COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA Rev. No.: 0 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS FECHA: 2011-02-16 CLAVE: CCAYAC-P-058 3.3 BLANCO DE MUESTRA: Son matrices que no contienen el analito de interés (placebo). Son difíciles de obtener pero son necesarios para estimar las interferencias que pudieran encontrarse durante el análisis de las muestras de prueba. 3.4 CRITERIOS DE ACEPTACIÓN: Parámetros bajo los cuales el resultado de una prueba será considerado aceptable. 3.5 CURVA DE CALIBRACIÓN: Es la representación gráfica de la señal medida como una función de cantidad del analito. 3.6 INCERTIDUMBRE: Estimación que caracteriza el intervalo de valores, dentro de los cuales se encuentra el valor convencionalmente verdadero de la magnitud medida. 3.7 INTERVALO DE TRABAJO: Intervalo comprendido entre las concentraciones superior e inferior (incluyendo dichas concentraciones) y para las que se ha demostrado que el analito es cuantificado con un nivel satisfactorio de repetibilidad, recuperación y linealidad. 3.8 INTERVALO LINEAL: Es la capacidad de un método analítico para dar resultados que son directamente proporcionales a la concentración del analito dentro de un intervalo dado. 3.9 LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN: Es la concentración más baja a la cual el analito puede cuantificarse con una precisión y veracidad aceptables bajo las condiciones experimentales establecidas. 3.10 LÍMITE DE DETECCIÓN: Es la concentración más baja a la cual puede detectarse el analito pero no necesariamente cuantificarse bajo las condiciones experimentales establecidas. 3.11 MATRIZ O PLACEBO: Muestra que contiene todos los componentes de un producto a excepción del analito. 3.12 MÉTODO NORMALIZADO: Proceso de medición robusto donde pequeñas variaciones en el procedimiento no deben producir de forma imprevista grandes variaciones en los resultados. 3.13 MÉTODO NO NORMALIZADO: Método alternativo que demuestra o estima el mismo analito tal cual se mide utilizando el método normalizado. 3.14 MUESTRA ADICIONADA O FORTIFICADA: Porción representativa del material a evaluar, a la que se le adicionan cantidades conocidas del analito de interés. 2 / 20 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA Rev. No.: 0 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS FECHA: 2011-02-16 CLAVE: CCAYAC-P-058 3.15 PARÁMETRO DE DESEMPEÑO: Parámetro específico a evaluar en una validación. 3.16 RECUPERACIÓN O RECOBRO: Cantidad del analito recuperada en la porción de muestra o muestra adicionada cuando esta es conducida a través del método analítico completo, y que permite evaluar la eficiencia de la extracción, proceso de preparación e interferencias que puedan existir al aplicarlo. Se expresa en términos de porcentaje. 3.17 REPETIBILIDAD: Grado de concordancia entre resultados analíticos individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homogénea por un solo analista, usando los mismos instrumentos y método en intervalos cortos de tiempo. 3.18 REPRODUCIBILIDAD (PRECISIÓN INTERMEDIA): Grado de concordancia entre resultados analíticos individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homogénea por dos analistas o instrumentos diferentes, usando el mismo método en diferentes días. 3.19 RESPUESTA ANALÍTICA: Lectura obtenida al aplicar un método analítico, como pueden ser el área o altura del pico en un cromatograma, lectura de absorbancia, cuentas de iones en un Espectro de Masas, lectura en mV, mL gastados en volumetría, diferencia de peso en un gravimétrico, entre otros. 3.20 RESULTADO DE ENSAYO: Valor de un mensurando obtenido tras la realización de un método de ensayo específico. 3.21 ROBUSTEZ: Es la medida de la capacidad del método analítico de permanecer inalterado por pequeñas, pero deliberadas variaciones (efecto de cambio en las condiciones) en los parámetros del mismo, proporcionando un índice de su confiabilidad durante su uso normal. 3.22 SELECTIVIDAD: Es la capacidad de un método analítico para medir solamente lo qué se pretende que se mida. 3.23 SENSIBILIDAD: Es el cambio en la respuesta del instrumento que corresponde a un cambio en la concentración del analito. Es la pendiente del intervalo de trabajo y cuanto mayor es esta, mayor es la sensibilidad del método. 