INFORME DE LABORATORIO

IDENTIFICACIÓN MORFOLÓGICA Y DIFERENCIACIÓN DE COLONIAS BACTERIANAS
CULTIVADAS EN 5 TIPOS DE AGAR.
*Gutiérrez, juan; García,Lorena; Guacanes, Leidy 1; Motta, Diana
1.
Estudiantes de cuarto semestre de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la universidad de
la Amazonia.
Florencia- Caquetá
Email: juandagual@hotmail.com*
RESUMEN
Universidad
Uno de los sistemas más importantes
para
la
identificación
microorganismos
es
de
observar
Florencia,
de
la
Amazonia
quienes
microorganismos
analizaron
presentes
sede
los
dos
su
diferentes tipos de leche, utilizadas para
crecimiento de bacterias en la leche,
para que estas crezcan adecuadamente
el consumo humano, este estudio se
en un medio de cultivo artificial este
realizado en 5 medios de cultivo sólidos
debe reunir una serie de condiciones
(agares).
como
son:
humedad
temperatura,
y
presión
grado
de
de
oxígeno
PALABRAS CLAVE:
Leche,
Agar,
Consumo
humano,
adecuadas, así como un grado correcto
de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y
Microorganismo, Patógeno
ABSTRACT
factores de crecimiento necesarios y
One of the most important systems for
debe
the identification of microorganisms is to
estar
microorganismo
exento
de
contaminante,
todo
este
informe se plasman los resultados de una
práctica realizada por estudiantes de la
observe their growth of bacteria in milk,
so that they grow properly in an artificial
culture medium, this must meet a series
of conditions such as: temperature,
M.R,
humidity and pressure of adequate
pueden ser observados individualmente a
oxygen, as well as a correct degree of
través de un microscopio (Díaz G.A, 2009)
acidity or alkalinity. A culture medium
o a simple vista cuando en conjunto
must contain the necessary nutrients and
forman colonias (Pírez M, 2014). Las
growth factors and must be free of all
colonias son la manera macroscópica de
contaminating
observar la morfología que constituye una
microorganisms,
this
1999).
Estos
report reflects the results of a practice
agrupación
carried out by students of the University
establecen en agrupaciones formadas por
of the Amazon headquarters Florence,
la reproducción de las bacterias en un
who
medio (Axelsson L, 1998).
analyzed
the
two
different
de
microorganismos
bacterias,
que
se
microorganisms present types of milk,
Existen miles de medios de cultivos con
used for human consumption, this study
diferentes características pero en este
was conducted in 5 solid culture media
caso, el medio de cultivo fueron cinco
(agars).
tipos
KEYWORDS
MacConkey, agar EMD, agar bismuto
Milk,
Agar,
Human
consumption,
de
agar:
agar
sangre,
agar
sulfito y agar Sabouraud. Estas colonias,
Microorganism, Pathogen
Vistas al microscopio, por lo general,
INTRODUCCIÓN
presentan
Las
bacterias
son
tres
formas
básicas:
las
microorganismos
bacterias esféricas se denominarán cocos,
unicelulares que se reproducen por fisión
las alargadas se denominan bacilos, las
binaria, es decir, asexualmente (Adams
bacterias curvadas y las que tienen forma
de
espiral
se denominan
espirilos,
su forma en los diferentes grupos
espiroquetas, comas o vibriones; cada
bacterianos.
una
distintas
MATERIALES
de
su
En primer lugar, es necesario para
reproducción en el medio; Las múltiples
ingresar al laboratorio tener en cuenta el
formas
estar
equipo de bioseguridad, estando en
determinadas por distintos factores,
primer lugar la bata, guantes, tapabocas y
siendo la rigidez de la pared celular, la
gorro.
de
ellas
características
presentan
dependiendo
bacterianas
pueden
más importante de ellas (Jay J.M, 2000).
