CURSO DE EXTRACCIONISTA Y MANEJO BASICO DE LABORATORIO Ct. Tec. Buscazzo Gonzalo buscazzogonzalo@Gmail.com info@aatlac.com.ar Microbiologia . • Es el estudio de los microorganismos y sus actividades. Esto concierne a su forma, estructura, fisiología, reproducción, metabolismo e identificación. • El objetivo de la Microbiología es comprender las actividades perjudiciales y beneficiosas de los microorganismos y mediante esta comprensión, diseñar la manera de aumentar los beneficios y reducir o eliminar los daños • Es el puente entra la biología y la infectologia Postulados de Koch • El agente debe estar presente en cada caso de la enfermedad y ausente en los sanos. • El agente no debe aparecer en otras enfermedades. • El agente ha de ser aislado en un cultivo puro a partir de las lesiones de la enfermedad. • El agente ha de provocar la enfermedad en un animal susceptible de ser inoculado. • El agente ha de ser aislado de nuevo en las lesiones de los animales en experimentación. De este modo se establecía un protocolo para considerar un patógeno como causa directa de una lesión: mientras que muchas bacterias aparecen como “parásitos” de lesiones provocadas por otros agentes, solo hay un agente que la provoque realmente. Fueron descriptos en un primer momento en relación a M. tuberculosis, y luego generalizados a los microorganismos en general. Aunque la mayoría de los agentes infecciosos causantes de enfermedad en humanos cumplen los postulados, hay algunas excepciones. Por ejemplo: Mycobacterium leprae, causante de la lepra, no se ha podido cultivar in vitro como cultivo puro, por lo que no cumple el tercer postulado. Microorganismos • Es importante tener en cuenta la gran DIVERSIDAD que existe entre ellos: diversidad de tamaño, de caracteristicas biológicas, de características patogénicas… • Hay cuatro grupos: - Bacterias - Virus - Hongos - Parásitos ÁREAS DE LA MICROBIOLOGÍA • Bacteriología: Estudia las bacterias, microorganismos procariotas unicelulares de estructura relativamente simple. Ejemplos: Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, etc. Bacterias • Son organismos unicelulares de vida libre que se reproducen por fisión binaria. Contienen dentro de su membrana plasmática toda la información genética, energía y maquinaria biosintética para su crecimiento y reproducción. • Son células procariontes (tienen núcleo, pero no tienen membrana nuclear) • La gran mayoría tiene pared celular, cuyas características las divide en dos grandes grupos: Gram positivas y Gram negativas. • Dependiendo de las condiciones en las que realicen la obtención de energía, pueden ser aerobias o anaerobias. • Pueden ser extracelulares o intracelulares (Chlamydias, Mycoplasmas). • Pueden o no tener movilidad propia. Si la tienen se debe a su forma (espiroquetas) o a que poseen un flagelo. • Pueden ser capsuladas (aumenta su virulencia) o no. Bacterias Según su morfología se agrupan en: Cocos Bacilos Espirilos Espiroquetas (rígidas) (flexibles) Los bacilos pequeños, se llaman cocobacilos. Si hay dos cocos asociados, se llaman diplococos. Virus • No son seres vivos: son agentes infecciosos. • Son “parásitos intracelulares obligados”: no tienen la maquinaria celular necesaria para reproducirse por si solos, por lo que usan la de la célula huésped. • Todos tienen una cápside viral, que recubre su ácido nucleico. Cada virus tiene un solo tipo de ácido nucleico, pero este varia de virus a virus. Así tenemos virus con DNA y con RNA • Algunos tienen una envoltura asociada, si la tienen se los llama envueltos. Si no, desnudos. ÁREAS DE LA MICROBIOLOGÍA • Micología: Estudia los hongos, microorganismos eucariotas quimioheterotrofos, pueden ser unicelulares o multicelulares. Ejemplos: Aspergillus fumigatus, Histoplasma capsulatum, Candida