3.24 SESGO: Es la diferencia entre el valor promedio obtenido de los resultados de prueba con respecto a un valor de referencia aceptado o conocido. 3.25 VALIDACIÓN: Es el proceso que establece, mediante estudios de laboratorio, que las características de desempeño del método, satisfacen los requisitos para su aplicación analítica. 3 / 20 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA Rev. No.: 0 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS FECHA: 2011-02-16 CLAVE: CCAYAC-P-058 3.26 VALIDACIÓN PARCIAL (confirmación del método): Evidencia objetiva para demostrar que al aplicar un método normalizado, se cumple con las especificaciones del mismo y se cuenta con la competencia técnica para realizarlo adecuadamente tomando en consideración sus propias instalaciones, equipo y personal. 4. DOCUMENTOS APLICABLES 1. AOAC. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals. December 2002. 2. CENAM. Guía para estimar la incertidumbre de la medición. Abril 2004. 3. CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de medición de conductividad electrolítica. Abril 2008. 4. CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean las técnicas de Espectrofotometría de Absorción Atómica y de Emisión y Atómica con Plasma Acoplado Inductivamente. Abril 2008. 5. CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean las técnicas de Cromatografía de Gases (GC) y Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución (HPLC). Abril 2008. 6. CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de Gravimetría de Masa. Abril 2008. 7. CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de medición de pH. Abril 2008. 8. CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de Titulación volumétrica. Abril 2008. 9. CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de Espectrofotometría de Ultravioleta-Visible. Abril 2008. 10. Colegio Nacional de Químicos Farmacéuticos Biólogos. Guía de Validación de Métodos Analíticos. Edición 2002. 11. Directiva 96/23/CE en cuanto al funcionamiento de los métodos analíticos y la interpretación de los resultados. Agosto 2002. 4 / 20 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS FECHA: 2011-02-16 CLAVE: CCAYAC-P-058 Rev. No.: 0 12. EMA. Documento MP-CA005-01. Manual de Procedimientos. Incertidumbre de mediciones. Política. 13. Eurachem. The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics. First Edition 1998. 14. Eurachem-CITAC. Guide CG4 Quantifying Uncertainty and Analytical Measurements. Second Edition. QUAM :2000.1 15. IUPAC. Harmonized Guidelines for Single Laboratory Validation of Methods of Analysis. Pure Appl. Chem., Vol. 74, No. 5, pp. 835–855, 2002. 16. NMX-CH-140-IMNC-2002. Guía para la expresión de incertidumbre en las mediciones. 17. RILAA/INPAZ. Curso a distancia sobre Validación de Métodos Químicos. Buenos Aires, Argentina. 2005. 18. Eurolab. Measurement Uncertainty in Testing. A short introduction on how to characterize accuracy and reliability of results including a list of useful references. Techical Report No. 1/2002. June 2002. 5. DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD 5.1 CRITERIO No. 1 Clasificar el método como Normalizado o no Normalizado conforme a lo siguiente: 5.1.1 Método Normalizado es aquel método publicado como primera instancia en: 1. Normas Oficiales Mexicanas (NOM) 2. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (FEUM) 3. Normas Mexicanas (NMX). Como segunda instancia: 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. Métodos Oficiales del AOAC Standard Methods Environmental Protection Agency (EPA) Pesticide Analytical Manual (PAM) Collaborative International Pesticides Analytical Council (CIPAC) United States Pharmacopoeia (USP) British Pharmacopoeia (BP) American Society for Testing Materials (ASTM) International Standard Organization (ISO) 5 / 20 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS FECHA: 2011-02-16 CLAVE: CCAYAC-P-058 Rev. No.: 0 13. 14. 15. 16. 17. 5.1.2 Codex Alimentarius Food and Drug Administration (FDA) Food and Agriculture Organization (FAO) European Commission (CE) United States Department of Agriculture (USDA) Método no Normalizado es aquel: 1. Desarrollado por el laboratorio (método propio). 2. Método obtenido de publicaciones científicas (Journals, tesis, etc). 3. Método normalizado modificado, ampliado o usado fuera de su alcance. 