Técnicas RANDOX

ALBUMINA (ALB)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar
las precauciones normales necesarias, que se requieren al
manejar reactivos de laboratorio.
PARA SU USO
La determinación cuantitativa in vitro de albúmina en suero y
plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma
manual y en el analizador Rx Monza.
Cat. No.
AB 362
6 x 100 ml
R1.
CAL
BCG Concentrado
Patrón
6 x 13.5 ml
1 x 5.5 ml
SIGNIFICADO CLINICO (1)
La albúmina es la proteína sérica más abundante representando
el 55-65% de las proteinas totales. Se sintetiza en el hígado y
tiene una vida media de 2 a 3 semanas.
Las principales funciones biológicas de la albúmina son mantener
el equilibrio de agua en suero y plasma, transportar y almacenar
una amplia variedad de ligandos ej: acidos
grasos,calcio,bilirrubina y hormonas como tiroxina. La albúmina
también es una fuente endógena de aminoácidos.
La hipoalbuminemia está asociada con las siguientes condiciones
:analbuminemia; sintesis deteriorada de albúmina en el higado;
enfermedades hepaticas; malnutrición o malabsorción; shock
generalizado; quemaduras o dermatitis; enfermedades renales e
intestinales .La hiperalbuminemia tiene poca relevancia
diagnóstica excepto tal vez en deshidratación.
Sin embargo, dado que ningún método puede ofrecer una
seguridad total de la ausencia de agentes infecciosos, este
material y todas las muestras de pacientes se deberán manejar
como posibles transmisores de enfermedades infecciosas y
eliminar apropiadamente.
Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.
Los reactivos deben utilizarse solamente para su
propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo
condiciones de laboratorio apropiadas.
ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO Y
DEL PATRON
R1.
Concentrado BCG
Diluya el contenido de una botella con 87 ml de agua
destilada. Estable durante 3 meses si se conserva entre
+15 y +25C.
G
AA
M
PRINCIPIO(2)
La medición de albúmina en suero se basa en su unión
cuantitativa con el indicador 3,3',5,5'-tetrabromo-m cresol
sulfontaleina (verde de bromocresol BCG). El complejo
albúmina-verde de bromocresol presenta una absorción máxima
a 578 nm, siendo la absorbancia directamente proporcional a la
concentración de albúmina en la muestra.
Atención: Patrón
El material de origen humano del que se deriva este producto ha
sido analizado a nivel de donante para el anticuerpo del Virus de
Inmunodeficiencia Humano (HIV 1, HIV 2), el Antígeno de
Superficie de Hepatitis B (HbsAg), y el anticuerpo del Virus de
Hepatitis C (HCV) y se ha encontrado que es NO-REACTIVO.
Los métodos utilizadon están aprobados por FDA.
SA
Verde de Bromocresol
MANUAL
RX MONZA
PREPARACION Y EXTRACCION DE LA MUESTRA
Suero, plasma heparinizado o plasma con EDTA. Se pueden
utilizar los procedimientos normales de recogida y
almacenamiento del suero para las muestras que se vayan a
analizar con este método. El suero es estable durante 3 días a
una temperatura de entre 2 y 8 C, o durante 6 meses a -20C.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
Concentración inicial de las soluciones
CAL. Estandard
Contenido listo para su uso. Etable hasta la fecha de
caducidad si se conserva entre +15 y +25C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Concentrado BCG
Patron Albumina
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Pipetas para dispensar volumenes 10 l y 3,0 ml.
Cronómetro y baño de agua o bloque de calentamiento para
mantener la temperatura entre 20 - 25ºC.
Espectrófotómetro con una capacidad de longitud de onda de
600 a 650 nm
Multisuero Valorado Randox Nivel 2 (No. Cat. HN1530) y Nivel
3 (No. Cat. HE 1532)
Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351).
R1.
Verde de Bromocresol (BCG) concentrado
Tampón succinato
75 mmol/l, pH 4.2
Verde de bromocresol (BCG)
0.15 mmol/l
Brij 35
Conservante
CAL Patrón
Especifico para cada lote
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MANUAL AB 362
PROCEDIMIENTO(2)
Utilice H2O de doble destilación para realizar una nueva
calibración de la ganancia en el modo cubeta. Seleccione ALB en
la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de
agua de la forma indicada.
Pipetee en una cubeta:
Blanco de reactivo S0
Patrón S1
Muestra
H2O de doble destilación
3 μl
Patrón
Muestra
Reactivo
1000 μl
3 μl
1000 μl
3 μl
1000 μl
Mézclelo e incúbelo durante 20 minutos a 20-25 oC o durante
10 minutos a 37 oC.
Introdúzcalo en el soporte de la celda de flujo de RX Monza y
pulse Read (Leer) en un plazo de 60 minutos.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda para el control de calidad diario Multisueros
Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3. Se deberá de analizar dos
niveles de controles al menos una vez al día. Los valores
obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si
los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye
error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de
bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
INTERFERENCIA
Se analizaron los siguientes analitos hasta los siguientes niveles y
se encontró que no interfieren:
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Se recomienda llevar a cabo una calibración diaria mediante el
patrón CAL que se proporciona en el kit o mediante el suero de
calibración de nivel 3 de Randox.
