método analítico - procedimiento analítico

TERMINOLOGÍA ANALÍTICA
- PROCESO ANALÍTICO
- TÉCNICA ANALÍTICA
- MÉTODO ANALÍTICO
- PROCEDIMIENTO ANALÍTICO
- PROTOCOLO ANALÍTICO
PROCESO ANALÍTICO
Conjunto de operaciones analíticas intercaladas que se
realizan entre la muestra y el resultado
Muestra
Operaciones
previas
Medida de
la señal
Toma y
tratamiento de
datos
Resultado
TÉCNICA ANALÍTICA
Principio científico adaptado a uno o varios instrumentos,
que nos es útil o necesario para obtener información
sobre la composición de la muestra (fluorimetría,
potenciometría etc.)
MÉTODO ANALÍTICO
Adaptación variada de una técnica, para llevar a cabo
una medida determinada. (Pueden existir varios métodos
analíticos distintos para determinar el mismo analito
mediante la misma técnica).
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO
Las instrucciones generales escritas necesarias para
utilizar un método. (Normalmente son normas de carácter
oficial Ej. ASTM D-2914 análisis de SO2 en vino).
PROTOCOLO ANALÍTICO
Las directrices específicas escritas que recogen los pasos
necesarios para desarrollar el método analítico sin
excepción. (Contiene detalles específicos que no recoge
el método).
SELECCIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO
DEFINICIÓN DEL PROBLEMA
1.- ¿Qué exactitud se requiere?
2.- ¿De cuánta muestra se dispone?
3.- ¿En qué intervalo de concentraciones está el
analito?
4.- ¿Qué componentes de la muestra interfieren?
5.- ¿Cuáles son las propiedades físicas y químicas
de la matriz de la muestra?
6.- ¿Cuántas muestras hay que analizar?
CARACTERÍSTICAS DE FUNCIONAMIENTO
Criterios de Fiabilidad (criterios numéricos)
Criterios de Practicabilidad (otras características
a valorar)
Características de Funcionamiento del método analítico
Criterios de Fiabilidad
Criterios de Practicabilidad
Precisión
Exactitud
Sesgo
Linealidad
Intervalo de Linealidad
Límite de Detección
Límite de Cuantificación
Sensibilidad
Selectividad
Robustez
Velocidad
Coste y disponibilidad de
equipo
Toxicidad de los reactivos
Habilidad del operador
Facilidad y comodidad
Seguridad en el laboratorio
Coste por muestra
EXACTITUD
Grado de coincidencia entre el valor
obtenido de la magnitud medida y el valor real
de la misma. (medida del error sistemático)
PRECISIÓN
Grado de concordancia mutua entre los
datos que se han obtenido de una misma
forma. (medida del error aleatorio)
EXACTITUD / PRECISIÓN
PRECISO
IMPRECISO
SESGADO
INEXACTO
INEXACTO
EXACTO
INEXACTO
INSESGADO
PRECISIÓN
(Grado de aproximación entre los resultados)
- Repetibilidad
+ Variación de los resultados dentro del curso del mismo
análisis
- Precisión intermedia
+ Variación interdía, por instrumentos, por analistas etc.
- Reproducibilidad
+ Ensayos interlaboratorio
Se expresará a través de la desviación estándar, coeficiente de
variación y el intervalo de confianza para cada caso.
LINEALIDAD
Es la capacidad del método para establecer una
relación directamente (o matemáticamente)
proporcional entre el resultado y la concentración
del analito en la muestra.
y = mx+b .
(S = mc + Sblanco )
Se expresa en términos de variación de la
pendiente de la línea obtenida por regresión
INTERVALO DE LINEALIDAD
Es el intervalo de concentración entre los niveles
de analito extremos (mayor y menor) que puede
utilizarse con precisión, exactitud y linealidad
Se expresa en unidades de concentración
LÍMITE DE DETECCIÓN
“Es la mínima concentración (o cantidad) de analito en
una muestra que puede ser detectada, pero no
necesariamente cuantificada, bajo las condiciones
experimentales establecidas”.
a) Evaluación visual (métodos no instrumentales)
b) Evaluación basada en la relación Señal/Ruido (3:1)
c) Evaluación basada en la desviación estándar de la
respuesta instrumental y la pendiente de la curva (m)
(DL= 3 σ / m)
La determinación de σ se corresponde con:
La desviación estándar del blanco
LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN
“Es la mínima concentración (o cantidad) de analito en
una muestra que puede ser determinado con aceptable
exactitud y precisión, bajo las condiciones experimentales
establecidas”.
a) Evaluación visual (métodos no instrumentales)
b) Evaluación basada en la relación Señal/Ruido (10:1)
c) Evaluación basada en la desviación estándar de la
respuesta instrumental y la pendiente de la curva (m)
(QL= 10 σ / m)
La determinación de σ se corresponde con:
La desviación estándar del blanco
LINEALIDAD E INTERVALO DE LINEALIDAD
S
S = mc + SBlanco
m=
m
SBlanco
C
SENSIBILIDAD
Capacidad del instrumento para discriminar
pequeñas diferencias en la concentración del
analito.
