres de colesterol 5 y 10 h de problema. 5 y 10 h de control. Fosfolípidos 50 y 70 h de prohlema, 50 h de control. Abril-Jiinio v A N A L E S L)E M E D I C I N A Y ~ ' I R ~ J G I A sultados son miiy diversos, oscilando cntrc 40,88 y 512,07 ing 96. Como pucdc observarse, las variaciones de glicéridos son muy importantes con iina probablc diferencia sexual. El fósforo lipídico cn los machos varía cntrc 1,S y 3,1 con una media de 2.5 y cn las hciiibras oscila entre 2,s y 5,0 con una media dc 3,6. Los fosfolípicios son superiores en Ins Iicmhras que en los machos, hallántlo\c en aquéllas conccntraciones mcdias de 90 (60-125) y en los machos J c 62 (37-85) mg % . El valor medio para la cspccic cs de 76 mg %. Las mcdias dc los ácidos grasos lihrcs son semejantes cn los dos sexos O,X6 para los machos y 0.84 para las hcmbras. h) Estudio cromatogrúfico (fig. 5). Lípidos neutros: En este croninto~rnmasc observan ésteres de colcstcrol triglicéridos, ácidos grasos lihrcs. colcstcrol librc y fosfolípido en proporcicín infcrior cn la niayoría de los casos estudiados, a los de control tlcl siiero huiiiaiio. h?) Estercs de colcstcrol: Se observan éstercs de colesterol saturados, inonoenoicos, dicnoicos, trienoicos y polienoicos en proporción inferior al control humano. Predoniinan los ésteres dicnoicos sobre las otras fracciones. h,) Fosfolípidos: Se fraccionan cefalina, lecitina y 2 esfingomielinas. No sc ohscrva lisolecitina. 17,) C) Lipoproteínas. Idas lipoprotcínas obtenidas y valoradas de los cobayos estudiados han 131 sido dc difícil interpretación, se han observado dos fracciones, probablemcntc alfa y betalipoprotcínas, sicndo ésta la fracción mayoritaria. 5. CONEJO (Oryctolagus cuniculus). Son mamíferos, Subclase Euterios, Ordcn Lagomorfos, Familia Leporidos, Género Oryctolagus. Sc han estudiado un total de 14 conejos, de los cuales 9 corresponden a machos y 5 corresponden a hembras, todos tienen una edad de 3 meses a) Estudio bioquímico (Tabla IX). En los machos las concentraciones de Iípidos totales oscilan entre 297 mg % y 450 con una media situada en 336 mg %. En las hembras los valorcs mínimos están entre 325 y 487 con una media de 386. La media obtenida en conjunto, es dccir, tanto en niachos como en hembras, es 354 n1g % . La concentración de colestcrol total oscila cn los machos entre 33 mg % y 76. La media está situada en 56 mg 7%. En las hembras oscila entre 38 y 81 mg %, estando la media situada cn 62 mg %. La cifra media obtenida para el conjunto de la especie está situada en 58 mg %. El glicerol libre en los machos está cntre 0,49 y 2,75 mg 7% con una media situada en 2,07. En las hembras la conccntración de glicerol librc oscila entre 1,O3 y 4,44 mg % con una media de 3,16, por tanto, se observa que la concentración de glicerol libre en TABLA IX ESTUDIO LIPIDICO EN ORYCTOLAGUS CUNICULUS LIPIDOGRAMA Nombre CONEJO Sexo 1 Edad 3 meses L . Totales - 297 C . T. G . L. G . 'V. F. Lip. Fofol. Alfa Beta 55 2,76 33,47 2,5 62 N o valorado CONEJO 2 3 meses 371 55 2,74 81,48 4,1 102,5 N o valorado CONEJO 3 3 meses 277 50 2,62 3837 3,3 82 N o valorado CONEJO 4 3 meses 321 65 2,38 37,13 5,4 135 32,7 67,3 CONEJO 5 3 meses 275 33 0,49 38,28 2,2 55 49,O 51,O CONEJO 6 3 meses 355 52 1,48 88,88 3,2 80 44,4 55,6 CONEJO 7 3 meses 380 76 2,81 3433 3,3 82 45,6 54,O CONEJO 8 3 meses 300 62 2,81 43,19 3,s 95 38,8 68,6 CONEJO 9 3 meses 450 57 0,57 128,52 3,8 95 31,4 68,6 CONEJO 10 3 meses 487 67 3,60 57,04 4,4 110 49,7 50,3 CONEJO 11 3 meses 325 38 1,13 73,68 6 150 40,l 59,9 CONEJO 12 3 meses 400 81 3,32 52,62 5,l 127 25,3 74,7 CONEJO 13 3 meses 370 62 3,83 64,83 43 112 40,2 60,8 CONEJO 14 3 meses 350 62 4,44 58,93 4,2 105 23,l 76,9 MACHOS HEMBRAS TOTAL II ANALES BE MEDICINA Y C l R U G l A Abril-Jiinio 133 ESTERES DE COLESTEKOL 1,IPIDOS NEUTROS FOSFOLTPIDOS Figura 6. Lípidos séricos de Oryctolagus cuniculus. Cromatograma de Iípidos neutros con 20, 40 y 60 h de extracto problema, 20 h de control. Esteres de colesterol, 5, 10 y 20 h de problema, 5 y 10 h de standard. Fosfolípidos 50 y 80 h. Control 50 h. 134 ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA hembras es superior a la que se ha obtenido en machos. La media situada para la especie está situada en 2,49 mg % . El glicerol ligado a glicéridos varía en los machos entre dos límites bastantc amplios situados cn 6,24 y 21,60 mg %, la media obtenida está en 8,97. En las hcmbras el valor mínimo ha sido de 8.79 y el valor máximo en 10,57 con una media de 9,65. El valor medio obtcnido para el conjunto de machos y hembras estudiados está en 9,21 mg %. Para los machos de csta especie los glicéridos oscilan entre 52,62 y 73,68, estando la media situada entre 61,42. El valor medio de glicéridos para la cspecic está en 59,37 mg %. El fósforo lipídico en machos varía entre 2,2 y 5 4 , con una media de 3,s. La media para las hembras es de 4,8, con un valor mínimo de 4,2 y un valor máximo de 6 mg %. El valor medio para la especie está situado en 3,9. El valor medio de fosfolípidos para los machos estudiados está en 87,6, con un valor mínimo de 55 y un valor máximo de 162. El valor medio obtenido para las hembras está en 120 mg % , con un mínimo de 105 y un máximo de 150. El promedio obtenido para la especie es de 99,4 mg % . Referente a los ácidos grasos libres el promedio estudiado para los machos cstá en 0,69 mVal, con un mínimo de 0,58 y un máximo de 1 , l . En las hembras el valor medio es de 1,11, con un mínimo de 0,75 y un máximo de 1,22. Como puede observarsc los valores para las hembras referente a la Vol. LIT. N.O 228 mayoría de parámetros lipídicos son más elevados que para los machos, destacan en estc sentido los fosfolípidos, los glicéridos y los ácidos grasos libres. b) Estudio cromatográfico (figura 6). b,) Lípidos neutros: En la placa de Iípidos neutros se observa si comparamos a distintas concentraciones el extracto de suero de conejo en relación con el cxtracto de suero humano, la prescncia de ésteres de colesterol, triglicéridos, ácidos grasos libres, colesterol libre y fosfolípidos. Destaca una menor proporción en relación con el hombre de éstercs de colesterol, de triglicéridos, colesterol libre y probablemente de fosfolípidos. Ahora bien, la concentración de ácidos grasos libres son superiores en el conejo que en el hombre. b2) Esteres de colesterol: En el cromatograma de ésteres de colesterol destaca la presencia de ésteres de colesterol saturados, monoenoicos, dienoicos, trienoicos e indicios de polienoicos, de ellos los que están en mayor proporción son los ésteres dienoicos, le siguen los saturados y a continuación los monoenoicos. b3 Fosfolípidos: En el cromatograma de fosfolípidos destaca la presencia de cefalina, lecitina, dos esfingomielinas y una lisolecitina, en una proporción inferior a la que se observa en el suero humano. La fracción mayoritaria de fosfolípidos corresponde a lecitina, sin embargo, esta proporción es inferior a la del suero humano. 