PARA USO MANUAL
Patrón
0,01 ml
----3,00 ml
--0,01 ml
--3,00 ml
Muestra
----0,01 ml
3,00 ml
G
H2O destilada
Patrón (CAL)
Suero o Plasma
Reactivo de BCG (R1)
Reactivo
AA
Pipetear en tubos de ensayo:
VALORES DE NORMALIDAD EN EL SUERO(2)
Adultos
38 - 44 g/l (3,8 – 4,4 g/dl)
Recién nacidos 38 - 42 g/l (3.8 - 4.2 g/dl)
SA
578 nm o 623 nm
630 nm (600 - 650 nm)
1 cm de espesor
20 - 25C
Frente al blanco de reactivo
500 mol/l
1,2%
22,75 mmol/l
6 g/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia para considerar las diferencias en edad, sexo, dieta
y localización geográfica.
M
Longitud de onda:
Espectrofotómetro:
Cubeta:
Temperatura de incubación:
Medición:
Bilirrubina
Intralípido®
Triglicéridos
Hemoglobina
Mezclar e incubar durante 5 min entre +20 y +25C. Medir la
absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón
(Apatrón) frente al blanco de reactivo
CÁLCULO MANUAL
La concentración de albúmina en la muestra puede
calcularse utilizando la fórmula siguiente:
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante
el analizador Rx Monza a una temperatura de 37 oC.
LINEALIDAD
Este método es lineal hasta 7,55 g/dl. Si la concentración
sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 1 con una
solución del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de nuevo.
Multiplique el resultado por 2.
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de albúmina con un nivel
aceptable de precisión se ha determinado en
0,287 g/dl.
Conc. de albúmina (g/l o g/dl)
Amuestra
=
x
Apatrón
Concentración
del patrón
NORMALIZACIÓN
El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en
el material de referencia DA470 de la albúmina (IFCC).
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MANUAL AB 362
PRECISION (Suero)
Análisis (Intra)
Nivel 1
Media (g/dl)
2,86
DE
0,036
CV (%)
1,28
n
20
Nivel 2
4,36
0,031
0,71
20
Análisis (Inter)
Media (g/dl)
DE
CV (%)
n
Nivel 1
2,86
0,129
4,52
20
Nivel 2
4,36
0,174
3,99
20
CORRELACION
Se comparó el método Randox (Y) con un método comercial
disponible (X). Se analizaron 51 muestras con valores
abarcando un rango de 22 a 46 g/l en un analizador Hitachi 747.
El análisis de regresión lineal de los datos resultó en la siguiente
ecuación:
Y = 1,073 X + 0,204
con un coeficiente de correlación r = 0.9910
G
AA
M
REFERENCIAS
1. Grant G.H., et al Amino Acids and Proteins; Fundamentals of
Clinical Chemistry, Tietz N.W. Editor, Third Edition, WB
Saunders Company Philadelphia USA, 328-329, 1987
2. Doumas, B.T., Watson, W.A., Biggs, H.G., Clin. Chim. Acta.
1971; 31: 87.
SA
Se analizaron 40 muestras con valores de entre 1,66 y 4,51 g/dl.
Revised 10 Sep 10 bm
Rev. 001
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FOSFATASA ACIDA
(ACP)
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE REACTIVOS
R1. Bufer
Contenios listos para su uso. Estable hasta la fecha de
caducidad si se conserva entre +2 to +8C.
Método Colorimétrico
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de Fosfatasa Acida en el suero.
Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador
Rx Monza.
R1. Tampón
R2. Sustrato
R3. Tartrato
SAM STAB Estabilizador
Para la Fosfatasa ácida no prostática:
R2. Substrato (R2B)
Disuelva el contenido de 1 botella de sustrato R2 en 3 ml
de tampón R1. A continuación, transfiera el contenido a un
vial de tartrato R3. Estable durante 5 días si se conserva
entre +2 to +8C o 24 horas entre +15 y +25C,
Conservese protegido de la luz.
1 x 70 ml
20 x 3 ml
10 frascos
1 frasco
METODO COLORIMETRICO
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón
Sustrato
Tartrato
Estabilizador
PRINCIPIO(1)
fosfatasa ácida
1-naftil-fosfato + H2O
fosfato + 1-naftol
1-naftol+sal de 4-cloro-2-metilfenildiazonio*
colorante azo
* = Sal TR Fast Rojo
PRPROCEDIMIENTO
FOSFATASA ÁCIDA TOTAL
Seleccione ACP en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a
cabo un blanco de agua de la forma indicada.
Pipetee en un tubo de ensayo:
AA
M
PREPARACION DE LA MUESTRA
Suero. La muestra puede ser estabilizado mediante la adición de
1 gota de ácido acético estabilizador (STAB SAM) a 1 ml de
suero. Estable durante 3 días a +2 y +8C ó 24 horas a +15 y
+25C.
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351).
SA
No. Cat.
AC 1011
20 x 3 ml
Para la Fosfatasa ácida total:
R2. Substrato (R2A)
Disuelva el contenido de 1 botella de sustrato R2 en 3 ml
de tampón R1. Estable durante 5 días si se conserva entre
+2 y +8C o 24 horas entre +15 to +25C, Conservese
protegido de la luz.
