Espectroscopía •Espectroscopía Espectroscopía ultravioleta

Espectroscopía
•Espectroscopía ultravioleta
ultravioleta--visible: molecular
atómica
•Espectroscopía infra
infra--roja
•Espectroscopía de resonancia magnética nuclear
•Espectrometría de masas
Principios de la Espectroscopía :
Radiación Electromagnética
Radiación Electromagnética
•se propaga a la velocidad de la luz
•tiene propiedades de ondaonda- partícula
•la energía de un fotón es proporcional a su frecuencia
c = λν
E = hν
λ: cm;
ν: ciclos/seg
10
c: velocidad de la luz (3 x 10 cm/seg)
27
h: cte
cte. de Planck (6.62
(6 62 x 10 erg/seg)
Y
λ
X
A
Z
El espectro electromagnético
C = λν
λ: cm;
ν: ciclos/seg
E = hν
c: velocidad de la luz (3 x 1010 cm/seg)
E = h C/λ
h: cte. de Planck (6.62 x 1027 erg/seg)
•Violet: 400 - 420 nm
•Indigo: 420 - 440 nm
•Blue: 440 - 490 nm
•Green: 490 - 570 nm
•Yellow: 570 - 585 nm
•Orange: 585 - 620 nm
•Red: 620 - 780 nm
El Espectro Electromagnético
Menor Longitud de onda (λ)
Mayor Longitud de onda (λ)
400 nm
750 nm
Luz Visible
Mayor Frecuencia (ν)
Mayor Energía (E
(E)
Menor Frequencia (ν)
Menor Energía (E
(E)
El Espectro Electromagnético
Menor Longitud de onda (λ)
Ultravioletaa
Ultraviolet
Mayor Frec
Frecuenc
uencia
ia (ν)
Mayorrr Energ
Mayor
Energía
ía (E)
Mayor Long
Longitud
itud de onda (λ)
InfraInfra-rojo
Menor Frec
Frecuenc
uencia
ia (ν)
Menor Energ
Energía
ía (E)
El Espectro Electromagnético
Rayos Cósmicos
Rayos γ
Rayos X
Energía
Luz Ultravioleta
Luz Visible
Radiación Infra-roja
Microondas
Ondas de Radio
Radiación electromagnética (R.E.)
La radiación electromagnética es un tipo de energía que se transmite por el espacio a
enormes velocidades. Muchas de las propiedades de la R.E. se explican convenientemente
mediante la teoría ondulatoria clásica con parámetros como velocidad, frecuencia, longitud
de onda y amplitud. En contraste con otros fenómenos ondulatorios, como el sonido, la R.E.
no requiere un medio de transporte para su transmisión, por lo tanto se transmite fácilmente
en el vacío.
La teoría ondulatoria para la R.E. no explica completamente los fenómenos asociados con
la absorción o la emisión de energia radiante, para estos procesos es necesario considerar
la energía radiante como un flujo de partículas discretas de energía llamados fotones o
cuantos.
Estos dos conceptos se complementan muy bien (dualidad, onda partícula) y se aplican
tanto al flujo de electrones como al de otras partículas elementales.
En la Figura se ha representado el vector eléctrico en la ordenada, de una onda
electromagnética.
La frecuencia de una onda luminosa está determinada por la fuente de radiación y
permanece constante independientemente del medio que atraviese.
atraviese La velocidad
velocidad, en
cambio, depende de la composición del medio.
E2 (Estado de alta energía)
ΔE = hν
(Energía de un fotón)
E1 (Estado de baja energía)
¿Qué clase de estados
estados?
?
electrónico
UV--Vis
UV
vibracional
Infra--rojo
Infra
rotacional
microonda
spin nuclear
radiofrecuencia
Espectroscopía UV- Visible
Transiciones entre estados de energ
energía
ía electró
electrónicos
ΔE = hν
Energíía entre 200 y 800 nm
Energ
Características de transiciones electrónicas entre orbitales σ, π y η
Transición λ (nm)
Ejemplo
σ → σ*
<200
Hidrocarburos saturados
π → π*
200–500
Alquenos, alquinos aromáticos
η → σ*
160–260
H2O, CH3OH, CH3Cl
η → π**
250 600
250–600
Carbonilos, nitro, nitrato,
carbonilo.
Eteno: Según CLOA los orbitales π ,π∗ resultan de la combinación de
2 orbitales p (uno de c/átomo) y tienen menor y mayor energía respecto
de los orbitales atómicos de origen.