albicans, etc. Hongos ÁREAS DE LA MICROBIOLOGÍA • La Parasitología: es el nombre que recibe aquella disciplina que forma parte de la Biología y que aborda especialmente el estudio de los parásitos. Cabe destacarse que el parásito es un tipo de organismo animal o vegetal que se caracteriza por vivir de otra especie, es decir, se alimenta de otro organismo. Parásitos • Protozoarios (unicelulares) o metazoarios (multicelulares). Eucariotas. • NO TODOS SON MICROSCOPICOS! Tamaños V B parásitos unicelulares Parásitos multicelulares Hongos y Impacto de los microorganismos en la vida • Los microorganismos pueden ser patógenos (causantes de enfermedad) o no. Dentro de los microorganismos patógenos tenemos que distinguir los que causan enfermedades siempre que están presentes (patógenos primarios) y los que causan enfermedad en situaciones especiales del huésped (patógenos oportunistas). • Es importante entender que un microorganismo puede ser patógeno para una especie y no para otra. • La mayoría de los microorganismos no son patógenos para el hombre. FLORA NORMAL El problema surge cuando un microorganismo perteneciente a cierto lugar del organismo (ej: E. Coli en el intestino) migra a otro lugar en donde no estaba antes, o que debería ser estéril, es decir, libre de gérmenes (ej: vejiga). En estos casos estos microorganismos que no son patógenos en un lugar, pasan a serlo en otro, siendo causantes de enfermedad. Célula Eucariota Célula Procariota Conceptos de Infectología • Infección: es la penetración y el desarrollo o multiplicación de un agente infeccioso en el organismo de un ser vivo. Puede o no dar enfermedad. • Enfermedad Infecciosa: enfermedad clínicamente manifiesta debido a la penetración y multiplicación de un microorganismo. • Periodo de incubación: tiempo que transcurre entre la exposición a un agente infeccioso y la aparición del primer signo o síntoma de la enfermedad. • Periodo de transmisibilidad: lapso durante el cual el agente infeccioso puede transferirse directa o indirectamente de una persona infectada a otra. CONCEPTOS • Patogénesis: espectro de eventos desencadenados por un microorganismo que conducen a daño y enfermedad. • Virulencia: severidad con que se presenta la enfermedad Conceptos de Infectología Interacción huésped-microorganismo: 1. Encuentro: depende de las características del microorganismo, de su reservorio (lugar donde permanece en la naturaleza, ya sea un ser humano, un animal o el ambiente) y de las condiciones que llevan al hombre a establecer contacto con él. 2. Entrada: vías de transmisión: - Inhalatoria: esporas, microgotas de saliva, filamentos, microorganismo directamente. - Por vectores: biológicos o fomites. - Fecal-oral - Sexual - Sanguínea - Por contacto directo con piel y/o mucosas - Zoonótica - Vertical Conceptos de Infectología • PATÓGENOS PRIMARIOS: los que inician enfermedades en huéspedes previamente sanos y que no tenían ninguna condición predisponente hasta ese momento, cuando lo alcanzan por la puerta de entrada adecuada, y en cantidades suficientes. • PATÓGENOS OPORTUNISTAS: los que causan enfermedad sólo en huéspedes con condiciones predisponentes (inmunocomprometidos por cualquier causa, quemados, gran destrucción o alteración de epitelios). La muestra debe ser: • Representativa: de la infección en curso. Por ejemplo: si tengo una neumonía la muestra más representativa será el esputo, en una meningitis el LCR, etc. • Significativa: cantidad de muestra suficiente como para obtener un resultado confiable. Deberá tener una cantidad suficiente de microorganismos como para poder tener un resultado positivo. • Tomada correctamente! Una muestra mal tomada puede llevar a un diagnóstico errado o a la ausencia de diagnóstico. • Tomada oportunamente! La muestra debe ser tomada en