G
Suero. La muestra se estabiliza añadiendo una gota de ácido
acético (estabilizador 4) a 1 ml de suero. Es estable durante 3
días entre +2 y +8C ó 24 horas entre +15 y +25C.
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes
R1 Tampón
Tampón citrato
R2. Sustrato
1-naftilfosfato
Sal TR Fast Rojo
R3. Tartrato
Tartrato sódico
SAM STAB Estabilizador
Acido acético
Muestra
Reactivo
0,05 ml
0,5 ml
Mézclelo, incúbelo durante exactamente 5 minutos a 37 °C o
durante 10 minutos a 20-25 °C y aspírelo en Rx Monza.
Concentraciones en la prueba
75 mmol/l, pH 5,2
10 mmol/l
2,5 mmol/l
FOSFATASA ÁCIDA NO PROSTÁTICA
Seleccione NACP en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y
lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.
Pipetee en un tubo de ensayo:
Muestra
Reactivo
0,05 ml
0,5 ml
135 mmol/l
3 mmol/l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar
las precauciones normales requeridas para el manejo de
reactivos de laboratorio.
Mézclelo, incúbelo durante exactamente 5 minutos a 37 °C o
durante 10 minutos a 20-25 °C y aspírelo en Rx Monza.
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Se recomienda el uso de suero fisiológico y suero de calibración
de nivel 3 de Randox para la calibración. Es aconsejable cambiar
el lote del reactivo para la calibración o seguir lo indicado por los
procedimientos de control de calidad.
Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.
Los reactivos deben ser utilizados sólo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
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MANUAL/ RX MONZA AC 1011
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un
analizador RX monza.
FOR MANUAL USE
Hg 405 nm
1 cm de espesor
30/37C
frente al aire
FOSFATASA ÁCIDA TOTAL
LINEALIDAD
El método es lineal hasta una concentración de 159 U/I.
Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe
diluir 1 + 4 con una solución del 0,9% de NaCI y debe someterse
a ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por 5.
Pipetear en tubos de ensayo:
Muestra
Solución de reactivo R2
Macro
Semi Micro
0,20 ml
2,00 ml
0,10 ml
1,00 ml
Mezclar, verter en la cubeta e incubar durante 5 min a 30/37C.
Leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar el tiempo
simultáneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min.
CÁLCULO MANUAL
Para calcular la actividad de la fosfatasa ácida en la muestra
utilizar las fórmulas siguientes:
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de fosfatasa ácida con un
nivel aceptable de precisión se determinó en 2,53 U/l.
PRECISION
Intraensayo
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
Fosfatasa ácida total:
U/l = 743 x ΔAsol.2a/min
Fosfatasa prostática:
U/l = 743 x (ΔAsol.2a/min - ΔAsol.2b/min)
Interensayo
Nivel 2
15.9
0.717
4.51
20
Nivel 3
43.6
1.90
4.35
20
Nivel 2
15.9
1.05
6.59
20
Nivel 3
43.6
3.04
6.98
20
CORRELACIÓN
Se comparó este método (Y) con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
G
AA
M
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
Media (U/l)
DE
CV(%)
N
SA
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
INTERFERENCIA
Sueros hemolíticos e ictéricos (bilirrubina > 3 mg/dl) interfieren
en la prueba.
VALORES NORMALES EN SUERO (2)
Fosfatasa ácida total
Hombre
Mujer
Fosfatasa ácida
prostática
30C
37C
Hasta 4,2 U/l
Hasta 3,0 U/l
Hasta 4,7 U/l
Hasta 3,7 U/l
Hasta 1,5 U/l
Hasta 1,6 U/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geográfica de la población.
Y = 0.9723 X + 0.5527
y un coeficiente de correlación de r = 0,9925
se analizaron 42 muestras de pacientes abarcando un rango de
2,5 a 93,9 U/l.
FOSFATASA ÁCIDA NO PROSTÁTICA
LINEALIDAD
El método es lineal hasta una concentración de 80,8 U/I.
Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe
diluir 1 + 4 con una solución del 0,9% de NaCI y debe someterse
a ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por 5.
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de fosfatasa ácida con un
nivel aceptable de precisión se determinó en 1,76 U/l.
PRECISION
Intraensayo
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
Interensayo
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
Nivel 1
6.65
0.289
4.34
20
Nivel 2
17.8
0.765
4.30
20
Nivel 1
6.65
0.295
4.43
20
Nivel 2
17.8
0.892
5.01
20
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MANUAL/ RX MONZA AC 1011
CORRELATION
Se comparó este método (Y) con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 0.9653 X + 0.1849
y un coeficiente de correlación de r = 0,9971.
se analizaron 40 muestras de pacientes abarcando un rango de
2,1 a 80,2 U/l.
G
AA
M
SA
REFERENCIAS
1. Hillmann, G.J., Clin. Chem. Clin. Biochem. 1971; 9: 273.
2. Silver, D., et al., J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1983; 21: 519.
Revisado 05 Sep 11 bm
Rev. 002
PAGE 3 OF 3
ALDOLASA (ALS)
PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD
R1. Tampón/Sustrato
Reconstituir un vial de Tampón/Sustrato 1 con 20 ml
e agua bidestilada. Es estable durante 2 semanas si se
conserva entre +2 y +8C.
Fructosa-1,6-difosfato aldolasa
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de Aldolasa en suero y plasma.