π∗
eteno
2p
π
π∗
π∗
hυ
π
2p
EF
π
EE
formaldehido
Niveles de energía y transiciones electrónicas
En espectroscopía UV-Vis se irradia con luz de energía suficiente como para provocar
transiciones electrónicas, es decir promover un electrón desde un orbital de baja energía a uno
vacante de alta energía.
Transiciones electrónicas posibles entre orbitales n: orbital que contiene par de electrones no
compartidos (ej en O, N, Cl)
En UV- Vis la energía solo
alcanza para las transiciones
n→π* y π→π*
σ→ σ *
UV lejano
λ < 200 nm, compuestos orgánicos simples
π→π*
UV
λ ~ 200-350 nm, compuestos insaturados
n→π*
UV-visible
λ ~ 350-700 nm, insaturados con heteroátomos
Transició
Transici
ón π→π* en cis,trans
cis,trans--1,3
1,3--ciclooctadieno
LUMO
ψ4∗
ψ4∗
ψ3∗
ψ 3∗
ΔE = hν
HOMO ψ2
ψ2
ψ1
ψ1
configuración
configuració
π-electr
electró
ónica
más estable
configuración
π-electr
electró
ónica
en el estado excitado
Las transiciones más favorecidas son entre el orbital ocupado de energía más
alta (HOMO) y el orbital desocupado de energía más baja (LUMO)
Transició
Transici
ón π→π*
La banda de energí
energía HOMO
HOMO--LUMO es afectada por los
sustituyentes del doble enlace
cuando (ΔE) HOMO
HOMO--LUMO se hace menor
menor,, la λmax se corre a
valores
alores mayores
ma ores
La inserción
inserción de un grupo alquílico causa un corrimiento a
mayores λmax
H
H
C
H
H
CH3
C
C
H
λmax 170 nm
H
C
CH3
λmax 188 nm
La extensión
extensión de la conjugación tiene un mayor efecto en λmax;
el corrimiento es nuevamente a mayores longitudes de onda
H
H
C
H
C
C
H
H
C
H
H
C
C
H
λmax 170 nm
H
H
H
λmax 217 nm
H
C
C
H
H
C
H
H
H3C
λmax 217 nm
di
dieno
conjugado
j
d
C
H
C
C
H
λmax 263 nm
H trieno conjugado mas
dos alquilos
H
C
C
H
C
H
C
CH3
Licopeno
Pigmento naranja en zanahorias
Pigmento rojo en tomates
La conjugación acerca al HOMO y al LUMO del sistema →
disminuye ∆E de la transición → ésta ocurre a λ menor
La conjugación acerca el HOMO y el LUMO del sistema, por lo cual
disminuye el E de la transición, y ésta ocurre a mayor λ
El espectrómetro UV-Vis registra las longitudes de onda
donde se produce absorción y cuantifica la absorción
S2
S0
S0
S2
S1
E
S1
ΔE (S1) = h . C / λ max
S0
El espectro se registra como Absorbancia (A) vs. longitud de onda (λ). Las
bandas del espectro UV son anchas porque incluyen la estructura fina de
transiciones vibracionales y rotacionales de menor energía:
Diagrama de Morse
E2 (Estado de alta energía)
Molecula diatómica:
A-B
R0: distancia interatómica normal
E = hv (Energía de un fotón)
E1 (Estado de baja energía)
c) Ionization
La energía está cuantizada
A
A*
Tipo de excitación: depende de la energía entregada
-rotacional
-vibracional
ΔE = hν = hc/λ
-electrónica
A medida que
aumenta
t la
l
conjugación, el
sistema absorbe a
λ mayores, o sea
que la absorción
se corre hacia el
visible
Otros Cromóforos
Grupos carbonilo conjugados
Compuestos aromáticos y
heteroaromáticos
A mayor conjugación de sistemas aromáticos la
absorción se desplaza al visible
Este compuesto es de color anaranjado
• Cromóforos: grupo covalente insaturado que tiene la potencialidad
del color
• Auxócromos: sustituyente que unido a un cromóforo cambia su λ max
y la intensidad de la absorción (ε)
Desplazamiento batocrómico: desplazamiento hacia λ mayores debido a una
sustitución determinada o a efecto de solvente.
Desplazamiento hipsocrómico: desplazamiento hacia λ menores debido a una
sustitución determinada o a efecto de solvente.
