xiv RESUMEN La tuberculosis, causada principalmente por

RESUMEN
La tuberculosis, causada principalmente por Mycobacterium tuberculosis,
es la enfermedad infecciosa de mayor incidencia a nivel mundial y representa
un serio problema de salud pública. Se conoce de la importancia que tiene la
respuesta inmune celular en el combate de la tuberculosis, por lo que la
identificación de los antígenos de Mycobacterium tuberculosis que inducen esta
respuesta y activan a los linfocitos T, resulta de gran interés. El objetivo de este
trabajo, fue caracterizar parcialmente la proteína PE_PGRS33 de M.
tuberculosis en un sistema de procesamiento y presentación de antígeno in
vitro; utilizando los hibridomas de células T específicos contra la proteína,
generados previamente (Gastélum 2008). Para ello se evaluó la activación de
los hibridomas por su capacidad de síntesis de IL-2 utilizando varias
metodologías, como citometría de flujo, proliferación de células CTLL-2 y ELISA
indirecto. En este trabajo, se establecieron las condiciones óptimas para evaluar
la activación de los hibridomas de células T por citometría de flujo, mediante la
expresión de IL-2 y otros marcadores de activación como CD69 y CD25; y se
identificó el fenotipo CD3+CD4+CD8- de los 5 hibridomas específicos contra la
proteína PE_PGRS33: 3C2.D4, 3C2.F5, 3C2.E7, 2F9.E7 y 2F9.B7. Además, se
realizó un análisis de los posibles ligandos de unión de la proteína a moléculas
MHC II (IAk) por 2 bases de datos y se compararon con las predicciones de los
péptidos generados por la digestión con la enzima tripsina obtenidos por el
programa PEPTIDE CUTTER. Al comparar ambas predicciones, se encontró
que es factible obtener dichos ligandos; por lo tanto, en este estudio se
establecieron las condiciones óptimas para la digestión enzimática con tripsina
y la purificación de los productos de la digestión por HPLC en fase reversa; que
ayudarán a la caracterización bioquímica e inmunológica de la proteína, en
futuras investigaciones.
xiv