INFORME DE PRÁCTICA FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA DE MEDICINA LABORATORIO CLÍNICO UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA LABORATORIO CLÍNICO RECUENTO DE PLAQUETAS EN SANGRE PERIFÉRICA CON CÁMARA DE NEUBAUER Y FROTIS SANGUÍNEO, EN ESTUDIANTES QUE CURSAN EL CUARTO AÑO DE MEDICINA DEL GRUPO “D” DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO, 2019 ALUMNO: VERDE AREDO ELVIS KEVIN DOCENTE: Dr. VILELA DESPOSORIO CARLOS DAVID PROMOCIÓN LV Trujillo – Perú 2019 1 INFORME DE PRÁCTICA LABORATORIO CLÍNICO FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA DE MEDICINA “RECUENTO DE PLAQUETAS EN SANGRE PERIFÉRICA CON CÁMARA DE NEUBAUER Y FROTIS SANGUÍNEO, EN ESTUDIANTES QUE CURSAN EL CUARTO AÑO DE MEDICINA DEL GRUPO “D” DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO, 2019” I. INTRODUCCIÓN Las plaquetas son células sanguíneas no nucleadas que tienen un volumen promedio de 10 fL. Se producen a partir del citoplasma de los megacariocitos de la médula ósea 1. Si bien en extendidos de sangre periférica, fijados y coloreados tienen solo 2 a 3 µm de diámetro, derivados de la fragmentación de sus células precursoras, los megacariocitos; la vida media de una plaqueta oscila entre 8 y 12 días, son células complejas, activas desde el punto de vista metabólico, que interactúan con su ambiente y desencadenan la hemostasia2. Las plaquetas se adhieren al colágeno subendotelial donde reemplazan a las células endoteliales que se desprenden o descaman de la membrana basal vascular. A medida que las células endoteliales se dañan o mueren se librean de su sostén en la membrana basal y dejan detrás un área de turbulencia que atrapa las plaquetas. En las arteriolas donde la sangre fluye con rapidez, la adhesión depende de la presencia de grandes cantidades de la glucoproteína plasmática, el factor de Von Willbrand3. El recuento de plaquetas nos proporciona información útil acerca del cuerpo, y se puede ver aumentado (trombocitosis) como consecuencia de un estímulo medular inespecífico (pos hemorrágica o tras crisis hemolítica), una paraneoplasia, o una cirugía reciente; o también se puede ver disminuido como consecuencia de una leucopenia, anemia, o un trastorno inmunológico. El recuento de plaquetas de un individuo sano se encuentra entre 150,000 y 450,000 por μl (microlito) de sangre (150-450 x 109/L)4. II. OBJETIVOS: A) GENERAL: Realizar el conteo plaquetario en sangre periférica con cámara de Neubauer y frotis sanguíneo en alumnos que cursan el cuarto año de medicina del grupo D de la Universidad Nacional de Trujillo. B) ESPECÍFICOS: Comparar los resultados obtenidos del recuento plaquetario en cámara de Neubauer y en frotis sanguíneo de los alumnos. Establecer el porcentaje de alumnos que tienen un recuento plaquetario dentro de los valores preestablecidos que se consideran normales (por ambos métodos). 2 INFORME DE PRÁCTICA LABORATORIO CLÍNICO III. FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA DE MEDICINA MATERIALES Y MÉTODOS: a. MATERIALES: i. Para la extracción de sangre venosa: 1. Jebe látex tubular de 35 cm de longitud y 5 mm de diámetro para ligadura. 2. Guantes descartables. 3. Ajugas # 21. 4. Torundas de algodón. 5. Alcohol iodado. 6. Tubos de Ensayo. 7. Lancetas. 8. Frascos con anticoagulante EDTA ii. Para preparar la dilución 1. Diluyente Oxalato de amonio al 1% 2. Micropipeta iii. Para realizar a el conteo de plaquetas en Cámara de Neubauer 1. Microscopio óptico. 2. Cámara de Neubauer 3. Lámina cubreobjetos. iv. Para realizar a el conteo de plaquetas en frotis sanguineo 1. Colorante Wright 2. Microscopio óptico 3. Lámina cubreobjetos. 4. Aceite de inmersión 5. Lamina portaobjetos b. MÉTODOS i. Extracción de sangre venosa - Se reunió todo el material necesario en la bandeja y se llevó al lado del paciente. - Lavado de manos. - Colocación de los guantes. - Colocación de la ligadura entre 7,5 cm o 10 cm por encima del punto de punción. - Colocación del brazo hiperextendido, de manera que la mano estuviera más baja que el codo. - Se seleccionó la vena por palpación cuidadosamente. - Se limpió la zona con un movimiento circular desde el centro hacia fuera. - Se dejó secar la zona durante 30 segundos para prevenir la hemólisis de la muestra y reducir la sensación de ardor en la venopunción. - Se insertó la jeringa con el bisel hacia arriba puncione la piel con un suave y rápido movimiento. - Se inmovilizó la vena seleccionada colocando el pulgar debajo de la zona de punción y tense la piel; así se impidió que la vena se escurra en el momento de la punción, el resto de los dedos se pusieron detrás del codo para evitar que éste se doble o prevenir cualquier movimiento. - Una vez llenado el tubo, retiramos la aguja, con un movimiento rápido y suave hacia atrás y se aprieta la zona con el fin de evitar la formación de un hematoma. 