la fijación tisular paso crítico en el estudio histopatológico

Hosp Aeronáut Cent 2013; 8(2):91-94.
La fijación tisular, paso crítico en el estudio histopatológico
Tissue fixation: a critical step in histopathologic evaluation
Graciela A. Santomingo, Néstor R. Lago
* Jefe de Servicio de Anatomía Patológica del Hospital Aeronáutico Central. Profesor Adjunto Int. de Anatomía Patológica, Universidad
de Buenos Aires.
** Asesor del Servicio de Anatomía Patológica del Hospital Aeronáutico Central. Profesor Adjunto de Anatomía Patológica, Universidad
de Buenos Aires.
La necesidad del estudio histopatológico de un
Según su mecanismo de acción se reconocen
tejido presupone una serie de pasos que incluyen
fijadores por métodos físicos y fijadores por
la fijación, la inclusión, el corte y la coloración que
métodos químicos: dentro de los primeros se
permiten su visualización a través del microscopio
emplea el enfriamiento por congelación y dentro
óptico, electrónico, de fluorescencia, etc. La
de
fijación del tejido es una etapa crítica que tiene
generalmente
como finalidad interrumpir la degradación que se
desnaturalizando las proteínas.
produce cuando ha sucedido la muerte celular, ya
La fijación por métodos físicos se utiliza para
sea que se ha privado a los tejidos de su aporte
estudios que necesiten conservar intacta la
de oxígeno o de nutrientes, como sucede durante
estructura antigénica del tejido o su contenido
los actos quirúrgicos, la extirpación parcial o
enzimático. La clave de este proceso radica en
completa de algún órgano o porción de tejido que
que
se
a un
instantánea: un lento proceso de enfriamiento
diagnóstico o para confirmar lo que la clínica, el
provocará formación de microcristales dentro de
laboratorio
los tejidos con la consiguiente difusión de
considere
o
necesario
el
para
estudio
de
arribar
las
imágenes
los
el
segundos
se
emplean
líquidos
enfriamiento
se
fijadores
que
realice
actúan
en
forma
sospechan (biopsia).
elementos desde el citosol o alterando las
La fijación se inicia con la interacción del tejido o
estructuras de membranas lo que conlleva a la
material a fijar con el agente fijador seleccionado
pérdida
de acuerdo al material a estudiar y al tipo de
alteraciones severas de la estructura.
estudio que se desee realizar.
Los líquidos que se usan para la fijación química
de
la
especificidad
antigénica
o
deben ser capaces de bloquear de inmediato la
Revista del Hospital Aeronáutico Central
91
La fijación tisular, paso crítico en el estudio histopatológico
autolisis,
considerando
de
Es excelente para los lípidos en general y es
fijador
compatible con la mayoría de las tinciones que se
seleccionado. En primer término se tiene en
utilizan de rutina y técnicas de biología molecular.
cuenta la velocidad con que difunde dentro del
En este último caso los tiempos de fijación no
tejido y en segundo término se relaciona con el
deberán ser excesivos ya que es posible la
tiempo que tarda el fijador en ejercer su acción.
pérdida de la indemnidad de determinantes
De estos parámetros dependen directamente la
antigénicos o ADN. Una desventaja evidente es
necesidad de un tamaño adecuado de la muestra
que
y su relación con el volumen del fijador.
irritantes de las mucosas (conjuntiva y mucosa
Es de buena práctica utilizar nueve veces el
nasal). Tiene también el inconveniente que por la
volumen del fijador en relación al de la muestra.
acción de la luz y el oxígeno se transforma
Los fijadores más utilizados en un servicio de
progresivamente en ácido fórmico y puede
anatomía patológica asistencial son:
producir un precipitado cristalino birrefringente y
penetración
y
la
la
de
velocidad
fijación
del
producen abundantes vapores que son
-
Alcohol 96: en extendidos citológicos.
de color negro: el pigmento formólico que dificulta
-
Formol
la visualización de los tejidos. Se evapora y debe
-
al
10%:
en
tejidos
(piezas
quirúrgicas – biopsias).
reponerse en cantidad adecuada en aquellas
Formol puro: en líquidos.
piezas que se desea preservar (piezas de museo,
Formaldehído o formol: esta sustancia en estado
por ejemplo).
puro es un gas tóxico e irritante para las mucosas
que se disuelve fácilmente en agua. En este
Estudios especiales en Patología
estado, en concentraciones entre el 35 y 40 % y
estabilizado con metanol, se denomina formalina
pura o formol. Es decir, que el formol que se
comercializa en estado líquido, o sea, al 40 %, es
la forma pura del fijador. La concentración que se
usa para fijar tejidos es al 10 % y ella se obtiene
colocando UNA parte de formol al 40% y NUEVE
de agua. En el caso de los líquidos, el diluyente
es el líquido en sí mismo, razón por la cual se
coloca UNA parte formol al 40% y NUEVE del
Existen numerosos procedimientos y estudios
especiales que se realizan en laboratorios de alta
complejidad que merecen una mención aparte.
