Curso de posgrado Productos Biofarmacéuticos: de I + D a control de calidad Cultivo de tejidos y células Dra. Lorena González FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA, UBA. ¿Cuál es la importancia de los cultivos de tejidos y celulares para la producción de ? en I+D…. SISTEMAS DE EXPRESIÓN Icon made Eucalyp, www.flaticom.com …y control de calidad BIOENSAYOS Icons made by Nikita Golubev, www.flaticom.com Historia del desarrollo del cultivo de tejidos 1885: Wilhem Roux 1907: R. G. Harrison 1910: Burrows 1916: Rous y Jones ´40s: Cultivo de células embrión de pollo solución salina de en Cultivos de médula espinal embrionaria de anfibios Plasma de pollo para nutrir los explantes de tejidos Extractos enriquecidos en tripsina para disociar células El aislamiento de los primeros antibióticos permitió el gran desarrollo del cultivo de tejidos Definición Cultivo de tejidos: conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento de las células 'in vitro', manteniendo al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas. Icon made by Freepik from www.flaticon.com Tipos de cultivos de tejidos. El órgano se conserva en un medio del que obtiene los nutrientes, al que puede liberar los desechos y en el que mantiene su estructura tridimensional "Test tube baby" by tarunkant is licensed under CC BY-NC-ND 2.0 Este tipo de cultivo permite mantener los tipos celulares diferenciados. Es una buena réplica del tejido de origen, pero no permite su propagación. Tipos de cultivos de tejidos. Se coloca un fragmento de tejido o de órgano en la interfase sólido-líquido de un soporte de vidrio o de plástico. Las células pueden migrar y proliferar por la superficie del soporte. Proteomic identification of new adipokines and miokines implicated in obesity (Full text in Spanish) - Scientific Figure on ResearchGate. Available from: https://www.researchgate.net/figure/Figura-29-Foto-delcultivo-de-diferentes-explantes-tisulares-De-izquierda-aderecha-y_fig13_259117313 [accessed 28 May, 2019] Tipos de cultivos de tejidos. En estos cultivos se pierden las interacciones célula-célula y las interacciones de la célula con la matriz extracelular. Sin embargo, las células son capaces de proliferar y la población celular crece notablemente. "Preparing Cell Cultures" by National Eye Institute is licensed under CC BY 2.0 Definición Cultivo celular: es el proceso mediante el que células aisladas pueden cultivarse en condiciones controladas. Es un modelo de estudio in vitro por el cual pueden crecer y mantenerse en suspensión o en monocapa células, por períodos prolongados Icon made by Freepik from www.flaticon.com : las células crecen adheridas sobre un soporte sólido (plástico o vidrio). El anclaje al sustrato es un prerrequisito para la proliferación celular (mayoría de las células excepto para las hematopoyéticas). : las células se encuentran dispersas en el medio de cultivo. Su crecimiento no depende del anclaje. Este tipo de cultivo se restringe a las células hematopoyéticas, células madre, líneas celulares transformadas y células tumorales. Crecimiento de las células en cultivo Fase de latencia (período log). Fijación al sustrato e inicio del ciclo celular. Fase de crecimiento exponencial. El número de células se duplica aproximadamente cada 24 horas. https://nptel.ac.in/courses/102103016/35 Crecimiento de las células en cultivo Fase de confluencia. Las células dejan de dividirse (monocapa: inhibición por contacto; suspensión: consumo del medio). Fase de muerte. Las células entran en una fase de senescencia que termina con la muerte de las células en cultivo. https://nptel.ac.in/courses/102103016/35 Tipo de cultivos celulares Cultivos primarios Cultivos celulares obtenidos de tejidos normales a partir de un organismo vivo. Características: Las células mantienen la viabilidad un periodo de tiempo limitado y no se Ejemplo: reproducen en cultivo. El cultivo presentan una reducción en el número total de células vivas a lo largo del tiempo Hepatocitos de ratón Tipo de cultivos celulares Línea celular primaria Cultivo establecido a partir de un tejido u órgano, que se mantiene un periodo de tiempo limitado pero con reproducción de las células en el cultivo. Ejemplo: Características: Poder limitado de proliferación celular (número limitado de generaciones). Fibroblastos dérmicos Tipo de cultivos celulares Líneas celulares continuas Cultivos celulares obtenidos a partir de un cultivo primario, mediante un fenómeno de transformación. Características: Poder ilimitado de proliferación Ejemplo: celular. Poder ilimitado de expansión (número ilimitado de generaciones). MDA-MB-231 Tipo de cultivos celulares Cultivo primario Línea celular continua Línea celular primaria BASIC TECHNIQUES IN ANIMAL CELL CULTURE - Scientific Figure on ResearchGate. Available from: https://www.researchgate.net/figure/Growth-of-animal-cells-in-culture_fig3_266455722 [accessed 28 May, 2019] Líneas celulares continuas Las células transformadas se caracterizan porque: • Son inmortales: crecen indefinidamente • Su crecimiento es aberrante: se pierde la inhibición por contacto y la dependencia del anclaje • Son malignas: invaden tejidos y dan lugar al crecimiento de tumores • Son genéticamente inestables: son heteroploides (varía el número de cromosomas) y cromosómicas En 1952 se obtuvo la primera línea celular continua humana: las células HeLa presentan aberraciones Bancos de líneas celulares Sintetizando y, además, para complementar…. Icon made by Freepik from www.flaticon.com Curso de posgrado Productos Biofarmacéuticos: de I + D a control de calidad Muchas gracias Dra. Lorena González FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA, UBA.