Chromophore
Example
Excitation
λmax, nm
ε
Solvent
C=C
Ethene
π
__>
π*
171
15,000
hexane
C≡C
1-Hexyne
π
__>
C=O
Ethanal
n
π
__>
π*
180
10,000
hexane
π*
__> π*
290
180
15
10,000
hexane
hexane
N=O
Nitromethane
n
π
__>
π*
π*
275
200
17
5,000
ethanol
ethanol
CX X
C-X
X=Br
Br
X=I
Methyll bromide
Meth
Methyl Iodide
n
n
__>
σ*
σ*
205
255
200
360
hexane
he
ane
hexane
__>
__>
Efecto del solvente
E
Corrimiento batocrómico
Cy
MeOH
Transición π, π*
Δ λ: 5-10 nm
π*
π
Cy
MeOH
E
π*
Corrimiento hipsocrómico
Cy
MeOH
Transición n, π*
Δ λ: 2-6 nm
n
Cy
MeOH
ΔE = h. c / λ
Que le sucede a la molécula en su estado electrónico excitado?
Transiciones y multiplicidad
π*
π
Absorción
hν
Estado fundamental
espines opuestos
π*
π*
π
π
Mantuvo el spin
S=1/2-1/2=0
M=2s+1=1 estado singulete
Varió el spin
S=1/2+1/2=1
M=2s+1=3
estado triplete
Diagrama de Jablonski
Procesos de relajación:
• no radiativos o de no emisión : emite
energía térmica
• radiativos o de emisión: emite energía
radiante o luz
Procesos de relajación:
™
™
no radiativos o de no emisión: ocurre por colisiones de las moléculas excitadas con moléculas
en estado fundamental, o de solvente. Pérdida de energía por choque. Se produce el pasaje de
un nivel vibracional a otro hasta llegar al nivel vibracional fundamental de ese nivel electrónico.
También puede perder energía hasta llegar al nivel fundamental electrónico.
radiativos
di ti
o de
d emisión:
i ió emite
it energía
í radiante
di t o luz
l
9 Fluorescencia: emite desde el estado singulete. Cesa cuando termina la irradiación,
duración: 10-6 seg.
9 Fosforescencia: emite desde el estado triplete. Transición prohibida, y por lo tanto de
baja probabilidad y es unproceso lento; tiene un rendimiento cuántico bajo (N° de
moléculas que sufren el proceso por fotón absorbido); ocurre en sólidos (no en líquidos),
dura mas allá de la irradiación 10-10-3 seg.
S1
ΔE(0,0)
S0
λ0,0
Espectro de absorción y de emisión.
λ0,0 = ½ (λabs + λfluo )
Pantallas solares
PABA: ácido p-aminobenzoico
El espectrómetro UV-Vis registra las longitudes de onda a
las que se produce absorción y la cuantifica
cubeta
muestra (en solución)
luz UV
DETECTOR
El espectro se registra
como Absorbancia ((A)) vs.
longitud de onda (λ)
Las bandas del espectro UV
son anchas porque incluyen la
estructura fina de transiciones
vibracionales y rotacionales de
menor energía
I/I0 = e-k1.l
I/I0 = e-k2.c
Combinando las ec: I/I0 = e-k3.l.c
Se defina ABSORBANCIA (A) como log (1/T)
A = log(1/T) = log (I/I0) = 2,303 . K3 . B . C
ε : coeficiente de absorción molar
Ley de Lambert-Beer
A = ε . b. c
Absorción de la luz
I0
⎛I ⎞
A = − log(T ) = − log⎜⎜ ⎟⎟
⎝ I0 ⎠
l
1.2
antraceno
1
−A
)
A = ε .l.C
ε: coeficiente de extinción molar (M-1.cm-1)
l: longitud de la celda (cm)
C: concentración (M)
A=Absorbancia, T= Transmitancia
Absoorbancia
(
I α a2
1.4
I 0 = I + I abs
I abs = I 0 1 − 10
I
0.8
0.6
0.4
0.2
0
200
250
300
350
400
450
Longitud de onda (nm)
500
Ley de Beer:
A: Absorbancia
A=εcl
Permite cuantificar la
concentración de una muestra
por UV
ε: coeficiente de extinción
(característico de cada sustancia)
l: largo del paso de la cuba (cm)
c: concentración (moles/l)
La zona de longitudes de onda que se registra en
un espectro UV- Vis es entre 200 y 800 nm
En esta zona no absorben dobles ni triples enlaces aislados
Solo van a absorber enlaces π conjugados y heteroátomos
con pares de electrones no compartidos (O, N)
Grupos que absorben luz = CROMÓFOROS
Utilidad del método:
Técnica cuantitativa
-sensibilidad
-señal observada: proporcional
a c (concentración) y a l (paso óptico)
A: absorbencia de luz al atravesar la masa en la cubeta
I0 es la intensidad de la luz que entra a la cubeta de
líquidos
I1 es la intensidad de la luz después de atravesar la
cubeta de líquidos
l es la medida longitudinal que la luz recorre dentro de la
cubeta
Selección de la longitud de onda
λ 395 nm
λ 410 nm
λ 430 nm
Rango dinámico de trabajo: zona lineal. Se verifica ley de Lambert-Beer
Saturación: Zona punteada
Limitaciones a la aplicabilidad de la Ley de Beer
Se observan frecuentemente desviaciones de la proporcionalidad entre A y c (cuando b es constante). Algunas de
estas desviaciones son importantes y representan limitaciones reales de la ley.
