•. • INTENDENCIA DE ADUANAS PROCESO: DE GESTiÓN ADMINISTRATIVA Y CONTROL SUBPROCESO: Procedimiento PRO-IA-DN-UNP-06.43 DETERMINACiÓN DE ALCOHOLES (SUPERIORES) Y ACETATO DE ETILO EN LICORES DESTILADOS. MÉTODO POR CROMATOGRAFIA DE GAS ELABORADO POR: Fecha (dd mm aa) 11 de agosto de 2010 Nombre Completo Fabiola Isabel Monroy de Javier Puesto que ocupa Jefe del Laboratorio Quími~Fiscal Versión 1 No. Folios 20 REVISADO POR: APROBADO POR: ~20\O Marvi7 .u /efe de.!-..... / rl! 'Z- Herrera ,~ .. ,~ .. .u I Raúf Au9usto I D ' Monroy \. II"::'~~"\ de A~S • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 1. Objetivo Proveer al personal del Laboratorio Químico Fiscal (LQF). la metodología para realizar el análisis de determinación de alcohol etílico o determinación del grado alcohólico real, en muestras de bebidas alcohólicas destiladas recibidas, para dar cumplimiento al Decreto número 536 del Congreso de la República de Guatemala, "Ley de Alcoholes , Bebidas Alcohólicas y Fermentadas·. 11. Alcance El presente procedimiento lo debe aplicar el Analista del LQF, a todas las muestras de alcohol y bebidas alcohólicas destiladas que ingresan, para la determinación del grado alcohólico real o porcentaje de etanol en volumen de cada una. Inicia desde que se establece el método para realizar el análisis, según se determine por medio del procedimiento de análisis fisicoquímico PRO-IA-DN-UNP.06.20 y finaliza con el registro de los resultados obtenidos por dicho análisis en el formato de informe de análisis fisicoquímico y su traslado para revisión, conforme al procedimiento referido. 111. Actores Involucrados ro~~edimiento Analistas delll",l)or",tnlrin Químico Fiscal Pagina 2 de 20 • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografia de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 IV. Marco Legal y Documentos Relacionados Decreto número 536 del Congreso de la República de Guatemala, "Ley de Alcoholes , Bebidas Alcohólicas y Fermentadas" Método 9.9091 -9. descrito en "Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, AOAC , 14th edition, 1984" Método AOAC 26.1 .30; "Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, AOAC, 18th edition, 968.09 Alcohols (Higher) and Ethyl Acetate in Distilled Liquors. Gas Chromatographic Method. First Action 1968. Final Action 1969" Método para la determinación de alcohol y componentes secundarios, del Laboratorio Unificado de Control de Alimentos y Medicamentos, LUCAM, del Ministerio de Salud Públ ica y Asistencia Social de Guatemala Norma Guatemalteca Recomendada (Obligatoria), COGUANOR NGO 33 010 h 13 Norma ISO 17025:2005 "Requisitos generales para la comn",t,~.iir:ia de laboratorios de ensayo y calibración" Página 3 de 20 Intendente de • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 v. Normas Internas 1. Previo a determinar el método de análisis a utilizar para identificación o determinación de materias y al finalizar el análisis, deben seguirse los lineamientos establecidos en el procedimiento para Análisis Fisicoquímico, número PRO-IA-DN-UNP06.20. 2. La determinación de alcoholes y acetato de etilo en licores destilados se debe realizar con el cromatógrafo de gas. La descripción de este equipo se da en el anexo 2, para más referencia. 3. Todos los reactivos que se utilicen deben ser de calidad analítica reconocida, el agua debe ser destilada o de pureza equivalente (ver Anexo 2) . 4. El analista debe seguir los lineamientos del presente procedimiento para determinación de alcoholes y de productos congenéricos, según se describe en el anexo 3 de este procedimiento, si tuviera alguna duda puede consultar los manuales correspondientes o verificar los resultados con la jefatura del laboratorio. 5. El informe de análisis debe llenarse con la información uu'" / ',,, Fisicoquímico, número PRO-IA-DN-UNP-Oo.20. en la norma 9 del procedimiento de Análisis Página 4 de 20 • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 VI. Narrativa 1 Analista del LQF Establecido el m a seguir para de alcoholes (superiores) y acetato de etilo, según lo indicado en el procedimiento PRO-IA-DN-UNP-06.20, procede con el análisis de la muestra. i actividades según se en el instructivo Determinación de alcoholes (supel·iore.s). acetato de etilo por de del anexo resultados en el formato en para revisión, según se describe en análisis Página 5 de 20 • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 VII. rama de FI rama Analista del LQF 1.Establece el