momentos oportunos. Hay infecciones que tienen periodos ventana (periodo en el cual el diagnóstico serológico (en el que se buscan anticuerpos o antígenos ) será negativo aún en presencia de infección). Hay otras infecciones crónicas en que encontraremos el microorganismo en algunos períodos y en otros no. Es por este motivo que la persona que pide la muestra (y la que la obtiene preferentemente también) debe estar familiarizada con los ciclos de las enfermedades infecciosas para saber si una muestra está siendo tomada en tiempo y forma o no. • Correctamente conservada y transportada: si no conservamos o transportamos correctamente la muestra es lo mismo que no tomarla, o tomarla mal. Puede terminar siendo inútil para su procesamiento, o darme resultados errados. Papel del laboratorio en la microbiología Dependiendo del área de la microbiología de la que estemos hablando, el laboratorio tiene papeles muy distintos: - En la microbiología básica y médica se utiliza como método de estudio de los microorganismos. - En la microbiología técnica se lo usa aparte de cómo método de estudio, como herramienta para la obtención de los mayores beneficios posibles a través de la explotación de un cierto microorganismo. - En la microbiología clínica se utiliza como herramienta para diagnosticar una infección por determinado patógeno. Diagnóstico Directo BUSCA AL AGENTE CAUSAL, O FRAGMENTOS DE ÉL (ANTÍGENOS, QUE PUEDEN SER PROTEÍNAS, ÁCIDOS NUCLEICOS, HIDRATOS DE CARBONO) Antes de procesar la muestra, recordemos: • Para poder realizar un buen diagnóstico en el laboratorio es IMPRESCINDIBLE tomar una buena muestra. Ésta debía ser: - Representativa (qué) - Significativa (cuánto y calidad) - Correctamente tomada (cómo) - Oportunamente tomada (cuándo) - Correctamente conservada y transportada. • El tipo de muestra dependerá de la localización de la infección. Tipos de muestras clínicas • Sangre • LCR • Esputo y secreciones respiratorias • Hisopado de fauces • Orina • Materia Fecal • Saliva • Tejidos (por biospia o raspado) • Secreciones • Líquido sinovial (articulaciones) • Colecciones (absesos, derrames) Infecciones de VAS (Vías Aéreas Superiores) Resfrío común o catarro de VAS. • Los agentes más frecuentes son virus (rinovirus, adenovirus, parainfluenza, coronavirus, etc). • Clínica: Congestión y secreción nasal, fiebre, puede acompañarse de conjuntivitis (los mismos virus son también agentes causales). • El diagnóstico es por la clínica. • Se autolimitan en 5 a 10 días. • El tratamiento es sintomático (antitérmicos, analgésicos). Faringitis AGENTE ETIOLÓGICO CLÍNICA MEDIOS DIAGNÓSTICOS OTRAS Streptococcus pyógenes Odinofagia, fiebre, adenopatías, secreción blanco grisácea en fauces HISOPADO! Cultivo en Agar Sangre (hacen hemólisis) IMPORTANTE: tratamiento con penicilina (evita secuelas). Es agente causal de infecciones cutáneas y de la escarlatina por su toxina Corynebacterium diphteriae Igual, produce una seudomembrana que puede causar oclusión de la VAS HISOPADO! Cultivo en medio de Loeffler (no crecen streptococos) IMPORTANTE VACUNARSE!! Neisseria Gonorrhoeae Igual, puede HISOPADO (dacron o acompañarse de ETS. alginato de calcio) OJO niños! Agar Thayer Martin (selectivo) Es una ETS! Tratamiento del paciente y de la pareja! Toma de muestra Hisopado de fauces • En infecciones de las vías aéreas superiores. • Con hisopo de algodón (lo más comun), de dacron o alginato de calcio (para N. gonorrhoeae). • Se desliza el hisopo con cuidado por la zona afectada. • Importante incluir en la muestra (si los hay): exudados, seudomembranas. • Se conserva a temperatura ambiente en MEDIO DE TRANSPORTE (Stuart, AMIES, etc). • Luego se utiliza para cultivo y tinciones. • Para streptococos hay un test rápido (Streptotest o Quicktest). Infecciones