INS-CLV-GCS-XXX-EC INTEROC S.A Determinación de Topramezone en Material Técnico y Formulaciones Nombre Cargo Rol Fecha Dario Pabon Castellanos Analista de Calidad /Analista de Cromatografía Elaborador 02/08/2021 Victor Berrezueta Morales Coordinador de Cromatografía Revisor 06/08/2021 Andrea Mancheno Urquiza Coordinador de Aseguramiento de la Calidad Revisor Henry Espinoza Ortiz Jefe de Control de Calidad Revisor Cecilia Zambrano Lopez Gerente de Aseguramiento de Calidad Aprobador Información confidencial. Se prohíbe toda divulgación, comunicación, reproducción o uso no autorizado. INSTRUCTIVO DE METODOS ANALTICOS Determinación de Topramezone en Material Tecnico y Formulaciones CÓDIGO: INS-CLV-GCS-XXX-EC 1. DESCRIPCIÓN DEL DOCUMENTO ESTÁNDAR Este entregable es elaborado para relevar el conjunto actividades y pasos para realizar un ensayo en específico. 2. OBJETIVO Este documento tiene por objeto describir la metodología para la determinación de Topramezone presente en formulaciones agroquímicas. 3. ALCANCE 3.1. Tipo de muestras. Este documento tiene como alcance el Material Técnico y todas las formulaciones de que se elaboran o maquilan en Planta Infinita que contengan Topramezone. 3.2. Interferencias conocidas Contaminación cruzada. Presencia de Burbujas. Turbidez de la muestra. Pureza de los reactivos. Deterioro de la Columna. 3.3. Intervalo de trabajo NO APLICA 3.4. Límite de detección y/o cuantificación NO APLICA 4. DOCUMENTOS RELACIONADOS Manual de Calidad de Laboratorio. Limpieza del Material de Vidrio en el Laboratorio → INS-CLV-GCS-040. Tratamiento de Residuos Peligrosos → POL-CLV-GCS-002. Manejo de Balanza Analítica → INS-CLV-GCS-031. Manejo de Potenciómetro → INS-CLV-GCS-043. Operación y Limpieza del Ultrasonido → INS-CLV-GCS-096-EC. Manejo de Cromatógrafo Líquido → INS-CLV-GCS-036. Identificación de Muestras para el Laboratorio → INS-CLV-GCS-069. Reporte y Almacenamiento de datos primarios provenientes del laboratorio de Control de Calidad → INS-CLV-GCS-068. Manejo fuera de especificaciones → PRO-CLV-GCS-026. Información confidencial. Se prohíbe toda divulgación, comunicación, reproducción o uso no autorizado. 2/9 INSTRUCTIVO DE METODOS ANALTICOS Determinación de Topramezone en Material Tecnico y Formulaciones CÓDIGO: INS-CLV-GCS-XXX-EC 5. GLOSARIO DE TÉRMINOS Abreviatura Nombre ACN Acetonitrilo MeOH Metanol HPLC Cromatógrafo líquido de alta eficacia GC Cromatógrafo de Gases PVDF Fluoruro de Polivinilideno V/V Volumen / Volumen P/V Peso / Volumen P/P Peso / Peso g/L Gramos / Litros g/Kg Gramos / Kilogramos 6. RESPONSABLES Función Responsable Analista de Cromatografía Coordinador de Cromatografía Revisar el Instructivo de Método Analítico y en función de este realizar el análisis descrito. Garantizar la correcta ejecución de lo descrito en el presente instructivo. Asegurar la calidad de los datos reportados. Verificar la correcta ejecución de lo descrito en el Instructivo de Método Analítico. Verificar los datos reportados y la correcta emisión y almacenamiento de reportes y documentación relacionada con el análisis. 