En las últimas décadas la investigación
de este tipo de microorganismos ha
permitido comprender su relación con el
hombre
además
de
encontrar
los
mecanismos de inmunidad para algunas
bacterias mediante la creación de vacunas
(Torres M, 2002). El estudio de las
bacterias se constituye de esta manera un
Imagen 1, Bata de bioseguridad, autor:
https://www.hoyfarma.com/images/stories/virtuemar
tema bastante importante dentro de la
microbiología, por lo tanto, el objetivo de
este
laboratorio
es
identificar
la
morfología de las colonias y bacterias
estudiadas para clasificarlas de acuerdo a
t/product/bata%20blanca%20manga%20larga%20pun
o%20resorte.png
Luego, para llevar a cabo todo el
procedimiento en el laboratorio con éxito
se necesitó un mechero, un asa de
platino, laminas porta objetos y un porta
laminas para conservar adecuadamente
Imagen 2, Guantes de bioseguridad, autor:
las muestras.
http://distribuidoradicola.com/wpcontent/uploads/2015/01/guantes-de-vitrilo-sin-polvotalla-extra-grande.jpg
Imagen 3, Tapabocas de bioseguridad, autor:
https://www.hoyfarma.com/images/stories/virtuemar
Imagen 4, mechero, autor: juan David Gutiérrez.
Tomada en: laboratorio de biología UDLA.
t/product/tapabocas%20tres%20pliegues.png
Imagen 5, asa de platino, autor: juan David
Gutiérrez. Tomada en: laboratorio de biología UDLA.
Imagen 4, gorro desechable, autor:
https://img.directindustry.es/images_di/photog/166427-13250970.jpg
Imagen 6, laminas porta objetos, autor:
https://cdn.shopify.com/s/files/1/1111/2076/products
/Captura_de_pantalla_2016-02Imagen 8, microscopio, autor: https://images21_a_las_11.46.48_1024x1024.png?v=1456052952
na.ssl-images-amazon.com/images/I/71ATAp4YXL._SX466_.jpg
También se necesitó el medio de cultivo,
en este caso fue el agar.
Imagen 7, porta laminas, autor: https://encryptedtbn0.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcSFDKstKKGgmL2oXJ8EOiAlnCTvsEgs5fe5STUXvMF7OB75V
Imagen 9, agar sangre, agar Sabouraud, agar
bP&s
Se necesitó un microscopio para poder
MacConkey, agar EMD y agar bismutosulfito. autor:
juan David Gutiérrez. Tomada en: laboratorio de
realizar
la
correspondiente
observación
morfológica de las placas tomadas en el
laboratorio.
biología UDLA.
por último, se utilizó leche comercial y
El día 12 se septiembre del año 2019 a
el material biológico que fue la leche de
las 6:00 am se realizó el muestreo en la
Finca san Vicente, ubicada en la vía
principal que conecta a Florencia con El
paujil, aproximadamente en el km 15. El
muestreo se realizó de una forma general,
es decir, no se tomó la muestra de leche
vaca.
solo en una vaca, sino que la muestra se
Imagen 10, leche comercial <Colanta>, autor: juan
David Gutiérrez. Tomada en: laboratorio de biología
UDLA.
tomó de todas las vacas que se
ordeñaron, 4 vacas en total para ser más
específicos. La muestra fue tomada en un
tarro de orina y se selló hasta el día de la
siembra en el laboratorio. Para evitar que
.
las bacterias se murieran por cuestiones
.
de temperatura, la muestra se mantuvo
Imagen 11, leche de vaca, autor: juan David
en la nevera, a una temperatura entre 0 y
Gutiérrez.
tomada en: finca san Vicente
5 grados centígrados aproximadamente.
La siembra de cultivos de bacterias se
METODOLOGÍA
realizó el mismo día, 12 de septiembre del
La recolección del material biológico se
2019 a las 6:00 pm en el laboratorio de
realizó por parte de los integrantes del
presente informe.
biología de la UDLA.
Para la siembra, primero se tuvo en
cuenta el asa de platino (imagen 5), el cual
se calentó en el mechero (imagen 4) para
poder dividir el cultivo en 2 mitades
(imagen 12). se dividió en dos mitades
para poder diferenciar los resultados
tanto de la muestra de leche comercial,
como la muestra biológica.