4 * a a "La llave reguladora de la diuresis" Conocido internacionalmente como LASlX ORAL PARENTERAL HOECHST IBERICA, S. A. - Barcelona TABLA X ESTUDIO LIPIDICO EN OVlS ARIES LIPIDOGRAMA Sexo Nombre - - Edad - CORDERO 1 h.1 3 meses CORDERO 2 M 3 meses CORDERO 3 M 3 meses CORDERO 4 M 3 meses CORDERO 5 M 3 meses CORDERO 6 3 meses CORDERO 7 3 meses CORDERO 8 3 meses CORDERO 9 3 meses CORDERO 10 3 meses MACHOS HEMBRAS TOTAL 136 A N A L E S D E MEI)I('IhfA Y ( ' 1 R l l í ; l A V o l . 1.11. N." 228 1.IPIDOS NEUTROS ESTERES DE COLESTEKOI> Figiira 7 . Lípidos séricos de Ovis Aries. Lípidos neiitros 20, 40 y 60 h tle pi'ohlemn: 20 h de control. Esteres de colesterbl 10 y 20 h de prohlema; 5 y 10 h de control. Fosfolípidos 50 y 80 h de prohlema: 50 h de control. I Al>ril-.lt~nio A,VAl.I:'.Y / ) E R I ~ ~ D I ( ' I I VYA ( ' I R U G I A C) Lipoprotcínas: Los lipidogrnnins de los 14 conejos híin sido de difícil valoríici6n dada la escasa coloracií,n dc las tiras. En ]as 10 vriloradas hemos conseguido la scparacicín dc dos Iipoprotcínas. La lipoprotcína alfa varía cntrc 23,l y 49,O nig 96. La lipoprotcína bcta cstá situada cntrc 50,3 y 76,9 mg 5%. 6. CORDERO (Ovis Aries) Son mamíferos, Subclasc Eutcrios, Ordcn Artiodactilos, Suborden Runiiantcs, Gcncro Ovis. Hcmos estudiado un totnl de 10 corderos, todos ~110smachos, con una cdacl aproximada de 3 rncscs. a, bioquímico (Tabla X), La cifra de Iípidos totales varía rclntiv:iincntc poco, con un míniino situado cn 221 y un máximo situado en 266. con uní1 nicdia de 24 1 nig 96. El colcstcrol total cstá situado cntrc 55-73 iiig O/o con una media de 65 iiig % . El glicerol librc ticnc un valor medio de 1,72 con un mínimo de 1,13 y un máximo de 3,18 mg %. En glicerol de glicérido hcnlos haIlndo un valor mctlio dc 2,3 1 con un mínimo dc 1,42 y un valor niáxiiiio de 3,79. Los glicéridos varían cntrc 2,78 y 16,06, con un valor niedio de 6,32 mg 96,por tanto, pueden obscrvarsc unos glicéridos bajísirnos en rclación a la especie humana. El fósforo lipídico oscila entre 3 y 6 nig %, con un valor mcdio de 3,52. 137 Los fosfolípidos varían entre 75 mg % con un valor medio de Y 150 mcS 87 nlg ?h. LOS ácidos grasos librcs oscilan cntrc 0984 Y 292 maVI, con un valor medio de 1,59. b) di^ croinatográfico (fig. 7). b,) Lípidos ~1 cromatograma dc lípidos ncutros demuestra la prcscncia dc éstcrcs de colesterol, triglicéridos, colcstcrol librc, ácidos grnsos libres y fosfolípidos. Destaca una disn~inución cn relación con cl suero humano de Cstcrcs de colesterol ttc triglicéridos y de colcstcrol libre. b2) Estcrcs de colesterol : Rcalizado cl cromatograma de éstcrcs dc colcstcrol sc observa la separación 6stcrcs saturados, monocnoicos, dienoiCOS,tricnoicos y policnoicos, cstando todos ellos en una proporción inferior a la dcl suero humano, sin embargo, las proporciones rclativas cntrc cada uno dc los Cstcrcs son scmcjantes a las que se obscrvan en el suero humano. b,) Fosfolípidos: En el cromatograma dc fosfolípidos se observa una pobreza de los cxtractos lipídicos, destacándosc la prcscncia dc ccfalina, lecitina y 2 csfingomiclinas. A las conccntracioncs empleadas prácticamcntc no se observa lisolccitina. La fracción mayoritaria dcl suero corresponde a la lccitina. c) Lipoprotcínas. La scparacicín clcctroforética y posterior tinción lipídica nos separa csencialmcntc lipoalbúmina y alfalipoproteínas (quc hemos calculado juntas) y bctalipoproteínas. En dos casos se ha \ 1 1 '& 7- TABLA SI ESTUDIO LIPIDICO EN G.41.LUS SP b 2 LlPII>OGRA.\fA .Yor~rhrc . E<laii .S<, \-o . . ~ - - L . Tufaler C . T . G . L. -- - -- - - ti. Y . G. G. - - - F . Lip. - ~- - - Bclci -- - 1 . 7 ? S: . 0.69 32.8 67.2 100 0.9 31.6 68.4 2.j 57 0.59 30.4 69.6 > L1 2 41.46 2.7 67 0.62 27.5 72.5 5.36 15.10 2.4 60 0.86 30.4 69.6 38.74 358.53 450 0.46 22.4 77,6 \f 3 meses 400 110 3.20 4.76 15 2.9 GALLO 2 51 3 meses 600 86 2.88 4.76 !r(.OX 4 GALLO 3 51 3 meses 400 96 2.8! j.68 8.36 GALLO 4 21 3 mcier 425 91 3.58 7.39 GALLO 5 XI 3 meses 500 110 3.79 H 3 meses 750 72 1.47 6 A!f(r 4 GALLO 1 GALLINA . A. G . L. f 18 72 + w m C i 2 b r m -c: i GALLINA 7 H 3 meses 950 57 1.94 53.49 495.91 16 400 0.45 23.2 76.8 GALLINA 8 H 3 meses 1.900 134 0.85 74.50 708.51 25 625 0,53 21.2 78.8 CiALLlNA 9 H 3 meses 1.025 86 7.51 40.17 430.24 20 500 0.96 36,3 63.7 GALLTNA 10 H 3 mesei 1.075 129 1.43 50.95 476.38 15 375 0.62 30 70 MACHOS 21 465 98 3.25 5.29 19.60 71 0.73 HEMBRAS H 1.140 95 1.84 53.37 495.71 18 470 0.60 802 97 2.54 20.33 257.65 10.8 270 0.66 TOTAI. 2.8 % ' . h < 4 Z ra IJ 7- I-'igiii':~ 8 . I.ípicloi plaim:iticos dc m a c h o de G i i I i ~ iSp. I.ipiclo\ nciilro\ 70, 40 y 6 0 h tle extracto. 20 h d e contiol. Eiteies d e colesterol 5, 1 0 y 20 h de prohlcrna y S y 10 h tic conti-ol. Fo.;folípidos 5 0 y X O h d e p:.«hleni;i y 5 0 i. de control. Y CIRIIGIA conseguido la separación de prcbctalipoprotcínas. Las alfalipoprotcínas oscilan cntrc 40 y 84,7 % . La bcta cntrc 19 y 60 %. En todos los casos a cxccpci6n de uno, la alfalipoprotcína cs superior a la bctn. Los lipidograinas son muy scniejantcs a los observados en la Capra Sp. 7. GALLINA (Gnllus Sp) Son aves, Suhclasc Cnrinndas, 0 r den Gallifornics. GCncro Gallus. Sc han estudiado un total de 5 gallos y dc 5 gaillnas, con cdadcs alrededor dc los 3 meses. a) Estiidio hioquíniico (Tabla X). En los gallos las cifras de Iípidos totales están en 465, con un valor niíninio situado en 400 y un vnlor máxinio situado en 600. El valor inedio cii las gallinas cs de 1.140, con Lin valor mínimo de 750 y iin valor niáxiiiio dc 1.900 mg %. El pronicdio ohtcnicio pnrn el conjunto de todos los individuos estudiados cstá en 802 mg %. La cifra de colcstcrol totiil oscila cn los machos cntrc 86 y 110 mg % y en hembras cntrc 57 y 134 nig ?h. La mcdia para los priineros es de 98 y para los segundos dc 95, la mcdia cn total cs dc 97 nig % . El glicerol libre oscila cntrc 2,8 cl uno y 3,79, con i i n vnlor mcdio de 3,25 cii machos. En las hembras los valores dc glicerol libre varían cntrc 0,85 y 3 3 1 , con un vnlor mcdio dc 1,84. El valoi- nicdio para In cspccic sería dc 2,54 nig % . V o l . 1.11. N." 2 2 8 Glicerol ¿c glicérido en los machos oscila cntrc 3.68 y 7.89. con un valor mcdio dc 5,29. En las hcmbi~nsosciln cntrc 38.74 y 74.50, con una nicdia dc 53,37. El vnlor iiicdio para la cspccic ha sido de 29,33 mg 76. Los glicCridos en los machos oscila cntrc 8.36 y 15.10. con iin valor iiicdio de 13. En Ins Iicmhras los gliiéridos varían cntrc 358.53 y 7 0 8 3 1 , con iin valor nicdio de 495.7 1 nig %'. Como pucdc ohscrvarsc existe iiiia cxtiaordinaria diferencia de los 2licCridos de lino a otro sexo, el valor iiicdio calculndo quc no ticnc c;isi ningún valor ha sido de 257.65 mg % . El f6sfoi-o lipídico varí:~cn los inachos cntrc 2.3 y 4 ing 96 y cii I;is Iicnibrns cntrc 1 5 y 25 i i i ~C/C. Los v;~Iorcs iiicdios obtenidos cstán cntrc 2,X para los machos y 1 8 para las hciiihras. El valor nicdio para la especie es de 10,X. Los fosfolípidos calciilados varía11 en los iii:ichos ciltrc 57 y 100 nig % y en las hcmhrns cntrc 357 y 625 nig %. Los vrilores iiicdios ohtcnidos cstán situados en los machos en 7 1 y en las hciiihrns en 470. Aquí piicdc ohscrvarsc tan1bii.n iinn cxtraordinarin diferencia scxii;il. Los ácid«s grnsos lihrcs tlc los iiinchos oscilan cntrc 0.69 y 0.9 mVsl, con iin valor iiicdio tlc 0.73. En las hciiibr:is cstos vrtlorcs oscilan cntrc 0.46 y 0.95, con un valor nicdio dc 0.60. La nicdin ohtcnidn para la cspccic está en 0,66. * 4 4 h ) Est~idiocroiiiatopráfico (íigiirns 8 y 9). Lípidos neutros: En el 'stiiclio cronintográfico de Iípitios neutros en b,) ESTERES I>E COLESTEKOL 1.ll'lDOS NEUTROS FOSFOLI 1'1 DOS Yigiira 9. 