3 INFORME DE PRÁCTICA FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA DE MEDICINA LABORATORIO CLÍNICO La presión en la zona se hizo durante más de cinco minutos, manteniendo recto el brazo. - Se retiró todo el material, colocando cada uno en el contenedor correspondiente. ii. Preparación de la dilución - Con la pipeta se midió 0.02 ml de sangre. - Se limpió la parte externa de la pipeta con el papel absorbente y se verificó que la sangre continúe en el mismo nivel. - Se depositó la sangre en el tubo de ensayo que contuvo 1.98 ml de Oxalato de Amonio al 1%. Se enjuagó la pipeta aspirando y expulsando este líquido por tres veces. Se mezcló. - Se dejó en reposo la mezcla por 10 minutos. iii. Preparación para realizar el recuento en la cámara de Neubauer - Se montó una laminilla cubreobjeto sobre la cámara de Neubauer - Con la pipeta se llenó la cámara. - Se dejó reposar la cámara sobre la mesa de trabajo durante 10 minutos. - Se colocó la cámara en la platina del microscopio y se contó el número de eritrocitos en los 25 cuadrantes del cuadrado central. - Luego se sumó esos valores, para luego multiplicarlo por 1000 iv. Preparación para realizar el recuento en frotis sanguíneo - Realizar un extendido en la lámina portaobjetos - Colorear con Wright - Colocar al microscopio y observar en 10X y colocar el objetivo de 100X e identificar las plaquetas - Contar el número de plaquetas en 10 campos microscópicos - Realizar el cálculo medio de las plaquetas contadas. - IV. RESULTADOS TABLA 1: Comparación entre la cantidad de plaquetas observadas en cámara de Neubauer y en frotis sanguíneo por alumno registrado en la práctica de laboratorio. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Alumnos Apellidos Romero Leiva Romero Rocha Ruíz Aspiros Ruiz Ruiz Sánchez Vargas Sandoval Lozano Santos Paulino Sevilla Cruz Silva Tamayo Silva Valencia Simón Campos Solórzano Baca Tapia Rojas Nombre Lizeth Gilda Edwar Ivan Danny Milagros Xiomara Tito Leslie Luis Paola David Juan Diego Frotis sanguíneo Cámara de Neubauer 216,000 81,000 385,000 215,000 210,000 191,000 200,000 313,000 328,000 206,000 163,000 322,000 82,000 175,000 328,000 420,000 59,000 97,000 200,000 266,000 310,000 348,000 167,000 178,000 330,000 334,000 4 INFORME DE PRÁCTICA FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA DE MEDICINA LABORATORIO CLÍNICO 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 Tello Coronel Torres Vilchez Vaca Villanueva Valdivieso Calderón Valera Chávez Vargas Chiclayo Vasquez Prado Vasquez Quipuscoa Vera Abanto Verde Aredo Vergara Tam Villacorta Zacarías Yengle Verau Zavaleta Carranza Norabuena Bardales Rodriguez Salgado Nikolay Mónica Michael Dante Christopher Jonathan Erick Juan Daniel Mary Kevin Rodrigo Luis Guido Andy Perla Kimberly 37,6000 320,000 300,000 310,000 325,000 300,000 193,000 410,000 157,000 320,000 280,000 249,000 250,000 305,000 276,000 90,000 390,000 326,000 310,000 320,000 310,000 310,000 210,000 442,000 172,000 380,000 320,000 298,000 245,000 310,000 310,000 300,000 TABLA 2: VALORES NORMALES DE REFERENCIA PLAQUETAS 150,000-450,000 plaquetas/mm3 V. DISCUSIÓN: Se obtuvieron valores esperados en la mayoría de alumnos en el conteo de plaquetas, tanto por el método de Neubauer como por el método de frotis sanguíneo, aunque los valores obtenidos por ambos métodos son diferentes, probablemente se deban a variaciones propias del método, como por ejemplo la calibración inapropiada de las pipetas en el caso de la observación en cámara de Neubauer y extendido demasiado grueso o delgado en el caso del frotis sanguíneo. 5 alumnos (2,4,5,13,29), presentan valores diferentes a los de referencia, estos valores anormales encontrados tanto en frotis sanguíneo(2,13,29) como usando la cámara Neubauer(4,5) se debe a que la falta de experiencia para la toma de muestra, frotis sanguíneo, tinción de la lámina, identificación de las plaquetas y conteo de estas, que pudieron haber influido en los resultados. VI. CONCLUSIÓNES: El recuento de plaquetas con el método de Neubauer en mayoría de estudiantes tanto varones como mujeres, se encuentra dentro del intervalo de los valores de referencia, por lo tanto, no presentan un cuadro de trombocitosis o trombocitopenia. El 93.1% de los alumnos del grupo D presentan un recuento de plaquetas normal con cámara de Neubauer El 89.7% de los alumnos del grupo D presentan un recuento de plaquetas normal con cámara de frotis sanguíneo La inexperiencia en la realización y análisis de estas pruebas, pueden dar falsos resultados. 5 INFORME DE PRÁCTICA LABORATORIO CLÍNICO VII. FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA DE MEDICINA REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. DESCHAMPS LAGO MARIA ESTHER. Manual de Practicas de Laboratorio. Veracruz, México. 46. 2. Schulze H, Shivdasani RA. Mechanisms of thrombopoiesis. J Thromb Haemost 2005; 3: 17171724. 3. Berkman N, Michaeli Y, Or R, Eldor A. EDTAdependentpseudothrombocytopenia: a clinicalstudy of 18 patients and a review of the literature. Am J Hematol 1991; 36: 195-201. 4. Sociedad Colombiana de Patología Clínica. Manualde Codificación, Nomenclatura, Nivelación y Valores de Exámenes de laboratorio Clínico. Medellín,Colombia: Edimeco S.A.; 2008: 1-100. 6
