Influencia del explanto inicial en la conservación de Nierembergia linariaefolia Faroni, A.1; Mata, D.2; Hompanera, N. 1. 1 Instituto de Recursos Biológicos, INTA Castelar, C.C. 45, (1712) Castelar, Argentina. 2 Instituto de Floricultura, INTA Castelar, C.C. 45, (1712) Castelar, Argentina. E-mail: afaroni@cirn.inta.gov.ar Introducción Líneas mejoradas y cultivares de especies ornamentales nativas (Nierembergia linariaefolia) son resguardadas en el Banco Base de Germoplasma del IRB, INTA Castelar, a través de una conservación in vitro. En un estudio previo se mostró que los protocolos aplicados en papa y batata, colecciones que tradicionalmente conserva el Banco, permite mantener esta especie a corto plazo. El intervalo entre subcultivo, en promedio, fue alrededor los 120 días (Hompanera et al., 2004). Dado que, se observaron diferencias, en un mismo medio en el crecimiento de los explantos, altura y proliferación de nuevas yemas, el presente estudio es evaluar la influencia del tipo de explanto inicial, yema o segmento nodal, sobre el período de repique, en N. linariaefolia cv. Nieve. Objetivo Determinar la influencia del tipo de explanto inicial, yema o segmento nodal, sobre el desarrollo de los materiales, e inicio de necrosis que afecten la longevidad de los mismos entre subcultivos, en los tres medios que se utilizan en el banco de conservación in vitro, para el mantenimiento del germoplasma de N. linariaefolia cv. Nieve. Materiales y métodos Material Vegetal: N. Linariaefolia cv Nieve. Se evaluaron: - dos tipos de explantos: yemas de 1cm y segmentos nodales de 1,5cm aproximadamente con 6 ó 7 nudos, y - tres medios de cultivo: CP - Conservación papa (Medio MS + 40g D-Sorbitol + 8g Agar- Agar M15 - Conservación batata1 (Sales MS +15g D-Manitol + 20mg Putrescina + 20g Sacarosa + 8g Agar- Agar) M20 - Conservación batata2 (Sales MS + 20g D-Manitol + 20mg Putrescina + 20g Sacarosa + 8g Agar- Agar) Los explantos fueron disectados de plantas que se encontraban en un medio MS (Murashige & Skoog, 1962) sin hormonas. Se sembró un explanto por tubo y se colocaron en una cámara a temperatura de 25 ± 2º C, con una intensidad de luz de 3000 lux y un fotoperíodo de 9 horas de luz. Los tubos fueron distribuidos al azar en una única gradilla. Los parámetros evaluados fueron: longitud del brote principal, desarrollo de raíces, número de vástagos laterales, material necrosado y/o mortandad del explanto, a los 30, 60, 90 y 120 días. El ensayo comprendió 6 tratamientos con 16 repeticiones. Los datos se analizaron estadísticamente con ANOVA y Test de Tukey (p < 0,05) Resultados y discusión A los 30, 60, 90 y 120 días, para un mismo medio, diferencias observadas en la altura de los explantos no fueron significativas (p<0,05) entre yemas y segmentos nodales (Tabla 1). Las diferencias observadas estuvieron relacionadas con el medio utilizado. Los menores tamaños del brote principal correspondieron a los tratamientos T5 y T6, siembras efectuadas sobre el medio Cp con 40gr de D- Sorbitol, sustancia que actúa aumentando la concentración osmótica del medio y consecuentemente disminuyendo la disponibilidad de las sustancias asimilables (Pence, V.C. et al. 2002). Tabla 1. Altura del explanto, a los 30, 60, 90 y 120 días Tratamiento 30 días 60 días 90 días 120 días T1 3,56 a 7,94 a 12,19 a 12,94 a T2 2,69 a 6,75 a 10,63 ab 12,06 a T3 3,13 a 6,81 a 9,94 b 11,69 a T4 3,69 a 8,38 a 10,75 ab 11,31 a 1b T5 1,06 b 1,25 b 1,38 c 1,59 b T6 1b 1,31 b 1,31 c Referencias: T1: yema en M15; T2: segmento nodal en M15; T3: yema en M20; T4: segmento nodal en M20; T5: yema en Cp; T6: segmento nodal en Cp. (p<0,05). En cuanto al número de yemas (Tabla 2), los tratamientos T2 y T4, donde se utilizaron segmentos nodales como explantos iniciales, mostraron