TEMA 15 BACILOS GRAM NEGATIVOS: CAMPYLOBACTER CARACTERISTICAS GENERALES DEL GÉNERO: • Son bacilos Gram negativos, cortos, con forma de coma, espiral o alas de gaviota. Con forma de S. Son bacilos curvos. • Son microaerofilicos, es decir, crecen en atmósfera con baja concentración de oxigeno. • Son móviles por un flagelo polar y no esporulados. • No fermentan los carbohidratos y dan positivas las pruebas de la Oxidasa y Catalasa. • Habitan en el tracto gastrointestinal de muchos animales. ESPECIES MÁS IMPORTANTES INDICANDO LA PATOLOGIA QUE PRODUCEN: • C Jejuni: Gastroenteritis • C. Coli: • C. Fetus: VIA DE TRANSMISION: • VIA ORAL: ingestión de comida y bebidas contaminadas. Sobre todo leche. • POR CONTACTO: con animales infectados. MUESTRAS: • Generalmente HECES (C. Jejuni) • A menudo en el examen directo se pueden intuir Campylobacter debido a su movilidad. • También se pueden tomar muestras de sangre (no es muy frecuente). MEDIOS DE CULTIVO Y CONDICIONES PARTICULARES DE CULTIVO: HECES: • Siembra inmediata a la toma de la muestra en medios selectivos. • Si se tienen que posponer, se utilizaran medios de transporte especiales: ♦ Medio Cary−Blair ♦ Campy−Thio . En estos medios los Campylobacter se mantienen viables de 1 − 2 semanas a 4°C. • Métodos alternativos para el aislamiento de Campylobacter spp. de HECES: ◊ Filtrar las heces para eliminar los coniformes y la flora acompañante. Los filtros son de acetato de celulosa. ◊ Colocar el filtro en la superficie del agar y echar una gota de heces. Se incuba y después se retira el filtro y se reincuban las placas. Los Campylobacter atraviesan el filtro y dan lugar a colonias en el agar. • El cultivo de Campylobacter tiene que cumplir tres requisitos: • Empleo de MEDIOS SELECTIVOS. 1 • Uso de atmósfera reducida de Oxigeno (Microaerofilicos). • Temperatura de 42°C en aislamiento inicial. A)− MEDIOS SELECTIVOS: Contienen antibióticos para inhibir la flora acompañante y agentes selectivos como: vancomicina (inhibe a gram positivos), inhibir hongos.. * MEDIO SKIRROW: contiene sangre de caballo y antibióticos (vancomicina, trimetroprim y polimixina B). Nota: NO SE UTILIZAN MEDIOS DE ENRIQUECIENTO; AL CONTRARIO QUE EN SALMONELLA. B)− Condiciones microaerofilicas de cultivo que se consiguen mediante: − Campanas de anaerobios. − Bolsas de plástico, etc C) − Se incuban las placas a 42°C durante 72 horas antes de descartarse como negativas. A esta temperatura se consigue el máximo aislamiento de C.Jejuni y C. Coli. Ambas especies pueden crecer a 37°C ; sin embargo, a 42°C se inhibe la mayor parte de la flora acompañante. PARA OTRAS ESPECIES DIFERENTES DE CAMPYLOBACTER, EXISTEN OTROS REQUISITOS. AISLAMIENTO DE CAMPYLOBACTER SPP. A PARTIR DE SANGRE: • Crecen en sangre, pero tardan en desarrollarse 2 semanas. Es conveniente cultivarlos en medios liquidos y hacer subcultivos en medios sólidos que se incuban a 37°C en atmósfera microaerofilica. IDENTIFICACION: Pruebas para le diagnostico: • COLOR DE LAS COLONIAS: grises, incoloras, de aspecto mucoso y no hemolíticas. • TINCION DE GRAM: a colonias sospechosas. A veces se prolonga el tiempo de tinción de la Safranina. • EXAMEN EN FRESCO: para observar la movilidad. • PRUEBAS BIOQUIMICAS INDIVIDUALES: • Oxidasa + y Catalasa +. • Producción de H2S en Agar TSI. • Crecimiento a distintas temperaturas. Pruebas para estudios epidiemologicos: • Hemoaglutinación indirecta • Aglutinación en portaobjetos. PATOLOGIA: C. Jejuni: 2 • Especie que se ha asociado al hombre con mayor frecuencia. • AGENTE ETIOLOGICO DE GASTROENTERITIS DIARREICAS, con eliminación de sangre en heces. • Se multiplica en el intestino delgado, pasa al epitelio y produce inflamación. En ocasiones puede pasar al torrente circulatorio y desarrollarse un cuadro de fiebre enterita. • Produce diarrea junto con dolor abdominal agudo, dolor de cabeza y fiebre. FACTORES DE PATOGENICIDAD: −No son del todo conocidos. Se cree que participa una citotoxina y también destrucción local de la mucosa intestinal. 3