Amilasa Pancreática SP

Amilasa Pancreática SP
Método Cinético Colorimétrico
Fabricante: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelona)
IVD
PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO
MUESTRA:
Suero, plasma heparinizado o en EDTA, orina.
Estabilidad del suero o plasma: un año a –20ºC, 7 días a 4-8ºC, 7 días a 20-25ºC.
Estabilidad de la orina: 3 semanas a –20ºC, 10 días a 4-8ºC, 2 días a 20-25ºC.
Deben descartarse muestras contaminadas.
PROCEDIMIENTO:
CONSERVAR A 2 - 8º C
LEER LAS INSTRUCCIONES ANTES DEL USO
REF
Referencia:
GN 80125:
Cont.
Presentación:
5 x 20 mL reactivo 1 + 25 mL reactivo 2
PRINCIPIO DEL METODO:
El sustrato EPS-G7 es catalizado por las α-Amilasas en varios fragmentos, los
cuales son hidrolizados por la α-glucosidasa produciendo glucosa y p-nitrofenol.
Al inhibirse la acción de la amilasa salivar en la fase de pre-incubación, el
incremento de absorbancia se corresponde con la actividad de la amilasa
pancreática de la muestra.
5 EPS-G7 + 5 H2O --Æ 2 Etilideno-G5 + 2G2PNP + 2 Etilideno- G4 + 2 G3PNP +
Etilideno-G3 + G4PNP
α-Glucosidasa
2 G2PNP + 2 G3PNP + G4PNP + 14 H2O Å---Æ 5 PNP + 14 G
Existen aplicaciones para los principales sistemas automáticos.
Longitud de onda: 405 nm
Paso óptico: 1 cm
Temperatura: 37ºC
Reacción: Cinética creciente
Medida: frente a aire
Suero / Plasma
Orina
Muestra
20 µL
20 µL
R1 Enzima
1000 µL
1000 µL
Mezclar, incubar aprox. 3 minutos, después añadir:
R2 de arranque
250 µL
250 µL
Mezclar y leer la absorción después de 2 min. Leer de nuevo cada minuto durante
3 minutos y calcular el ∆ Abs/min medio.
CALCULO:
Mediante Factor:
Actividad muestra = ∆ Abs/min x Factor
Factor (a 405 nm) = 5670
Mediante Calibrador:
[Amil. P] (U/L) muestra = (∆A/min
muestra
/ ∆A/min
cal)
. [Amil. P] (U/L)
cal
CALIBRADORES Y CONTROLES:
SIGNIFICACIÓN CLINICA:
Las α-Amilasas son enzimas hidrolíticos que catalizan el almidón en maltosa. La
amilasa pancreática es producida por el páncreas y liberada en el tracto intestinal,
mientras que la amilasa salivar es sintetizada en las glándulas salivares y
secretada en la saliva. La estructura de ambas amilasas es similar en un 97%, por
lo que sólo pueden distinguirse utilizando anticuerpos monoclonales para inhibir la
acción del enzima salivar. La amilasa presente en la sangre es eliminada a través
de la orina.
La medición de la amilasa pancreática en suero y orina se aplica principalmente en
el diagnostico de patologías pancreáticas y en su seguimiento. En la pancreatitis
aguda, la actividad de la amilasa en sangre aumenta en pocas horas después de
iniciarse el dolor abdominal, alcanzando el máximo a las 12 horas y vuelve a
valores normales al cabo de 5 días. Aunque la amilasa pancreática es mucho mas
especifica para la detección de enfermedades pancreáticas, se recomienda
efectuar una medición de Lipasa para confirmar una pancreatitis aguda.
REACTIVOS:
Se recomienda el uso del multicalibrador Biocal (GN 90999) para calibrar la
técnica.
Se recomienda el uso de los controles Gernorm (GN 90998) y Gerpath (GN 90997)
para controlar a dos niveles la técnica.
CARACTERÍSTICAS DEL METODO:
Rango de medida:
El test ha sido desarrollado para determinar la actividad de la amilasa pancreática
cuya ∆ Abs/min máxima corresponde a 0.350. Si los valores exceden el límite
máximo, debe diluirse la muestra en solución salina (1+10) y multiplicar el
resultado obtenido por 11.
Especificidad / Interferencias:
No se han observado interferencias por Bilirrubina hasta 40 mg/dL, ácido
ascórbico 30 mg/dL y Lipemia a 2.000 mg/dL de Triglicéridos. La presencia de
hemoglobina interfiere incluso a concentraciones mínimas.