1-ípicloi plasrnáticos de gallina. 1-ípidos neutros 20, 40 y 60 h de extracto prohlerna: 20 h de control. Esteres de colesterol 5, 10 y 20 h de prohlem;~;5 y 10 h de control. Fosfolípidos 50 y 8 0 h de problema; 50 h de extracto control. 142 ANALES DE AdEDlCINA Y ClRUGlA machos se demuestra la presencia de Estcres de colcsterol. triglicéridos, ácidos grasos libres, colesterol libre y fosfolípidos. Sc observa que la proporción de triglicEridos es muy inferior a la del suero humano, y asiniismo, la dc éstcres de colestcrol y probablcmente la de fosfolípidos. b,) Estcres de colesterol: En el cromatograma de ésteres de colestcrol sc demuestra la presencia de ésteres saturados, monoenoicos, dienoicos, tricnoicos y tetraenoicos. Los éstcres dicnoicos son los que cstán en fracción mayoritaria. b,) Fosfolípidos: En el cromatograma de fosfolípidos se obscrvan ccfalina, Iecitina, esfingomielina e indicios dc lisolecitina. La fracción mayoritaria es la lecitina. V o l . 1-11. N," 228 c) Lipoprotcíni~s. La separación mediante clectroforesis sobre acctato de cclulova y posterior tinción lipídica nos ha demostrado 2 fracciones de interpretación difi:ultosa, pero que creemos que se trata de alfn y beta lipoprotcínas. No hemos hallado diferencias scxualcs, lo cual despuis de lo que hemos visto con los Iípidos resulta sorprenderitc. La proporción de alfa lipoproteinas oscila cntrc 22.4 y 36.3 %. Las hetalipoproteínas varínn cntrc 63.7 y 77.6 % . 8. PERRO (Canis Sp.) Son maniífcios, Suhclasc Euterios. Orden Fisípcdos. Familia Cánidos, Género Canis. Lípidos ncutros: Si ahora csb tudiamos el cromatograma de ga11'inas sc observa lo mismo cluc los machos, pero con una extraordinaria concentración de triglicéridos y asimismo dc fosfolípidos. bz,) Estercs de colcstcrol: En el cromatograma de ésteres de colcsterol cstán los Cstcres saturados, nionoenoicos, dienoicos y trienoicos, en una proporción semejante la que hcmos observado en los machos. a) Estudio hioquíniico (Tabla XII) Se han cstudindo 9 niachos y 1 1 hembras, en ellos solaiiicntc se ha dcterminado la concentración dc Iípidos totales. En los machos el vnlor nicdio obtcnido ha sido de 418. con un vnlor mínimo de 287 y un valor niáxiiiio de 700 mg 5%. En las hcnibrns el valor nicdio cbtcnido ha sido de 480. con un mínimo de 375 y iin máximo de 775. h . , Fosfolípidos: En el croniatograma de fosfolípidos hay una extraordinaria concentración de cefalina y lccitina en nicnor proporción dc 2 esfingomielinas predominando una de ellas y de lisolecitina. Por tanto. cn gallos y gillanas es la especie donde hay mayores diferencias scxualcs. b) Estudio croniatográfico (fig. 10). b,) Lípidos ncutros: El estiidio cromatogrrífi:o de los Iípidos neutros nos deniuestra In presencia de éstercs de colcstcrol. triglicEridos, colcstcrol libre, ácidos grasos lihrcs y fosfolípidos. Las propoicioncs obscrvndas son scnicjantcs, aunque en mcnoi propor- ,\l~ril-Jt~ni<) e b ANA1,E.Y BE M E I ) I C I I \ ' A Y C I R U G I A ción a las que sc observan en la especic humana. Esteres de colcstcrol: El crob iiiatogrania dc fstcrcs de colesterol nos demuestra la presencia de éstcres saturados, monoenoicos, dicnoicos, tricnoicos y polienoicos, predominando los Cstcrcs dicnoicos sobre los saturados y monoenoicos. h,) Fosfolípidos: En el cromatogrania de fosfolípidos se separan ccfnlina, Iccitina, 2 csfingomielinas y lisoIccitina, In fracción mayoritaria corresponde a la Iccitina. 143 y 1.26, con una niedia de 0,41 y en las Iicmbrns oscila cntre 0.15 y 0,83, con una incdia dc 0,63. Para este grupo la mcdia cstá cn 0,54 mg % . La glicerina de glicérido en los niachos el valor mínimo obtenido es de 1,34 y el valor nláximo cstá en 2,05, en las hembras estudiadas el vnlor niínimo es de 0,47 y el valor máximo está en 4.97. La media en los casos de los machos está en 1,71, en tanto que en las hembras el valor medio está en 2,49 mg %, es decir, al parecer cxistc una mayor concentración de glicerina dc glicéridos en hembras que en machos. 9. TOROS Y VACAS (Ros doiiicsticus) TABLA X1I Soii iii:iniífcros, Subclase Euterios, Orden Artidnctilos, Suhordcn Runiinntci, Género Ro\. Sc ha estudiado un toro, 4 bueyes. 1 terncrn y 4 vacas. Estudio bioquíniico (Tabla XIIT) Lípidos totales. La cifra de Iípidos !oialcs de los bueyes y el toro estudiado4 os:ila cntrc 345 y 473 mg %. con Lirin incdia de 376; en las hembras la c.~nccntracicín de Iípidos varía cntrc 342 y S67 con iina iiicdin de 434 i11y %. 1-n coiiccntracicín dc colcstcrol total cii los iiinchos cstá cntre 1 10 y 185 iiig C/c. con iinn mcdia de 1 13. En las Iienihras las cifras oscilan cntrc 92 y 230 mg %, con una incdia de 15 1. Las concentraciones dc glicerol lihrc cii los machos os-ila entre 0,27 1) v 4 L,PIDTCO DE Nornhre .FCXO - - PERRO PERRO PERRO PERRO I 2 5 6 PEI~RO7 PERRO X PERRO 9 PERRO 10 , I,ERRO PERRO 2 PERRO 3 PEKRO 4 I'ER U 0 5 PERRO 6 PERRO 7 PEliliO X PERRO 0 PEKRO 1 0 I'ERRO 1 1 PERRO 12 - SP 1- Talal<,\ - -- H hl hI M M 375 287 350 H 450 H H H MACHOS HEMBRAS TOTAI, 455 144 AArALES L)E IZIEiII('1NA Y C I R I I G I A Vol. L11. N." 228 I.IPIDOS NEUTROS *MP. ESTERES DE COI.ESTEROL Fig~ii.:i 10. Lípidos de suero de Canis Sp. Lípidos neiilros 50 y 5 0 h dc eutr;icto tle do, problemas, control de 20 h. Esteres de colesterol 3 0 y 30 h de problenla, 10 h de control. Fosfolípidos XO h de prohlcma y 50 h de control. Abril-Junio & + + ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA Referente a los glicéridos podemos dccir que en los machos el valor mínimo obtenido es de 6,06, en cambio el valor máximo está situado en 15,OO; la media obtenida es de 12,47. En las hembras estudiadas el valor mínimo está en 3,07 en una hembra de 5 a 6 mcses y el valor máximo es de 45,21, la media para hembras de glicéridos cs de 17,95. El valor mínimo del fósforo Iipídico en los machos es de 3,O mg %, en tanto que el valor máximo es de 6 mg %. Con una media de 3,9. En el caso de las hembras el fósforo lipídico oscila cntre 1,3 y 9,3, con una media de 4 mg % . Los fosfolípidos en esta especie oscilan entre 75 y 102,5 mg %, este ú1timo caso es el valor que se ha tomado en el toro, la media en el macho es de 95,6, en las hembras estudiadas el valor mínimo de fosfolípidos es de 60 mg %, en tanto que el valor máximo es de 232, la media para las hembras es de 101,5. Los ácidos grasos libres obtenidos en los machos están situados: el mínimo en 0,25 y el máximo en el toro en 1,23, con una