Respiratorias Bajas Neumonía Aguda de la Comunidad (NAC) • 50% Bacterianas: importante conocer el medio epidemiológico ya que la mayoría de los tratamientos son empíricos (sin hacer diagnóstico de certeza). • En nuestro medio consideramos en pacientes ambulatorios: Streptococcus Pneumoniae, Mycoplasma neumoniae, Haemophilus influenzae Toma de muestra Esputo • En infecciones respiratorias bajas (neumonías, bronquitis, bronquiolitis). • Si el paciente es capaz de esputar, debe hacerlo en un frasco estéril. Se puede estimular las secreciones y la expectoración con nebulizaciones. • Se pueden aspirar secreciones del contenido estomacal en niños (no esputan y por eso lo degluten). • También se pueden hacer técnicas invasivas en pacientes internados: - Lavado bronquioalveolar (BAL, se llena la vía aérea de solución fisiológica y luego se retira). - Cepillado bronquial: cepillo que viene con un cobertor, que se inserta en las vías respiratorias desde la boca con el capuchón puesto para no contaminarlo con la flora bucal. Se toma la muestra, se vuelve a tapar el cepillo por el mismo motivo y se retira. -Si el paciente está intubado, se puede aspirar secreciones desde el tubo. • Lo más común es que se use esputo. Se considera un esputo significativo cuando a la tinción de gram veo menos de 10 células epiteliales, y más de 25 leucocitos por campo. • REQUIERE REFRIGERACIÓN A 4° C si la muestra no va a ser procesada inmediatamente. • Se utiliza para realizar cultivos y tinciones. NAC AGENTE ETIOLÓGICO MEDIOS DIAGNÓSTICOS OTRAS INFECCIONES QUE CAUSA Streptococcus neumoniae Agar Sangre (hace hemólisis) Sinusitis, otitis media, meningitis, endocarditis Haemophilus influenzae Agar chocolate (sangre calentada, libera nutrientes que necesita) Meningitis, otitis media aguda, sinusitis, conjuntivitis. IMPORTANTE VACUNACION! Pseudomona Aeruginosa Agar chocolate Infección urinaria Staphylococcus aureus Agar Chapman hipersalado Infecciones cutáneas Mucha resistencia!!! Toma de muestra Sangre • Se puede usar en el diagnóstico de una infección hematológica, o para cualquier tipo de infección. Hay infecciones localizadas que cursan con microorganismos en sangre que pueden ser detectados. Si no busco el microorganismo, puedo buscar la respuesta inmune que éste genera: así puedo diagnosticar una hepatitis con una muestra de sangre. • Se puede obtener por punción venosa. Generalmente no se utiliza punción arterial. Siempre antes de punzar para obtener cualquier tipo de muestra y por cualquier motivo hay que desinfectar la zona!! • Para realizar estudios serológicos se toma sin anticoagulantes, pues necesitamos sólo el suero. • Si necesito sangre entera, la recojo con anticoagulantes, de manera estéril. • Si voy a realizar hemocultivo, inoculo la muestra directamente en el frasco. • Lo ideal es procesarla lo antes posible. Si vamos a tardar hay que conservarla a temperatura ambiente, sin refrigerar, protegida de la luz. • Puedo realizar con ella frotis, tinciones, cultivos, observción directa, etc. Bonquiolitis • Es el primer episodio de broncoespasmo en niños menores de dos años. • Causada por el Virus Sincicial Respiratorio (VSR). • Clínica: - Fiebre - Insuficiencia respiratoria (de leve a grave) - Tos (seca o con expectoración) - Compromiso del estado general - Alteraciones en la auscultación y en la radiografía de tórax (pueden no encontrarse estas últimas) • Diagnóstico: CLINICO. Puede hacerse aspirado nasofaríngeo e IFI (inmunofluorescnecia indirecta) en él. Toma de muestra Asirado Nasofaríngeo • Con una sonda (tamaño acorde al paciente!!). • Se introduce la sonda por la nariz hasta la faringe (medirla previamente). • Se aspira (secreciones y células) y se colocan sobre un portaobjetos. • Se busca al agente (o partes de él) por medio de IFI. Meningitis