7. REQUERIMIENTOS GENERALES 7.1. CONDICIONES AMBIENTALES El ensayo se realiza en las condiciones ambientales del laboratorio, las cuales se encuentran en un rango: Temperatura → 15°C a 25°C Humedad → Menor o igual a 80% Estas condiciones se registran en el Templates CLV-GCS-027. 7.2. TEMPERATURA DE LAS MUESTRAS DE ENSAYO Información confidencial. Se prohíbe toda divulgación, comunicación, reproducción o uso no autorizado. 3/9 INSTRUCTIVO DE METODOS ANALTICOS Determinación de Topramezone en Material Tecnico y Formulaciones CÓDIGO: INS-CLV-GCS-XXX-EC Las muestras deben estar a temperatura ambiente en función del rango establecido para la temperatura del laboratorio. 8. DESCRIPCIÓN DEL INSTRUCTIVO 8.1. MATERIALES Columna Analítica HPLC/GC. Filtros de jeringa de PVDF de 0.22 µm. Membranas Filtrantes de PVDF de 0.45 µm. Frascos ámbar de tapa rosca de 30.0 mL. Frascos ámbar de tapa rosca de 50.0 mL. Frascos ámbar de tapa rosca de 100.0 mL. Pipeta automática de 5.0 mL de volumen ajustable. Puntas descartables de 5.0 mL. Baño Ultrasónico. Espátula. Jeringas descartables. Viales y tapas para HPLC/GC. 8.2. EQUIPOS Código Nombre del equipo Instructivo de uso INS-029 Potenciómetro INS-CLV-GCS-043 INS-020 Balanza Analítica BOECO INS-CLV-GCS-031 INS-031 Balanza Analítica BOECO BAS-31 INS-CLV-GCS-031 INS-019 Cromatógrafo de Líquidos AGILENT 1200 INS-CLV-GCS-036 INS-036 Cromatógrafo de Líquidos AGILENT 1220 INS-CLV-GCS-036 INS-060 Cromatógrafo de Líquidos THERMO ULTIMATE 3000 INS-CLV-GCS-036 INS-014 Ultrasonido INS-CLV-GCS-096-EC 8.3. REACTIVOS / SOLUCIONES 8.3.1. Estándares Analíticos. - Topramezone (CAS. 210631-68-8). 8.3.2. Reactivos. - Acetonitrilo Grado HPLC (CAS 75-05-8). - Acetato de Amonio GR (CAS 631-61-8). - Hidroxido de Amonio 28-30% (CAS 1336-21-6). - Agua Tipo 1. Información confidencial. Se prohíbe toda divulgación, comunicación, reproducción o uso no autorizado. 4/9 INSTRUCTIVO DE METODOS ANALTICOS Determinación de Topramezone en Material Tecnico y Formulaciones CÓDIGO: INS-CLV-GCS-XXX-EC 8.3.3. Disolventes y/o Fase Móvil. - Disolvente 1 → Acetonitrilo / Hidroxido de amonio (1000/1) - Disolvente 2 → Acetonitrilo / Agua (90/10) ajustado a pH 9 con Hidroxido de Amonio. 8.4. DESARROLLO 8.4.1. Preparación de fase móvil. En un matraz volumétrico de 1000.0 mL pesar 8.4.2. Condiciones Cromatográficas. - Fase móvil: Acetonitrilo / Agua (55/45) Longitud de onda: 277 nm Columna: Zorbax Eclipse XDB-C18 (L1) - 250x4.6 mm; 5 µm Volumen de inyección: 10.0 µL Temperatura Columna: 30°C Flujo: 1.0 mL/min Tiempo de retención: Thiram alrededor de 4.8 minutos Pirimetanil alrededor de 7.2 minutos Tiempo de corrida: Alrededor de 11.0 min (Estándar y Muestra) 8.4.3. Preparación del Sistema Cromatográfico. - - Equilibrar la columna mediante el bombeo de la fase móvil a través de la misma a flujo de 0,2 ml/min. Incrementando el flujo de 0.2 mL/min hasta llegar al flujo descrito en el punto 8.4.1.con una frecuencia de 5 minutos, monitoreando que la presión del sistema no exceda los límites de tolerancia de la columna. Estabilizar el equipo con las condiciones del método descrito por mínimo 30 minutos. A continuación, se inyecta el punto medio de la curva para observar la resolución del pico del Ingrediente Activo. 