5.2 CRITERIO No. 2 Considerar los siguientes parámetros de desempeño de acuerdo al tipo de método. Métodos normalizados Parámetro Fisicoquímicos Físicos Cuantitativos Cualitativos Métodos no normalizados Fisicoquímicos Intervalo lineal y de trabajo Límite de detección Límite de cuantificación Recuperación Sesgo Repetibilidad Reproducibilidad Incertidumbre Sensibilidad Selectividad Robustez Nota: Los parámetros de desempeño a considerar para los métodos fisicoquímicos dependerá del tipo de prueba de que se trate. 6 / 20 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA Rev. No.: 0 5.3 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS FECHA: 2011-02-16 CLAVE: CCAYAC-P-058 CRITERIO No. 3 Clasificar el método por tipo de prueba Tipo de prueba Metodología Espectrofotometría UV-Visible Turbiedad Espectrofotométrica Absorción Atómica (AA), Plasma Inductivamente Acoplado (ICP) Cromatográfica Potenciométrica Volumétrica Gravimétrica Física (cuantitativa) Cromatografía de Líquidos (HPLC), Cromatografía de Gases (GC), Cromatografía de Líquidos-Masas (HPLC-MS), Cromatografía de Gases- Masas (GC-MS) pH Aniones y cationes por técnica de Ion selectivo Conductimetría Valoraciones por titulación (manual y automática) Pérdida por secado Residuo de ignición Materia extraña Densidad relativa Disolución Desintegración Índice de refracción Rotación óptica Punto de fusión Polarimetría Espectrometría de Infrarrojo Variación de volumen Uniformidad de dosis Osmolaridad Temperatura de fusión Dispositivos médicos Color Viscosidad Temperatura de fusión, etc. 7 / 20 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS FECHA: 2011-02-16 CLAVE: CCAYAC-P-058 Rev. No.: 0 Tipo de prueba Metodología Física (cualitativa) Pruebas límites de cloruros, fosfatos, hierro, fluoruros, sulfatos, etc Metales pesados (cualitativa) Inhibidores (formaldehído, sales cuaternarias, oxidantes, derivados clorados, etc. CRITERIO No. 4 Establecer los parámetros finales de desempeño con base al tipo de prueba: Espectrofotométrica Cromatográfica Potenciométrica Volumétrica Gravimétrica Física Tipo de prueba Intervalo lineal y de trabajo SI SI SI SI SI NO Límite de detección SIa SIa NO NO NO SIb Límite de cuantificación SIa SIa SIa SIa SIa NO Recuperación SI SI NO SI SI NO Sesgo SI SI SI SI SI NO Repetibilidad SI SI SI SI SI SIc Reproducibilidad SI SI SI SI SI SIc Incertidumbre SI SI SI SI SI SIc Sensibilidad SId SId SId,e SIe SId NO Selectividad SId SId SId,e SI SI SIb Robustez SId SId SId SId SId SId Parámetro de desempeño Solo para análisis a nivel de trazas (ppm, ppb, ppt) b Solo métodos cualitativos. c Solo métodos cuantitativos. d Solo aplica para métodos no normalizados. e Solo para el análisis de aniones y cationes por ión selectivo a Nota: Solo para métodos gravimétricos y volumétricos la selectividad se sustenta con los resultados de linealidad, recuperación, repetibilidad y reproducibilidad, si estos cumplen con los criterios de aceptación establecidos 8 / 20 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA Rev. No.: 0 5.5 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS FECHA: 2011-02-16 CLAVE: CCAYAC-P-058 CRITERIO No. 5 Seleccionar el tipo de matriz a evaluar conforme a: 1. La más solicitada. 2. La más compleja. 3. Para métodos generales que apliquen a diferentes matrices; FEUM, Residuos orgánicos, metales contaminantes, etc. Se debe seleccionar una matriz representativa por grupo (alimentos, principio activo, tipo de presentación, entre otros) a. Alimentos: lácteos, cárnicos, productos de la pesca agua, cereales, frutas, vegetales, productos de panificación, miel, productos de confitería, especias, entre otros. b. Medicamentos: cápsula, gragea, tableta, suspensión, jarabe, ungüento, colirio, espuma, gel, supositorio, parche, jalea, ovulo, entre otros. 