media de 0,35; en las hembras el valor mínimo es 0,22 y el valor máximo 0,88, con una media situada en 0,75 mVal. b) Estudio cromatográfico (fig. 11). bl) Lípidos neutros: El estudio cromatográfico de lípidos neutros comparado con el cromatograma del suero humano nos demuestra: ésteres de colesterol, t;iglicéridos, ácidos grasos libres, colesterol libre y fosfolípidos, 145 destaca que la concentración de triglicéridos es muy inferior a la obtenido en la especie humana, mejor podríamos decir que es inferior la concentración de colesterol, especialmente colesterol libre. bZ) Esteres de colesterol: E n el cromatograma de ésteres de colesterol, destaca la presencia de ésteres saturados, monoenoicos, dienoicos y dos ésteres trienoicos que se desdoblan, así hay una cuarta fracción correspondiente a los ésteres de colesterol trienoicos. Destaca el hecho de que los ésteres de colesterol que están en mayor proporción son los ésteres dienoiCOS. b3) Fosfolípidos: En el cromatograma de fosfolípidos se observan cefalina, lecitina, esfingomielina y, en ' cambio, no se visualiza a la concentración señalada la presencia de lisolecitina, destaca en menor proporción que en los fosfolípidos de la especie humana. c) Lipoproteínas. La separarión de lipoproteínas demuestra la existencia de dos o tres fracciones de difícil interpretación y que probablemente se trata de lipoalbúmina, alfalipoproteína y betalipoproteína. La fracción mayoritaria corresponde a alfalipoproteína. 10. HOMBRE Hemos efectuado desde el año 1967 más de 1.300 estudios de lípidos com- TABLA XIII l ESTUDIO LIPIDICO DE BOS DOMESTPCUS LIPIDOGRAMA Nombre Sexo TORO M Edad VACA 1 H 6-7 afiss VACA 2 H 6-7 años VACA 3 H 6-7 años BUEY 1 M 6-7 años TERNERA H 5-6 meses BUEY 2 M 5-6 meses VACA 4 H 5-6 meses BUEY 3 M 5-6 meses BUEY 4 M 5-6 meses MACHOS HEMBRAS TOTAL L. Totales C. T. G . L. G. G. G. N. F. Lip. Fosfol. A . G . L. Alfa Beta b 2 a -i En el síndrome ARTROPATIA IMPOTENCIA - FUNCIONAL de la ENFERMEDAD REUMATICA INOOMETRCINA LlAUf 1 antiinf lamatorio analgésico antigotoso anticolagenosis INDOMETACINA LlADE + Cápsulas con Supositorios con 25 m g de Indometacina Frasco de 50 capsulas P V.P. 146,lO 100 mg de Indometacina Cajas con 10 supositorios P.v P 88,90 @ LlADE ~RPrnRlOS fRAMCtUllWS Joaquin Cmta 26 Madrid 6 I 1.ll'lDOS NEUTROS ESTERES D E COLESTEROL F:igiirn I l. 1-ípidoi plasni;íticoi de Ros domesticus. I.ípidos neutros 20. 40 y 60 h dz extracto; 20 h de control. Esteres de colesterol 10 y 20 h de problema, 5 y 10 h de control. Fosfolípidos 50 y 80 h de problema; 50 h de standard. 14% A N A LES BE MEL)IC'IIVA Y C'1RUC;IA pletos, coinprcndiendo cn este conccpto la dctcrininación de: - Lípidos totalcs - Colesterol total - Gliccrol librc - Glicerol de glicérido - Glicéridos - Croniatografía de lípidos nciitros - Crornatografía de éstcrcs - Cromntografía de fosfolípidos Adcniús, en In niayoría de casos, aunque por razones técnicas, no cn todos, se ha verificado fósforo lipídico, fosfolípidos y tícidos grasos librcs. Con mcntalidacl clínica hcmos clasificado los individuos en clínicamente nornialcs y bioquímicamcnte normales. En cl primer grupo coniprcndemos ;iqucllns personas, no obcsas, que no han pndccido cnfcrnicdad alguna un año antes a la extracción. En el scFundo grupo incluimos los individuos cuyas cifras dc Iípidos séricos no sobrepasan unos límites aceptados por la niayoría de autorcs y comprobados por nosotros. Pcrsonalmcntc, para establcccr los valorcs normalcs cn In especie humana, con objeto dc scr comparados con las cspccics de animalcs estudiados. Tomamos como patrón un grupo dc personas que trabajan en nucstro lahoratorio. Para los valores de glicéridos, glicerol librc y ácidos grasos lihrcs Valor medio Varones Hembras Ambos scxos aceptamos los valores publicados por nucstro equipo en divcrsas revistas. 1 ) - Lipoproteínas 0,92 0,9 1 0,9 1 5 Vol. 1.11. N,,' 228 Estudio bioquíniico En las cspc:ics hunianas es bien conocido que los Iípidos sufrcn variacioncs dc ncucrdo con la cdnd, por lo quc nuestros resultados, los hcmos desglosado en cinco grupos: 1 ( 1 8-29 años), 11 (30-39 años), 111 (40-49 ;~ños),IV (50-59 años) y V (60 años en ndclantc). En la Tabla XIV rcsumimos los valorcs hallados eri adultos clínica y blioquímicanicntc riornialcs. En la Tahla XlVa resumimos nucstriis obscrvacioiics refcrcn:cs al colcstcrol total. Carlos PASCLJAI. y Augusto COROMINAS han estudiado por el método de E G G ~ T Elos I N valores de glic6ridos de sucio en individuos bioquímicaiiicntc nornialcs, observando en varones unn media de 88.95 ing %, con una dcsviación standard dc 32,92, coi1 uii valor mínimo de 19, l l y iin iiilíxiino de 158.79 iiig %. En hcnibras los valores i.csultantcs han sido: mcdia (Ic 79,03 nig %, desviación standrad de 37, 95, un valor niíninio de 3,13 y inúximo de 154.93. Los valorcs de gliiridos varían de acuerdo con la edad coino se demuestra en la Trihln XV. Sc han cstudiado los valorcs dc gliccrol sérico en 100 individiios bioquíniicamcnte normalcs. observando los siguientes valorcs: D. S. 12íniitcs 95 % 4 @ a TABLA XIV VALORES DE LIPIDOS TOTALES EN ADULTOS "CLINICAMENTE NORMALES VARONES Grupo V . M&. V . Min. Casos 1 18-29 HEMBRAS -- 12 V . Medio Grupo V . Mín. Caso% - - ~ 521 1.047 653 V . Máx. -- - 1 18-29 36 444 1.350 11 30-39 5 575 91 1 753 11 30-39 13 425 1 .O00 111 40-49 11 571 1.200 931 111 40-49 7 560 955 IV 11 53 1 1.040 787 IV 50-59 8 639 1.529 7 583 883 744 V 60 6 525 1.133 V 50-59 60 VALORES D E LIPIDOS TOTALES EN ADULTOS "BIOQUIMICAMENTE NORMALES" VARONES Grupo -- 1 Casos HEMBRAS V . Mín V Máx -- - --- - D . S. Grupo -- 1 Casos V Mín V . Máx V . Mdx. 18-29 29 444 787 613 11 30-39 7 425 790 65 1 18-29 11 52 1 773 617 73,72 11 30-39 3 575 750 666 87,80 111 40-49 4 575 800 655 122,97 111 40-49 6 560 777 648 IV 50-59 4 639 692 655 3 525 800 685 IV V 50-59 5 53 1 71 1 614 87,99 60 5 583 755 703 68.90 V 60 Valores medios totales = 651 Valores medios totales = 650 Desviación standard = 88,27 Desviación standard = 100,63 V . Medio TABLA XIV a COLESTEROL TOTAL EN ADULTOS CLINICAMENTE NORMALES" VARONES Grirpo ('UJOS HEMBRAS V . Máx. V . Mín. .'L Medio - Grirpn C<r.