Sensibilidad / Límite de detección:
Se encuentran listos para el uso.
El límite inferior de detección es 5 U/L.
Reactivo 1:
Tampón de Good (pH 7.15)
Na Cl
Mg Cl2
α Glucosidasa
Anticuerpos monoclonales
0.1 mol/L
62.5 mmol/L
12.5 mmol/L
≥ 2.5 kU/L
≥ 31 mg/L
Reactivo 2:
Tampón de Good (pH 7.15)
EPS-G7
0.1 mol/L
8.5 mmol/L
Precisión intra ensayo (n=20, a 37ºC):
Muestra 1 (U/L): media: 69.7, SD: 2.18, CV: 3.13%
Muestra 2 (U/L): media: 207, SD: 2.61, CV: 1.26%
Muestra 3 (U/L): media: 370, SD: 3.36, CV: 0.91%
Precisión inter ensayo (n=20, a 37ºC):
Muestra 1 (U/L): media: 68.3, SD: 1.48, CV: 2.17%
Muestra 2 (U/L): media: 204, SD: 1.61, CV: 0.79%
Muestra 3 (U/L): media: 371, SD: 3.14, CV: 0.85%
Comparación con otros métodos:
CONSERVACIÓN:
El reactivo es estable hasta fecha de caducidad si se mantiene a 2-8ºC, protegido
de la luz y de contaminaciones. No debe congelarse.
Se han analizado 58 muestras utilizando el reactivo de Gernon (y) y otro de un
fabricante de la competencia (x).
Correlación: r= 0.994; relación: y = 0.97x - 1.66
PRECAUCIONES EN EL MANEJO:
VALORES NORMALES:
La actividad de la α-amilasa salivar llega hasta el 3%. Si hay presencia de
actividades muy elevadas para α-amilasa salivar, pueden obtenerse lecturas
incrementadas de α-amilasa pancreática.
La piel y la saliva contienen α-amilasa por lo que ha de evitarse pipetear el
reactivo con la boca así como el contacto del reactivo con la piel.
El reactivo contiene azida sódica (0.95 g/L). Evitar cualquier contacto con piel y
membranas. No ingerir.
Deben tomarse las precauciones necesarias en el uso de reactivos de laboratorio
clínico.
Deben seguirse las disposiciones locales para la gestión de residuos.
En suero y plasma, los valores deben ser inferiores a 53 U/L para mujeres y
hombres.
En orina, los valores deben ser inferiores a 319 U/L para mujeres e inferiores a
356 U/L para hombres.
Cada laboratorio debe establecer su propio rango de referencia.
BIBLIOGRAFÍA:
Lorentz K. α-Amilase. In: Thomas L, editor. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed.
Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p.192-202
IU/GN/80125/R0/1009
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
e-mail: ral@ral-sa.com
web: www.ral-sa.com
PANCREATIC AMYLASE SP
Kinetic Colorimetric Method
Manufacturer: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelona) - Spain
IVD
FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE
SPECIMEN:
Serum, heparin plasma or EDTA plasma, urine.
Stability of serum/plasma: 1 year at -20ºC, 7 days at 4-8ºC, 7 days at 20-25ºC.
Stability of urine: 3 weeks at -20ºC, 10 days at 4-8ºC or 2 days at 20-25ºC.
Discard contaminated specimens.
PROCEDURE:
STORE AT 2 - 8º C
READ INSTRUCTIONS
REF
Reference:
GN 80125:
Cont.
Package:
5 x 20 mL reagent 1 + 25 mL reagent 2
PRINCIPLE:
The substrate EPS-G7 is cleaved by α-amylases into various fragments. These are
further hydrolysed in a second step by α-glucosidase producing glucose and pnitrophenol. As the salivary isoenzyme is inhibited selectively by a combination of
two monoclonal antibodies during the preincubation phases, the increase in
absorbance represents the pancreatic amylase activity in the sample.
5 EPS-G7 + 5 H2O --Æ 2 Ethylidene-G5 + 2G2PNP + 2 Ethylidene- G4 + 2 G3PNP
+ Ethylidene-G3 + G4PNP
α-Glucosidase
2 G2PNP + 2 G3PNP + G4PNP + 14 H2O Å---Æ 5 PNP + 14 G
Application sheets for automated systems are available on request.