9 / 20 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS CLAVE: CCAYAC-P-058 FECHA: 2011-02-16 Rev. No.: 0 5.6 CRITERIO No. 6 Evaluar los parámetros de desempeño correspondientes como se detalla en las siguientes tablas: Parámetro Muestras Repeticiones Calcular/determinar Observaciones a) Utilizar niveles establecidos en la curva de calibración ó utilizar la tabla guía contenida en el anexo A. a) Graficar respuesta analítica (y) vs. nivel de concentración adicionado (x) Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas Intervalo lineal Mínimo 5 niveles diferentes de concentración Cada nivel por triplicado b) Confirmar visualmente la existencia de linealidad del intervalo. c) Elaborar gráfico de residuales. d) Confirmar aleatoriedad de los residuales alrededor de la recta Ver nota 2 Intervalo de trabajo Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas Mínimo 5 niveles diferentes de concentración. a) Considerar los niveles que cumplen con los criterios de recuperación y repetibilidad establecidos. Cada nivel por triplicado b) Graficar la concentración obtenida (y) vs. la concentración adicionada (x) c) Calcular la pendiente (m) y el coeficiente de correlación (r ). 10 / 20 b) Los niveles de concentración deben estar igualmente espaciados en el intervalo de interés. c) Considerar en el intervalo el valor de la especificación y/o los valores de aceptación y rechazo y estar en la medida de lo posible al centro de este. d) Reportar el intervalo de concentraciones obtenido en las unidades establecidas por el método. a) Utilizar los datos obtenidos en la estimación del intervalo lineal. b) Reportar el intervalo de concentraciones obtenido en las unidades establecidas por el método COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA Rev. No.: 0 Parámetro Límite de detección (pruebas cualitativas) CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS CLAVE: CCAYAC-P-058 FECHA: 2011-02-16 Muestras Repeticiones Calcular/determinar Observaciones 10 replicas de cada nivel Elaborar tabla de respuesta de resultados positivos y negativos con respecto a la concentración Concentración mínima en la cual se obtienen 10 resultados positivos Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas. Mínimo 5 niveles diferentes de concentración. a) Límites de detección y cuantificación Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas Mínimo 5 niveles diferentes de concentración. b) Cada nivel por triplicado Calcular la pendiente (m) y la desviación estándar de la ordenada al origen (sbo) de la respuesta analítica (y) vs nivel de concentración adicionado (x) Estimar los límites con las siguientes ecuaciones: LD = LC = Recuperación y sesgo Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas. Mínimo 5 niveles diferentes de concentración Cada nivel por triplicado 3.3 * sbo m b) Reportar los límites estimados estadísticamente en las unidades establecidas por el método. c) Considerar como límite práctico de cuantificación el nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo. 10 * sbo m a) Calcular la concentración recuperada para cada nivel de concentración adicionado. b) Para el sesgo, efectuar la resta aritmética de la concentración añadida menos la concentración recuperada. 11 / 20 a) Utilizar los datos obtenidos en la estimación del intervalo de trabajo, a) Utilizar los datos obtenidos en la estimación del intervalo de trabajo b) Reportar la recuperación como intervalo en % y el sesgo como intervalo en las unidades establecidas por el método. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA Rev. No.: 0 Parámetro CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS CLAVE: CCAYAC-P-058 FECHA: 2011-02-16 Muestras Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas. Repetibilidad Tres niveles diferentes de concentración (niveles inferior, medio y superior estimados en el intervalo de trabajo) Repeticiones Cada nivel por sextuplicado. Calcular/determinar Observaciones a) Analizar las muestras por un mismo analista (analista 1) en 2 días diferentes (3 niveles/triplicado /día). a) Utilizar la información obtenida en la estimación del intervalo de trabajo como los datos para el día 1 (cada nivel por triplicado por día). b) Calcular el % de recuperación de los 6 resultados para cada nivel c) Calcular la media (x), desviación estándar (sr) y el coeficiente de variación (CVr) de los % de recuperación obtenidos para cada nivel adicionado. b) Reportar la desviación estándar (sr) o coeficiente de variación (CVr) máximos obtenidos. c) Si no se cuenta con dos analistas o dos equipos para estimar la reproducibilidad, estimar solo la repetibilidad con el mismo analista pero utilizando un tercer día. a) Analizar las muestras en 2 días diferentes (3 niveles/triplicado/día) y por un analista diferente (analista 2) Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas. Reproducibilidad Tres niveles diferentes de (Precisión concentración (niveles inferior, intermedia) medio y superior estimados en el intervalo de trabajo). Cada nivel por sextuplicado. b) Calcular el % de recuperación de los 6 resultados para cada nivel c) Combinar estos resultados con los datos obtenidos en la estimación de la repetibilidad y calcular la media (x), desviación estándar (sR) y el coeficiente de variación (CVR) de los % de recobro para cada nivel. 