~os 1'. Mír~. V . Máx. V . Medio 1 12 175 320 211 1 37 153 341 224 11 4 202 297 260 11 12 188 294 236 111 9 192 336 259 111 7 184 299 237 IV 8 151 320 241 IV 6 189 426 318 V 6 182 322 261 V 6 21 1 345 258 COLESTEROL TOTAL EN ADULTOS "BIOQUIMTCAMENTE NORMALES" VARONES Grirpo C « 70 r V . Mín. 1'. HEMBRAS Máx. V . Medio Grirpo Casoc V. Mi~i. - -- V . Máx. - - - D. S. - V . Medio - - - - - -~ - - - -- - 1 9 175 220 189 1 28 153 250 26,32 209 11 5 202 202 202 11 8 188 249 20,22 215 111 4 192 249 210 111 5 184 249 29.30 2 19 N 5 151 249 209 iV 4 189 250 43,17 219 V 5 182 235 208 V 4 21 1 249 30.16 2 17 Valores medios totales = 203 Valores medios totales = 2 15 Desviación standard = 27,78 Desviación standard ír = 29.83 Ahril-Jiinio A N A L E S D E MEDICINA Y C l R U G l A 151 FOSFOLIPIDOS LIPTDOS NEUTROS ESTERES DE COLESTEROL Figura 12. Lípidos de sueros humanos. Cromatograma de Iípidos neutros de 3 sueros problemas y un control, 20 h de cada muestra. Cromatograma de Esteres de coIestero1 d e 2 sueros; de cada uno de ellos 5 y 10 h d e extracto. Cromatograma de fosfolípidso d e 3 problemas y iin control, 50 h de cada miiestra. I 152 ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA Vol. 1.11. N,,' 228 1,IPIDOS NEUTROS k:igiira 13. Lípidos d e sueros hiimanos. Cromatogi-ania de Iípidos neiiti-o.; d e 3 \iic;o.; problem;i\ y iin control, 2 0 h de c;id;i miiestra. Cr«matogram¿i tle Estcrei de colesterol de 2 suero\: de catl;i lino d e ellos 5 y 10 h dc estr;icto. Croniatograma de forfolípiilo.; con 3 prohlem;i\ y iin control. TABLA XV VALORES D E GLICERIDOS (Pascua1 y Co;ominas) ADULTOS "CLINICAMENTE NORMALES VARONES Grupo 1V.o V . Mín. V . M&. HEMBRAS V . Medio D . S. Grupo V . Mín. N.O V . M6x. D. S. V . Medio ADULTOS "BIOQUIMICAMENTE NORMALES" VARONES Grupo - - 1 N O V Mín. V Máx. HEMBRAS V . Medio -- 11 49,12 mg% 116,49 mg% D. S. Grupo 77,77 mg% 22,95 mg% 1 N O - 33 V . Mín V . Medro V . Máx. -- - 5,09 mg% 147,69 mg% - 67,69 mg% 11 5 40,40 " 128,81 " 70,79 " 37,63 " 11 13 25,61 " 153,82 " 74,77 " 111 9 30,68 " 172,48 " 101,36 " 49,lO " 111 7 49,44 " 172,OO " 84,66 " IV 9 65,41 " 146,51 " 99,71 " 30,OO " IV 6 65,31 " 143,62 " 105,92 " V 7 65,40 " 133,91 " 89,68 " 31,58 " V 6 88,40 " 147,08 " 117,21 " 1 al V 41 30,68 " 172,48 " 88,95 " 34,92 " 1 al V 65 5,09 " 172,OO " 79,03 " - NOBECUTAN APOSITO PLASTICO ESTERIL ANTISEPTICO, EN FORMA DE AEROSOL. - LAB. INIBS,A Loreto, 8 BARCELONA-15 1.1 I'll)OS NEUTROS FSTEKI'S DE COLESTEROI 1:igiii;i 14. Eatiidio croiii;itogr;itico clc Iípidu\ clc p;icieiiic\ clislipcniico\. Ohs2rscve cii el croniíitograma de I.ípitlos neiitros, :iiirnento\ cfc triglicérido\. 156 ANALES DE MEDICINA Y C l R U G I A El estudio dc fosfolípidos en varoncs normalcs ha dcniostrado una media dc 180 ing 96 ; cn hembras cl valor promedio hri sido dc 178 mg 5%. La mcdiri total ha sido 179 mg %. b) Estudio croniatográfico b,) Lípidos neutros: La scparacicín cronintogrrílica dc Iípidos neutros, nos dcmucstra 111 presencia dc éstercs de colcstcrol, triglicéridos, colcstcrol librc, A.G.L. y fosfolípidos. b2) Estcrcs tlc colcstcrol: El fraccionamiento de Cstcrcs de colesterol nos demuestra los éstercs saturados, monocnoicos, dicnoicos, tricnoicos y policnoicos. b,) Fosfolípidos: El cromatogranin de fosfolípidos se scpara cefalina, Iccitina, csfingomic:linas y lisolecitina. La fraccicín mayoritaria corresponde a Iccitina. c) Lipoprotcínas Las lipoprotcínas quc sc separan en el suero humano normal son alfa, beta y en gcncrnl prcbcta. No sc separan en ayunas, cn individuos normalcs quilomicroncs. Las proporciones halladas en condiciones normales son: alfa lipoprotcínas 30 a 40 % prcbcta lipoprotcínas 0-1 0 96 bcta lipoprotcínas 55-65 % IV. COMENTARIO Los Iípidos son principios inmediatos dc gran importancia biológica que podríamos rcsumir cn los siguicntcs puntos: 1) Son importantes componcn- Vol. LTT. N: 228 tcs de la dicta. 2) Producen notable proporcicín de cncrgía calorífica, pucsto que 1 gr dc glicéridos desprende 9.4 kcal. 3) Fornian sustancia dc rcscrva ncuniulándosc en cl tcjido ndiposo. 4) El tcjido adiposo tiene misión tcrinogenftica cn aninialcs homoternios. 5) Los rícidos grnsos cscncialcs poliinsaturados, que no se sintctiznn en el organismo son vitales para el dcsarrollo. 6) Los Iípidos son vchículo de vitaminas liposolublcs. 7) Algunos ácidos grnsos (prostaglandinas) ticncn niisicín hormonal. 8) La mcnibrann cclulrir y dc In niitocondria cst ;I' constituida por lipoprotcínas. 9). Algunos Iípidos complejos forman las coniplicadas estructuras del sistcnia ncrvioso y la vaina dc la niiclina. Los Iípidos se localizan en In sangre y tejidos dc animales. En los tcjidos puede cn gcncral dcmostrnrsc. iin patrón lipídico propio para cada tcjido. Para ello, la croniatografía en capa fina cs un método bastante bueno; podemos citar que cn el tcjido nervioso sc localiza cscncialiiientc colcstcrol librc y fosfo y glucolípidos, en tanto cii cl tcjido adiposo es niuy rico cn triglicfridos. En los últimos años se ha rcvalorizado cl tcjido adiposo cn cl que se ha demostrado la iinportantc niisicín en In rcgulnción de rícidos grasos y glicéridos circulantes, es decir, los fcnóincnos dc lipogC.ncsis y lipolisis. El tcjido adiposo sc ha dividido clínicamcntc cn blanco y pardo. Esto último dcniostrado cn cl tcjido adiposo intcrcscapulrir sc carnctcrizn: a) por estar muy vascularizado, b) tcncr gran * m 158 ANALES DE MEDICINA Y ClRUGlA proporción de hen~atíesen los capilares, c) tiene elevada concentración de citocromos, d) gran riqueza en mitocondrias, lugar principal de formación de ATP, e) la composición lipídica del tejido adiposo pardo es distinta a la del blanco, en el sentido de tener una mayor concentración de ácidos grasos no saturados, lo que confiere a los lípidos una nnayor fluidez. Al parecer, la misión esencial del tejido adiposo pardo sería la producción de calor, corno se demuestra en las especies animales hibernantes, sin embargo, este tejido también existe en el hombre, perro, rata.. . (A. GAJDOS). Los Iípidos orgánicos proceden en su mayoría de los que se ingresan con la alimentación, siendo la mayor parte triglicéridos y seclundariamente colesterol y fosfolípidos. En el intestino tiene lugar una emulsión de las grasas y posteriormente una hidrolisis por acción de la lipasa pancreática e intestinal, convirtiéndose los triglicéridos; en monoglicéridos y ácidos grasos, que atraviesan las células de la mucosa. Por otra parte, la lecitinasa A actúa sobre los fosfolípidos y produce lisolecitina. En las células de la mucosa1 intestinal glicerol, ácidos grasos y lisolecitina, sufren procesos metabólicos de resíntesis produciéndose nuevos triglicéridos y fosfolípidos que se conglomeran en gotas llamadas quilomicrones que por vía linfática van a la sangre, de donde los 1ípidos son extraídos y metabolizados por las células del tejido adiposo, hepático y cardíaco. El proceso de degradación de los Vol. LII. N.O 228 ácidos grasos tiene lugar en la mitocondria verificándose una secuencia de reacciones llamadas globalmente beta oxidación. Tiene lugar sucesivamente: 1) Formación de un tioéster de ácido graso. 2) Deshidrogenación. 3) Betadeshidratación. 