Imagen 12, división de cultivo en dos mitades,
autor: juan David Gutiérrez. Tomada en: laboratorio de
biología UDLA
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
AGAR MACCONKEY
El
agar
MacConkey
es
un
medio
diferencial y selectivo para el aislamiento
de bacilos Gram negativos, fermentadores
o no de lactosa, de la familia de las
Enterobacterias provenientes de muestras
Imagen 13, muestra de agar MacConkey, leche comercial
clínicas y no clínicas (Levine, M., and
y finca. autor: leidy guacanez. tomada en: laboratorio
microbiología
H.W.). también puede ser utilizado en
análisis de alimentos (Downes, F.P., and
K. Ito.).
Este medio está basado en el hecho de
que las sales biliares son precipitadas por
los ácidos; la presencia de sales biliares y
cristal violeta inhibe el crecimiento de la
mayoría de bacterias Gram positivas como
Imagen 14, muestra de agar MacConkey, leche
comercial y finca. autor: diana marcela Motta. tomada
en: laboratorio microbiología 1-macconkey se observó
Enterococcus
y
(MacConkey,
A.T.).
microorganismos
fermentadores
Staphylococcus
dentro
entéricos
de
de
se
lactosa
fermentadores (MacConkey, A.).
los
tienen
y
en 100x bacilos pleomorficos.
no
Microscópicamente
se
logró
determinar, que la morfología que se
encontraba presente era la de Bacilos
Gram positivos, encontrados sin una
organización o agrupación definida, como
lo podría ser que son bacilos pleomorficos,
una forma circular y en algunos puntos del
comercial fue contaminada desde su
campo se observaron cómo bacilos rectos
origen.
y no fue posible identificar la presencia de
AGAR SULFITO BISMUTO
flagelos; teniendo en cuenta lo anterior y
Como la mayoría de los medios de cultivo,
lo descrito por Alberto Ernesto Parma en
el agar sulfito de bismuto contiene
Microbiología
197
sustancias nutritivas para promover el
(Stanchi N. O. 2007), sobre Escherichia
desarrollo bacteriano, tales como las
Coli.
peptonas y el extracto de carne. Así
Es posible determinar como positiva la
mismo, la glucosa funciona como una
presencia de este microorganismo en estas
fuente de energía y carbono.
veterinaria,
pág.
colonias, sumado a que coincide de igual
forma la morfología colonial
Ahora bien, no todas las bacterias
y la
crecerán en este medio, ya que el agar
posibilidad de que se desarrolle en este
sulfito de bismuto es un medio selectivo.
medio de cultivo específico y además a
Este contiene compuestos que inhiben el
esto, la posibilidad de encontrar el mismo
crecimiento de los microorganismos Gram
microorganismo en la leche comercial se
positivos y de ciertas bacterias Gram
puede determinar finalmente que una de
negativas. Estos compuestos son: el
las muestras en este caso la leche se
indicador sulfito de bismuto y el verde
encuentran contaminadas con Escherichia
brillante. Por su parte, el fosfato disódico
Coli, o durante el protocolo de toma y
mantiene la osmolaridad y el pH del
siembra de las muestras se realizó una
medio.
contaminación cruzada entre estas, de
Adicionalmente, el agar sulfito de
manera esto quiere decir que la leche
bismuto es un medio diferencial gracias a
la presencia del sulfato ferroso, que
evidencia la formación de H2S. El H2S
compuestos contienen muchos nutrientes y
formado por las bacterias reacciona con el
esta propiedad permite que en él puedan
sulfato ferroso y forma un precipitado
crecer
negro insoluble claramente visible.
cultivables.
Finalmente, el agar-agar proporciona la
consistencia
sólida
al
medio
según
(Wilson y Blair) (1927).
la
mayoría
de
las
bacterias
Ese crecimiento ocurre sin restricción; por
este motivo es no selectivo. Sin embargo, si
a este medio se le adicionan compuestos que
impidan
el
crecimiento
de
algunos
microorganismos y favorezca el de otros, se
vuelve selectivo. Es el caso si se adicionan
ciertos tipos de antibióticos o anti fúngicos.
Así mismo, el agar sangre es un medio
diferencial, ya que permite distinguir 3 tipos
de bacterias: los beta-hemolíticos, alfa –
hemolíticos y gamma-hemolíticos Según
Imagen 15, muestra de agar bismuto, leche comercial y
los laboratorios Britania (Britania, s. f.).
finca. autor: leidy guacanez. tomada en: laboratorio
microbiología
Microscópicamente no se logró determinar
nada en este agar porque no estaba
contaminado entero bacterias.