Meningitis • Las mas frecuentes son las virales, que son mas banales y no requieren tratamiento farmacológico (excepto las causadas por Herpes Simplex). Sí se requiere un control estricto del paciente • Las bacterianas son mas graves, pero por suerte menos frecuentes. Se realiza SIEMPRE diagnóstico de certeza (aislamiento del agente en este caso), pero hasta obtener el resultado del mismo se realiza tratamiento empírico; por eso, al igual que en la neumonía, es necesario conocer el medio epidemiológico: - Pacientes de 0 a 2 meses: Patógenos adquiridos en el canal de parto: Streptococcus agalactiae, Escherichia coli K1. - Pacientes de 2 meses a 5 años: S. pneumoniae, N. meningitidis, H. Influenzae. - Pacientes mayores de 5 años y menores de 60: S. pneumoniae, N. meningitidis. - Pacientes mayores de 60: S. pneumoniae, N. meningitidis, BGN, Lysteria monocitogenes. Meningitis AGENTE ETIOLÓGICO MEDIOS DIAGNÓSTICOS OTRAS Streptococcus agalactiae Agar Sangre (hace hemólisis) IMPORTANTE: se realiza pesquisa en el ultimo trimestre y se trata a la madre! E. Coli K1 Búsqueda de antígenos por medios moleculares N. Meningitidis Agar sangre, chocolate, thayer martin. Toma de muestra LCR • En sospecha de cualquier infección meningoencefálica, o en pacientes con alteraciones del sensorio sin causa clara. • Se toma la muestra por punción lumbar, por debajo de la cuarta vértebra lumbar, en donde con buena técnica ya no hay riesgo de lesión medular. Debe hacerse con técnica estéril!!! • Se coloca una aguja especial, y se deja gotear la muestra en un tubo de ensayo estéril. Luego esta muestra se separa en dos tubos: uno se usará para cultivos, y el otro para hacer el estudio físico-químico. • Es importante observar el aspecto del liquido ni bien comienza a salir por la aguja, así como la presión con la que lo hace. Infección urinaria • CLINICA: - Disuria (molestias al orinar) - Dolor lumbar (en las altas) o suprapúbico (en las bajas). - Fiebre • El diagnóstico es clínico, y el tratamiento inicial empírico, por lo que es necesario conocer el medio epidemiológico: el agente más frecuente a cualquier edad (90% de los casos) es la E. coli. Hay otros agentes menos importantes, generalmente bacterias: Proteus spp., Klebsiella spp. Dentro de los hongos, el más frecuente es Cándida spp. • Al hacer el diagnóstico se comienza el tratamiento, y si llegase a resultar un patógeno distinto en el cultivo, se lo cambia. Lo mismo ocurre si en el antibiograma se encuentra resistencia a el tratamiento instaurado. Toma de muestra Orina • En infecciones urinarias altas o bajas. También se puede usar en algunas ETS (uretritis). • Muy importante explicarle al paciente cómo tomarla!! 1. Realizar higiene de la zona con un jabon sin usar (está estéril) y agua para minimizar la contaminación por la flora normal. Secar con una toalla limpia (para no contaminar). Las mujeres deben colocarse un tampón vaginal para evitar la contaminación con flora vaginal. 2. Según la patología se tomará chorro medio (IU, ya que de esta manera por arrastre elimino la flora de la uretra) o primer chorro (uretritis, para ver la flora existente en la uretra, y ver si hay algún patógeno primario). Se debe tomar en un frasco estéril especial para éste uso, ya no se recomienda utilizar frascos caseros. 