4) Deshidrogenación con formación de un compuesto beta cetónico y 5) Tiolisis del enlace beta cetónico resultando un tioéster de ácido graso con dos carbonos menos que el original. Este tioéster de ácido graso sufrirá todas las reacciones radicadas eliminándose en cada proceso una molécula de acetil COA. La regulación del metabolismo lipídico corre a cargo de mecanismos nerviosos y hormonales. Se han descrito como hormonas que actúan en la lipogénesis insulina, oxitocina, prolactina y prostaglandinas. Se comportan como agentes lipolíticos o adipocinéticos catecolaminas, secretina, ACTH, H melanofora, H somatotropa, g!ucagon, hormona luteínica y serotoninas. Finalmente, como hormonas permisivas podemos citar las tiroideas y los glucocorticoides. La regulación hormonal y nerviosa se establece en el tejido adiposo por intermedio de un sistema efector constituido por la adenilciclasas localizadas en la cara interna de la membrana célular adiposa. Estas adenilciclasas se consideran el "primer mensajero" del sistema efector y actúan en la síntesis del 3-5 AMP cíclico considerado como "segundo mensajero". El AMP cíclico actúa a su vez estimulando la lipasa tisular sensible a las hormonas que hidrolizan los triglicéridos, ejerciendo 4 + $ a Ahi-il-Jiiiiio ANALES D E M EDICINA Y CIRIJGIA por tanto iin cfccto lipolítico. La concentración de AMP cíclico está bajo In dcpcndcncia de dos enzimas, la adenilciclasa, quc cntaliza la formación de AMP cíclico a partir dc ATP, y la fosfodicsterasa, que lo degrada en 5 AMP y 3 AMP. Cada efecto que estimula la primera enzinia o inhiba la segunda aumenta la conccntración dc AMP cíclico. La conccntración de Isic disminuye por las sustancias que inhihcii las adcnilciclasas o estimulan la fosfodicstcrasa. El resultado de los conlplicados procesos de lipog&nc\is o lipolisis que ticiic lugar cn el tcjiclo adiposo es la prcscii:ia de una scric de coniponcntcs lipídicos en la sangre de los animales supcriorcs. El primcr interrogante que se nos plantea es si existen diferencias cualitntivas o cuantitativas entre los difeixntes animales. Pcrsoiialmcntc, además de los sucros de los animales investigados, hciiios estudiado la composición de otros seres mis infcriorcs con objeto dc estnhlcccr diferencias cualitativas. El estudio mcdiantc cromatografía en capa fina de extracto lipídico de .Iiilus tcrrcstris (fip. 15) nos demuestra la presencia dc cscualcno, ésteres de colestcrol, triglicéridos, ácidos grasos libres, colcsterol libre y fracción polar. Ilcstaca en estc croinatograma una notable zona de triglicéridos, colestcrol libre superior a colcsterol esterificado, una m:incha marcada de A.G.L. Es tainbicn iinportaiitc destacar que el csciinlcno cstli en mayor proporción cluc el cdesterol esterificado. En el 159 cromatogrania de éstercs de colesterol, sc observan istercs saturados, tilonocnoicos, dienoicos y trienoicos, todos ellos cn poca conccntración. Finalmente, en el cromatogrania de fosfo y glucolípidos señalamos la presencia de cerebrósidos, cofalina, sulfátidos, lecitina, fracción no identificada, esfingomiclina y dos fracciones más probablemente lisoleritina e inositolfosfátidos o gangliósidos. En el extracto lipídico de hormiga común se demuestra después de la CCF, escualcno, ésteres de colesterol, triglicéridos, A.G.L. y fosfolípidos. El estudio de extractos lipídicos de calamar, merluza, rape y sardina, nos dcmucstra una notable concentración dc colesterol esterificado y libre en el primcro, en tanto que en la sardina predominan los triglicéridos. En meiluza y rape observamos colesterol libre y A.G.L. Ascendiendo por la escala zoológica comentaremos en primer lugar los Iípidos de gallus Sp. En los machos los Iípidos son cualitativamente idénticos a los dc la especie humana y cuantitativamente, a excepción del glicerol libre, inferiores. En las hembras hemos observado una gran concentración de Iípidos totales, glicéridos y fosfolípidos muy superiores a las observadas en los machos, siendo el colcsterol total y los A.G.L,. aproximadamente igual. La interpretación dc esta diferencia sexual es difícil con los datos de que disponcmos, en primcr lugar podríamos pcnsar diferencias en la alimentación, con la ingestión, por ejemplo, dc pienso con grasa, quizás a título de hipótesis, 160 ANALES DE MEDICINA Y CIRUGlA Vol. 1-11. N." 228 1-IPIDOS NEUTROS FOSFOLIPIDOS ESTERES DE COLESTEROL Figura 15. Cromatograma de Julus Terrestris. Lípidos neutros 20 y 40 h de extracto y 20 h de control. Fosfolípidos 10, 20 y 50 h de extracto y 50 1 de control. Esteres de colesterol 5, 10 y 15 h de extracto problema y 5 y 10 h del control. 1 Abril-Junio $ b @ 6 ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA podríamos suponer que la hiperlipemia de la hembra está relacionada con la producción del huevo. El estudio mediantc CCF de la yema demuestra una importante concentración de triglicéridos y fosfolípidos. La confirmación de csta hipótesis la tendríamos si se observan semejantes diferencias sexuales cn otras aves. En Cavia Sp las concentraciones lipídicas observadas son algo menos de una tercera parte de las halladas en el suero humano, a cxcepción del glicerol libre que en algunos casos ha sido superior. En los Oryctolagus Cunículus estudiados demostramos unos valores de lípidos totales medios de 345 mg %, inferiores por tanto a los hallados en cl hombre. El colesterol total medio ha sido de 58. El glicerol libre es superior al del suero humano, en cambio los glicéridos están a la mitad. Los fosfolípidos son ligeramente inferiores y los A.G.L. superiores. Se ha hallado una mínima diferenciación sexual en el sentido de unos valores lipídicos globales superiores en las hembras. El estudio lipídico sérico en Sus Scrofa nos demuestra una media de lípidos totales de 464 mg %, colesterol 130 mg %, glicéridos 24,39 mg %, fosfolípidos 3 25 mg %, glicerol libre 196 mg % y A. G. L. 0,26 mVal/litro. Destacan unos glicéridos muy bajos y un glicerol libre más alto que en el suero humano. En el Canis Sp. solamente hemos determinado la concentración de lípidos totales observando aproximadamente unos valores a la mitad de los 161 del suero humano. Con CCF hemos estudiado semicuantitativamente todos los parámetros lipídicos habituales, demostrándose cualitativamente idénticas a las de suero humano. En los Bos domesticus hemos hallado las siguientes proporciones lipídicas medias: totales 41 1 mg %, colesterol total 137 mg %, glicerol libre 0,54 mg %, glicéridos 15,75 mg %, fosfolípidos 99,2 mg %, A. G. L. 0,60 mVal. Parece observarse una mínima diferencia sexual con hiperlipemia relativa a favor de las hembras. En los machos Equus Caballus hallamos una concentración lipídica total de 412 mg %, colesterol 85, G. L. 0,21, glicéridos 59,39, fosfolípidos 126 mg % y A.G.L. 0,24 mVal. En la hembra estudiada las concentraciones lipídicas son superiores. Los lípidos de Capra Sp. macho son ligeramente inferiores a los de la especie humana, con unos totales medios de 640 img %, un colesterol de 216, en cambio los glicéridos son muy inferiores (17,53). Los fosfolípidos han resultado 151 mg % . Los A.G.L. son superiores. Al parecer existe una mayor proporción de Iípidos en machos que en las hembras, si bien tenemos poca información para aceptarlo como conclusión definitiva. En Ovis Aries solamente hemos tenido oportunidad de estudiar machos observando unos lípidos 1/3 de los observados en el hombre. Lípidos totales 241 mg %, colesterol 65, fosfolípidos 87 mg %. Los glicéridos son muy inferiores con una media de 6,32 mg %, en cambio el glicerol libre y 162 ANALES D E MEDICINA Y CIRUGIA los A.G.L. son superiores a los hallados en la especie humana. En resumen, podemos afirmar que no hay diferencias