método a seguir, según PRO-LAON-UNP-OB.20 2. Realiza el I segUn Instructivo de Detenninaci6n de alcoho6es (superiores) Ver Anexo 1. Página 6 de 20 Intendente • Intendencia de Aduanas • PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 VIII. Registros Nombre del Registro Tipo de Registro (papel/electrónico) Informe de análisis Papel y digital (software) IX. Glosario Productos congenéricos . Son compuestos qu ímicos formados nrilor.ilo"l,mAntA durante los procesos de fermentación y maduración, y en menor escala durante la destilación por entre algunos ácidos orgánicos con el alcohol etílico para formar esteres. Los productos congenéricos contri bebida alcohólica el sabor y aroma propios de la materia prima con que ésta se elabora. Los compuestos ésteres, aldehídos, ácidos orgánicos, alcoholes superiores y Nota. Los pr~IUUClUIS r.lnn(1Arlérir.n~\ se designan también nomb~ de ilrnnl~r",7"~. PAgina 7 de 20 • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 x. Listado de Anexos Tipo de Anexo: Fonnatos I Fonnulirloe; Requisitos Requeridos (REQ; Instructivo I Gula (INS); Identificación del Anexo ANEXO 1 Nombre del Anexo mS,IrIJClI\rn para Versión (superiores) n/a 2 n/a 3 n/a 4 de n/a Pagina 8 de 20 • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 ANEXO 1 INSTRUCTIVO PARA DETERMINACiÓN DE ALCOHOLES (SUPERIORES) Y ACETATO DE ETILO EN LICORES DESTILADOS, MÉTODO POR CROMATOGRAFíA DE GAS se Analista de LQF Analista de 3. 4. mna I condiciones descritas en el anexo 2 Inyecta la de la muestra y Si es necesario. verifica la respuesta de en los en el manual de equipo, ajusta el I de validación del método. estándar, según se se con en en "'U"UdIUd Herrerr: Página 9 de 20 en el • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 ANEXO 2 Cromatografía A. Aparato a. Cromatógrafo de gas. Equipado con detector de llama de ionización. En el LOF se utiliza un cromatÓQrafo marca Shimadzu, modelo 2010 equipado con los detectores de llama de ionización (FPD), de captura de electrones (EC) yel detector selectivo para Nitrógeno y Fósforo (NPD) . b. Columna . 23 % Carbowax 1500 (w/w) en Chromosorb W (60-80 mesh, lavado con ácido) o equivalente. En el LQF se utiliza una columna marca Alltech, con fase AT™-Petro, de 100 m. de longitud, con diámetro interno de 0.25 mm., grosor de film de 0.50 ~m , serie No. 507344, utilizando N2 como gas portador. c. Parámetros aproximados. Temperatura en la columna 70 OC (isotérmica); detector e inyector 150 OC; flujo de gas portador He 150 mUmin. En el LOF, se emplean las siguientes condiciones: temperatura del inyector de 150 OC Y del detector 220 OC; en el horno de la columna se utiliza una rampa de temperatura de 90 a 170 OC., utilizando N2 como gas portador, con un flujo de 0.7 mUmin. d. Jeringa. De 1O ~L, Hamilton Co. No. 701 , o equivalente. modelo AOC -20i con jeringa de 10 ~L Y capacidad de inv!~ción 1.0 ~L de cada l))IJ<estI~ Las condicio soluciones s óptimas de peración varían de acuerdo Se d be hacer el ajuste de n,.,rÁn,et,lOs 'ng. ,M:;±(ool~ J9f! DEPA Jefe de ~ utiliza un inyector automático marca Shimadzu, lIorn,.'I.",. de 6 muestras; programado para inyectar ~~__~::--_ inActru.mento y deben ser determinadas utilizando .~~~ agudeza de pico y óptima separación. Página 10 de 20 Intendente de • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 Utilizando un estándar de alta pureza de n-propanol, debe haber una completa separación entre los picos de n-propanol y etanol en la línea base. B. Reactivos: Entre los reactivos utilizados se mencionan los siguientes: a. b. c. d. e. f. Alcohol Isobutílico. Alcohol Isoamílico. Alcohol n-propílico Acetato de Etilo Alcohol n-butílico Soluciones de estándar interno de alcohol n-butílico: i. Alto Nive/.- Diluir 10 mL de n-butanol a 100 mL. , con etanol al 40 % . (1 mL., añadido a una muestra o solución estándar de 100 mL., es aproximadamente equivalente a 81 g. de n-butanol por 100 L.) ii. Bajo Nive/.- Diluir 1 mL de n-butanol a 200 etanol a 95 %. (1 mL., añadido a una muestra o solución estándar de 100 mL., es uivalente a 4.1 g. de n-butanol por 100 L.) g. Solución estándar de alto nivel de alcoholes n_r\rn,ní 'f;:t,~('k. - Pesar con exactitud 1 mL., de acetato de etilo isoamílico y acetato de etilo. mL de alcohol isobutílico, 2 mL de alcohol "fn,r"clt\ de 100 mL y diluir a volumen con alcohol Página 11 de 20 Intendente de • • Intendencia de Aduanas PRO·IA·DN·UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 ii. Solución Intermedia .