Nos referimos a los estudios de microscopía
electrónica e inmunofluorescencia. Estos estudios
necesitan
procesar
los
tejidos
de
manera
particular o la fijación por medios habituales debe
ser óptima, ya que se busca estudiar estructuras
subcelulares, proteínas, genes o parte de los
mismos.
líquido a fijar.
El formol es un buen fijador que determina una
Microscopía electrónica
buena conservación de la estructura tisular. Es
buen desinfectante y no endurece excesivamente
La microscopia electrónica de transmisión permite
los tejidos (es un medio óptimo para conservar y
estudiar muestras biológicas a nivel celular y
almacenar biopsias y piezas quirúrgicas). Provoca
subcelular, citoquímico e immunocitoquímico.
escasa retracción tisular. Posee una velocidad de
Existen numerosos tipos de fijadores para uso en
penetración
microscopía electrónica de transmisión. En este
adecuada
quirúrgicas (1 mm/hora)
92
para
grandes
piezas
caso trataremos aquellos que consideramos de
Santomingo G, Lago N, Hosp Aeronáut Cent 2013; 8(2):91-94.
uso más común. Los elegidos son aquellos que
Este último es un buen preservador de la
mejor preserven la estructura celular, de más
ultraestructura celular, sobre todo membranas, en
sencillo
combinación
manejo
y
menor
toxicidad.
Cabe
con
los
aldehídos.
El
estudio
consignar que la mayoría de las sustancias
ultraestructural se realiza con especímenes más
fijadoras son tóxicas por inhalación o por
pequeños, de unos pocos milímetros, ya que
contacto, algunas de ellas cancerígenas, por lo
requiere una adecuada fijación (usualmente más
que es indispensable seguir las indicaciones de
breve que para microscopía de luz y con tiempos
seguridad para su manejo y utilización. A
controlados) para poder obtener detalles del
diferencia
convencionales,
tejido. La necesidad de realizar cortes muy
usualmente se realizan fijaciones secuenciales y
delgados para su evaluación con el microscopio
combinadas.
electrónico obliga a utilizar medios de inclusión
de
las
técnicas
duros y resistentes a la temperatura por lo que
Glutaraldehído
los más usados son las resinas epoxy que son las
que aportan una mayor homogeneidad en las
Se usa a una proporción de entre el 0,5 y el 3 %.
Tiene una alta capacidad para preservar la
estructura celular, por lo que es el fijador de
referencia para la observación ultraestructural.
Se usa en soluciones tamponadas siendo los
buffers fosfato y cacodilato de Na los habituales.
Se debe tener en cuenta su baja penetración
tisular y puede producir retracción de los tejidos,
por lo cual se debe controlar estrictamente el
tiempo de fijación.
polimerización y más facilidad para la realización
de cortes ultrafinos (la más difundida es el Epon
812). También pueden usarse resinas acrílicas
pero
presentan
inconvenientes
en
la
polimerización, algunas de ellas lo hacen en frío o
luz
UV
y
son
útiles
para
inmunoelectro-
microscopía.
Concluyendo,
antes de
realizar
un
estudio
biópsico es necesario conocer la patología que se
busca diagnosticar obteniendo la muestra en
condiciones adecuadas y con la fijación que se
Tetróxido de osmio
requiera para la realización de las técnicas
Es un buen fijador para grasas y membranas
pertinentes. Es necesario recordar que técnicas
celulares. Tiene un fuerte carácter oxidante que
como la inmunofluorescencia requieren tejido
lo convierte en peligroso para su uso, por lo que
fresco, sin fijador. Se debe recordar que las
no se usa para tinciones habituales.
características estructurales que se pierden por
una mala fijación o manejo inadecuado del tejido
no se pueden recuperar en ningún momento del
Glutaraldehído-tetróxido de osmio
procesamiento
y
en
numerosas
ocasiones
Se usan en combinación secuencial. Es habitual
dificulta o impide un adecuado diagnóstico. El
que
microscopía
contacto con el médico patólogo y el laboratorio
fijados
en
que recibirá el espécimen para ser estudiado es
glutaraldehído (1 al 3 %) o paraformaldehído (2
de fundamental importancia. Permite intercambiar
al 4 %), para posteriormente ser refijados
ideas, datos clínicos y de laboratorio, decidir
los
electrónica
tejidos
sean
destinados
a
inicialmente
en
tetróxido de osmio al 1 % en solución tamponada.
Revista del Hospital Aeronáutico Central
93
La fijación tisular, paso crítico en el estudio histopatológico
sobre las posibles técnicas a utilizar, conocer la
2.
inmunohistoquímicos de coloración. DAKO
manera más adecuada de recolección, fijación y
envío del tejido y siempre es favorecedora para
Boenisch, T. y col. Manual de métodos
Corporation. 3ª edición. 2002.
3.
HER 2 Testing. A best-practise guide for HER 2
una interpretación racional de los hallazgos
testing, including guidance on methologies,
morfológicos.
interpretation and quality control. Productos Roche,
2007.
Bibliografía
4.
Rosai, J. Surgical Pathology. Volumen I Ed. Mosby,
10ª edición, 2011.
1.
García del Moral, R. Laboratorio de anatomía
patológica. Ed. Interamericana – Mc Graw-Hill. 1ª
edición, 1993.
94