cualitativas en los lípidos plasmáticos de los animales y el hombre. En cambio, sí hay diferencias cuantitativas en el sentido de una menor concentración lipídica en todos los parámetros. E n algunas especies hay mayor proporción de glicerol libre y ácidos grasos libres. RESUMEN Y CONCLUSIONES 1) En esta investigación pretendeinos hacer un estudio de Lipobioquímica comparada. Comparamos la concentración lipídica de suero o plasma de diversas especies animales en relación a la especie humana. Entre los animales estudiados tenemos, caballos, cabras, cerdos, cobayos, conejos, corderos, gallináceas, perros, toros y vacas. En cada una de las especies se ha estudiado un mínimo de 10 individuos, procurando escoger machos y hembras, con objeto de establecer si existen diferencias sexuales. Los parámetros lipídicos estudiados han sido: Lípidos totales, colesterol total, glicerol libre, glicerol de glicéridos, fosfolípidos, glicéridos, fósforo lipídico, ácidos grasos libres, estudiados por métodos químicos. Por métodos electroforéticos sobre acetato de celulosa se ha estudiado el lipidograma. Y, finalmente, mediante métodos cromatográficos en capa fina hemos estudiado los distintos parámetros lipidicos séricos. Vol. LII. N.O 228 Se han verificado tres tipos de cromatogramas: de lípidos neutros, de ésteres de colesterol y de fosfolípidos; en total hemos realizado 431 análisis químicos, 345 placas cromatográficas y 76 lipidogramas. 2) Se consideran brevemente los aspectos más importantes de la bioquímica de los lípidos. Se expone la modificación de BLOORmodificada en lípidos simples (glicéridos, estéridos y ácidos biliares), lípidos complejos (glicerofosfolípidos y esfingolípidos). Los glicerofosfolípidos contienen glicerina, ácidos grasos y ácido fosfórico y además colina (lecitina), etanolamina (cefalina), serina (fosfatidilserina) e inositol (inositolfosfatido). Los esfingolípidos tienen un aminoalcohol de cadena no saturada con 18 carbonos llamados esfingosina, ésta se une mediante enlace amídico al ácido graso formando la ceramida. Si el hidroxilo terminal de la esfingosina está esterificado por la fosforilcolina, tenemos la esfingomielina. Los glucoesfingolípidos son ceramidas con moléculas glucídicas, galactosa (cerebrósidos), galactosa y sulfúrico (sulfátidos) hexosas, hexosaminas y NANA (gangliósidos). Entre los derivados de los lípidos describimos las características más importantes de los alcoholes, ácidos grasos y prostaglandinas. 3) Los lípidos plasmáticos no son suficientemente polares para circular en forma libre, por lo que requieren la unión con proteínas, resultando macromoléculas llamadas lipoproteínas y que de acuerdo con su movilidad electroforética se denominan en el hombre c t I 5 Abril-Junio b. b a 6 ANALES DE M alfa, beta, prebeta y quilomicrones. La lipoproteína alfa tiene una movilidad clectroforética como las alfa, globulinas. Tiene un peso molecular entre 165.000 y 400.000. Está compuesta por un 30 % de fosfolípidos, 18 % de colcsterol y 45 a 55 % de proteínas. La betalipoproteína tiene un peso molccular dc 1,3 a 3,2 por lo6. Contiene 20 a 25 % proteína, 8 % colesterol libre, 35 % cdesterol esterificado, 22 % de fosfolípidos y 10 % de triglicéridos (FREDRICKSON y cols.). La lipoproteína prebeta se sintetiza en el hígado, vchiculiza los triglicéridos de síntesis cndógena. Los triglicéridos de procedencia intestinal van ligados a los quiloinicrones. Finalmente, los ácidos grasos libres van ligados a la albúmina. En resumen, existen tres formas de rtansporte de los Iípidos plasmáticos: a) Lípidos de procedencia exógena que circulan en forma de emulsión con los quilomicrones. b) Los de procedencia endógena forman un complejo macromolecular con alguna lipoproteína que según su movilidad electroforética dividimos en alfa, beta y prebetalipoproteína y c) Los áridos grasos libres de procedencia endógena van ligados a la albúmina. 4) Los estudios de los lípidos plasmáticos de los animales se han verificado mediante técnicas químicas, electroforéticas y cromatográficas. Entre los métodos químicos diremos quc la determinación de los lípidos totales se ha efectuado con la ténica de ZOLLNER y KIRSCH.La determinación de colesterol total se ha verificado con el método de RAPPAPORT. La determinación de glicerol libre, glicerol de glicérido y glicéridos se ha determinado por el método enzimático de EGGSTEIN.La determinación de foslolípidos se ha verificado con el método de ZILVERSMIT y DAVIS.Finalmente, los ácidos grasos libres se han verificado por la técnica de DUNCOMBE. Para la separación d e proteínas se ha empleado como soporte el acetato de celulosa, empleando como colorante el Rojo Ciba 7B. Mediante esta técnica se separan perfectamente las alfalipoproteínas, beta, prebeta y quilomicrones. Métodos cromatográficos : Hemos empleado la cromatografía sobre Silicagel G (en capa fina), en el cromatograma de Iípidos neutros se han empleado como solventes el éter de petróleo, éter etílico y ácido acético en proporción 90/ 10/ 1, consiguiendo una perfecta separación de ésteres de colesterol, triglicéridos, ácidos grasos libres, colesterol libre y fosfolípidos. La separación de ésteres de colesterol se ha conseguido con un sistema solvente consistente en éter de petróleocloroformo 90/10. Se han separado ésteres saturados, monoenoicos, dienoicos, trienoicos y polienoicos. En el cromatograma de fosfolípidos el sistema solvente ha consistido en cloroformo metanol-acético-agua, con el cual se han separado perfectamente cefalina, lecitina, esfingomielinas y lisdicitinas. 5) Se han estudiado 10 Equus Caballus, l hembra y 9 machos, 7 de los cuales eran mulo3 (híbrido F1de asno, macho y yegua). Si bien la estadística 164 ANALES DE MEDICINA Y ClRUGlA es poco numerosa para deducir conclusiones definitivas, se observa una diferencia sexual con una mayor proporción de Iípidos séricos en la hembra que en el macho. En los machos la concentración de lípidos totales es de 412 mg, colesterol 85, glicerol libre 0,21, glicéridos 59,39, fosfolípidos 126 y ácidos grasos libres 0,24 mEq/l. En el estudio cromatográfico además de confirmar los datos bioquímicos, destaca una notable proporción de ésteres dienoicos sobre los monoenoicos y saturados. El estudio de las lipoproteínas demuestra la aparición de dos fracciones de débil intensidad y con movilidad alfa y beta. La proporción de lipoproteína alfa oscila entre 8,6 y 25 %. La de lipoproteína beta entre 75 y 91,4 %. 