Universidad veracruzana Coatzacoalcos Veracruz Facultad de ciencias químicas Reporte 2: organización de laboratorio de cultivo de células y tejidos Docente: Dra. Heidi Medorio García Alumno: Eduardo Gabriel Morales Zavala Materia: Cultivo de células y tejidos Carrera: Ingeniería en biotecnología Matrícula: zS1602473 Fecha de entrega: 22 de Marzo del 2019 Objetivos Conocer los requerimientos de un laboratorio, instalaciones, áreas, equipos, materiales y suministros necesarios o indispensables para la realización de actividades del cultivo in vitro de tejidos vegetales y animal. Diseñar las áreas necesarias para los procedimientos que permitan la elaboración de medios de cultivo, el aislamiento y cultivo in vitro de células, tejidos y órganos vegetales, así como su incubación. Conocer como ejemplo las normas de cada área de trabajo de un laboratorio de cultivo de células y tejidos. Procedimientos Los alumnos realizarán investigación bibliográfica sobre las áreas de un laboratorio de cultivo de células y tejidos, necesidades, requerimientos, equipos básicos e instalaciones. Los alumnos justificarán su uso y aplicación, así como el manejo y precauciones dentro del Laboratorio En base a lo investigado, diseñarán un laboratorio de cultivo de células y tejidos. Fundamento Uso de laboratorio de cultivos El cultivo celular es una de las principales técnicas en las ciencias de la vida. Los requerimientos básicos para que las células crezcan óptimamente son: temperatura controlada, substrato para la adhesión celular, y medio de cultivo apropiado e incubador que mantenga un pH y una osmolalidad correctos. El paso más importante y crucial en el cultivo celular es la selección del medio de cultivo apropiado para el cultivo in vitro. Un medio de cultivo típico está compuesto de un complemento de aminoácidos, vitaminas, sales inorgánicas, glucosa, y suero como fuente de factores de crecimiento, hormonas y factores de adhesión. Además de nutrientes, el medio también colabora en mantener el pH y la osmolalidad. (University of Pittsburgh Medical Center, 2013) Pero esto no es todo lo que conlleva a la realización de los cultivos in vitro, de tejido celular, tener un laboratorio que cumpla con las funciones adecuadas para poder realizar las actividades necesarias para este trabajo, es importante, que va desde tener el equipamiento necesario hasta las normas correctas de higienes que puedan darnos la mejor calidad. Universidad de Sevilla No se podrán utilizar microorganismos patógenos, ni realizar cultivos que contengan bacterias o algún tipo de hongo, en los laboratorios propios de cultivos. No entrar en la sala de cultivos si esta la luz UV encendida de la cabina. Nadie podrá usar las cabinas de flujo vertical de la sala de cultivos para otros menesteres que no sea la de manipular estérilmente algún producto. Se establecen unas normas de higiene y bioseguridad para su utilización correcta que están colocadas en la cabina. No obstante, se resaltan las siguientes normas. Introducción al cultivo de células y tejidos Requisitos de espacio El espacio asignado para el laboratorio de cultivo de tejidos debe ser uno dedicado al cultivo de tejidos (para minimizar la introducción de contaminantes potenciales). Minimizar el tráfico dentro y fuera de la sala de cultivo (espacio) anular el habla en el espacio. Todas las tareas que no sean necesarias deben realizarse en la sala de cultivo tareas que no requieran un ambiente estéril debe realizarse en otra parte. Las personas que no participan activamente en el cultivo de células deben abandonar la sala. Tener un refrigerador y un congelador en la sala de cultivo o en una "sala de entrada" con bolsa de aire de modo que no sea necesario entrar y salir de la sala de cultivo durante un experimento. Reactivos necesarios para el trabajo de cultivo. Si no es posible tener una habitación separada para el equipo de cultivo celular, seleccionar una esquina del laboratorio que está más alejado de las puertas y otras áreas de gran tráfico. Retire cualquier equipo que no sea necesario para el cultivo de células. Los pisos deben ser Suave y sin textura. Si se utiliza un revestimiento de vinilo para pisos, debe ser una hoja continua sin costuras. Los techos también son una fuente potencial de contaminación y no deben utilizarse con aire a presión positiva, se debe construir un techo sólido. Como mínimo, deben instalarse nuevas baldosas de techo cada pocos años La plomería y