Este producto es adecuado para su utilización de forma Manual y
en el analizador RX monza.
No. Cat.
AD 189
5 x 20 ml
R1. Tampón/Sustrato
R2. NADH
R3. GDH/TIM/LDH
5 x 20 ml
2 x 1 ml
1 vial
PRINCIPIO
La aldolasa convierte la fructosa-1,6-difosfato (F-1,6-DP) en
gliceraldehído-3-fosfato (GAP) y dihidroxiacetona fosfato (DAP).
La adición de triosafosfato isomerasa (TIM), glicerolfosfato
deshidrogenada (GDH) y NADH convierte la dihidroxiacetona
fosfato en glicerol-1-fosfato. El grado de la reacción de la aldolasa
se mide por la disminución de la absorbancia a 340 nm como
consecuencia de la conversión de NADH en NAD+.
aldolasa
F-1,6-DP
AA
Concentración en la prueba
G
R1. Tampón/Sustrato
Tampón colidina
Monoyodoacetato
F-1,6-DP
R2. NADH
R3. GDH/TIM/LDH
GDH
TIM
LDH
Ammonium Sulphate
NADH
R2
0.05ml
0.1ml
0.2ml
GDH/TIM/LDH
R3
0.01ml
0.02ml
0.04ml
M
2Glicerol-1-P + 2 NAD+
MUESTRA
Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma.
Componentes
Tampón/Sustrato
R1
2.5ml
5.0ml
10.0ml
SA
GDH
COMPOSICION DEL REACTIVO
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DEL REACTIVO EN
FUNCIONAMIENTO PARA RX MONZA
Prepare el reactivo en funcionamiento como se indica en la tabla
siguiente:-
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón/Sustrato
NADH
GDH/TIM/LDH
DAP
2DAP + 2NADH + 2H+
R3. GDH/TIM/LDH
Componentes listos para su uso. Es estable hasta la
fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C.
Estable durante 8 horas entre +2 y +8ºC.
GAP + DAP
TIM
GAP
R2. NADH
Reconstituir un vial de NADH 2 con 1 ml de agua
bidestilada. Es estable durante 4 semanas entre +2 y +8C.
51 mmol/l, pH 7,4
0,27 mmol/l
2,7 mmol/l
0,23 mmol/l
≥ 326 mU/ml
≥ 4,35 U/ml
≥ 616 mU/ml
> 35%
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Los reactivos deben utilizarse solamente para su
propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo
condiciones de laboratorio apropiadas.
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Calibrador de aldolasa de Randox (No. Cat. AD 5000)
Control de Aldolasa Randox Nivel 2 (Cat. No. AD 5001) y Nivel
3 (Cat. No. AD 5002)
0.9% Solución NaCl.
PROCEDIMIENTO
Seleccione ALS en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a
cabo un blanco de agua de la forma indicada.
Pipetee en un tubo de ensayo:
H2O de doble destilación
ALS CAL
Muestra
Reactivo en funcionamiento
SO*
Patrón
S1
Muestra
35µl
----450 µl
--35 µl
--450 µl
----35 µl
450 µl
Mézclelo, incúbelo durante 5 minutos a 37ºC o 10 minutos a 2025ºC y aspírelo en RX monza.
*blanco de reactivo
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
El uso de solución salina y Randox Aldolasa sérica de calibración
se recomienda para la calibración. LA calibración se recomienda
a los cambios en el lote del reactivo como se indica en los
procedimientos de control de calidad.
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MANUAL/ RX MONZA AD 189
PARA USO MANUAL
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
LINEALIDAD
El método es lineal hasta una concentración de 106 U/l. Si la
concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir
1+4 con una solución de NaCl del 0,9% y debe someterse a
ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por 5.
340 nm (Hg 365 nm o Hg 334 nm)
1 cm de espesor
37C
frente a muestra blanco
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de Aldolasa con un nivel
aceptable de precisión se determinó en 1,73 U/l.
Pipetear en tubos de ensayo:
Muestra Blanco
Muestra
Tampón/Sustrato (R1
Solución NaCl 0,9%
NADH (R2)
GDH/TIM/LDH (R3)
0,2 ml
2,50 ml
-
Calibrador
Muestra
0,2 ml
2,50 ml
0,05 ml
0.01 ml
0,2 ml
2,50 ml
0,05 ml
0,01 ml
Mezclar la muestra, R1, R2 y R3 y se incuba durante 5 minutos a
37C y leer la absorbancia A1 contra el blanco de muestra.
Dejar reposar a 37C durante exactamente 20 minutos. después
de la primera lectura y entonces medir la absorbancia A2 frente
al blanco.
* Si A1 es < 0,95 diluir 1+1 con NaCl al 0,9% y repetir el test.
Multiplicar el resultado por 2.
PRECISION
Precisión intraensayo
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
Precisión interensayo
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
Nivel 2
6.36
0.295
4.64
20
Nivel 3
19.1
0.854
4.47
20
Nivel 2
6.36
0.402
6.32
20
Nivel 3
19.1
1.35
7.09
20
CORRELACIÓN
El método de Randox (Y) se comparó con otro método
comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de
regresión lineal:
MANUAL DE CÁLCULO
Para calcular la actividad aldolase utilizar la siguiente fórmula:
SA
(A1 - A2) Muestra
x Conc. de calibrador
Y = 0,9815 X + 0,183
y un coeficiente de correlación r = 0,9917.
