TP 3 Transporte y Osmosis

T.P. 3: VARIACION DEL VOLUMEN CELULAR POR LA PRESION OSMOTICA
DEL MEDIO DE INCUBACION
Objetivo: Se medirán los cambios de volumen de glóbulos rojos como consecuencia
de cambios en la presión osmótica de las soluciones de suspensión.
Los resultados permitirán verificar: a) si el comportamiento osmótico de los eritrocitos
obedece al previsto para soluciones ideales, y b) si se asemeja al de un
comportamiento limitado por una membrana impermeable a los solutos, permeable al
solvente y que no ofrece resistencia al cambio de volumen.
Conocimientos teóricos requeridos: Presión osmótica de soluciones diluidas,
ecuación de Van´t Hoff y su aplicación en la predicción del comportamiento osmótico
de las células (ver bibliografía).
Procedimiento:
1. Conseguir un voluntario que done sangre (no debe tratarse de los generosos y
desprendidos profesor e instructor del curso, ya que se ha demostrado que en tal
caso el experimento no funciona).
2. En caso de no conseguir lo solicitado en el punto 1, se acabó el práctico. En caso
contrario, pasar al punto siguiente.
3. Tomar 5 ml de sangre y separar el plasma por centrifugación. Lavar los glóbulos
rojos con NaCl 200 miliosmolar (mOsm) tres veces.
4. Suspender los glóbulos rojos en un volumen suficiente de NaCl 200 mOsm para un
hematocrito de 50% (aproximadamente el mismo volumen que el pellet).
5. Medir 0.5 ml de esa suspensión en 5 tubos numerados.
6. Agregar 0.25 ml de soluciones de ClNa de osmolaridad creciente, siguiendo el
orden indicado en el cuadro. Calcular la osmolaridad final y completar el cuadro.
Tubo Nro.
0.25 ml NaCl (mOsm)
1
200
2
350
3
500
4
800
5
1100
Osmolaridad final
7. Representar el volumen relativo(Htc/Htc a 300 mOsm) en función de 1/T
(T=tonicidad= mOsm/300)
8. Calcular el volumen relativo para miliosmolaridad infinita.
9. Calcular el volumen de agua difusible en glóbulos rojos en condiciones fisiológicas.
10. Calcular la pendiente de la representación realizada.
11. Validar los resultados obtenidos comparando con el volumen celular teórico de la
hemoglobina teniendo en cuenta los siguientes datos:
Concentración de hemoglobina: 5mM
Mr de la hemoglobina: 67000
Volumen específico de la hemoglobina: 0,749 cm3/g
Algunas preguntitas:
¿Por qué se lavan los glóbulos rojos varias veces con NaCl 200 mOsm?
¿Por qué se heparinizan los tubos?
¿Por qué la relación de hematocritos mide el cambio relativo de volumen celular?
¿Cuál es el significado físico del volumen relativo para miliosmolaridad infinita?
¿Qué significado físico tiene la pendiente de la recta? ¿El valor de esta pendiente es
compatible con ese significado físico?
Bibliografía adicional (se adjunta en guía de seminarios):
Garrahan, P. & Rega, A. Transporte a través de la membrana celular. Monografías de la OEA,
Buenos Aires, 1977.