3. Debe ser la primera orina de la mañana o tener (de ser posible) tres a cuatro horas de retención urinaria, para aumentar las posibilidades de encontrar el microorganismo. Toma de muestra Orina • En los niños se toma la muestra con micción al acecho: hay que perseguirlo hasta que orine, y en ese momento juntar la muestra en frasco estéril. Hay que higienizarlo de la misma manera, y si tarda mucho repetir. Igualmente, es más probable que la muestra este algo contaminada. • En pacientes sondados, puede tomarse la muestra previo cambio de la sonda para disminuir la contaminación, que en parte existirá de todas maneras; o por punción suprapúbica, método cruento pero que no debería dar una muestra contaminada de ser tomada correctamente. • HAY QUE REFRIGERARLA!! • Puedo cultivar o realizar tinciones del sedimento. Afecciones Intestinales Parasitosis intestinales AGENTE CLÍNICA DIAGNÓSTICO Entamoeba hystolítica (protozoo) Diarrea mucosanguinolienta Dolor -Seriado de M. Fecal: fresco -Indirecto Giardia Lamblia (protozoo) Diarrea aguda Diarrea crónica con malabsorción y desnutrición en niños -Seriado de M. Fecal: fresco -Puede realizarse sondaje duodenal si el resultado es negativo (acá no se hace) -Importante: evaluar estado nutricional y general Teniasis (Taenia saginata Cuadro inespecífico: diarrea, y T. Solium) prurito anal, perdida de (cestodes, platelmintos) peso, aumento del apetito Expulsión de proglótides (segmentos del parásito) -Seriado de M. Fecal: fresco -Observación macroscópica del parásito o sus proglótides expulsadas por el paciente. -Solium: carne de cerdo (menos acá). Puede hacer neurocisticercosis. -Saginata: carne de vaca Hymenolepis nana (cestodes, platelmintos) Asintomática. Diarrea. Prurito anal y nasal. -Seriado de M. Fecal: fresco -Muy frecuente en niños Ascaris Lumbricoides (nematodes, phasimidia) Obstrucción intestinal (ovillos) - Seriado de M. fecal: fresco Diarreas bacterianas y virales • Sintomatología más aguda. • Las virales se autolimitan en 5-7 días. Dan diarreas acuosas, generalmente sin moco, pus o sangre. No se realiza diagnóstico etiológico no tratamiento específico. Cuidar la hidratación y nutrición de los pacientes!! • Las bacterianas también se autolimitan, pero pueden tardar algunos días mas. Dan diarreas acuosas, que pueden tener mas frecuentemente moco, pus o sangre. No debe realizarse tratamiento antibiótico, excepto que se CONFIRME que su etiología es por bacterias invasivas como Yersinia enterocolítica, Shigella spp. o Salmonella spp. Para realizar el diagnóstico se realizan cultivos en medios selectivos especiales para esas bacterias. Toma de muestra Materia Fecal • Generalmente en infecciones por parásitos. En infecciones que se suponen bacterianas no se hace porque debido a la gran cantidad de flora que tiene esta muestra es muy difícil encontrar algo. En cambio, los parásitos al no ser flora normal (excepto Entamoeba coli) pueden ser observados y dan diagnóstico. Puede usarse en rotavirus, se busca su genoma por PCR. • Se debe explicar correctamente la preparación al paciente, debe evitar: medicamentos no absorbibles opacos (carbón, bismuto), contrastes baritados, grasas, alimentos con muchos residuos (fibras). • Se puede requerir muestra única o seriada: - Única: se recolecta la materia fecal recién emitida en un frasco con fijador y otro con solución fisiológica o agua. Esto es necesario ya que el fijador puede romper algunas formas de algunas especies de parásitos, con lo cual no las vamos a encontrar luego en la observación al microscopio. - Seriada: de 3 a 7 muestras alternas en 7 días, en un frasco con formol. Explicar que debe recoger las zonas que tengan algo particular (moco, sangre). El último día recoger la muestra en solución fisiológica y llevarla al laboratorio. Esto se usa en infecciones en las que por el ciclo del parásito o por el aumento del tránsito intestinal suponemos que no encontraremos el parásito en una muestra única. • Remitir rápidamente al laboratorio o conservar refrigerada!! • Voy a observar al MO con o sin tinción, y puedo cultivar en medos especiales (esto es de poco uso en la práctica). Infecciones del tracto genital Enfermedades del tracto genital AGENTE ETIOLÓGICO CLÍNICA MEDIOS DIAGNÓSTICOS Treponema pallidum (Sífilis) Chancro (lesión ulcerada) duro e indoloro. Luego se generaliza. Directo por microscopía de fondo oscuro. Indirecto: VDRL Chlamydia Trachomatis (Clamidiasis) Secreción transparente uretral (hombre) o cervical (en la mujer). Tracoma. Conjuntivitis. Indirecto: PCR, Elisa, IFI Es intracelular! No se cultiva Neisseria gonorrhoeae (Gonorrea) Secreción purulenta uretral o Hisopado (dacron o alginato) cervical. Conjuntivitis. Transporte en Stuart Cultivo en Thayer Martin Gardnerella vaginalis (vaginosis) Flujo blanco grisáceo con olor a pescado podrido, ardor, prurito Agar chocolate (CLINICO) Cándida spp. (Candidiasis vaginal) Flujo blanco con aspecto de “leche cortada”, prurito, ardor Directo: MO Cultivo en medioo Lactrimel o Stuart Toma de muestra Secreciones en Enfermedades del tracto genital • Si se ve secreción desde la uretra se puede tomar por cepillado o espontáneamente. • Si hay secreción en el endocérvix hay que colocar un espéculo y tomar la muestra con un hisopo. • Recordar que si la sospecha es N. gonorroheae, el hisopo debe ser de Dacron o Alginato de Calcio. Debe colocarse en medio de transporte. • Se realizan extendidos, que luego se tiñen, o cultivos Toma de muestra Secreciones en Enfermedades del tracto genital • VDRL: Venereal Desease Research Laboratory. Método indirecto de diagnóstico de sífilis. Se buscan anticuerpos en suero. Muy sensible y poco específico. • Se confirma por medio de otro método de diagnóstico indirecto, que busca anticuerpos más específicos (FT-abs). Toma de muestra Tejidos • En infecciones mucocutáneas. Sus agentes etiológicos sueles ser hongos (dermatofitos, Cándida) y bacterias (Streptococos, Staphylococos, y otros). • En las exantemáticas (sarampión, rubeóla, sexta, quinta que son virales; o escarlatina que es bacteriana) no suele hacerse diagnóstico microbiológico: es CLINICO. • Cuando es necesario tomar escamas de piel o de uñas, se debe pedir al paciente que tres dias previos no utilice talcos, cremas ni antifúngicos. Si la muestra a tomar es de una uña del pié, debe hacerse baños de agua y sal los tres días previos, y concurrir con zapatos cerrados a la consulta. • Puede ser por raspado o por biopsia. • Se tiñe y observa al microscopio óptico, o se puede cultivar. • Los tejidos deben refrigerarse o guardarse en un conservante (formol), las escamas pueden conservarse a temperatura ambiente. Toma de muestra Líquido Articular y colecciones • Artritis sépticas: generalmente bacterianas. El agente mas frecuente es el Staphylococo. • Se recolectan por punción, guiada por métodos por imágenes o no. • El líquido articular es estéril, por lo que cualquier microorganismo encontrado indica una infección. • Se realiza cultivo, y tinciones. Infecciones intrahospitalarias Son las que se dan en pacientes internados que no estaban presentes al momento de la internación y que aparece durante ella o al alta. Infecciones intrahospitalarias • La más frecuente de todas es la infección urinaria, causada por el uso o la manipulación de sondas. Ya que algunas bacterias hacen biofilms, y colonizan la sonda. • Los patógenos causales mas frecuentes son la E. coli, BGN, Enterococcus spp., Cándida spp. • Se previenen mediante: - Uso racional de sondas - Técnica aséptica en su colocación y manipulación - Manipularla lo menos posible - Sacarla lo antes posible! • De ser posible para tomar la muestra cambiar la sonda y obtenerla desde la sonda recién colocada. Infecciones intrahospitalarias Infecciones de herida quirúrgica • S. aureus, S. epidermidis, Enterococcus spp. son los más frecuentes. • Si se desencadena en menos de 24 horas pensar en Clostridium spp. o S. agalactiae. • Se previenen con una buena técnica quirúrgica, y con el baño previo con jabón con iodo los tres días previos. SAMR • Primer aislamiento: un