M
(A1 - A2) Calibrador
Se analizaron 42 muestras con valores de entre 2,46 y 89,86 U/l.
REFERENCIA
1. Feissli, S., et al., (1966). Klin. Wschr. 44: 390.
G
AA
CONTROL DE CALIDAD
Los controles de Aldolasa Randox Niveles 2 y 3 se recomiendand
para el control de calidad diario. Se deberían procesar 2 niveles de
control al menos una vez por día. Los valores que se obtengan
deberían entrar dentro de un rango específico. Si los valores no
estan dentro de este rango, y la repetición excluye el error, se
deberían lleva a cabo los siguientes pasos:
1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano
puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
INTERFERENCIA
La hemólisis interfiere en la prueba.
VALORES DE REFERENCIA(1)
Suero:
Hasta 7,6 U/l (37C)
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geográfica de la población.
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO ESPECÍFICAS
Se obtuvieron las siguientes características de rendimiento
mediante un analizador RX monza y un modo de célula de flujo
a 37ºC.
Revisado el 15 de Sep 2010 bm
Rev. 001
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ALT
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo
de reactivos de laboratorio.
Alanina Aminotransferasa
IFCC
MANUAL
RX MONZA
La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel o las membranes mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante
agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar
atención médica inmediatamente.
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de Alanina
Aminotransferasa en el suero y plasma. Este producto es
adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza.
AL 1268
5 x 20 ml
AL 2360
5 x 100 ml
R1a.
R1b.
R1a.
R1b.
R1a.
R1b.
Tampón/Substrato
Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato
1 x 70 ml
Tampón/Substrato
Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato
1 x105 ml
20 x 2 ml
Tampón/Substrato
Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato
1 x 105 ml
Tampón/Substrato
Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato
5 x 100 ml
5 x 100 ml
L-glutamato + piruvato
LD
L-lactato + NAD+
MUESTRA
Suero, plasma heparinizada o plasma EDTA.
G
piruvato + NADH + H+
AA
PRINCIPIO
ALT
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes
PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y
ESTABILIDAD
R1a. Tampón/Substrato
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y+8C
5 x 20 ml
METODO UV
Este es un método estandard optimizado de acuerdo con las
concentraciones recomendadas por la IFCC.
-oxoglutarato + L-alanina
Los reactivos deben utilizarse solamente para su
propósito por personal de laboratorio cualificado, y
bajo condiciones de laboratorio apropiadas.
10 x 10 ml
SA
AL 1205
10 x 10 ml
R1a.
R1b.
La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las
cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando
se desechen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes
de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies
metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio
al 10%.
Existen hojas de Salud y Seguridad disponibles
Concentración en la Prueba
R1a. Tampón/Substrato
Tampón Tris
100 mmol/l, pH 7,5
L-alanina
0,6 mol/l
R1b. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
-oxoglutarato
15 mmol/l
LD
≥1,2 U/ml
NADH
0,18 mmol/l
R1b. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
Reconstituir un vial de Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato R1b con el volumen apropiado de
Tampón/Substrato R1a:
2 ml para el kit de 20 x 2 ml (AL 1200)
10 ml para el kit de 10 x 10 ml (AL 1205)
20 ml para el kit de 5 x 20 ml (AL 1268)
Estable durante 14 días entre +2 y+8C e ó 24 horas
entre+15 y +25C.
M
No. Cat.
AL 1200
20 x 2 ml
Cat. No. AL 2360 5 x 100 ml
Reconstituir un vial of Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
R1b con una parte de Tampón/Substrato R1a y después
transferir todo el contenido a la botella R1a, enjuagando la
botella R1b varias veces. Estable durante 14 días entre +2
y+8C e ó 24 horas entre+15 y +25C.
R1 = Bufer/Substrato/Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
R2 = Ninguno
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón/Substrato
Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)
Salino RX series (Cat. No. SA 3854)
PAGE 1 OF 2
MANUAL AL 1200
PROCEDIMIENTO
Aspire H2O de doble destilación y realice una nueva
calibración de la ganancia en el modo de célula de flujo.
Seleccione ALT en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y
lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.
INTERFERENCIA
Evitar la hemólisis ya que interfiere con el análisis.
VALORES DE NORMALIDAD EN SUERO(1)
25C
30C
hasta 22 U/l
hasta 17 U/l
hasta 29 U/l
hasta 22 U/l
Pipetee en un tubo de ensayo:
Muestra
Reactivo
Hombres
Mujeres
0,05 ml
0,5 ml
Mézclelo y aspírelo en Rx Monza.
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante
un analizador Rx Monza en funcionamiento a 37 ºC.
PARA USO MANUAL
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de ALT con un nivel
aceptable de precisión se determinó en 7,99 U/l.
340 nm (Hg 334 nm o Hg 365 nm)
1 cm de espesor
30/37C
frente al aire
LINEALIDAD
Este método es lineal hasta 500 U/l. Si la concentración
sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + x con una
solución del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de
nuevo. Multiplique el resultado por x + 1.
0,2 ml
2,0 ml
0,1 ml
1,0 ml
G
AA
Mezclar. Leer la absorbancia inicial después de 1 minuto.
