l-lactato (lac)

L-LACTATO (LAC)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo
de reactivos de laboratorio.
PAP
Determinación Enzimática de L-Lactato
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de L-Lactato en plasma
y CSF. Este ensayo és específico para la determinación de LLactato. Este producto es adecuado para un uso manual o en
el analizador Rx Monza.
Cat No.
LC 2389
16 x 6 ml
R1a. Tampón
R1b. Reactivo Enzima
CAL Patrón
1 x 100 ml
16 x 6 ml
1 x 5.5 ml
METODO COLORIMETRICO
La concentración de L-Lactato en la muestra se determina de
acuerdo a la siguiente reacción.
L-Lactato + O2
Lactato Oxidasa
piruvato + H2O2
H2O2 + 4-aminoantipirina + TOOS
Peroxidasa
TOOS =
Producto púrpura + 4H2O
N-etil-N-(2 hidroxi-3-sulfopropil)
m-toluidina
El L-Lactato es uno de resultados netos de la gluconeogénesis
producida en el músculo esquelético activo. El L_Lactato és
metabolizado en el hígado. El NADH és producido en la
glucólisis en los tejidos por oxidación aeróbica. Si no hay
presencia suficiente de oxígeno para que se produzca esta
oxidación, se regenera NAD+ a partir de NADH en la
reducción de piruvato a lactato
Una concentración incrementada de lactato en la sangre es
así un indicador de metabolismo anaeróbico hecho que se da,
por ejemplo, si disminuye el flujo de sangre a los tejidos y el
suministro de oxígeno es insuficiente. En casos de reducciones
de oxígeno severas, podría darse la “Acidosis Láctica”. El LLactato por lo tanto se puede utilizar como un indicador de
fallo circulatorio severo.
MUESTRA
Plasma (anticoagulantes: litio heparina lodoacetato, fluoruro
EDTA, fluoruro oxalato, fluoruro sódico).
CSF Utilizar sin modificación.
La sangre se toma de una vena libre de estasis y se conserva
en un baño de hielo. El plasma se separa por medio de la
centrifugación durante los 30 minutos siguientes. La demora
en la separación puede llevar a un incremento de los valores
de lactato observados. El análisis se deberá llevar a cabo
inmediatamente.
La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel o las membranes mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante
agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar
atención médica inmediatamente.
La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las
cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando
se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes
de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies
metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio
al 10%.
Existen hojas de Salud y Seguridad disponibles
Los reactivos deben utilizarse solamente para su
propósito por personal de laboratorio cualificado, y
bajo condiciones de laboratorio apropiadas.
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS
REACTIVOS
R1a. Tampón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8°C.
R1b. Reactivo Enzima
Reconstituir el contenido de un frasco de Reactivo
Enzima R1b con 6 ml de Tampón R1a. Estable
durante 6 semanas entre +2 y +8°C ó 2 semanas entre
+15 y +25°C, cuando se conserva protegido de la luz.
CAL Patrón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8°C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón
Reactivo Enzima
Patrón
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
NOTAS
Evitar la contaminación del reactivo, muestras y material de
cristal por medio de la saliva o el sudor dado que tienen
contenidos elevados de lactato.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
R1a. Tampón
Tampón Pipes
TOOS
Azida Sódica
R1b. Reactivo Enzima
4-aminofenazono
Peroxidasa
Lactato oxidasa
Ascorbato oxidasa
CAL Patrón
Concentraciones Iniciales
100 mmol/l, pH 7,20
2,1 mmol/l
1 g/l
0,4 mmol/l
≥ 1000 U/l
≥ 600 U/l
≥ 10000 U/l
Especifico para cada lote
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PROCEDIMIENTO
Seleccione LAC en la pantalla de Monza ejecutar prueba y
llevar a cabo un blanco de agua con agua dulce doble destilada
(ddH2O) como se indica en las instrucciones.
VALORES DE NORMALIDAD(5)
mmol/l
Plasma
0,5 – 2,22
Pipetear en la Cubeta:
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de
la población.
dd H2O
Patrón
Muestra
Reactivo
Reactivo Blanco S0
5 µl
500 µl
Patrón S1
5 µl 500 µl
Muestra
5 µl
500 µl
Mezclar e incubar por 5 minutos a 37°C. Inserte la cubeta en
el soporte del flujo de célula y oprima leer.
CALIBRACION
Se recomienda la calibración durante el cambio de lote de
reactivo, o como se indica en los procedimientos de control
de calidad, usando el estándar proporcionado en el Kit.
PARA USO MANUAL
Longitud de onda
Cubeta
Temperatura de Reacción
Medición
550 nm
1 cm de espesor
20-25°C, 37°C
frente al blanco de reactivo
Muestra
Patrón
Reactivo
Patrón
(Hl)
-10
1000
Muestra
(Hl)
10
-1000
Mezclar, incubar durante 10 minutos entre 20 - 25°C ó 5
minutos a 37°C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra)
y el patrón (Apatrón) frente al blanco del reactivo dentro de los
siguientes 30 minutos.
CÁLCULO MANUAL
Concentración de L-Lactato =
Concentración de L-Lactato =
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Las siguientes características de rendimiento se obtuvieron
utilizando un Rx Monza en modo cubeta funcionando a 37°C y
calibrado en el estándar proporcionado por el Kit.
LINEALIDAD
El test es lineal hasta una concentración de L-Lactato de 19,7
mmol/l (178 mg/dl). Diluir las muestras superiores a esta
concentración 1+1 con NaCl al 0,9% y multiplicar el resultado
por 2.
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de L-lactato con un nivel
aceptable de precisión se determinó en 0,165 mmol/l (1,49
mg/dl).
PRECISION
Pipetear en los tubos de ensayo:
Blanco del
Reactivo (Hl)
--1000
mg/dl
4,5 - 20
Amuestra
Apatrón
Amuestra
Apatrón
x Concentración
del patrón (mg/dl)
x Concentración
del patrón (mmol/l)
NORMALIZACIÓN
El L-Lactato Randox Estándar incluido en este Kit es trazable a
L-Lactato método de referencia Gravimétrico.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y
Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles
distintos de controles al menos una vez al día. Los valores
obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si
los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye
error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus
componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
Precisión Dentro del Análisis
Nivel 2
Media (mg/dl)
13.1
DE
0.106
CV(%)
0.81
n
20
Nivel 3
53.3
0.458
0.86
20
Precisión Total
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
Nivel 2
13.1
0.749
5.72
20
Nivel 3
53.3
1.93
3.62
20
CORRELACIÓN
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 0.9382 X + 0.2605
y un coeficiente de correlación r = 0,9980
Se analizaron 49 muestras de pacientes con valores de entre
6.5 y 123 mg/dl.
REFERENCIAS
1. Shimojo N et al, CLIN CHEM 1989; 35(9): 1992 - 1994.
2. Shimojo N, Fujino K et al, CLIN CHEM 1991; 37(11) 1978
- 1980.
3. Lehninger Al: Principles of Biochemistry, Worth Publishers,
New York, 1993, p 416.
4. Mascini M et al, CLIN CHEM. 1987; 34(4) 591 - 593.
5. Jacobs DS, Kasten BL, Demott WR and Wolfson WL:
Laboratory Test Handbook, LEXI COMP INC, OHIO,
1990, p. 245.
Revisado 15 Sep 10 bm
Rev. 001
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