Wavelength: 405 nm
Optical path: 1 cm
Temperature: 37ºC
Reaction: Increasing kinetic
Measurement: against air
Serum / Plasma
Urine
Sample
20 µL
20 µL
R1 Enzyme
1000 µL
1000 µL
Mix, incubate approx. 3 minutes, then add:
R2
250 µL
250 µL
Mix, read absorbance after 2 minutes. Read absorbance again after 1, 2 and 3
minutes and calculate the mean ∆ Abs/min.
CALCULATION:
With factor:
Sample activity = ∆ Abs/min x Factor
Factor (at 405 nm) = 5670
With calibrator:
[P. Amil. ] (U/L)
sample
= (∆A/min
sample
/ ∆A/min
cal)
. [P. Amil.] (U/L)
cal
CALIBRATORS AND CONTROLS:
SUMMARY:
α-Amylases are hydrolytic enzymes which break down starch into maltose. In the
human body α-amylases originate from various organs: the pancreatic amylase is
produced by the pancreas and released into the intestinal tract, the salivary
amylase is synthesized in the salivary glands and secreted into saliva. As the
pancreatic and the salivary amylase show a structural homology of 97%, the only
method to distinguish both sufficiently is to use an assay based on monoclonal
antibodies to inhibit the salivary enzyme. The amylase present in the blood is
eliminated through the kidney and excreted into the urine. Therefore, an elevation
of serum activity is reflected in the rise of urinary amylase activity. Measurement
of α-amylase in serum and urine is mainly applied for the diagnosis of pancreatic
disorders as well as for detecting the development of complications. In acute
pancreatitis the blood amylase activity increases within few hours after onset of
abdominal pain, peaks after approx. 12 hours and returns to values within the
reference range at the latest after 5 days. Although the pancreatic amylase is
much more specific for detection of pancreatic disorders than the total amylase,
for confirmation of an acute pancreatitis an additional measurement of lipase is
recommended.
REAGENTS:
It is recommended to use the multicalibrator Biocal (GN 90999) to calibrate the
method.
It is recommended the use of the controls Gernorm (GN 90998) and Gerpath (GN
90997) to control at two levels the method.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS:
Measuring range:
The test has been developed to determine pancreatic amylase activities which
correspond to a maximal ∆ Abs/min of 0.350. If such value is exceeded the
sample should be diluted 1+10 with NaCl solution (9g/L) and results multiplied by
11.
Specificity / Interferences:
No interference was observed by ascorbic acid up to 30 mg/dL, bilirubin up to 40
mg/dL and lipemia up to 2000 mg/dL triglycerides. Hemoglobin interferes even at
minimal concentrations.
Sensitivity/ Limit of detection:
The lower limit of detection is 5 U/L.
Precision intra-assay(n=20, at 37ºC):
Ready to use.
Reagent 1:
Good’s buffer (pH 7.15)
Na Cl
Mg Cl2
α Glucosidase
Monoclonal antibodies
0.1 mol/L
62.5 mmol/L
12.5 mmol/L
≥ 2.5 kU/L
≥ 31 mg/L
Reagent2:
Good’s buffer (pH 7.15)
EPS-G7
0.1 mol/L
8.5 mmol/L
Sample 1 (U/L): mean: 69.7, SD: 2.18, CV: 3.13%
Sample 2 (U/L): mean: 207, SD: 2.61, CV: 1.26%
Sample 3 (U/L): mean: 370, SD: 3.36, CV: 0.91%
Precision inter-assay (n=20, at 37ºC):
Sample 1 (U/L): mean: 68.3, SD: 1.48, CV: 2.17%
Sample 2 (U/L): mean: 204, SD: 1.61, CV: 0.79%
Sample 3 (U/L): mean: 371, SD: 3.14, CV: 0.85%
Method comparison:
STORAGE:
The reagents are stable up to the end of the indicated month of expiry, if stored at
2-8ºC, protected from light and contamination is avoided. Do not freeze the
reagents.
WARNINGS AND PRECAUTIONS:
The remaining activity of salivary α-amylase is up to 3%. Very rarely extremely
high activities of salivary α-amylase may lead to increased readings of pancreatic
α-amylase. However saliva and skin do contain α-amylase, therefore never pipette
by mouth and avoid skin contact with the reagents.
The reagents contain sodium azide (0.95 g/L) as preservative. Do not swallow!
