TRABAJO PRACTICO Nº 8 TALLER DE METABOLISMO ENERGETICO Coordinadores: Drs. Marcelo Salierno y Daniel Medesani Objetivo general: entrenar a los alumnos en el uso de metodologías relacionadas con la estimación de la tasa metabólica, en función de la temperatura ambiente y de otras variables relevantes como el tamaño corporal. Objetivos particulares: 1) Determinar la relación entre el tamaño corporal y la tasa metabólica en homeotermos mediante la medición del consumo de oxígeno en especies de tamaño corporal variable. Estimar la tasa metabólica a partir de la medición del consumo de oxígeno en un respirómetro a volumen constante. 2) Aclimatación térmica en poiquilotermos. Evaluar la respuesta metabólica al cambio térmico en poiquilotermos previamente aclimatados a distintas temperaturas. Estimar la tasa metabólica a partir de la medición del consumo de oxígeno en un respirómetro a presión constante. En todos los casos, estimar la tasa metabólica a partir de la medición del consumo de oxígeno en respirómetros a volumen constante y a presión constante, según corresponda. Materiales y Métodos 1) Relación TM específica / Masa corporal Especies a utilizar: Hamster Rata Ratón Variable a medir: Tasa de consumo de oxígeno, mediante un respirómetro a volumen constante, consistente en un electrodo que censa el oxígeno disuelto en una cámara cerrada. Este electrodo se conecta mediante un dispositivo especial a una computadora, que mediante un programa analiza, digitaliza y registra la variable en estudio (ver figura 4 del Anexo). Diseño experimental: Los animales, previamente mantenidos en condiciones controladas de temperatura (25°C) y fotoperíodo (14Luz:10Osc), se colocarán en el dispositivo experimental (respirómetros a volumen constante). Cada grupo de alumnos medirá el consumo de oxígeno de los animales expuestos a temperatura ambiente. Las cámaras de medición serán del tamaño adecuado para cada especie. Una vez concluidas las mediciones, todos los animales deberán ser pesados. Se calculará la tasa de consumo de O2 (VO2) en uL O2 / min / g, de acuerdo con la metodología detallada en el apunte que se anexa. Completar la tabla y graficar los resultados obtenidos (VO2) en función de la masa corporal de cada especie utilizada. Especie Masa corporal (g) VO2 (uL / min) TM específica (uL O2 / g * min) Hamster Rata Ratón 2) Aclimatación Térmica en Invertebrados. Especies a utilizar: Cangrejos de la especie Chasmagnathus granulatus. Variables a medir: Tasa de consumo de O2 (en respirómetros a presión constante, ver anexo) Diseño experimental: Se utilizarán cangrejos expuestos durante dos semanas a dos temperaturas de aclimatación, 10 y 25 °C. Los animales de cada temperatura de aclimatación serán colocados en las cámaras respirométricas correspondientes, y este dispositivo se sumergirá en un baño de agua, el cual será colocado a la temperatura de aclimatación (por ejemplo 10°C) para realizar la primera medición, y luego se llevará el baño de agua a la otra temperatura (por ejemplo 25°C). Protocolo de trabajo: Cada grupo de alumnos recibirá cuatro animales aclimatados a cada temperatura (10 y 25 °C), junto con el dispositivo experimental (respirómetro) y el baño de agua. Una vez concluidas las mediciones, todos los animales deben ser pesados Se calculará la tasa de consumo de O2 (VO2) en uL O2 / min / g, de acuerdo con la metodología detallada en el apunte que se anexa. Graficar los resultados obtenidos (VO2) en función de la temperatura de medición, para ambos grupos experimentales. Comparar la respuesta metabólica a los cambios de la temperatura ambiente. Planilla Metabolismo - Respirómetro a Presión Constante Efecto Temperatura de Aclimatación Grupo: Especie: Hora de iniciación del registro : Hora de finalización del registro: T°C 10 25 Tiempo (minutos) 0 5 10 15 20 25 30 acumulado 0 5 10 15 20 25 30 acumulado Fecha: Temperatura de aclimatación: 10°C Presión ambiental: animal 1 Hora de iniciación del registro : Hora de finalización del registro: T°C 25 10 Tiempo (minutos) 0 5 10 15 20 25 30 acumulado 0 5 10 15 20 25 30 acumulado animal 2 animal 3 animal 4 control Temperatura de aclimatación: 25°C Presión ambiental: animal 1 animal 2 animal 3 animal 4 Control Cálculos: (10°C) Cálculos: (25°C) Peso (gr): Peso (gr): l O2/min (T): l O2/min (T): lO2/min/gr (T/M): T/M estandarizada: lO2/min/gr (T/M): T/M estandarizada: (T / M estandarizada: uL O2 / min / g, para T: 273ºC y P: 760 mmHg) Promedios (10°C) Promedios (25°C) Peso (gr) : Peso (gr) : l O2/min (T) : l O2/min (T) : l O2/min/gr (T/M) : l O2/min/gr (T/M) : T/M estandarizada : T/M estandarizada : INFORME: Objetivos del Taller de Metabolismo Energético. Breve metodología. Resultados obtenidos y discusión para cada una de las dos etapas del taller. Analizar la relación TM / Tamaño corporal Determinar la respuesta de poiquilotermos a la aclimatación térmica. ¿Existe compensación metabólica?