8.4.4. Preparación de la solución Estándar Stock. - Pesar con exactitud 50.0 mg de estándar de Thiram y 30.0 mg de estándar de Pirimetanil (con precisión de 1 mg). Adicionar (por peso) 50.0 mL del disolvente 1. Colocar en una base de agitación magnética durante 5 minutos hasta completa disolución, con ayuda de un vortex homogenizar la solución. Rotular y almacenar en Freezer después de utilizar. 8.4.5. Preparación de Estándares de Trabajo. Información confidencial. Se prohíbe toda divulgación, comunicación, reproducción o uso no autorizado. 5/9 INSTRUCTIVO DE METODOS ANALTICOS Determinación de Topramezone en Material Tecnico y Formulaciones - CÓDIGO: INS-CLV-GCS-XXX-EC Nivel Alícuota (mL) Disolvente 2 (mL) Total (mL) 1 1.0 19.0 20.0 2 3.0 17.0 20.0 3 5.0 15.0 20.0 Tomar de la solución estándar stock, en recipientes separados, alícuotas (por peso) de 1.0, 3.0 y 5.0 mL. Adicionar a cada uno (por peso) el volumen del disolvente 2 necesario para completar 20.0 mL; 19.0, 17.0 y 15.0 mL respectivamente. Tapar inmediatamente y agitar. Rotular y almacenar en Freezer después de utilizar. Filtrar en viales con ayuda de un filtro de jeringa de PVDF de 0.22 µm. 8.4.6. Manejo de Muestras. - La Identificación y almacenamiento de las muestras se lo realiza de acuerdo al Instructivo Operativo - Identificación de Muestras para el Laboratorio Código INS-CLVGCS-069. - La cantidad requerida para realizar el ensayo es de mínimo 100 mL para líquidos solubles y concentrados emulsionables; de 250 mL para suspensiones concentradas. - Las muestras pueden venir en recipientes transparentes, blancos o ámbar de PET (Tereftalato de polietileno). 8.4.7. Preparación de Material Técnico. - Pesar por triplicado (con precisión de 1 mg) alrededor de 50.0 mg de Thiram o 30.0 mg de Pirimetanil según corresponda el material técnico a analizar. - Adicionar (por peso) 50.0 mL del disolvente 1. - Colocar en una base de agitación magnética durante 5 minutos hasta completa disolución, con ayuda de un vortex homogenizar la solución. - Tomar una alícuota (por peso) de 3.0 mL. - Adicionar (por peso) 17.0 mL del disolvente 2. - Tapar inmediatamente y agitar. - Filtrar en viales con ayuda de un filtro de jeringa de PVDF de 0.22 µm. 8.4.8. Formulaciones. - Pesar por triplicado (con precisión de 1 mg) una cantidad de formulado que contenga el equivalente a 50.0 mg de Thiram y/o 30.0 mg de Pirimetanil según corresponda el formulado a analizar. - Adicionar (por peso) 50.0 mL del disolvente 1. - Colocar en una base de agitación magnética durante 10 minutos hasta completa suspensión de la muestra, con ayuda de un vortex homogenizar la solución. - Tomar una alícuota (por peso) de 3.0 mL. - Adicionar (por peso) 17.0 mL del disolvente. - Tapar inmediatamente y agitar. - Filtrar en viales con ayuda de un filtro de jeringa de PVDF de 0.22 µm. Información confidencial. Se prohíbe toda divulgación, comunicación, reproducción o uso no autorizado. 