Avoid contact with skin and mucous membranes.
Take the necessary precautions for the use of laboratory reagents.
Refer to local legal requirements for waste management.
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
A comparison between Gernon Pancreatic amylase (y) and a commercially
available test (x) using 58 samples gave following results:
Y=0.97x – 1.66 U/L
r=0.994
REFERENCE RANGE:
In serum and plasma the values must be lower than 53 U/L for women and men.
In urine the values must be lower than 319 U/L for women and lower than 356
U/L for men.
Each laboratory should establish its own reference range.
LITERATURE:
Lorentz K. α-Amilase. In: Thomas L, editor. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed.
Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p.192-202
IU/GN/80125/R0/1009/EA
e-mail: ral@ral-sa.com
web: www.ral-sa.com
Amylase Pancréatique SP
Méthode Cinétique Colorimétrique
Fabricant: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelone) - Espagne
IVD
POUR LE DIAGNOSTIC IN VITRO
CONSERVÉ À 2 - 8º C
REF
GN 80125:
Sérum, plasma recueilli sur héparine ou EDTA, urine.
Stabilité dans le sérum ou le plasma: 1 an à -20ºC, 7 jours entre 4-8ºC et 7 jours
entre 20-25ºC.
Stabilité dans l’urine: 3 semaines à -20ºC, 10 jours entre 4-8ºC et 2 jours entre
20-25ºC.
Eliminer les échantillons contaminés.
MODE OPÉRATOIRE:
LIRE LES NOTICES
Référence:
SPÉCIMEN:
Cont.
Emballage:
5 x 20 mL réactif 1 + 25 mL réactif 2
PRINCIPE:
Des notices d’application adaptées aux systèmes automatisés sont disponibles sur
demande.
Longueur d’onde: 405 nm
Trajet optique: 1 cm
Température: 37ºC
Réaction: cinétique croissante
Mesure: contre l’air
Sérum / Plasma
Urine
Échantillon
20 µL
20 µL
R1 Enzyme
1000 µL
1000 µL
Le substrat EPS-G7 est scindé par les α-amylases en différents fragments. Ceux-ci
sont ensuite hydrolysés dans un second temps par l’α-glucosidase en glucose et pnitrophénol. L’iso enzyme salivaire étant inhibée de façon sélective par la
combinaison de 2 anticorps monoclonaux pendant la phase de pré incubation,
l’augmentation d’absorbance représente l’activité de l’amylase pancréatique de
l’échantillon.
Mélanger, incuber environ 3 minutes, puis ajouter:
R2
250 µL
5 EPS-G7 + 5 H2O --Æ 2 Ethylidène-G5 + 2G2PNP + 2 Ethylidène- G4 + 2 G3PNP
+ Ethylidène-G3 + G4PNP
Avec facteur:
Activité échantillon = ∆ Abs/min x Facteur
Facteur (à 405 nm) = 5670
α-Glucosidase
2 G2PNP + 2 G3PNP + G4PNP + 14 H2O Å---Æ 5 PNP + 14 G
INTÉRÊT CLINIQUE:
Les α-Amylases sont des enzymes hydrolytiques qui scindent l’amidon en maltose.
Dans le corps humain, les amylases trouvent leur origine dans différents organes:
l’amylase pancréatique est produite par le pancréas et libérée dans le tractus
intestinal, l’amylase salivaire est synthétisée dans les glandes salivaires et sécrétée
dans la salive. L’amylase présente dans le sang est éliminée par le rein et excrétée
dans l’urine; l’élévation de l’activité sérique se reflète ainsi dans l’augmentation de
l’activité de l’amylase urinaire. La mesure d’α-amylase dans le sérum et l’urine
s’applique principalement au diagnostic d’affections pancréatique et au dépistage
de l’apparition de complications. En cas de pancréatite aiguë, l’activité de l’amylase
sérique augmente dans les quelques heures suivant le déclenchement des
douleurs abdominales, atteint un pic après environ 12 heures et retrouve des
valeurs de la zone de normalité au plus tard après 5 jours. La spécificité de l’αamylase dans les affections pancréatiques n’est pas très forte, car des
concentrations élevées peuvent être mesurées dans diverses affections non
pancréatiques, comme la parotidite. En conséquence, la mesure complémentaire
de l’activité de la lipase sera réalisée afin de confirmer une pancréatite aiguë.