AGAR SANGRE
El agar sangre es un medio enriquecido
Imagen 16,, muestra de agar sangre, leche comercial
porque lleva como aditivo principal 5 -10%
y finca. autor: leidy guacanez. tomada en: laboratorio
de sangre sobre una base de agar. Ambos
microbiología
Imagen 17:1-01 sangre bacilos en empalizada gram
+ leche de finca esta muestra se observó en 100x
autor: diana
marcela Motta tomada en laboratorio.
Este campo estuvo destinado para la
Imagen
18:(1-01)
formas
coco
basilares
(estafilococos con bacilos) Gram + leche de finca agar
sangre esta muestra se observó en 100x autor: diana
marcela Motta tomada en laboratorio.
siembra de la leche tomada directamente
de una vaca de finca, las características
microscópicas y de su colonia, han llevado
a realizar un diagnóstico presuntivo que
apunta a el hallazgo de E. coli, se
determinó una la colonia de forma
alargada, con centro grande y color más
oscuro que su exterior, también se
determinó una alfa hemolisis debido a que
hubo una oxidación parcial de los glóbulos
rojos, por otro lado microscópicamente
presento bacilos Gram positivos, en
empalizada.
Este campo estuvo destinado para la
siembra de la leche tomada directamente
de una vaca de finca, donde según las
características microbiológicas y de su
colonia, las cuales resultan tener una
similitud bastante cercana con las del
microorganismo staphylococcus aureus.
Con bacilos y cocos bacilares Se observó
una colonia grande, de forma alargada,
elevación plana o elevada, con color
amarilloso a dorado, un crecimiento fuerte
y rápido y tambien se observó una beta
hemolisis.
Imagen 19:1-02 formas coco basilares organizados
bacilos alargadas Gram –leche comercial sangre se
observó en 100x autor: diana
marcela Motta tomada
Este campo estuvo destinado para la
siembra de la leche tomada directamente
de una bolsa de leche comercial, donde
según las características microscópicas y
de su colonia, se determinó la morfología
de la colonia fue grande, teniendo en
cuenta que este microorganismo no es
exigente y el agar sangre le proporciona
nutrientes
necesarios
para
su
desarrollo; donde se vio como formas
bacilares organizados y bacilos alargados
Gram negativos.
observó en 100x autor: diana
marcela Motta tomada
en laboratorio.
en laboratorio.
los
Imagen 20-2-01 sangre cocos gran + leche comercial se
Este campo estuvo destinado para la
siembra de la leche tomada directamente
de una bolsa de leche comercial, donde
según las características microscópicas y
de su colonia, se determinó la morfología
de la colonia fue pequeña, teniendo en
cuenta que este microorganismo no es
exigente y el agar sangre le proporciona
los
nutrientes
necesarios
para
su
desarrollo; donde se vio como formas
bacilares organizados y bacilos alargados
Gram positivos.
AGAR SABOURAUD
negativas. Se agrega gentamicina para
El agar dextrosa de Sabouraud (SDA)
inhibir aún más el crecimiento de bacterias
se usa para el aislamiento, cultivo y
gram Negativas.
mantenimiento de especies de hongos y
levaduras no patógenas y patógenas. SDA
fue formulado por Sabouraud en 1892 para
el cultivo de dermatofitos. El pH se ajusta
a aproximadamente 5,6 para mejorar el
Imagen 21, muestra de agar sangre, leche comercial
crecimiento de hongos, especialmente
dermatofitos, e inhibir ligeramente el
y finca. autor: leidy guacanez. tomada en: laboratorio
microbiología
crecimiento
bacteriano
en
muestras
clínicas (Sagar Aryal)
Este medio está basado en La peptona
(resumen enzimático de caseína y resumen
enzimático de tejido animal) proporciona
la fuente de nitrógeno y vitaminas
necesaria
para
el
crecimiento
de
Imagen 22: 1-01saboraud bacilos letras china gram-
organismos en SDA. La dextrosa se agrega
esta muestra se observó en 100x autor: diana marcela
como fuente de energía y carbono. El agar
Motta tomada en laboratorio.
es el agente solidificante, Se puede agregar
Este campo estuvo destinado para la
cloranfenicol y / o tetraciclina como
siembra de la leche tomada directamente
antimicrobianos de amplio espectro para
de
inhibir el crecimiento de una amplia gama
características microscópicas y de su
de bacterias grrftam positivas y Gram
colonia, se determinó la morfología de la
una
finca,
donde
según
las
colonia fue grande donde se vio como
que es una colonia blanca con borde entero
formas bacilos en letras chinas alargados
y elevación plata.
