Microbiología de Agua: Coliformes, coliformes fecales y Escherichia coli Laboratorio Microbiología Aplicada Spring 2007 Microbiología de Agua ¿Qué es un coliforme? Grupo de especies de varios géneros Klebsiella pneumoniae Escherichia coli Citrobacter freundaii Enterobacter aerogenes Microbiología de Agua ¿Qué es un coliforme? zCaracterísticas en común {Gram-negativos {Bacilos no formadores de esporas {Algunos son mótiles {Anaeróbos fermentativos {Fermentadores de lactosa produciendo gas y ácido luego de 48 hrs a 32 o 35oC Coliformes zPueden estar presentes en: {heces fecales de animales de sangre caliente {pájaros {tierra Coliformes fecales zIncluye E. coli y algunos Klebsiella y Enterobacter spp. {Temperaturas de incubación: 44.5 o 45oC por 24 hrs. Tipos de E. coli z Cuatro tipos de E. coli enterovirulentos (EEC) { E. coli enterotoxigénico (ETEC) { E. coli enteropatogénico (EPEC) { E. coli enterohemorrágico (EHEC) { E. coli enteroinvasivo (EIEC) E. coli enterotoxigénico (ETEC) z Causante de la diarrea del viajero z Dosis infecciosas altas z Vehículo: agua o alimento contaminado con aguas usadas E. coli enteropatogénico (EPEC) zMecanismo de virulencia probablemente por la producción de una verotoxina (Shiga-like toxin) zAlimentos implicados son carne molida y pollo E. coli enterohemorrágico (EHEC) z E. coli O157:H7 es habitante normal de los intestinos de todos animales incluyendo los humanos zProducción de una verotoxina zDosis tan bajas como 10 organismos zNo fermenta sorbitol, MUG negative E. coli enterohemorrágico (EHEC)- Alimentos implicados E. coli enteroinvasivo (EIEC) z Parte de la flora intestinal normal de los humanos y otros primates zDosis infecciosa ~ 10 organismos zProduce “bacillary dysentery” zSe confunde con shigellosis zVehículos: hamberguer, leche no pausterizada Infecciones E. coli O157:H7 Septiembre-Octubre 2006 199 personas afectadas;3 muertos Taco Bell – Dic 2006 71 personas afectadas Métodos para Detectar Coliformes zMPN {Basado en probabilidad estadistica {NO es contaje directo {Técnica líquida zSólido {Contaje directo en medio Coliformes MPN - Continuación El objetivo es “diluir el organismo zSeleccione la muestra más diluída con todos los tubos positivos y los próximos dos {3,2,1 – Nuestra combinación zDetermine el MPN utilizando la tabla de MPN Coliformes Se asume en MPN zDistribución al azar de la bacteria zLos organismos no se aglutinan zSi hay un microorganismo presente, crecerá zExisten las condiciones apropiadas para crecer Ventajas sobre el uso de placas zEl tamaño de la muestra puede ser mayor zMejor para números bajos de organismos zEl medio líquido es más suave para el organismo porque no se expone al calor zRequiere preparación de medio con antelación Medios - LST z Lauryl Sulfate Tryptose Broth z Prueba PRESUMPTIVA para coliformes { Se informa como “presumptive coliforms/g” z Ingredientes { Lauryl Sulfate – Algunas bacterias no pueden crecer - Selectivo { Lactosa – Producción de gas – Diferencial w/durham tubo { NaCl – Aumenta razón de reproducción { Tryptona – Fuente de Nitrógeno z Incube a 35oC por 48 horas Medio - BGLB z Brilliant Green Lactose Bile z Incube a 35oC por 48 horas z Producción de gas – Positivo z Ingredientes {Oxgall – forma de bilis {Brilliant Green Dye – Inhibe Gram + z Resultados son coliformes confirmados z No utilize BGLB directamente – Altamente inhibitorio Medio – EMB Agar Eosine Methylene Blue Agar Placas ya servidas Estriado para aislar del MPN Ingredientes - Diferencial { Peptona – Proteína { Lactosa – Producción de ácido { Tinte Eosine – Inhibitorio { Azul de metileno – Indicador de pH z E. coli and Enterobacer { Nucleated, dark centered, with or without a metallic green sheen – CONFIRMED COLIFORMS z z z z Coliformes Coliformes Método Sólido zVRBA {Violet Red Bile Agar zPeptona – Fuente de nitrógeno zLactosa – Producción de ácido zRojo neutral – Indicador (6.8 rojo, 8.0 amarillo) zCristal Violeta – Inhibe Gram + zNaCl – Aumenta razón de crecimiento zSales biliares VRBA zTípica – Rojo-púrpura, Colonias Elípticas, puede ser una zona de precipitación zSe recomiendan placas con 10100 colonias– Colonias más grandes zPonga una capa de agar luego que la primera solidifique zResultados – Presumptiva Coliformes Coliformes