Dos factores limitan la sensibilidad
- La pendiente de la curva de calibrado
- La precisión
a) Sensibilidad de Calibración (IUPAC)
S = mC + SBlanco ,
S − SBlanco
m=
C
b) Sensibilidad analítica
γ =σ
m
Señales
SELECTIVIDAD
Expresa la capacidad del método analítico para medir
con exactitud y de modo específico el analito en
presencia de otros componentes que pueden formar
parte de la matriz.
Se mide comparando los resultados de un análisis de
muestras que contienen impurezas, productos de
degradación o ingredientes placebo, con los resultados
de la misma muestra sin los componentes anteriores
ROBUSTEZ
Expresa la capacidad del método para permanecer
invariable a pequeñas modificaciones ambientales o de
procedimiento.
Se mide mediante la reproducibilidad
ROBUSTEZ
(Influencia de las variaciones ambientales o de procedimiento)
- Estabilidad de las disoluciones
- Tiempos de extracción
- En HPLC:
+ Variaciones de pH de la fase móvil
+ Variaciones de composición de la fase móvil
+ Diferentes columnas (lotes y suministradores)
+ Temperatura y caudal
- En GC
+ Diferentes columnas (lotes y suministradores)
+ Temperatura y caudal
VALIDACIÓN
Se define la validación analítica como el trabajo
experimental encaminado a obtener pruebas documentadas
de que un método analítico proporciona consistentemente la
información requerida al uso al que se destina.
Los criterios de validación se deben relacionar con las
especificaciones a examinar, por lo que el método deberá
poseer la característica básica necesaria para discriminar
de forma segura la información analítica de interés.
La ICH (International Conference on Harmonization
http://www.ich.org) (1996) establece las características que
deben considerarse en la validación de un método analítico
para evaluar la calidad de los medicamentos.
Criterios para juzgar la calidad de los medicamentos
Pruebas de Identidad
-Tienen por objeto demostrar que la muestra examinada se
corresponde con la sustancia que debe ser.
Pruebas de Pureza
-Límite de las concentraciones aceptables de impurezas de los
medicamentos.
Pruebas de Actividad
-Límites admitidos de concentración del ingrediente
ingredientes activos en el medicamento o materia prima.
o
Pruebas de Efecto o Acción
-Garantía de que la forma farmacéutica actuará del modo
previsto.
CALIBRACIÓN
La calibración consiste en comparar el valor de la magnitud
medida (o representada) por el sistema de medición, con los
los valores que, bajo condiciones estrictamente definidas,
producen patrones conocidos o materiales de referencia
- Calibración directa.
La magnitud medida coincide con la del patrón
- Calibración indirecta.
La respuesta del instrumento no coincide con
la magnitud medida
- Métodos de calibración
+ Curva de calibrado
+ Adición estándar
+ Patrón interno
Contenido:
Definiciones
Tipos de defectos
Crítico
Principal
Secundario
Niveles de Inspección
Normal
Rigurosa
Reducida
Clases de Muestreo
Simple
Doble
Múltiple
MEDIDA
EL INSTRUMENTO
Planes de EN
Muestreo
Curvas OC
Patrón
Analito
MEDIDA EN EL INSTRUMENTO
!
Patrón
Del Analito
Patrón
interno
!
!
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!
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!
!
MEDIDA EN EL INSTRUMENTO
De dos señales diferentes
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#
!
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GRÁFICAS DE CONTROL DE CALIDAD
Gráficas de control tipo Shewhart
(De valores individuales, Xi)
Gráficas de “Rango” o “Recorrido” (R)
Gráficas de control de datos acumulados
(Gráficas de “Cusum”)
GRÁFICAS DE CONTROL Xi SHEWHART
+3σ X
+2σ X
Invalidación (probabilidad de azar = 1%)
Alarma (probabilidad de azar = 5%)
VALOR
DIANA
-2σ X
-3σ X
Alarma (probabilidad de azar = 5%)
Invalidación (probabilidad de azar = 1%)
1
2
3
4
5
CONTROLES
6
7
8
Indicadores para interpretar graficas X
El procedimiento de medida estará fuera de control
cuando:
1) Uno o más puntos superen los niveles de
invalidación (>3σ de X)
2) Dos o más puntos consecutivos por encima del
límite de alarma (>2σ de X)
3) Una serie de 7 o más puntos por arriba o por
abajo de la media X
4) Una tendencia de incremento o disminución
GRÁFICAS DE R (RECORRIDO)
+3,3σ
σR
+2,5σ
σR
Invalidación (probabilidad de azar = 1%)
Alarma (probabilidad de azar = 5%)
VALOR
RECORRIDO
MEDIO
1
2
3
4
5
CONTROLES
6
7
8
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CUSUM
GRÁFICAS DE CUSUM
30
20
INVALIDACIÓN
10
ALARMA
5
10
15
0
-10
ALARMA
-20
-30
INVALIDACIÓN
CUSUM
SHEWHART
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