Gram
negativos
también
se
puede
determinar que es una colonia amarillenta
con bordes irregulares y elevación baja
convexa.
Imagen 24: 2 –saboraud -01 bacilos empalizada esta
muestra se observó en 100x. autor: diana marcela Motta
tomada en laboratorio.
Este campo estuvo destinado para la
siembra de la leche tomada directamente
de una bolsa de leche comercial donde
Imagen 23:1- Sabouraud - 02-cocos gram-
según las características microscópicas y
muestra se observó en 100x. autor: diana marcela
de su colonia, se determinó la morfología
Motta tomada en laboratorio.
Este campo estuvo destinado para la
de la colonia fue grande donde se vio como
siembra de la leche tomada directamente
formas de bacilos en empalizada alargados
de
una
finca,
donde
según
las
Gram
positivos
también
se
puede
características microscópicas y de su
determinar que es una colonia amplia con
colonia, se determinó la morfología de la
borde cremado y elevación baja convexa.
colonia fue pequeña donde se vio como
formas de cocos
circulares Gram
negativos también se puede determinar
y Teague) Agar EMB, contiene colorantes
de azul de metileno y eosina, que inhiben
las bacterias gram positivas en cierto
grado. Los colorantes también actúan
Imagen 25: 2 -saboraud -02 bacilos en empalizada
esta muestra se observó en 100x autor: diana marcela
como
indicadores
diferenciales
en
respuesta a la fermentación de la lactosa o
Motta tomada en laboratorio.
Este campo estuvo destinado para la
la
sacarosa
por
siembra de la leche tomada directamente
microorganismos.
parte
de
los
de una bolsa de leche comercial donde
Los coliformes producen colonias de
según las características microscópicas y
color negro azulado, mientras que las
de su colonia, se determinó la morfología
colonias de Salmonella y Shigella son
de la colonia fue pequeña donde se vio
incoloras o de color ámbar transparente.
como formas de bacilos en empalizada
Las colonias de Escherichia coli pueden
alargados Gram negativos también se
exhibir
un
brillo
puede determinar donde hay dos colonias
característico
blancas pequeñas, con borde entero y
fermentación de la lactosa. (MacFaddin,
elevación plana,
J.F.)
debido
verde
a
metálico
la
rápida
AGAR EMB
El agar EMB es un medio ligeramente
selectivo
para
el
aislamiento
y la
diferenciación de bacilos gram negativos
Imagen 26, muestra de agar sangre, leche comercial
entéricos (Enterobacteriaceae y diversos
y finca. autor: leidy guacanez. tomada en: laboratorio
microbiología.
otros bacilos gram negativos) (Holt-Harris
medios utilizados para el crecimiento de
entero bacterias (Elida Gentiline). El
flagelo polar monotrico no es visible.
Imagen 27-1-emb-01-lf bacilos ramificados gram +
autor: leidy guacanez. tomada en: laboratorio
microbiología.
Esta muestra de obtuvo directamente de
una bolsa de leche comercial marca
colanta donde se pudo observar una
colonia donde se identificó esta era color
Imagen 28: -02-emb-01-01 bacilos organizados
crecimiento ramificado relacionados con micobacteriun
autor: leidy guacanez. tomada en: laboratorio
blanco, con un tamaño de 5mm de
microbiología.
diámetro, y contaba con un centro en
Esta muestra de obtuvo directamente de
relieve, microscópicamente de observaron
una bolsa de leche comercial marca
bacilos
negativa;
colanta donde se pudo observar una
características
colonia donde se identificó esta era color
Debido
ramificados
a
morfológicas
Gram
estas
de
la
colonia
y
violeta;
con
un
tamaño
grande,
microscópicas la colonia tuve un bajo
microscópicamente de observaron bacilos
crecimiento también se dice que tiene
organizados con crecimiento ramificados
respiración anaerobia, pueden crecer en
relacionados con micobacterium Gram
medios de cultivos simples o todos los
negativo; Debido a estas características
morfológicas
de
microscópicas
la
la
colonia
colonia
y
tuvo
un
crecimiento alto donde se observa grande.