250 µL
Mélanger, lire l’absorbance après 2 minutes. Lire à nouveau l’absorbance après 1,
2 et 3 minutes et calculer la valeur moyenne de ∆ Abs/min.
CALCUL:
Avec calibrant:
[Amil. P] (U/L) ´échantillon = (∆A/min
échantillon
/ ∆A/min
cal)
. [Amil. P] (U/L)
cal
CALIBRANTS ET CONTRÔLES:
C’est recommandé d’utiliser le multicalibrant Biocal (GN 90999) pour calibrer la
méthode.
C’est recommandé d’utiliser les contrôles Gernorm (GN 90998) et le Gerpath (GN
90997) pour contrôler à deux niveaux.
PERFORMANCES:
Domaine de mesure:
Le test a été développé pour la détermination d’activité de l’amylase pancréatique
correspondant à un maximum ∆ Abs/min de 0.350. Au delà de cette valeur, diluer
l’échantillon 1+10 avec du NaCl (9 g/L) et multiplier le résultat par 11.
Spécificité / Interférences:
Aucune perturbation n’a été observée par la présence d’acide ascorbique jusqu’à
30 mg/dL, de bilirubine jusqu’à 40 mg/dL et de lipémie jusqu’à 2000 mg/dL de
triglycérides. L’hémoglobine interfère, même à concentration minimale.
Sensibilité/ Limite de détection:
RÉACTIFS:
La limite de détection analytique est de 5 U/L.
Prêts à l’emploi.
Précision intra série (n=20, à 37ºC):
Réactif 1:
Tampon de Good (pH 7.15)
Na Cl
Mg Cl2
α Glucosidase
Anticorps monoclonaux
0.1 mol/L
62.5 mmol/L
12.5 mmol/L
≥ 2.5 kU/L
≥ 31 mg/L
Réactif 2:
Tampon de Good’ (pH 7.15)
EPS-G7
0.1 mol/L
8.5 mmol/L
Échantillon 1 (U/L): moyenne: 69.7, SD: 2.18, CV: 3.13%
Échantillon 2 (U/L): moyenne: 207, SD: 2.61, CV: 1.26%
Échantillon 3 (U/L): moyenne: 370, SD: 3.36, CV: 0.91%
Précision inter série (n=20, à 37ºC):
Échantillon 1 (U/L): moyenne: 68.3, SD: 1.48, CV: 2.17%
Échantillon 2 (U/L): moyenne: 204, SD: 1.61, CV: 0.79%
Échantillon 3 (U/L): moyenne: 371, SD: 3.14, CV: 0.85%
Comparaison de méthodes:
Les réactifs sont stables jusqu’à la fin du mois de la date de péremption indiquée,
conservés entre 2-8ºC en évitant toute contamination. Ne pas congeler les réactifs
et les protéger de la lumière.
Une comparaison entre la méthode Amylase pancréatique de Gernon (y) et une
méthode disponible sur le marché (x), réalisée sur 58 échantillons, a donné les
résultats suivants:
Y=0.97x – 1.66 U/L
R=0.994
AVERTISSEMENTS ET PRECAUTIONS D’EMPLOI:
VALEURS USUELLES:
L’activité résiduelle de l’α-amylase salivaire est d’au maximum 3%. Dans de très
rares cas, des activités très élevées d’α-amylase salivaire peuvent conduire à
l’obtention de valeurs élevées d’α-amylase pancréatique. Cependant, la salive et la
peau contenant de lα-amylase, ne jamais pipeter les réactifs avec la bouche et
éviter le contact avec la peau.
Les réactifs contiennent de l’azide de sodium (0.95 g/L) comme conservateur. Ne
pas avaler. Eviter le contact avec la peau et les muqueuses.
Prendre les précautions nécessaires habituelles pour l’utilisation de réactifs de
laboratoire.
Se référer aux exigences légales nationales pour l’élimination des déchets.
RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES:
CONSERVATION:
En sérum et plasma les valeurs doivent être inférieures à 53 U/L pour des femmes
et des hommes.
En urine les valeurs doivent être inférieures à 319 U/L pour des femmes et
inférieures à 356 U/L pour des hommes.
Lorentz K. α-Amilase. In: Thomas L, editor. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed.
Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p.192-202
IU/GN/80125/R0/1009/EF
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
e-mail: ral@ral-sa.com
web: www.ral-sa.com