Leer de nuevo tras 1, 2 y 3 minutos. Observar si el cambio de
absorbancia por minuto está entre
0,11 y 0,16 a 340 nm/Hg 334 nm
0,06 y 0,08 a Hg 365 nm
usar sólo los valores para los 2 primeros minutos del cálculo.
PRECISION
M
Muestra
R1. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
Micro
SA
Pipetear en la Cubeta:
Macro
hasta 40 U/l
hasta 31 U/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geográfica de la población.
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Se recomienda el uso de suero fisiológico y suero de
calibración de nivel 3 de Randox para la calibración. Es
aconsejable cambiar el lote del reactivo para la calibración o
seguir lo indicado por los procedimientos de control de
calidad.
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
37C
CÁLCULO MANUAL
Para calcular la actividad de la ALT utilizar la siguiente fórmula:
Análisis (Intra)
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
Nivel 2
38.9
1.79
4.61
20
Nivel 3
134
1.59
1.19
20
Nivel 2
38.9
1.78
4.58
20
Nivel 3
134
5.22
3.90
20
Análisis (Inter)
U/l = 1746 x A 340 nm/min
U/l = 1780 x A Hg 334 nm/min
U/l = 3235 x A Hg 365 nm/min
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
NORMALIZACIÓN
El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en
el material de referencia JSCC TS01 de ALT.
CORRELACIÓN
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y
Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles
distintos de controles al menos una vez al día. Los valores
obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si
los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye
error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
Y = 0,99 X + 17,2
y un coeficiente de correlación r = 0,9935
Se analizaron 47 muestras de pacientes con valores de entre
18 y 522 U/l.
REFERENCIAS
1. International Federation of Clinical Chemistry, Scientific
Committee. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1980; 18:
521-534.
Revisado el 04 Apr 11, bm
Rev. 004
PAGE 2 OF 2
AMONIACO (NH3)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
Método Enzimático - UV
MANUAL
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de Amoníaco en plasma.
Este producto es adecuado para su utilización en Manual.
No. Cat.
AM 1054
20 x 3 ml
R1a.
R1b.
R2.
CAL.
Reactivo
Tampón
GLDH
Patrón
20 x 3 ml
70 ml
1,0 ml
5,5 ml
RELEVANCIA CLÍNICA
La mayor fuente de amoniaco en circulación es el tracto
gastrointestinal. En condiciones normales, el amoniaco se
metaboliza a la urea por las enzimas hepáticas. Muchas
enfermedades, tanto heredadas como adquiridas, causan un
incremento en los niveles de amoniaco (hiperamonemia). Las
deficiencias heredadas de las enzimas del ciclo de la urea son la
mayor causa de hiperamonemia en niños. La hiperamonemia
adquirida está provocadas por una enfermedad hepática,
insuficiencia renal o el síndrome de Reye. Un nivel de amoniaco
elevado resulta tóxico para el sistema nervioso central.
PRINCIPIO(1)
Las soluciones R1b, R2 y CAL contienen azida sódica. Evitar su
ingestión o contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto
con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua
abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar
inmediatamente a un médico.
La azida sódica reacciona con el cobre y el plomo de las tuberías,
lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se desheche
este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la
formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas
con hidróxido sódico al 10%.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Por favor, desechar todos los materials Biológicos y Químicos de
acuerdo a las pautas locales.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio
GLDH
glutamato + NAD+
AA
M
El amoníaco se combina con -oxoglutarato y NADH en
presencia de glutamato deshidrogenasa (GLDH) para
+
formar glutamato y NAD . La correspondiente disminución
de la absorbancia a 340 nm es proporcional a la
(1)
concentración de amoníaco en plasma.
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
R1a. Reactivo
Reconstituir el contenido de un vial de Reactivo R1a con
3 ml de Tampón R1b. Es estable 24 horas entre +15 y
+25C ó 2 días entre +2 y +8C.
SA
-oxoglutarato + NH3 + NADH
G
MUESTRA(2)
Plasma heparinizado o EDTA plasma.
Se obtiene sangre venosa sin estancar y se conserva en un baño
de hielo. El plasma se separa dentro de 30 min. El ensayo de
amoníaco debería llevarse a cabo inmediatamente. El plasma
puede conservarse durante 2 horas a +4C.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
R1a. Reactivo
NADH
-oxoglutarato
R1b. Tampón
Trietanolamina
R2.
GLDH
CAL. Patrón
Concentración inicial de las soluciones
0,16 mmol/l
2 mmol/l
0,15 mol/l, pH 8,6
1200 U/ml
See lot specific insert
R1b. Tampón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
especificada cuando se conserva entre +2 y +8C.
R2.
GLDH
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
especificada cuando se conserva entre +2 y +8C.
CAL. Patrón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
especificada cuando se conserva entre +2 y +8C.