a) Desviaciones reales
La Ley de Beer es sólo aplicable a soluciones en las que las interacciones dependientes de la concentración de
las moléculas o iones son mínimas. Concentraciones “altas” alteran las absortividades molares y por lo tanto
conducen a una relación no lineal entre A y c.
b) Desviaciones químicas
Cuando
C
d llas especies
i absorbentes
b b t experimentan
i
t asociación,
i ió di
disociación
i ió o reacción
ió con ell solvente
l
t originan
i i
productos con características absorbentes distintas de las del analito.
Un ejemplo típico se observa con soluciones de dicromato potásico no amortiguadas, en las que existen los
siguientes equilibrios:
Cr2O7+H2O ↔ 2HCrO4 ↔ 2H+ + 2CrO4-2
A casi todas las longitudes de onda los valores de ξ del ion dicromato y las dos especies de cromatos son muy
diferentes.
c)
Desviaciones instrumentales
R di ió policromática:
Radiación
li
áti
el requisito básico para el cumplimiento de la Ley de
Beer es que la radiación incidente sea monocromática.
p
de las características tecnológicas
g
del
Dependiendo
sistema óptico del instrumento será más o menos
accesible poder utilizar en forma práctica una
radiación limitada a una sola longitud de onda.
Radiación dispersa:
la radiación dispersa suele diferir considerablemente
en longitud de onda con respecto a la radiación
principal; además puede alcanzar el detector sin haber
pasado a través de la muestra.
Instrumentación
Los instrumentos que miden la absorción selectiva de la radiación en las soluciones se conocen
con los nombres de: colorímetros, fotómetros y espectrofotómetros. Hoy en día es pertinente
diferenciar los instrumentos según su sistema de detección: detectores simples (convencional) o
detectores multicanal (arreglo de diodo).
Algunos de los diseños básicos de los instrumentos usados en la medición de la absorción de
Energía Radiante se ilustra en el siguiente esquema:
Figura. Diagrama de bloques de diferentes tipos de
instrumentos de medición de la absorción
molecular (simple haz, doble haz).
Chopper (13 ciclos x seg)
Fuente de energía radiante
Debe producir un haz de radiación cuya potencia sea suficiente para facilitar la detección y
medida; debe ser estable. Ej.:
•Lámpara de hidrógeno o de deuterio (UV)
•Lámpara de mercurio (UV)
Producen un espectro continuo entre 160–375 nm y deben emplearse ventanas de cuarzo en los tubos, ya que el vidrio
absorbe fuertemente en esta región del espectro electromagnético.
.
La excitación eléctrica de deuterio o hidrogeno a baja presión produce un espectro UV continuo. El mecanismo para ésta
implica la formación de una especie molecular excitada, D2*, que se rompe para dar dos especies atómicas y una fotón
ultravioleta. Este puede ser mostrado como;
D2 + energía eléctrica → D2* → D' + D'' + hν
•Lámpara de filamento de tungsteno (visible)
Es la fuente más común para la zona del visible e infrarrojo. Esta lámpara es útil para la
región entre 320 – 2500 nm.
-Atenuador: diafragmas, rendijas
-Celdas
Recipientes para la muestra
La mayor parte de las aplicaciones espectrofotométricas utiliza las muestras en
solución líquida
líquida, por esta razón se requieren recipientes para colocar la muestra
(celdas). La celda debe transmitir el 100% de la energía radiante en la zona
espectral de trabajo.