todos los demás accesorios y herrajes de "mamparo" deben estar bien sellados donde pasa por la pared o el techo. Existen diferentes necesidades, dependiendo del nivel de cultivo de tejidos que se realice en los cuales en el mayor de los casos se es necesario requerir de: Laboratorios de enseñanza Laboratorios estándar para el cultivo Laboratorios óptimos para el cultivo Para el desarrollo de la investigación y docencia, en el campo del cultivo de tejidos, se requieren de materiales que permitan la preparación de fórmulas nutrimentales con el objetivo de cultivar tejidos, órganos y células vegetales in vitro. Es muy importante que los materiales y equipos de uso común en el laboratorio se identifiquen por su nombre correcto y uso específico que tiene cada uno, pero más importante es saber manejarlo correctamente en el momento oportuno, teniendo en cuenta los cuidados y normas especiales para el uso de aquellos que así lo requieran. Organización en el laboratorio Áreas de preparación Se utiliza principalmente para preparar los medios de cultivo, además de proveer también un espacio para almacenar los materiales de vidrio, plástico y los reactivos químicos. Cuenta con mesas de trabajo para la preparación de los medios y para colocar las balanzas, el medidor de pH, preparador automático de medios de cultivo y otros elementos; también incluye vitrinas, estanterías y espacio para el equipo de refrigeración. Áreas de lavado y esterilización El área de lavado incluye un lavadero grande con agua caliente y fría, una fuente de agua de alto grado de pureza, así como basureros adecuados para el material vegetal, inorgánico y de vidrio que se desecha. El área de esterilización contiene un espacio para la autoclave. Áreas de transferencia En esta área del laboratorio se realiza el trabajo de disección, inoculación y trasferencia de los explantes (tejido vegetal). Dado que este trabajo demanda el más alto nivel de limpieza ambiental, se cuenta con la instalación de campanas o cámaras de flujo horizontal con aire del trabajo presión. Áreas de incubación Los cultivos se incuban en gabinetes o cámaras de crecimiento. El área de incubación o crecimiento in vitro proporciona un buen control de la temperatura (24 ±1°C), fotoperiodo de 16/8 hora luz/obscuridad, y de irradiancia entre 50-60 µmol.m-2s-1. Invernadero Las plantas obtenidas en laboratorio, también llamadas vitro plantas, se acondicionan o aclimatan en un invernadero automatizado de 541.8 m2. Esta infraestructura es un modelo tipo capilla, con dobles ventanas y cortinas cenitales, protegida con malla antiácidos y techo de plástico. Medidas precaución Se deberá conocer la ubicación de los elementos de seguridad en el lugar de trabajo No se debe comer, beber, fumar o maquillarse No se puede guardar alimentos en el refrigerador Utilizar vestimenta apropiada En caso de usar nitrógeno líquido, este debe ser operado por dos personas. Mesas de trabajo deben de estar despejada, solo es para el estricto uso de actividades experimentales y de investigación No correr en el laboratorio Disminuir el trafico de entradas y salidas Respetar las señales de advertencia Equipo necesario para el laboratorio Para el área de preparación Refrigerador Balanzas (una macro balanza y una de precisión) Potenciómetro Plancha eléctrica Frascos (125, 250 y 500 ml) Para el área de lavado y esterilización Autoclave Destilador de vidrio Gradillas para secado Bandejas de aluminio Recipientes de plástico grandes Estufas para esterilización y secado Para el área de transferencia Gabinete de flujo laminar Microscopio con luz Instrumentos de disección Pinzas Tijeras Navaja Frascos con alcohol Mecheros Mascaras Guantes Recipientes para basura Planos para el laboratorio de cultivo celular Bibliografía Fcen. (2007). Obtenido de Fcen: http://www.fcen.uba.ar/shys/pdf/SegLabQyBAlumnos.pdf Media, S. S. (2007). The Teaching Laboratory. En J. P. Roberts, INTRODUCTION TO CELL AND TISSUE CULTURE (Theory and technique) (págs. 31 - 50). Obtenido de https://www.bjcancer.org/Sites_OldFiles/_Library/UserFiles/pdf/Introduction%20to%20Cell%20and%20Tissue% 20Culture.pdf Secretaria de agricultura ganaderia, d. r. (junio de 2017). Gob. Obtenido de SAGARPA: https://www.gob.mx/cms/uploads/attachment/file/264918/Reporte_de_Proyecto_1_Laboratorio.pdf University of Pittsburgh Medical Center, U. S. (5 de Marzo de 2013). Labome. Obtenido de Labome: http://www.labome.es/method/Cell-Culture-Media-A-Review.html