R1 = Reactivo/Tampón
R2 = GLDH
MATERIALES SUMINISTRADOS
Reactivo
Tampón
GLDH
Patrón
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO
PROPORCIONADOS
Controles Randox de Amonio Etanol:
NIvel 1 (Cat. No. EA 1366)
Nivel 2 (Cat. No. EA 1367)
Nivel 3 (Cat. No. EA 1368)
MANUAL - AMONIACO - AM 1054
PAGINA 2 DE 2
PROCEDIMIENTO
CÁLCULOS
Ablanco = Blanco A1 - Blanco A2
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
340 nm
1 cm de espesor
25/30/37C
Frente al aire
Utilizando un patrón:
Amuestra - Ablanco
Procedimiento Macro
Conc. de
Amoníaco =
Pipetear en la cubeta:
Blanco de
Reactivo
Patrón
Muestra
--0,2 ml
--3,0 ml
----0,2 ml
3,0 ml
0,2 ml
----3,0 ml
Muestra
Agua destilada
Patrón
Reactivo (R1)
Amuestra = Muestra A1 - Muestra A2
x Patrón de conc.
Apatrón
-
Ablanco
INTERFERENCIA
La hemólisis interfiere con el análisis.
En muestras normales se observa un pequeño cambio de
absorbancia. Esto puede ser aumentado añadiendo 0,3 ml de
muestra en vez de 0,2 ml. para el procedimiento macro y 0,15 ml
de muestra en vez de 0,1 ml para el procedimiento semi micro.
Mezclar, dejar reposar durante 5 min. Leer la absorbancia inicial
de la muestra y del blanco (A1).
Para utilizar un método completamente automatizado de
amoníaco recomendamos No. Cat. AM 1015.
GLDH (R2)
VALORES NORMALES (2)
Amoníaco en plasma:
0,02 ml
0,02 ml
Mezclar e incubar durante 5 min. Leer la absorbancia final de la
muestra y del blanco (A2).
Procedimiento Semi Micro
Pipetear en la cubeta:
Muestra
--0,1 ml
--1,5 ml
----0,1 ml
1,5 ml
0,1 ml
----1,5 ml
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la
población.
LINEALIDAD
El método es lineal hasta 1180 µmol/l (20 µg/ml).
REFERENCIAS
1. Dewan J.G., Biochem J., 1938; 32: 1378.
2. Mondzac A., Ehrlich G.E., Seegmiller J.E., J Lab Clin. Med.,
1965; 66: 526.
M
Patrón
AA
Muestra
Agua destilada
Patrón
Reactivo (R1)
Blanco de
Reactivo
10 - 47 mol/l
0,17 -0,80 g/ml
SA
0,02 ml
GLDH (R2)
0,01 ml
G
Mezclar, y dejar reposar durante 5 min. Leer la absorbancia inicial
de la muestra y del blanco (A1).
0,01 ml
0,01 ml
Mezclar e incubar durante 5 min. Leer la absorbancia final de la
muestra y del blanco (A2).
CONTROL DE CALIDAD
Los controles Randox de Amonio Etanol Nivel 1, Nivel 2 y
Nivel 3 se recomiendan para el control diario de calidad Deberían
utilizarse como mínimo dos niveles de controles una vez al día. Los
valores obtenidos deberían entrar dentro de un rango determinado.
Si estos valores se salen de ese rango aun habiéndolo repetido, se
deben seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar los ajustes del instrumento y el foco de luz.
2. Comprobar la limpieza de todo el equipo.
3. Comprobar el agua y la presencia del algún posible agente
contaminante que pueda interferir en los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción.
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y los componentes del
mismo.
6. Contactar con el Servicio Técnico de Laboratorios Randox.
Irlanda del Norte (028) 94422413.
Revisado el 26 Abril 2010 bm
Rev. 001
ANTITROMBINA III
(AT III)
RECOGIDA DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN (4)
Mezcle nueve partes de sangre recién extraída con una parte
de citrato trisódico al 3,2% (0,109 mol/l). Evite la hemólisis y
la contaminación de la muestra sanguínea con fluidos
corporales. Se deben rechazar las muestras que contengan
menos del 90% del volumen previsto de llenado. Centrifugue
la sangre durante 15 minutos a 1500 g. Realice el análisis en
un lapso de 4 horas, si las muestras se conservan entre 20 y
25°C. Si la prueba no se realiza antes de las 4 horas, el
plasma puede mantenerse congelado a -20°C hasta 2
semanas, o a -70°C durante un máximo de 6 meses. Para
obtener más detalles sobre la recogida de muestras consulte
el documento NCCLS H21-A3.
 No postergue el mezclado de la sangre con el
anticoagulante.
 Evite la formación de espuma en la muestra.
 Utilice exclusivamente recipientes de plástico o de vidrio
siliconado.
 Las muestras turbias, ictéricas, lipémicas y hemolizadas
pueden generar resultados erróneos.
 La congelación y consiguiente descongelación de
muestras de plasma que contengan células residuales
podría generar membranas celulares dañadas que pueden
afectar a los resultados.
 El las muestras de plasma con un hematocrito fuera del
intervalo del 20 al 55% puede que la concentración de
anticoagulante errónea, por lo que debe ajustarse el
anticoagulante según proceda.
SEMIAUTOMÁTICO
INDICACIONES
Determinación cuantitativa in vitro de la antitrombina III (AT
III) en plasma humano mediante el método cromogénico. El
producto es adecuado para uso con métodos manuales o
semiautomáticos.
Núm. cat.
