ELECTROFORESIS INTEGRANTES: JESICA DAYANA BOLIVAR MONICA FONSECA YURI MARTÍNEZ ¿ Que es electroforesis? Es una técnica de separación de moléculas que depende de la movilidad de estas en un campo eléctrico, a través de una matriz porosa; la cual las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica. ¿ Cómo funciona ? La técnica clásica utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa impregnada de un electrolito. Sus extremos se sumergen en dos depósitos independientes que contienen ambos al electrolito y están unidos a los electrodos del generador de corriente. La muestra se deposita en forma de un pequeño trazo transversal en la tira. La distancia de migración se mide en relación un marcador interno. Las placas son reveladas con sales de plata, azul de Coomassie, o reactivos en particular. Características de la electroforesis • Las proteínas tiene cargas eléctricas diferentes y cuando se pone en un campo eléctrico, sus moléculas se desplazan de acuerdo con su carga eléctrica y su peso molecular • La dirección de la migración de las moléculas depende del pH de la solución y del punto isoeléctrico de la proteína • El grado de desplazamiento depende de la carga eléctrica de cada proteína • La electroforesis es la técnica mas utilizada para estudiar las proteínas en forma integral como una prueba de tamización. • La sensibilidad para detectar proteínas depende del medio en el cual se hace la electroforesis ya sea papel de filtro, acetato de celulosa, poliacrilamida o gel de agarosa; del medio en el cual se corren sea acido o alcalino, de la sensibilidad de los instrumentos, de la habilidad del operador y de la capacidad de análisis e interpretación de quien solicita o aplica la prueba. Aplicaciones de la electroforesis • La electroforesis en gel permite a los científicos separar las hebras de ADN, permitiendo así facilitar la identificación y examinación de sus componentes. A medida que el ADN se mueve a través del gel, ayuda a separar las secciones mayores y menores entre sí. Este proceso ofrece varias aplicaciones beneficiosas para proporcionar la información genética. • Ayuda a identificar enfermedades • Determinar paternidad, así como establecer vínculos genéticos entre grandes grupos de personas Técnicas electroforéticas • Electroforesis capilar en zona o en disolución libre (CZE) Es el procedimiento de electroforesis más habitual, en el cual el capilar es recorrido por el electrolito a través de un medio buffer que puede ser ácido (fosfato o citrato), básico (borato), o anfótero (carácter ácido y básico). El flujo electro osmótico crece con el pH del medio electroforético. Electroforesis capilar electrocinética micelar (MEKC) En esta variante del procedimiento anterior se añade a la fase móvil un compuesto catiónico o aniónico para formar micelas cargadas. Estas pequeñísimas gotitas inmiscibles con la disolución retienen a los compuestos neutros de un modo más o menos eficaz, por afinidad hidrófila hidrófoba. Se puede utilizar este tipo de electroforesis para moléculas que tienen tendencia a migrar sin separación, como es el caso de algunos enantiomeros. Electroforesis capilar en gel (CGE) Esta es la transposición de la electroforesis en gel de poliacrilamida o de agarosa. El capilar está relleno con un electrolito que contiene al gel. Se produce un efecto de filtración que ralentiza a las grandes moléculas y que minimiza los fenómenos de convección o de difusión. Los oligonucleótidos, poco frágiles, se pueden separar de este modo Isoelectroenfoque capilar (CIEF) Esta técnica, también conocida como electroforesis en soporte, consiste en crear un gradiente de pH lineal en un capilar con pared tratada que contiene un anfótero. Cada compuesto migra y se enfoca al pH que tenga igual valor que su punto isoeléctrico (al pI su carga neta es nula). Seguidamente, bajo el efecto de una presión hidrostática y manteniendo el campo eléctrico, se desplazan las especies separadas hacia el detector. Las altas eficiencias obtenidas con este procedimiento permiten separar péptidos con pI que apenas difieren entre sí 0.02 unidades de pH. ISOELECTROENFOQUE ¿Qué es Isoelectroenfoque? • Es un tipo de electroforesis que se emplea para separar moléculas cargadas • Debido a que diferentes proteínas tiene diversos grupos titulables, también tiene diferentes puntos isoeléctricos. • El pH isoeléctrico(pI) es el pH al cual una proteína ( o una aminoácido o un péptido) no tiene carga neta. • En el pI el numero de cargas positivas balancea exactamente al numero de cargas negativas. • En el Isoelectroenfoque el gel se prepara con un gradiente de pH paralelo al campo eléctrico. Conforme las proteínas migran a través del gel bajo la influencia de este campo eléctrico van encontrando regiones con diferentes valores de pH, así la carga sobre la proteína va cambiando. • Cada proteína alcanza el punto en el cual no tiene carga neta “su punto isoeléctrico” y en ese momento deja de migrar- • Cada proteína permanece en la posición del gel correspondiente a su pI, logrando asi un método efectivo de separación. Aplicaciones • La capacidad del IEF de separar las proteínas en bandas definidas lo hace útil como herramienta analítica y preparativa. Varias preparaciones proteicas que se creían homogéneas se separaron en varios componentes mediante esta técnica. • Una de las aplicaciones más importantes de la IEF es la electroforesis bidimensional, que consiste en la separación de proteínas según su pI y su respectivo peso molecular (MW). Bibliografía • Campuzano, G. 2006. La electroforesis de proteínas: mas que una prueba de laboratorio. Tomado de: file:///C:/Users/Usuario/Downloads/Electroforesis%20de%20proteinas.pdf • Morales, I. s.f. Electroforesis. Tomado de: http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Exposicion_electroforesis_5087.pdf • Arizmendi, Ailín - Gribaudo, Virginia – Lonigro et al. 2013. electroforesis bidimensional( isoelectroenfoque y SDS-PAGE). Toamdo de: http://ufq.unq.edu.ar/DocenciaVirtual/BQblog/Electroforesis%202D%20(IEF+SDS-PAGE).pdf • Perez, J. 2016. Electroforesis. ManzaBioBac2. Tomado de: http://manzabiobac2.blogspot.com/2016/11/electoforesis.html