diferencias significativas (p< 0,05) con respecto a las siembras con yemas, tratamientos T1 y T3. En el tratamiento T6, se observaron diferencias respecto al tratamiento T5, a los 30 y 60 días pero no fueron significativas. A los 90 días, ambos tratamientos, fueron los que presentaron la mayor cantidad de yemas. Cabe señalar, que a los 30 días, en el tratamiento T6, se observó una pronunciada clorosis que afectó al 44% de los explantos y que en algunos casos llevó a una necrosis que tornaba impredecible la supervivencia de los mismos. A los 120 días, en el tratamiento T6, los explantos muertos representaban el 25% de los materiales sembrados inicialmente. Situación indeseable en un protocolo de conservación de germoplasma. En el primer período, los explantos en medios con una concentración menor de azúcares no asimilables, fueron los que desarrollaron la mayor cantidad de vástagos laterales y sistema radicular. A los 60 días esos tratamientos, comenzaron a mostrar síntomas de marchitamiento, clorosis y senescencia de las hojas inferiores, los primeros indicios de agotamiento del medio. Resultados semejante informaron Hompanera et al. 2004, para los cvs. Estrella y Cielo que obtuvieron los mejores resultados en el medio de conservación de papa. Tabla 2. Número de yemas por explanto. Tratamiento 30 días 60 días 90 días 120 días 0,50 b T1 0,44 c 0,31 b 0,50 b 2,99 a T2 2,44 a 2,44 a 2,69 a 0,56 b T3 0,06 c 0,44 b 0,56 b 2,63 a T4 1,75 ab 2,25 a 2,56 a 3,06 a T5 0,19 c 1,75 a 3,56 a 2,94 a T6 0,88 bc 2,56 a 3,56 a Referencias: T1: yema en M15; T2: segmento nodal en M15; T3: yema en M20; T4: segmento nodal en M20; T5: yema en Cp; T6: segmento nodal en Cp. (p<0,05). Conclusiones Un mayor período entre repique, con menor longitud del explanto, mayor número de vástagos y poco desarrollo radicular, condiciones deseables en la conservación de materiales in vitro, se logra en Nierembergia linariaefolia cv. Nieve utilizando como explanto inicial, la siembra de yemas en el medio de conservación de papa, medio con alto contenido de azúcares no asimilables. En los medios que contienen menor cantidad de azúcares no asimilables, el desarrollo de los explantos, crecimiento y cantidad de vástagos, en una primera etapa es mayor, pero por agotamiento del medio, se reduce el período entre intervalo de repique. Bibliografía Escandón, A.S., Alderete, M., Trotta, M., Facciuto, G., Hagiwara, J.C., Mata, D., Soto, S. y Miyajima, I. 2003. El uso de herramientas biotecnológicas (cultivo de tejidos) en la domesticación y el desarrollo de germoplasma en Scoparia spp. IV Simposio de Recursos Genéticos para América latina y el Caribe. p. 143. 10 al 14 de noviembre, Mar del Plata. Hompanera, N., G. Facciuto, A. Escandon y S. Soto. 2004 Evaluación de medios de cultivo para la conservación de los recursos genéticos de especies nativas ornamentales en el banco in vitro del IRB. II Congreso Argentino de Floricultura y Plantas Ornamentales. VI Jornadas Nacionales de Floricultura y I Encuentro Latinoamericano de Floricultura. p. 54-56. 26 al 29 de Octubre, Buenos Aires. Murashige, T. and Skoog, F. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant. 15: 473-497 Pence, V.C.; Sandoval, J.A.; Villalobos A, V.M.; Engelmann, F. (eds.). 2002. In vitro collecting techniques for germplasm conservation. International Plant Genetic Resources Institute (IPGRI). 100 p. IPGRI Technical Bulletin. no. 7. QK 725 P4. 63596. Rome (Italy). Soto, S, L. Bullrich, D. Mata, G. Facciuto, J.C. Serpa, J.C. Hagiwara, Morisigue, I. Miyajima and N. Kobayashi. 2005 New clones of Nierembergia linariaefolia obtained from population native to Argentina. V International Symposium on New Floricultural Crops. ISHS Acta Horticulturae: 683 Junio. Paraná, Brasil.