Subido por Gabriela Benavente

Laboratorio 5 (2)

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LABORATORIO 05
TÉCNICAS PARA EL AISLAMIENTO Y EL CULTIVO
DE MICROORGANISMOS
Contenidos
Objetivo y definición
Materiales
Procedimiento
Conclusiones
Indicador de logro
Al finalizar la sesión serás capaz de:
• Adquirir conocimientos sobre la separación de
microorganismos como colonias individuales a partir de
mezclas microbianas mediante técnicas de aislamiento.
• Propagar cepas microbianas mediante técnicas de
trasplante y conocer las características coloniales de los
microorganismos.
¿Dónde se cultiva a los
microorganismos? ¿cómo ?
Medio de cultivo
• Son soluciones nutritivas (líquida o gelatinosa) que se
utilizan en el laboratorio para el cultivo y crecimiento de los
microorganismos
https://www.youtube.com/watch?v=YGoPu0cn9ms
https://www.youtube.com/watch?v=miga09gVMyY
AISLAMIENTO
Es la separación de un microorganismo del resto que lo acompañan.
Se aislan para obtener un cultivo puro.
TÉCNICAS PARA EL AISLAMIENTO
ESTRÍAS
DILUCIONES
Por su función
SELECTIVOS
Promueve el crecimiento de ciertos
microorganismos
o inhibe el crecimiento de otros
COMUNES
Permite el crecimiento de la
mayor parte de los
Microorganismos.
ENRIQUECIDOS
Se le agrega exceso de
nutrientes, sangre,
suero
Agar nutritivo
Ejm: Agar Manitol salado
Agar Sabouraud
Ejm: Agar nutritivo
Ejm: Agar sangre
“La siembra es
superficial”
TECNICAS DE SIEMBRA
Aislamiento por estrías
Flamear
1
2
1
2
Flamear
1
2
Flamear
Flamear
3
3
4
https://www.youtube.com/watch?v=6NckVGCobwY
3
II. MATERIALES
• Guardapolvo blanco y limpio
Láminas porta y cubre objetos
Gradilla
Asa Drigralsky
y aguja de Kolle
Mecheros Bunsen
Placas petri
CEPAS BACTERIANAS
 Escherichia coli
 Salmonella
 Bacillus
 Staphylococcus
MEDIOS DE CULTIVO EN PLACA PETRI
Placas Petri con:
• Agar MacConkey
• Agar Manitol Salado
• Agar Nutritivo
Agar EMB
Agar nutritivo
Agar manitol salado
•3 tubos con 12 ml de agar nutritivo
licuado y mantenido a 50°C.
•3 placas Petri estériles.
•2 tubos con cuñas de agar
nutritivo.
•2 tubos con caldo nutritivo
III. PROCEDIMIENTO
• Limpiar las superficies con un paño con alcohol (70 o
96°)
• Encender el mechero
• Ponerse los guantes,
• Mascarilla
III. PROCEDIMIENTO
Técnicas de aislamiento
1. Por estrías
a. EN CONDICIONES DE
ESTERILIDAD/ROTULAR LAS
PLACAS
b. TOMAR UNA ASADA DE LAS
CEPAS
c. REALIZAR UN ESTRIADO EN
LA SUPERFICIE
https://www.youtube.com/watch?v=W6xpPJZIb1E
https://www.youtube.com/watch?v=-TnHCd4sY24
Rotular placas: Medio, bacteria, nombre y fecha
E. coli
Agar MacConkey
Agar nutritivo
Agar manitol salado
A.N
Medio de
cultivo
Bacteria
• Fecha
 Hora
Nombre del grupo
(siglas)
Aislamiento por estrías
Flamear
1
2
1
2
Flamear
1
2
Flamear
Flamear
3
3
4
3
“Tenga cuidado de no producir
roturas en el agar”
Incube las placas a 37°C por 24-48 h.