12 / 20 Reportar la desviación estándar (sR) o coeficiente de variación (CVR) máximos obtenidos COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA Rev. No.: 0 Parámetro CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS CLAVE: CCAYAC-P-058 FECHA: 2011-02-16 Muestras Repeticiones Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas. Sensibilidad Mínimo 5 niveles diferentes de concentración. Cada nivel por triplicado Calcular/determinar Observaciones a) Graficar la respuesta analítica (y) vs la concentración adicionada (x) a) Utilizar los datos obtenidos en la estimación del intervalo de trabajo b) Calcular la pendiente de la recta (m) b) Reportar la relación entre el cambio de respuesta analítica por unidad de concentración. Pueden emplearse técnicas confirmatorias para asegurar la identidad del analito como son la utilización de detectores de espectrometría de masas, arreglo de diodos o infrarrojo. Cuando no se tienen estándares de interferencias o impurezas se pueden aplicar las siguientes condiciones de degradación: Selectividad Blancos de muestra o muestras adicionadas con cantidades conocidas de interferencias, productos de degradación o impurezas Por duplicado Evaluar si la presencia de las interferencias, impurezas o productos de degradación inhiben o incrementan la detección del analito. a) Temperatura: 70-120 °C o 20 °C por debajo de su punto de fusión, durante 2 a 4 semanas. b) Luz UV, luz fluorescente y/o humedad relativa por un tiempo apropiado. c) pH 1 a 2 y/o 10 a 12 y someterlas a 60-80 °C por un tiempo apropiado. d) Para líquidos y semisólidos adicionar peróxido de hidrógeno. 13 / 20 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA Rev. No.: 0 Parámetro CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS CLAVE: CCAYAC-P-058 FECHA: 2011-02-16 Muestras Repeticiones Calcular/determinar Observaciones a) Identificar de 4 a 7 factores que puedan tener un efecto significativo en el desempeño del método y variar ligeramente cada uno ellos. b) Efectuar una serie de 8 combinaciones de valores nominales con variaciones deliberadas Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas Robustez Concentración equivalente al nivel medio estimado en el intervalo de trabajo 8 muestras por duplicado c) Analizar una muestra por duplicado con cada serie de combinaciones d) Calcular las diferencias de las mediciones de los subgrupos. e) Graficar en una línea los valores de las diferencias de menor a mayor. f) Calcular la desviación estándar de las diferencias (sDi). 14 / 20 a) Reportar los factores que más influyen en el resultado final. b) Establecer si el método es robusto frente a las variaciones establecidas. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA Rev. No.: 0 Parámetro CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS CLAVE: CCAYAC-P-058 FECHA: 2011-02-16 Muestras Repeticiones Observaciones Calcular/determinar a) Especificar el mensurando. b) Identificar incertidumbre Incertidumbre No aplica Utilizar la información obtenida en el proceso de validación. las fuentes de c) Cuantificar los componentes de la incertidumbre (u) d) Calcular la incertidumbre estándar combinada (uc) e) Calcular expandida(Uexp) la Puede utilizarse como guía los criterios establecidos en las referencias 2, 12, 14, 16 y 18. incertidumbre Nota 1. Cuando no sea posible adicionar de manera directa el analito en la muestra, la adición debe ser llevada a cabo en las primeras etapas. Nota 2. Para la determinación de: intervalo lineal y de trabajo, límites de detección y cuantificación, recuperación, sesgo, repetibilidad y sensibilidad se debe aplicar el método de ensayo específico por un mismo analista (el de más experiencia en el análisis) bajo las mismas condiciones. Nota 3. Para métodos físicos cuantitativos la repetibilidad y reproducibilidad se calculan en base a la lectura directa. 