Región U.V. = Celdas de cuarzo, sílica fundida, Vycor.
Región VIS = Celdas de vidrio, pyrex, algún tipo de plástico.
La longitud más común para el trabajo en las regiones UV-VIS es 1 cm (otras son:
2,, 5 y 10 cm).
)
Sistema Optico
En Espectrofotometría VIS-UV es esencial disponer de una radiación constituída
por un grupo limitado y contínuo de λ (Banda) ya que:
™ La ley de Beer se aplica a radiación monocromática.
™ Los anchos de banda estrechos aumentan la SENSIBILIDAD al disminuir la
señal del blanco pero no de la muestra
muestra.
™ Mejoran, también, la SELECTIVIDAD, con menos λ menor probabilidad de que
sustancias distintas del analito absorban.
Están constituidos por dos componentes:
•Sistema para dirigir la radiación
Se utilizan: Diafragmas
Diafragmas, Rendijas,
Rendijas Lentes
Lentes, Espejos,
Espejos etc.
etc
•Sistema de aislamiento de λ.
‰ Sistemas NO DISPERSIVOS: Actúan atenuando todas las λ excepto la
deseada.
‰ Sistemas DISPERSIVOS: Dispersan la radiación policromática separando
espacialmente las λ del espectro.
Sistema selector de la longitud de onda: Monocromadores
(i) Fotómetro (colorímetro): este tipo de instrumentos utiliza filtros que permiten obtener
bandas de radiación que abarcan un intervalo limitado de longitudes de onda (con un fotómetro
no es posible obtener una banda de absorción variable en forma continua).
Color filtro
Color solución
380–435
Azul
Amarillo
480–490
Verde azuloso
Rojo
500–560
Verde amarillento
Violeta
580–595
Anaranjado
Azul verdoso
595–650
Rojo
Verde azuloso
Región λ (nm
(ii) Espectrofotómetro: utilizan un complejo sistema óptico de selección de
longitud de onda (sistema monocromador), el cual consta de variados
componentes
p
tales como:
•prisma o rejilla;
•lentes;
•espejos;
•ranuras de entrada y salida.
Estos instrumentos pueden seleccionar longitud de onda en forma continua y
en algunos casos con precisión de décimas de nm. Por lo tanto, es posible
obtener en forma continua el espectro de absorción de una molécula.
Sistemas NO DISPERSIVOS: FILTROS
Son láminas que al interponerse en el paso de la luz absorben parte de la radiación
o la interfieren, permitiendo que pase únicamente la luz deseada.
Filtros
Filtros de Absorción
De paso de banda
De corte
Filtros de Interferencia
Filtros de absorción: Actúan dejando pasar una banda de λs (Filtros de paso de
banda) o bloqueando las λs más largas o más cortas que una λ determinada
(Filtros de corte).
Ancho de banda efectiva = 30-50 nm.
Filtro de paso de banda
Δλ = ancho de banda efectivo
Filtro de corte
λc = λ de corte
λm = λ a la que T = 90-99% de Tm
λh= λ a la que T = 0,5 Tm
Sistemas NO DISPERSIVOS: FILTROS
Filtros de interferencia: Se basan en las interferencias ópticas para obtener una
banda de λs relativamente estrecha.
Ancho de banda efectivo: 5-10 nm.
Se construyen con un dieléctrico transparente, CaF2 ó MgF2, que ocupa el espacio
entre dos películas metálicas semitransparentes muy delgadas,
delgadas generalmente de
Ag. Todo ello colocado entre dos capas de vidrio transparente.
.
Sistemas NO DISPERSIVOS: FILTROS
Filtros de interferencia: El grosor de la capa dieléctrica, t, se controla
cuidadosamente y determinará la λ que se transmite.
t
Para que exista reforzamiento en 2
(rayo reflejado en 1´) y produzca
una interferencia constructiva con
el rayo que incide en 2), la
diferencia de camino óptico entre
los rayos debe ser un múltiplo
entero de la λ en el medio
dieléctrico.
dieléctrico
Sistemas NO DISPERSIVOS: FILTROS
Filtros de interferencia
Los filtros de interferencia son mejores que los de absorción:
1.
Anchos de banda efectivos menores (5-10 nm frente 40-50 en Filtros de
Absorción).
2.
El porcentaje de transmitancia en el máximo es más alto 70-85% del inicial,
mientras que en los filtros de absorción es 50 %.