- Diluir 10 mL de la Sol. Stock a 200 mL. , con alcohol al 40 %. iii. Solución de Trabajo .- (Aproximadamente 40.2, 41.1, 81.2 Y 45.1 g/ 100 L. , de alcohol n-propílico, alcohol isobutílico, alcohol isoamílico y acetato de etilo, respectivamente) . Diluir 5 mL de solución Stock a 100 mL con etanol al 40 % . Añadir 1 mL de solución de estándar interno de alto nivel de nbutanol (f) (1), Y mezcle. Esta solución debe prepararse (fresca) cada semana. h. Solución de trabajo de bajo nivel de alcohol n-propílico, isobutílico, isoamílico y acetato de etilo. (Aproximadamente 2.0, 2.1, 4.1 Y 2.3 g/ 100 L. , de alcohol n-propílico, alcohol isobutílico, alcohol isoamílico y acetato de etilo, respectivamente) . Diluir 5 mL de solución intermedia de alto nivel (g) (2), a 100 mL. , con alcohol etílico al 95 %. Añadir 1 mL de solución de estándar interno de bajo nivel, (f) (2) Y mezclar. Esta solución debe prepararse (fresca) cada semana. i. Soluciones de Etanol Absoluto: Prepare soluciones patrón de concentraciones similares a la de la muestra. Preparar soluciones estándar de similar concentración a las de la solución de la muestra, si estas últimas difieren grandemente (de los estándares de alto o bajo nivel). c. Determinación: Hacer una inye'CCC~;i~ó~n~~~~ de 10 ~L. , de la muestra, para total (contenido I substraer esta c, estándar nivel, dependiendo de ",Ion,..,¡" de n-butanol. (Si se encuentra presente, p~·"'n,rl". ac,~talto interno) . Añadir 1 mL de solución de de etilo) , a 100 mL de la porción de la Tribublrla Página 12 de 20 • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 muestra en un balón aforado e inyectar en el cromatógrafo alícuotas de 10 ¡.¡L., de la muestra y de la solución estándar en triplicado . Medir la altura del pico de n-propanol, alcohol isobutílico, alcohol isoamílico y acetato de etilo con exactitud cercana a 0.05 cm y calcular la razón entre las alturas de pico de cada compuesto y la altura del n-propanol (estándar interno) en las soluciones de muestra y estándar. (Para una determinación más exacta de alcohol isoamílico, utilice el área de los picos.) x = H x S / H' Donde: X = concentración del alcohol superior o del acetato de etilo en la porción de la muestra (g / 100 L) ; H = altura de pico (o área del alcohol isoamílico) razón entre el alcohol superior o el acetato de etilo al n-butanol, en la porción de la muestra; H' = altura de pico (o área del alcohol isoamílico) razón entre el alcohol superior o el acetato de etilo al n-butanol, en la solución estándar (g / 100 L). La suma de la concentración de alcohol isoamílico y alcohol isobkl1:t1l\"l<l es casi equivalente a la concentración de aceite de fusel , como se determina en el método AOAC 936.10 (ver 26.1 .2 CAS-141 -78-6 (acetato de etilo) . CAS-78-83-1 CAS-71 -23-8 {,.¡f',nhnl n-plropi CAS-71 ,tíli",nl. í Página 13 de 20 • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 Anexo 3 Determinación del grado alcohólico y productos congenéricos Cristalería de Laboratorio: Matraces volumétricos , de 100cm 3 . Pipetas volumétricas, de 1, 2, 4, 5 Y 10 cm 3 Ó pipetas graduadas de 4 y de 10 cm 3 , Ó bu reta graduada de 10 mL. Microjeringa, de 10 11L., o inyector automático con jeringa de 10 11L. A un matraz volumétrico de 100 cm 3 se agregan 10 cm 3 de la muestra sin diluir, 7cm 3 de acetona como estándar interno, y se completa el volumen con agua destilada; se prepara la solución estándar, en un matraz volumétrico de 100 cm 3 con 7 cm 3 de acetona, 10 cm 3 de alcohol etílico de concentración similar a la muestra y se lleva a volumen con agua destilada; la temperatura ambiente debe ser la misma al preparar la solución de la muestra y la solución del estándar, así como durante todo el procedimiento para no tener error en la medición de los volúmenes de las soluciones. La solución del estándar se prepara con 10 cm3 de Etanol de pureza yeltQcida en concentración similar a la muestra. Anota la temperatura. Se ajusta el c~~m~~gr,~~a~l!aS condiciones descritas en el y a continuación en triplicado, de la solución mrtró,rI La respu'estqfdlel cromatógrafo verificarse después de inví~"t,,, triplicado 5 I1L de la solución de la muestra O soluciones de muestras. Página 14 de 20 • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 Expresión de los resultados. Los resultados se expresen en porcentajes en volumen y se calculan aplicando la fórmula siguiente: A*E*S e =-'--~-'­ A, * E, En laque: C=Contenido de etanol, expresado en centímetros cúbicos por 100cm 3 de muestra. A=Área del pico del estándar interno de la solución estándar de alcohol etílico. E=Área del pico del etanol de la solución de la muestra. S=Concentración de etanol en la solución estándar de alcohol etílico, expresada en centímetros cúbicos por 100cm3 de solución . A,=Área del pico del estándar interno de la solución de la muestra. E,=Área del pico del etanol de la solución estándar de alcohol etílico. Determinación de productos congenéricos Cristalería de Laboratorio: Matraces Microjeringa, Pipetas olur}létric,as Página 15 de 20 • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografia de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 a. Se ajusta el cromatógrafo a las condiciones descritas, se efectúan inyecciones preliminares de 10 IlL de la muestra sin diluir, para verificar la ausencia de alcohol n-butílico; si dicho alcohol está presente al realizar los cálculos debe restarse esta cantidad de la cantidad total que se determine, de alcohol n-butílico en la muestra, después de agregar al estándar interno. b. A 100cm3 de la muestra se agrega 1cm 3 de la solución de estándar interno, se mezcla y se inyectan por triplicado 10 IlL de la muestra con el estándar interno y a continuación 10 IlL, también en triplicado, de cada una de las soluciones estándares de trabajo. Expresión de los resultados . Los resultados se expresan en miligramos por 100cm 3 de la bebida alcohólica destilada, para cada compuesto volátil analizado, y se calculan aplicando la fórmula siguiente: e I = A, * E, * SI A, * E3 En la que: C l =contenido del compuesto volátil expresado en miligramos por 100cm3 de bebida alcohólica destilada; véase nota. A 2= Área del pico del estándar interno en la solución estándar de trabaj espondiente. E2= Área del pico del compuesto volátil en la solución de la muestra. Sl= Concentración del compuesto volátil en la solución estándar de abajo, ex esada en miligramos por 100 cm 3 . ~= Área del pico del estándar interno de la solución de la mue Ira, después de restarle el área del pico del n-butanol que pudiera haber estado originalmente en la muestra. E3= Área del pico volátil en la solución estándar e trabajo corresp Nota. Si se alcohólico y resultados en base a 100 cm 3 de JICOhOI a ro se divide el valor de C l entre el grado Pégina 16 de 20 • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 Informe de Ensayo o Análisis En el informe de análisis se debe indicar lo siguiente: El método usado y el resultado obtenido en cada determinación. Cualquier condición no especificada en la norma, o señalada como opcional, así como cualqu ier circunstancia que pueda haber influido en los resultados. Todos los detalles necesarios que permitan la completa identificación de la muestra. Correspondencia Para la preparación del presente procedimiento se tomaron en cuenta los siguientes documentos: a) Método 9.9091-9. descrito en "Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, AOAC , 14th edition, 1984"; b) Método para la determinación de alcohol y componentes secund . 5, del Laboratorio Unificado de Control de Alimentos y Medicamentos, LUCAM, del Ministerio de Salud Pública y Asist cia cial de Guatemala. c) Método AOAC 26.1.30; "AOAC Official Method 968.09. Alco Is (High and Ethyl Acetate in Distilled Liquors". Gas Chromatographic Method. First Action 1968. inal Action 969. d) Norma Guatemaltec dada, COGUANOR NGR 3 010 h 13 f(J>,.,~Ht",r( 'C,'-¡'I<".':'I<M"TIVu Página 17 de 20 Intendente d Aduanas • • Intendencia de Aduanas PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 ANEXO 4 Ejemplo de informe de Laboratorio LABORArORlO Q(IMIC() RSCAL Página 1B de 20 • Intendencia de Aduanas • PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 LISTA DE CONTROL DE CAMBIOS No. Fechada V.,.lón ".bcnc:l6n 1 Septiembre JuatlllCIICI6n del c.mblo Primera versión 2010 \ Página 19 de 20 Intendente d • Intendencia de Aduanas • PRO-IA-DN-UNP-06.43 Determinación de Alcoholes (superiores) y Acetato de Etilo en Licores Destilados, Método por Cromatografía de Gas Versión 1 29 de septiembre de 2010 LISTA DE DISTRIBUCiÓN Número de Puesto que ocupa Jefe del Departamento Operativo Ubicación FIsIca Coplas Contro..... En das Archivo digital Jefe de la Unidad de Laboratorio Químico Fiscal Archivo digital Laboratorio Archivo digital Supervisor del Químico Fiscal Analistas de Laboratorio Químico Archivo digital Página 20 de 20