6/9 INSTRUCTIVO DE METODOS ANALTICOS Determinación de Topramezone en Material Tecnico y Formulaciones CÓDIGO: INS-CLV-GCS-XXX-EC 8.5. CONTROL DE MÉTODO Inyectar por triplicado cada una de los niveles de soluciones estándar de calibración. La variación entre replica no puede ser mayor al 2% de RSD. Registrar las áreas obtenidas y trazar la curva de calibración, el coeficiente de correlación debe ser mínimo de 0.995. Determinar la pendiente y el %RSD de los valores de pendiente en cada nivel de concentración no debe ser mayor a 2.0%. Los resultados se pueden reportan en Porcentaje (%) P/V o P/P, g/L y g/Kg dependiendo del tipo de formulación de la muestra a analizar. Los Resultados se reportan con 2 cifras decimales. Las muestras se preparan por triplicado. 9. CALCULOS 9.1. Concentración de Muestra (Cm) Cm = Pm A1 × 1000 × Pm + D1 A1 + D2 Dónde: Pm: D1: A1: D2: Peso de muestra (mg) Primera dilución (mg) Primera alícuota Segunda dilución (mg) 9.2. Concentración del estándar (CST) CST = MST × PST A1 × 1000 × MST + D1 A1 + D2 Dónde: MST: PST: D1: A1: D2: Masa del estándar (mg) Pureza del estándar Primera dilución (mg) Primera alícuota Segunda dilución (mg) Pendiente: AST ⁄C ST Información confidencial. Se prohíbe toda divulgación, comunicación, reproducción o uso no autorizado. 7/9 INSTRUCTIVO DE METODOS ANALTICOS Determinación de Topramezone en Material Tecnico y Formulaciones AST: CST: CÓDIGO: INS-CLV-GCS-XXX-EC Área del estándar Concentración del estándar 9.3. Contenido de Activo (%) X= y+b m Rx = x 𝑦 Cantidad absoluta de x = Rx × Área de muestra × F × d Ingrediente Activo (%) = Cantidad Absoluta de X × 100 Cm Dónde: y: b: m: Rx: FRx: Cm: d: F: Área de la muestra Intercepto Pendiente Respuesta de x Factor de respuesta para x Concentración de muestra Densidad de la muestra (si no aplica el valor es 1) Factor de conversión (si no aplica el valor es 1) 10. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN O RECHAZO La regresión lineal de la curva de calibración R2 o coeficiente de correlación debe ser mínimo a 0.995. El promedio de los 3 resultados de análisis es el resultado final de la muestra y si se encuentra dentro de las especificaciones se acepta el análisis. Los 3 resultados deben cumplir con las especificaciones del producto analizado. Si uno de los tres resultados esta fuera del rango se debe proceder tal como indica el PROCLV-GCS-026 (Manejo fuera de especificaciones). Si dos de los tres resultados están fuera del rango se debe proceder tal como indica el PROCLV-GCS-026 (Manejo fuera de especificaciones). Si las 3 muestras no cumplen los límites de aceptación se considera un fuera de especificación El %RSD del promedio de las tres muestras analizadas no debe ser mayor al 2.0%. 11. ANEXO Anexo No. Título Páginas N/A N/A N/A Información confidencial. Se prohíbe toda divulgación, comunicación, reproducción o uso no autorizado. 8/9 INSTRUCTIVO DE METODOS ANALTICOS Determinación de Topramezone en Material Tecnico y Formulaciones CÓDIGO: INS-CLV-GCS-XXX-EC Registro Cod. Título CLV-GCS-027 Registro de Temperatura y Humedad en el Laboratorio. INS-CLV-GCS-068 Bitácora del Analista / Coordinador. 12. HISTORIAL CONTROL DE CAMBIO Fecha Razón de cambio Observación 27/07/2021 Creación de Instructivo Cambio de método GC a HPLC Información confidencial. Se prohíbe toda divulgación, comunicación, reproducción o uso no autorizado. 9/9