Sistemas DISPERSIVOS: MONOCROMADORES
•
Dispersan la radiación separando espacialmente las distintas λ de la luz
policromática.
•
Proporcionan bandas de ancho pequeño.
•
Aíslan una pequeña banda de la luz policromatica,
policromatica es decir
decir, monocroman la
radiación.
Redes de transmisión
Monocromadores de red
Redes de reflexión
Monocromadores
Monocromadores de Prisma
Constan de tres componentes:
1.
Sistema dispersante: Red o prisma
2.
Lentes, colimadoras y de enfoque, para dirigir la radiación
3.
Rendijas de entrada y salida.
Red de difracción por reflexión
Red de difracción por reflexión
Ley de Bragg
n λ = 2 d sen Φ
Detección de la radiación
Dispositivo electrónico llamado transductor que convierten la
energía radiante en una señal eléctrica.
Requisitos:
• Responder a la E.R. en un amplio
intervalo de λ.
• Poseer elevada sensibilidad.
• Respuesta lineal.
• Tiempo de respuesta rápido, etc…
Detectores de fotones:
• Celdas fotovoltaicas.
• Tubos fotomultiplicadores.
• Fototubos.
• Diodo de silicio.
Efecto fotoeléctrico
El efecto fotoeléctrico consiste en la emisión de electrones p
por un
metal cuando se hace incidir sobre él una radiación electromagnética
(luz visible o ultravioleta, en general).
En la actualidad los materiales fotosensibles más utilizados son, aparte
de los derivados del cobre (ahora en menor uso), el silicio, que produce
corrientes eléctricas mayores.
DETECTORES DE FOTONES
Fototubo: La radiación causa una emisión de electrones de una
superficie sólida fotosensible. Basado en el efecto fotoelectrico.
e-
Anodo
Catodo
e-
e-
El material fotosensible del cátodo(ej. óxidos de metales
alcalinos) emite electrones al ser irradiado. Debido al
voltaje
j aplicado
p
entre los electrodos, los electrones se
dirigen al ánodo, por el circuito fluye una corriente cuya
intensidad es directamente proporcional a la intensidad de
la radiación que la provoca.
• Se utilizan en el UV-VIS
(190-700 nm)
•Es más sensible q
que la célula
fotovoltaica.
Está constituido por un cátodo semicilíndrico y un
ánodo de filamento en una ampolla de cuarzo o
vidrio donde se ha hecho el vacío. Entre los
electrodos se aplica un voltaje
DETECTORES DE FOTONES
Tubo fotomultiplicador: Al ser iluminado el cátodo fotosensible se emite electrones que son
acelerados por el campo eléctrico e inciden sobre varias superficies liberando una cascada de
electrones secundarios, 106- 107 electrones por cada fotón incidente.
Fotocátodo
hν
Ventana de cuarzo
Dínodo 1
Dínodo 2
Dínodo 3
Ánodo
•Son muy sensibles a la
radiación
di ió VIS y UV
UV.
•Tienen tiempos de respuesta
muy rápidos.
Constituido por un cátodo fotosensible (similar al fototubo) y un ánodo colector
separados por una serie de electrodos positivos de MgO, GaP (entre 5-11), llamados
dínodos (cada uno a un voltaje 90 V superior al anterior) que emiten de 2 a 5
electrones cuando son golpeados con electrones de suficiente energía.
Espectroscopía de emisión fluorescente
Análisis cuantitativo: linealidad
Log [F0 / F0 – F] = a . b. c
F0: 100, referencia: sulfato de quinina / HClO4 0.1 M
F: señal de fluorescencia del analíto
2 – log (100 – F)
A cte.
A:
t de
d proporcionalidad
i
lid d
B: ancho de la celda
C: concentración del analíto
Técnica muy sensible
C
Rango dinámico lineal a bajas concentraciones amplio
Métodos espectroscópicos
-directo
- indirecto
UV-visible
involucra una reacción química
Térmica
Enzimática
Desarrollo de color: método
colorimétrico
-Bebidas analcoholicas (Coca-ColaTM)
Método directo: cafeína
-Bebidas alcoholicas (vino)
Método directo: ác. Sórbico
Método indirecto: test de ác. Tiobarbitúrico
(lípidos)
-Hidratos de carbono
Método directo: relación de hexosas a pentosas
Método indirecto: Test de Duboi, H2SO4 fenol
-Lípidos
Método indirecto
Test de Stern-Shapiro (ác. Hidroxámicos)
Método indirecto: Test de ác. tiobarbitúrico