15 / 20 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS FECHA: 2011-02-16 CLAVE: CCAYAC-P-058 Rev. No.: 0 5.7 CRITERIO No. 7 Criterios de aceptación Parámetro Criterio de aceptación a) Comportamiento lineal en la gráfica de concentración vs respuesta analítica. Intervalo lineal b) Datos aleatorios en el gráfico de residuales a) Pendiente: valor cercano a 1 Intervalo de trabajo Límite de cuantificación práctico Límite de cuantificación estimado Límite de detección Recuperación Repetibilidad Reproducibilidad Robustez 5.8 b ) Coeficiente de correlación: r ≥ 0.98 para cuantificación de residuos e impurezas r ≥ 0.99 para cuantificación de contenido e ingrediente activo Nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo Menor o igual al nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo Los establecidos en la referencia original del método. Si no se dispone de estos datos utilizar como guía las tablas contenidas en el anexo B. Si sDi < sR el conjunto de los factores no influye en el resultado y por tanto el método es robusto. CRITERIO No. 8 Elaborar un protocolo de validación que incluya lo siguiente: Título 1.Objetivo 2. Campo de aplicación 3. Método de ensayo 4. Equipo 5. Materiales Protocolo de validación parcial o total (según aplique). Señalar asimismo el nombre y clave del método que se pretende validar. Considerar los parámetros de desempeño a evaluar y el analito a determinar Indicar el tipo de producto (s) para los cuales aplica la validación Elaborar un diagrama de flujo simplificado, que señale la metodología empleada para cuantificar el analito (método interno) Descripción general del equipo a utilizar en la validación. Indicar los materiales a utilizar separando como material de uso general y material volumétrico 16 / 20 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS FECHA: 2011-02-16 CLAVE: CCAYAC-P-058 Rev. No.: 0 6. Reactivos 7. Muestras 8. Desarrollo experimental 9. Resultados 10. Análisis estadístico 11. Criterios de aceptación a) Indicar el nombre de los reactivos a utilizar y su grado. b) Señalar los patrones a utilizar con su grado de pureza o concentración. c) Detallar la preparación de las soluciones de trabajo (soluciones que no requieren de un valor de título exacto). d) Detallar la preparación de la soluciones de referencia (soluciones que requieren de un título exacto, soluciones stock, curva de calibración, etc.). Indicar las características, forma de almacenamiento y cantidades de muestra estimadas para llevar a cabo la validación. Detallar la preparación de los blancos de muestra o muestras adicionadas. Detallar las instrucciones para cada uno de los parámetros de desempeño a ensayar. Propuesta de formato de registro Establecer para cada parámetro de desempeño la herramienta estadística a utilizar para su evaluación. Establecer los criterios de aceptación que deben cumplirse con su respectiva referencia bibliográfica. Nota: El protocolo debe incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó. 5.9 CRITERIO No. 9 Elaborar un informe de resultados de validación que incluya lo siguiente: Título 1.Objetivo 2. Campo de aplicación 3. Antecedentes 4. Equipo 5. Materiales 6. Reactivos Informe de resultados de validación parcial o total (según aplique). Señalar asimismo el nombre y clave del método que se validó. Considerar los parámetros de desempeño evaluados y el analito determinado. Indicar el tipo de producto (s) para los cuales aplicó la validación Hacer una breve explicación de las características del analito, su importancia sanitaria o nutricional, así como las especificaciones nacionales e internacionales establecidos para este. Descripción del nombre, marca, modelo, número de serie, número de identificación e intervalo de trabajo del equipo utilizado en la validación Descripción de: a) Nombre, marca y lote del material de uso general utilizado. b) Nombre, marca, clave, volumen nominal y volumen real del material volumétrico empleado a) Indicar el nombre, marca, grado, pureza, presentación y lote de los reactivos utilizados b) Indicar el nombre, marca, pureza o concentración, presentación y lote de los patrones de referencia utilizados c) Detallar la preparación de las soluciones de trabajo (soluciones que no requieren de un valor de título exacto) que se emplearon 17 / 20 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA Rev. No.: 0 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS FECHA: 2011-02-16 CLAVE: CCAYAC-P-058 d) Detallar la preparación de la soluciones de referencia (soluciones que requieren de un título exacto, soluciones stock, curva de calibración, etc.) que se utilizaron. 