Medio de enriquecimiento selectivo y diferencial para la detecci

Medio de enriquecimiento selectivo y diferencial para la detecció
detección de
microorganismos del grupo coliforme en diversos productos y para
investigar la presencia de E. coli por fluorescencia y prueba confirmativa
por indol.
El reactivo DBC contiene el substrato Cromogé
Cromogénico de la enzima 55-bromobromo-4-clorocloro-3 indolilindolil-B
D-Galactopiranosida (X(X-GAL) para la detecció
detección de BB-galactosidasa (una enzima indicativa del
grupo de los coliformes).
coliformes). En la hidró
hidrólisis de la BB-D-galactosidasa,
galactosidasa, XX-GAL desprende un
compuesto Cromogé
Cromogénico (indigo
(indigoindigo-azul) que hace que el medio vire de amarillo claro a un color
azulazul-verdoso.
Ademá
Además contiene el substrato fluorogenico de la enzima 44-metilmetil-umbelliferilumbelliferil-B-D-glucoronido
(MUG) para la detecció
detección de B - glucoronidasa (una enzima especí
específica para E.coli). En la
hidró
hidrólisis de la B - glucoronidasa,
glucoronidasa, MUG desprende 4 – metilumbelliferona que presenta
fluorescencia cuando se expone a la luz ultravioleta. La fluorescencia
fluorescencia distingue la presencia de
E.coli del grupo de coliformes.
coliformes.
PROCEDIMIENTO
1. Tomar la muestra en el frasco hasta 100mL.
2. Verter el contenido del polvo en el frasco con la muestra.
3. Agitar hasta integrar completamente el polvo. (ligeramente amarillo)
amarillo)
Incubar a 35 ± 2 º C 18 a 24 hrs.
INTERPRETACIÓ
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS.
Despué
Después del periodo de incubació
incubación, examinar si existe cambio de color en el medio.
a)
ausencia
ia de
Si el medio no presenta cambio de color o es amarillo hay ausenc
coliformes.
b)
Si se detecta un cambio de color verdeverde-azul indica la presencia de colifornes.
c)
La presencia de Escherichia coli se determina al iluminar al cultivo con luz U.V
(366nm), si hay fluorescencia indica la presencia de E. coli (algunas especies de
Shigella pueden dar positiva la fluorescencia). La confirmaci
confirmació
ón de E. coli se
realiza mediante la detecció
detección de la producció
producción de indol al agregar unas gotas de
reactivo de Kovacs al medio de cultivo. Si es positicvo se forma un anillo