año después de la aparición de la meticilina (antibiótico que no se usa en la clínica, pero representa a las penicilinas en la confección de antibiogramas). • En hospitales su prevalencia es de hasta 40- 50%. • Todas las cepas son resistentes a meticilina y cefalosporinas. Algunas cepas son resistentes a aminoglucósidos, quinolonas y macrólidos. • El tratamiento de elección actualmente es la vancomicina. Aunque… Procesamiento Procesamiento • Nos llega al laboratorio una muestra correcta y oportunamente tomada que es a su vez correctamente transportada. Es representativa, y suponemos que será también significativa (esto último lo terminaremos de averiguar durante el procesamiento). • El médico que nos envía la muestra tiene una sospecha diagnóstica, que nos informa. A partir de esto tenemos que procesar la muestra. Generalmente la persona que remite la muestra nos informa lo que quiere que hagamos con ella en el laboratorio, es decir, donde quiere que la sembremos y lo que quiere que busquemos. También es posible que en el laboratorio haya un protocolo que nos indique dependiendo del tipo de muestra, qué técnicas debemos aplicar. Procesamiento de la muestra Microscopía • 1- Con tinción • 2- Sin tinción Cultivo Otros • 1- Medios líquidos • 2- Medios sólidos • Búsqueda de antígenos • Diagnóstico indirecto Medios de cultivo Crecimiento microbiano • Engloba todos los procesos que llevan al aumento de número de un microorganismo, ya sea en la naturaleza, en una infeccion o en un cultivo. • Es necesario que haya un adecuado metabolismo, en un marco de regulación de los procesos metabólicos para llegar a la división celular. Medios de Cultivo • Un medio de cultivo es una solución de nutrientes que permite el crecimiento de un microorganismo (bacteria, hongo o parásito). Pueden ser sólidos o líquidos. • Para “cultivar” un virus debemos realizarlo en células (cultivo celular), recordemos que los virus son parásitos intracelulares obligados. • La introducción del microorganismo en el medio se denomina “inoculación”. Medios de Cultivo • Pueden ser sólidos o líquidos. • En un medio sólido veo colonias. En un medio líquido mediré la turbidez del mismo para determinar el crecimiento. • Siembra semicuantitativa: Se realizan 3 o 4 estrías, y se evalúa cuántas estrás presentan crecimiento de colonias. • Siembra cuantitativa: con una micropipeta se inocula una cantidad conocida de muestra y se evalúa cuántas colonias crecieron con esa cantidad. En bacteriología se cuantifica como unidades formadoras de colonia (UFC) por mililitro. Medios de Cultivo • La elección o el armado del medio de cultivo dependerá de la sospecha que yo tenga acerca del microorganismo causante de la infección. Las infecciones suelen ser causadas por un número restringido de microorganismos cuando pensamos en un tipo de infeccion en un paciente con ciertas características y teniendo en cuenta la epidemiología del lugar. Entonces, pensando en los microorganismos que pueden causar la infección en cuestión, sembraré la muestra en determinados medios. • Es importante tener en cuenta el metabolismo del bicho sospechado: si yo pienso en anaerobios, debo cultivarlo en medios especiales para el caso. Cultivo LOS CULTIVOS SON MUY UTILIZADOS EN BACTERIOLOGÍA Y EN MICOLOGÍA, NO TANTO EN PARÁSITOS Y EN VIROLOGÍA (CASI NADA). Medios de Cultivo: Bacteriología Medios sólidos Medios líquidos Medios de Cultivo: Bacteriología Siembra en tres estrías Agar Nutritivo Medios todo Agar Sangre propósito Agar Chocolate (enriquecido) Medios de Cultivo: Diferencial y selectivo Agar Mc. Conkey: Violeta de Genciana (inhibe Gram negativos) + lactosa + colorante sensible al ácido Agar Levine: Eosina + Azul de metileno (inhibe cocos positivos) + lactosa Cultivo de hongos: microcolonias antibiograma
