Detección del virus del papiloma humano (HPV) en carcinoma de

Resumen: M-076
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E
Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2004
Detección del virus del papiloma humano (HPV)
en carcinoma de laringe.
Schelover, Eduardo R. - De Gorodner Z., Ofelia L. - Lucero, Horacio R. - De Luca, Gerardo
Marín, Marcelo - Steinschütz, Claudia M. - Knopoff, Rafael - Crenna, Vanina - Toledo, Patricia
UNNE. Instituto de Medicina Regional. Laboratorio de Biologia Molecular.
Av Las Heras 727, CP:3500. Resistencia Chaco.Teléfono: 428213. mail: schelover@hotmail.com
Antecedentes
El carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello es el sexto cáncer más frecuente en todo el mundo, con una
proyección anual de más de 400.000 casos. La etiología de la enfermedad es oscura, aunque estudios epidemiológicos
han identificado al uso del tabaco y del alcohol como los dos más importantes factores de riesgo. Aparte el virus del
papiloma humano (HPV) está asociado a lesiones epiteliales escamosas proliferativas en otros sitios del cuerpo y esta
asociación sugiere una relación del HPV en la etiología del carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello,
particularmente laringe.
En seres humanos, el carcinoma de células escamosas del cuello uterino es una neoplasia maligna relacionada con HPV.
Este modelo al parecer apoyaría la posibilidad de que el HPV tiene un papel importante como cofactor en la
carcinogénesis de las vías aéreas, donde el revestimiento epitelial es del mismo tipo morfológico.
En la laringe existen factores de riesgo relacionados con el carcinoma de células escamosas, siendo el tabaco y el
alcohol los principales, seguidos por la exposición a productos industriales, radiaciones, deficiencia de vitaminas y al
HPV.
La frecuencia reportada en la cual el HPV y el carcinoma de células escamosas han sido identificados varía
ampliamente entre un 2% a un 76%, dependiendo en parte del método usado para detección del HPV o del material a
analizar.
El virus del papiloma humano(HPV) es un virus ADN. Hasta el momento más de 90 tipos de HPV han sido
demostrados en lesiones benignas y malignas del tracto ano genital, de cabeza y cuello, tractos aéreo y digestivo
incluyendo pulmón y esófago.
Los subtipos de papiloma virus tienen marcadas diferencias en su predilección por sitios anatómicos diferentes y en su
propensión a cambios malignos. Los subtipos de HPV encontrados en carcinomas laríngeos incluyen los subtipos 6, 11,
16, 18, 30 y 33 .
Con base en estudios de carcinoma cervical, diferentes tipos de HPV se han clasificado como de alto riesgo (tipos 16
y 18) , mediano riesgo (tipos 30 y 33) y bajo riesgo (tipos 6 y 11).
Entre las lesiones laríngeas, el ADN de HPV ha sido detectado en papilomatosis juvenil y del adulto y en el carcinoma
de células escamosas. La progresión de lesiones benignas a carcinoma invasivo ha sido bien documentada. Al parecer
existe una fuerte vinculación con subtipos de HPV 6 y 11 para papilomatosis laríngea y el carcinoma de células
escamosas que se origina en papilomatosis preexistentes.
Los diferentes tipos de HPV tienen una distribución geográfica variada. Además existe una amplia variabilidad en la
frecuencia reportada en la cual el HPV y el carcinoma de células escamosas han sido identificados, dependiendo en
parte del método usado para detección del HPV o del material a analizar ( tejidos embebidos en parafina o tejidos
frescos). Estos hechos son el sustrato de que permanezca oscuro el rol del HPV en el carcinoma laríngeo.
La demostración del ADN de HPV en carcinoma laríngeo es un importante paso en el entendimiento del posible rol de
la infección por HPV en la tumorogénesis laríngea. El objetivo de presente trabajo es determinar por medio de una
técnica altamente sensible de biologia molecular: Reacción en Cadena de la Polimerasa(PCR), la presencia de HPV en
carcinomas laríngeos.
Materiales y Métodos
Se estudiaron un total de 25 muestras procedentes de pacientes con diagnóstico anatomo patológico de carcinoma de
laringe. 15 de ellos correspondieron a material de biopsia y 10 fueron hisopados laringeos. Para la obtención del
material de biopsia, se revisaron los archivos de estudios histopatológicos del Servicio de Patología y Citodiagnóstico
del Hospital “Dr. José R. Vidal” de la Ciudad de Corrientes, Argentina y se registraron los casos de tumores epiteliales
de la laringe, diagnosticados en biopsias y piezas quirúrgicas.
Por otro lado se tomaron muestras de hisopados de laringes con carcinoma, del Servicio de Otorrinolaringología del
Hospital “Dr. José R. Vidal” de la Ciudad de Corrientes y del Servicio de Otorrinolaringología del Hospital “Perrando
Castelan” de Resistencia Chaco.
Los materiales procesados previamente por el método de inclusión en parafina fueron seccionados con micrótomo y
desparafinados, luego al igual que los hisopados, se procedió a la extracción del ADN por medio de proteinasa K.
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Ambos tipos de muestras fueron estudiados por técnicas de biología molecular PCR (reacción en cadena de la
polimerasa) basado en el uso de primers consensus o genéricos desarollados por Manos y Col. (MY09 y MY11). Estos
permiten amplificar un fragmento de 450 pares de bases correspondientes a la región L1 del genoma viral, mediante una
enzima llamada polimerasa. Los productos amplificados se sometieron a una corrida electroforética demostrando un
patrón de bandas compatibles con la presencia de HPV.
Discusión de Resultados
La edad de presentación de los casos estudiados fue de 45 a 70 años con un predominio en el grupo correspondiente
entre 61 y 65 años. La distribución según edad se muestra en la tabla 1.
Todas las muestras pertenecían a pacientes de sexo masculino. Según el tipo histológico 24 casos tenían diagnóstico de
carcinoma epidermoide y 1 era carcinoma adenoide quístico.
De las 25 muestras estudiadas solamente en 2 (8%) carcinomas epidermoides se recuperó ADN del virus HPV. Una de
ellas fué aislada de una biopsia y correspondió a un paciente de 62 años y la otra muestra en que se aisló ADN viral de
HPV fué en un hisopado laringeo de un paciente de 64años. Los hallazgos positivos y negativos de acuerdo al tipo de
muestra se observan en la tabla 2.
Tabla 1. Distribución por grupo etario de casos de carcinoma laríngeo.
Grupo etario
45-50 años
51-55 años
56-60 años
61-65 años
66-70 años
Total
Número de casos
4
4
6
8
3
25
Tabla 2. Distribución de muestras positivas y negativas para la presencia de ADN viral de HPV.
Tipo de muestra
Biopsias
Hisopados
Total
Positivos
1 (4%)
1 (4%)
2 (8%)
Negativos
14 (56%)
9 (36%)
23 (92%)
Total de muestras
15 (60%)
10 (40%)
25 (100%)
Conclusiones
Dado que se trata de un primer informe empleando esta metodología, que hasta ahora no se había utilizado en la región,
se puede concluir que se ha podido lograr poner a punto la técnica con resultados satisfactorios. El presente trabajo
continúa con la incorporación de nuevas muestras y tendientes a la genotipificación viral en las muestras positivas, por
lo tanto las conclusiones definitivas se han de elaborar posteriormente, contando con una mayor cantidad de casos .
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Cap I :1-13.
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