Modificadores genéticos y químicos de un modelo en Drosophila de Distrofia miotónica Rubén D. Artero ruben.artero@uv.es Departamento Universidad de Valencia RubéndeD.Genética, Artero Allepuz www.uv.es/GMD marzo 2005 El splicing alternativo genera gran parte de la diversidad del proteoma Secuencias en cis Factores en trans Una alteración en el control del splicing alternativo origina distrofia miotónica Base genética de la distrofia miotónica RNA “tóxico”. Secuestra MBNL y provoca una falta de función de este factor de splicing Muscleblind-like: MBNL1-3 DM: cuadro clínico Miotonía Debilidad muscular Cataratas Problemas conducción cardiaca Calvicie frontal, hipogonadismo Resistencia a los tratamientos con insulina Degeneración de la retina “La DM es, probablemente, la enfermedad humana más variable en sus síntomas” •Afecta de algún modo a virtualmente todos los sistemas del cuerpo • Puede aparecer desde el nacimiento (DM congénita) a la tercera edad Un transgen para expresar la expansión humana en Drosophila MBNL1 rescata la viabilidad de los embriones mutantes muscleblind Porcentaje de embriones con el genotipo indicado que eclosionan 100 n=213 90 n=676 80 70 60 n=804 50 40 n=684 30 20 10 n=687 n=1334 n=592 0 Fondo mutante: Expresión artificial de: Dmef2: general musculatura da: ubicuo mblE27 mblE27/mblE16 Dmef2-Gal4> Dmef2-Gal4> UAS-MBNL1 UAS-MBNL1 da-Gal4> UAS-MBNL1 Dmef2-Gal4> da-Gal4> UAS-mblC UAS-mblC Los músculos que expresan 480 CUGs son distróficos a los 2 días a los 38 días Los RNAs (CUG)480 quedan retenidos en el núcleo y secuestran Muscleblind... ...provocando falta de función de esta proteína El fenotipo empeora cuando disminuye la concentración efectiva de Muscleblind ...y alteraciones en el splicing alternativo de transcritos específicos Disminuye en MHC/UAS-CTG 5 8 132 pb 6 9 5 6 1019 pb 289 pb 5 Disminuye en mbl9 648 pb 7 8 86 pb 152 pb 9 86 pb 5 7 6 93 pb 9 Un modelo en Drosophila... ¿para qué? WT UAS-(CTG)480 sev-Gal4 WT MHC-Gal4 UAS-(CTG)480 Modificadores dominantes del fenotipo svp1 thread4 Control: sev-Gal4>UAS-(CTG)480 Aly02267 vikingk00236 La expresión de CUGs parece alterar la adhesión celular y sensibilizar a apoptosis Células subretinales El fenotipo rugoso por expresión de repeticiones CUG es sensible, entre otros, a viking (colágeno IV), spinster (proapoptótico) y thread (antiapoptótico) La sobreexpresión de mblC activa la muerte celular programada L1 L2 silvestre en-Gal4>UAS L3 en-Gal4> UAS-mblC en-Gal4/+ A B L4 L5 ptc-Gal4> UAS-mblC C dpp-Gal4> UAS-mblC D Tinciones en discos imaginales de larva 3 con anti-caspasa3 La expresión de (CUG)480 en los cuerpos de seta provoca letalidad dependiente de temperatura 60 % of females 50 40 30 20 10 0 25ºC 27ºC 103Y-Gal4; UAS-CTG(60) 28ºC 29ºC 103-Gal4; UAS-CTG(i480) ...que puede emplearse en rastreos de modificadores químicos Día 1 Recoger Larvas Cruce Control 28ºC Compuesto Contar adultos Día 9 De moléculas pequeñas o hexapéptidos 30 drogas ya descritas suprimieron la letalidad dependiente de CUGs PEPTIDE Péptido con secuencia parecida al final del segundo dedo de zinc es un supresor débil Todo gracias al esfuerzo de... Lidón Monferrer Sales Amparo García López Irma García-Alcover M Carmen Alvarez Marta Vicente En colaboración con el grupo de Enrique Pérez Paya (CIPF)