2.Por diluciones
1= DILUCIÓN1
1. ROTULAR 3 PLACAS Y 3 TUBOS
( Cepa a emplear)
2=DILUCIÓN 2
3=DlLUCIÓN 3
1
2
3
1
2
3
Tiene 9mL
de caldo
nutritivo
TÉCNICA DE AISLAMIENTO POR DILUCIONES
(Por vertido en placa)
1ml
1ml
1ml
1
2
Tubo 1 con
9mL de caldo
1ml
Dilución 1
3
Tubo 2 con
9mL de caldo
Tubo 3 con
9mL de caldo
1ml
Dilución 2
1ml
Dilución 3
1ml
Inocular la
placa
Añadir el agar
nutritivo
Girar la placa
Colonias
creciendo en el
agar
“ A 40°C se solidifica el agar”
3 cepas por grupo
Técnicas de transplante
“SIEMBRA SOBRE LA SUPERFICIE
INCLINADA”
Técnicas de transplante ( Caldo a Caldo)
ROTULE LOS
TUBOS
Incubar a 37°C
24-48 horas.
CALDO NUTRITIVO
(CON INÓCULO)
CALDO NUTRITIVO
(SIN INÓCULO)
EVALUACIÓN DE LOS TUBOS SEMBRADOS EN CALDO
(CALDO A CALDO)
• Después de la incubación, evalúe los tubos con caldo nutritivo
considerando:
 Cantidad(escasa, moderada, abundante)
 Apariencia (turbidez, floculación, sedimentación,
película completa, anillo superficial, mucosidad).
Incubar las placas y tubos a 37°C por
24 a 48 horas
…LUEGO DE LA INCUBACIÓN
OBSERVAR LAS CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS
 Observe el desarrollo de las colonias aisladas y describa
sus
características
de
forma,
bordes,
elevación
y
consistencia (butiroso, viscoso, fibroso) según la figura
siguiente:
•
•
•
•
Forma,
Bordes,
Elevación
Consistencia
Colonias
REGISTRAR CAMBIOS DE COLOR DE
LOS MEDIOS DE CULTIVO
 Anote los resultados y preste particular atención a los
cambios que se producen en los medios
selectivo/diferenciales. Explique los resultados en el
informe.
OBSERVACIONES DE LAS PLACAS
MEDIO DE CULTIVO
MICROORGANISMO
COLOR DEL
MEDIO DE
CULTIVO
CAMBIOS
Agar EMB
E. coli
ROJO
COLONIAS
NEGRAS
CON BRILLO
METALICO
Agar Manitol Salado
Staphylococcus
ROSADO
AMARILLO
(Por rojo de
fenol)
https://www.youtube.com/watch?v=6hfS1XbPfQk
Colonias de Staphylococcus aureus
en el medio de cultivo Agar Manitol Salado
 Colonias de E. coli en el medio
EMB
IMPORTANTE
EVALUACIÓN DE LOS RESULTADOS A LAS 24H
• Observar si hay presencia de colonias en el medio de cultivo, forma,
elevación y margen
• Tomar fotografías a cada microorganismo como se desarrolla en los
diferentes medios de cultivo
• Apreciar los cambios de coloración
• Nota: Investigar la composición química de los medio de cultivo y
contrastar con los resultados obtenidos
CONCLUSIONES
• Las microorganismos se aislan en medios de cultivo con
el propósito de obtenerlos puros.
• El medio MacConkey es específico para E.coli, sus
colonias serán rosadas, el medio Manitol Salado es
específico para Staphylococcus.
• Las técnica de aislamiento por estrías y la técnica de
dilución en placa permite la obtención de colonias
aisladas
Fuentes de información
• Madigan M., John M. Martinko & Jack Parker. Brock: Biología de
los microorganismos, 14va. edición, Pearson Educación, S.A.,
Madrid. 2015.
• Agar Manitol Salado. Disponible en:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/c
atedraMicro/10_AgarManitolSal.pdf
• Juan Juscamaita (2006).Guía de Microbiología. UNALM
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