Imagen 30 -2-mb-03 lc hongos bacilos letras chinas
esta muestra se observó en 100x autor: diana marcela
Motta tomada en laboratorio.
Esta muestra de obtuvo directamente de
leche de finca donde microscópicamente
Imagen 29: -Emb 2-02 bacilos en agrupaciones gram –
se
pudo
observar
una
colonia
de
esta muestra se observó en 100x autor: diana marcela
crecimiento lento también se observan
Motta tomada en laboratorio.
bacilos
Esta muestra de obtuvo directamente de
una bolsa de leche comercial marca
ramificados
que
son
Gram
negativos color blanca pequeña con bordes
irregulares.
colanta donde microscópicamente se pudo
observar una colonia de crecimiento
rápido también se observan hongos, y
CONCLUSION
bacilos en letras chinas que son Gram
Si bien hay muchos factores que pueden
positivos color violeta.
influir en los resultados durante una
práctica de laboratorio, y más por
estudiantes universitarios inexpertos en la
materia, durante la cual se puede realizar
un mal manejo o mal procedimiento, que
afecten en los resultados y no permitan
tener conclusiones precisas; teniendo en
Los lácteos descompone la caseína a
consideración la posible contaminación
péptidos y aminoácidos y la grasa de la
cruzada
leche a ácidos grasos libres, los cuales
entre
contaminación
muestras,
por
la
posible
exposición
al
ambiente, la falla en protocolos como
descomponen la leche y acortan su vida
útil.
pueden ser los de tinción, toma de
muestras, siembra, conservación de las
REFERENCIAS
Referencias
muestras, entre otros realizados durante el
Adams M.R. (1999). food microbiology.
desarrollo de la práctica, podemos concluir
cambridge : the royal society of chemistry .
que
directamente
relacionado
a
los
Axelsson L. (1998). latic acid bacteria:
resultados obtenidos en los agares, las
classification and physiologic. microbiology
muestras bacilares tanto como de finca
and functional aspects , 1-72.
como comercial presentaron un tipo de
contaminación por heces fecales o han
tenido contacto con alguna herida . La
práctica universitaria en conclusión puede
declararse como exitosa, debido a que se
cumplio con el objetivo de identificar los
microorganismos
presentes
en
las
Diaz G.A. (2009). morfologia y estructura
bacteriana . centro de formacion profesional.
instituto villaverde, 28(2).
Jay J.M. (2000). modern food microbiology .
Pírez M. (2014). morfologia y estructura
bacteriana. revista de actualizacion clinica ,
45(2).
muestras, sin embargo, no es posible
Torres M. (2002). flora, probioticos y salud.
determinar el origen real de cada uno de
Guadalajara : segunda edicion, formas finas.
los mismos, ni describir su procedencia en
.Laboratorio ValteK. (2009). Agar Sabouraud
la muestra.
dextrosa con cycloheximida. Disponible en:
Signature=be1abb82133c62188d064a661ab
andinamedica.com.
6ce332e3b09908c9346f9596b35733e0770ae
Bayona M. Condiciones microbiológicas para
https://www.lifeder.com/agar-sulfito-de-
el cultivo de Helicobacter pylori. Rev Col
bismuto/
Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
https://www.lifeder.com/agar-sangre/
Laboratorio CEDIVET Centro de Diagnóstico
https://www.lifeder.com/agar-sabouraud/
Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009).
http://aramara.uan.mx:8080/bitstream/123
Diagnóstico Microbiológico de Bailey & Scott.
456789/436/1/Bacterias%20l%c3%a1cticas%
12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina
2c%20Importancia%20en%20alimentos%20y
http://metabase.uaem.mx/bitstream/handle
%20sus%20efectos%20en%20la%20salud.pdf
/123456789/1466/280_2.pdf?sequence=1htt
ps://s3.amazonaws.com/academia.edu.docu
ments/43169930/MorfologiayEstructuraBact
eriana.pdf?response-contentdisposition=inline%3B%20filename%3DTEM
AS_DE_BACTERIOLOGIA_Y_VIROLOGIA_MED
IC.pdf&X-Amz-Algorithm=AWS4-HMACSHA256&X-AmzCredential=AKIAIWOWYYGZ2Y53UL3A%2F20
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