7. Muestras 8. Método de ensayo 9. Desarrollo experimental 10. Resultados 11. Análisis de resultados 12. Conclusión 13. Bibliografía Indicar las características, forma de almacenamiento, marca, presentación, caducidad y cantidades de muestra utilizadas para llevar a cabo la validación. Detallar la preparación de los blancos de muestra o muestras adicionadas utilizados. Elaborar un diagrama de flujo simplificado, que señale la metodología empleada para cuantificar el analito (método interno) Detallar como se llevaron a cabo los ensayos de cada uno de los parámetros de desempeño. Presentación de resultados en forma de tablas, señalando fechas de inicio y término, analistas, laboratorio, analito, matriz, unidades y clave de bitácora o registro primario Presentar en forma de tabla los criterios de aceptación considerados y los resultados obtenidos y hacer las observaciones correspondientes. Efectuar una conclusión final en donde se señale que el método se ajusta al uso propuesto (Numeral 5.4.3 17025) Referencias utilizadas. Los que aplique: 14. Anexos Bases de datos utilizadas Cromatogramas, espectros, resultados impresos, etc. Certificados de análisis o pureza. Certificados de trazabilidad Certificados de calibración de material. Formatos de verificación de material Gráficos de control, etc. Nota: El informe de resultados debe incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó. 6.0 NOTIFICACIÓN DE VIGENCIA Se otorga un periodo de transición de 180 días contados a partir de la fecha de publicación para que los laboratorios que se encuentren autorizados o en proceso del mismo se apeguen a estos criterios. Para los laboratorios que soliciten autorización posterior a la fecha de publicación, deberán cumplir estos criterios de inicio. Estos criterios se aplicarán en todos los procesos de evaluación que se realicen a los 180 días naturales, a partir de la fecha de publicación del documento en la página web de la COFEPRIS. 18 / 20 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA Rev. No.: 0 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS FECHA: 2011-02-16 CLAVE: CCAYAC-P-058 ANEXOS Anexo A. Guía para considerar los niveles del intervalo lineal Determinación Intervalo recomendado Contenido o principio activo 80 a 120 % del contenido del marbete o especificación Cuantificación de una impureza Uniformidad de contenido Prueba de disolución Residuos y contaminantes 50 a 120 % el valor de la especificación 70 a 130 % la concentración declarada en el marbete Mínimo ± 20% el intervalo establecido 0 a 150 % el valor de la especificación. Anexo B.- Criterios de aceptación Recuperación para contenido en alimentos y agua Concentración del analito 0.1 a 1 % 1 a 10 % 10 a 99 % 100 % Criterio de aceptación 90-108% 92-105% 95-102% 98-101% Recuperación para residuos y contaminantes en alimentos y agua. Concentración del analito < 1 µ g/kg ó µ g/L 1 a 10 µ g/kg ó µ g/L 10 a 100 µ g/kg ó µ g/L 0.1 a 100 mg/kg ó mg/L 100 a 1000 mg/kg ó mg/L Criterio de aceptación 50-120% 60-120% 70-120% 70-110% 85-110% Recuperación en productos farmacéuticos Prueba Cromatográfica Volumétrica Espectrofotométrica Criterio de aceptación 98-102% 98-102 % 97-103 % 19 / 20 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA Rev. No.: 0 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS FECHA: 2011-02-16 CLAVE: CCAYAC-P-058 Repetibilidad y reproducibilidad para contenido en alimentos y agua. Concentración del analito 0.1 a 1 % 1 a 10 % 10 a 99 % 100 % Repetibilidad ( r) Reproducibilidad (R ) CVr ≤ 3% CVr ≤ 2% CVr ≤ 1.5 % CVr ≤ 1% CVR ≤ 6% CVR ≤ 4% CVR ≤ 3 % CVR ≤ 2% Repetibilidad y reproducibilidad para residuos y contaminantes en alimentos y agua. Concentración del analito < 1 µ g/kg ó µ g/L 1 a 10 µ g/kg ó µ g/L 10 a 100 µ g/kg ó µ g/L 0.1 a 100 mg/kg ó mg/L 100 a 1000 mg/kg ó mg/L Repetibilidad ( r) Reproducibilidad (R ) CVr ≤ 35% CVr ≤ 30% CVr ≤ 20% CVr ≤ 15% CVr ≤ 10 % CVR ≤ 53% CVR ≤ 45% CVR ≤ 32% CVR ≤ 23% CVR ≤ 16% Repetibilidad y reproducibilidad en productos farmacéuticos Prueba Cromatográfica Volumétrica Espectrofotométrica Repetibilidad CVr ≤ 2 % CVr ≤ 2 % CVr ≤ 3 % 20 / 20 Reproducibilidad CVR ≤ 2 % CVR ≤ 2 % CVR ≤ 3 %