6) Se han investigado los lípidos y lipoproteínas de 10 Capra Sp., 9 machos y l hembra, Se han observado diferencias sexuales en el sentido de una mayor concentración lipídica en machos que en hembras, sin embargo, nuestras conclusiones no son definitivas por tener la hembra edad inferior a la mayoría de machos y al haber podido solamente estudiar una. Las concentraciones promedio de lípidos halladas en machos han sido: Lípidos totales 641 mg %, colesterol 216 mg %, glicerol libre 1,78 mg %, glicéridos 17,53 mg %, fosfolípidos 151 mg % y A.G.L. 1,29 mEq/l. En relación con la especie humana contrasta visiblemente la inferior proporción de glicéridos, la mayor concentración de A.G.L. Vol. LII. N.O 228 El estudio cromatográñco demuestra, en comparación con un extracto de suero humano, la ínfima zona de triglicéridos y la significativa mancha de A.G.L. Por otra parte, la proporción de ésteres saturados, monoenoicos, dineoicos, trienoicos es semejante. De entre los fosfolípidos destaca como fracción mayoritaria lecitina, seguida de esfingomielinas, cefalina y lisoleticina. La separación de lipoproteínas demuestra la presencia de lipoalbúmina, alf alipoproteína. La alf alipoproteína es la que está en mayor proporción. 7) El estudio lipídico en 10 individuos (1 hembra y 9 machos) de Sus Scrofa demuestra una concentración de lípidos plasmáticos inferiores a los de la especie humana. Las concentraciones medias de lípidos totales han resultado 464 mg %, de colesterol total 130 mg %, glicerol libre 1,96 mg %, glicéridos 24,39 mg %, fosfolípido 125,2 y ácidos grasos libres 0,26 mVal. La cromatografía en capa fina demuestra la presencia de fracciones lipídicas cualitativamente idénticas a las de la especie humana, destacando una menor proporción de la fracción glicerídica. En el lipidograma aparecen, en los machos, lipoalbúmina alfa beta y lipoproteína. La fracción mayoritaria corresponde a la lipoproteína beta. En la hembra se ha observado además prebetalipoproteína. 8) Se han estudiado los lípidos de 10 Cavias Sp., hallándose los siguientes valores medios en la especie: Lí- Abril-Junio \+ \ c S ANALES DE MEDICINA Y CIRUGIA pidos totales 261 mg %, colesterol total 50 mg %, glicerol libre 0,89 mg %, glicéridos 90,97, fosforo lipídico, 2,9 mg %, fosfolípidos 76, A.G.L. 0,85 mVal. Los valores obtenidos son, en general, inferiores a los observados en la especie humana. 9) En 14 Conejos (Oryctolagus cunículus), 9 machos y 5 hembras, la concentración de parámetros lipídicos hallada ha sido la siguiente: lípidos totales 345 mg %, cdesterol total 58 mg %, glicerol libre, 2,49 mg %, glicéridos 59,37, fosfolípidos 99,4 mg % y ácidos grasos libres 0,84 mVal. El estudio cromatográfico nos ha demostrado la presencia de ésteres de colesterol, triglicéridos, A.G.L., colesterol libre y fosfolípidos. Entre los ésteres de colesterol predominan los dienoicos, sobre los saturados y monoenoicos. La fracción mayoritaria de fosfolípidos es la lecitina, seguida de cefalina, esfingomielinas y lisolecitina. La separación electroforética de lipoproteínas nos permite visualizar dos fracciones, alfa y beta. La primera en una proporción entre 23,l y 49,O % y la lipoprotenía beta entre 50,3 y 76,9 %. 10) Se han estudiado los lípidos séricos en 10 machos de Ovis Aries. El promedio obtenido ha sido, lípidos totales 241 mg %, colesterol total 65 mg %, glicerol libre 1,72 mg % glicéridos 6,32, fosfolípidos 87 mg %, ácidos grasos libres 1,59 mVal. Destaca una disminución de lípidos totales, especialmente de glicéridos y colesterol. Se observa un aumento en 165 relación con la especie humana de A.G.L. En el lipidograma la fracción mayoritaria corresponde a la alfa lipoproteína. 11) Hemos estudiado 10 individuos de Gallus Sp., observando importantes diferencias sexuales. En los machos las concentraciones promedio son las siguientes: Lípidos totales 465 mg %, colesterol total 198 mg %, glicerol libre 3,25, glicéridos 19,60 mg %, fosfolípidos 71 mg % y A.G.L. 0,73 mVal. En las hembras los valores son: 1ípidos totales 1.140 mg %, colesterol 95, glicerol libre 1,84 mg %, glicéridos 495,71, fosfolípidos 470 y A.G.L. 0,60 mVal. Por tanto, las diferencias sexuales más significativas son a nivel de glicéridos y de fosfolípidos. El estudio cromatográfico confirma las diferencias sexuales demostradas por métodos químicos. La separación electroforética de lipoproteínas demuestra la aparición de 2 fracciones alfa y beta, que sorprendentemente no presentan diferencias sexuales. 12) El estudio de 9 machos y 11 hembras de Canis Sp., nos demuestra una concentración media de lípidos totales en los primeros de 418 mg % y en las segundas de 486 mg %. En el cromatograma de lípidos neutros demostramos ésteres de colesterol, triglicéridos, colesterol libre y fosfolípidos. Los ésteres de colesterol demostrados han sido los saturados, monoenoicos, dienoicos y trienoicos con indicios de tetraenoicos. El cromato- 166 ANALES D E MEDICINA Y CIRUGIA Vol. LII. N.O 228 mg %, fosfolípidos 180 mg %, A.G.L. 0,39 mVal/l. En hembras la concentración de 1ípidos totales ha resultado 650 mg %, 13) El promedio de parámetros colesterol total 215, glicerol libre 0,91 lipídicos obetnidos en 10 individuos mg % , con una desviación standard Bos domesticus, son los siguientes: de 0,36 mg %, glicéridos 79,03 mg %, lípidos totales 41 1 mg % , colesterol con una desviación standard de 37,9 137 mg %, glicerol libre 0,54, glicé- mg %. Para los fosfolípidos el valor ridos 15,76 mg %, fosfolípidos 99,2 promedio ha sido 178 mg %. Finalmg %, ácidos grasos libres 0,60 mente, para los A.G.L. 0,39 mVal/l. 15) En diversas ocasiones hemos mVal/ l . publicado el interés de la cromatogra14) El estudio de parámetros lifía en capa fina para la separación de pídicos séricos es de un interés extralípidos humorales y tisulares del cuerordinario en el hombre, puesto que las po humano y con finalidad clínica o alteraciones del metabolismo lipídico de investigación hemos desarrollado en son causa de numerosas enfermedades. nuestro laboratorio más de 7.000 plaPersonalmente hemos verificado des- cas cromatográficas. Mediante el desade el año 1967 más de 1.300 estudios rrollo de Iípidos neutros conseguimos lidípidos completos con finalidad diag- la separa~iónde ésteres de colesterol, nóstica. Sin embargo, para el presente triglicéridos, A.G.L., colesterol libre y estudio de lipobioquímica comparado, fosfolípidos. Por otra parte, con clorohemos aceptado más datos de 15pidos formo-metano1 podemos aislar ésteres totales, colesterol libre, glicerol libre saturados, monoenoicos, dienoicos y y glicéridos de individuos química- trienoicos. Por último, en el desarrollo mente normales publicados en otro lu- de fosfolípidos separamos cefalina, legar. Los otros parámetros lipídicos los citina, esfingomielinas y lisolecitina. hemos estudiado en personal del laboPor tanto, con estos desarrollos, poratorio expresamente para este trabajo. demos identificar hasta 14 parámetros Los valores hallados en varones han lipídicos séricos. Por su resolución, sido: lípidos totales 651 mg %, coles- facilidad de ejecución y reproductibiliterol total 203 mg %, glicerol libre dad la CCF tiene un indiscutible inte0,92 mg %, con una desviación stan- rés para el estudio de lípidos séricos dard de 0,37, glicéridos 88,9 mg % , y tisulares en condiciones normales y con una desviación standard de 32,9 patológicas. grama de fosfolípidos nos demuestra cefalina, lecitina, dos esfingomielinas y lisolecitina. La lecitina es la fracción mayoritaria. El trabajo con$ta de 177 citas bibliográficas.