ANT 2754 R1a. Reactivo de trombina
26 ml
R1b. Tampón
R2. Sustrato
4 x 2 ml
1 x 10 ml
4 x 2 ml
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
M
Contenido
G
AA
PRINCIPIO
En este método de dos fases(2) se añade trombina a la
solución diluida de plasma que contiene antitrombina III en
presencia de exceso de heparina. Tras un período de
incubación inicial (fase 1) la actividad residual de la trombina
se determina con un sustrato cromogénico específico de la
trombina (fase 2). La actividad residual de la trombina es
inversamente proporcional a la concentración de
antitrombina III.
Con el fin de conferir especificidad para la antitrombina III,
este sistema de ensayo utiliza un concentración final de
heparina más baja, en la cual la inactivación de la trombina
aumentada por heparina, debida al cofactor II de la heparina,
es desdeñable. Además, el cofactor II de la heparina humana
reacciona más fácilmente con la trombina humana que con la
bovina(3). Así, este sistema de ensayo presenta mayor
especificidad para la antitrombina III al utilizar trombina
bovina.
SA
RELEVANCIA CLÍNICA
La antitrombina III es un inhibidor de las proteasas
plasmáticas del tipo serina. Una función importante de la
antitrombina III es inhibir la actividad de la trombina. Por lo
general, la velocidad de inhibición de la trombina causada por
la antitrombina III es lenta (actividad antitrombina
progresiva). Sin embargo, dicha velocidad puede aumentar
miles de veces en presencia de heparina (actividad cofactor
de la heparina).
Tolefsen y Blank(1) han descubierto otro inhibidor rápido de
la trombina que depende de la heparina, el cofactor II de la
heparina, en el plasma humano. Esta proteína puede interferir
en las mediciones de antitrombina III, especialmente a
concentraciones de heparina elevadas (2 unidades/ml USP).
MUESTRA
Plasma citrado.
Plasma diluido 1+40 en NaCl al 0,9%.
R1a. Reactivo de trombina
Trombina bovina liofilizada
R1b. Tampón
Tampón tris
R2. Sustrato
Tosyl-Gly-Pro-Arg-4-nitranilida
acetato
Concentración inicial
de las soluciones
8 UI/ml
90 mmol/l, pH 8,2
2,5 mmol/l
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DE
SEGURIDAD
Solo para uso diagnóstico in vitro. No pipetee con la boca.
Aplique las precauciones habituales necesarias para la
manipulación de reactivos de laboratorio.
El reactivo tampón de la antitrombina III (R1b) contiene acida
sódica. Evite la ingestión o el contacto con la piel o las
mucosas. En caso de contacto con la piel, lave el área
afectada con abundante agua. En caso de contacto con los
ojos o ingestión, busque atención médica de inmediato.
La acida sódica reacciona con las tuberías de plomo y cobre,
con el consiguiente riesgo de generación de acidas explosivas.
Al eliminar estos reactivos, hágalo con gran cantidad de agua
para evitar la acumulación de acidas.
Las superficies
expuestas de metal deben limpiase con hidróxido sódico al
10%.
Están disponibles, previa petición, las fichas técnicas de salud
y seguridad.
Los reactivos deben utilizarse solo para la finalidad
prevista
y
por
personal
de
laboratorio
adecuadamente cualificado, en unas condiciones de
laboratorio apropiadas.
PÁGINA 1 DE 3
MANUAL ANT 2754
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS
REACTIVOS
R1a. Reactivo de trombina
Reconstituya un vial de reactivo de trombina (R1a) con
2 ml de tampón (R1b).
Estable durante 2 días entre +15 y +25°C; 14 días
entre +2 y +8°C; 30 días a -20°C.
CÁLCULO DE LOS RESULTADOS
Trace el gráfico de la ∆Abs/min obtenida con cada calibrador
de antitrombina III frente al % de antitrombina III
correspondiente en papel de escala lineal.
La antitrombina III en las muestras de plasma del paciente se
puede determinar mediante la interpolación de la curva de
calibración.
R1b. Tampón
Contenido listo para su uso. Estable hasta la fecha de
caducidad cuando se almacena a una temperatura entre
+2 y +8°C.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los controles de coagulación Randox de nivel
1, 2 y 3 para el control de calidad diario. Deben analizarse
tres niveles de controles al menos una vez al día. Los valores
obtenidos deben situarse dentro de un intervalo
determinado. Si estos valores están fuera del intervalo y la
repetición excluye un posible error, debe procederse como
sigue:
1. Comprobar los parámetros del instrumento.
2. Comprobar que todo el equipo utilizado esté limpio.
3. Comprobar los contaminantes, como un crecimiento
bacteriano, que pueden contribuir a la obtención de
resultados imprecisos.
4. Comprobar la temperatura de la reacción.
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y su contenido.
6. Póngase en contacto con el servicio técnico de atención
al cliente de Randox Laboratories, llamando al teléfono
+44 (0) 28 9442 2413 (Irlanda del Norte).
R2. Sustrato
Reconstituya un vial de sustrato (R2) con 2 ml
de agua desionizada.
Estable durante 8 días entre +15 y +25°C; 14 días
entre +2 y +8°C; 90 días a -20°C.
Precaliente las partes alícuotas de reactivo de
trombina (R1a) y sustrato (R2) a +37°C antes de
utilizarlas.
Pipetear en una cubeta
Muestra diluida/control/calibrador
Reactivo de trombina (R1)
G
PROCEDIMIENTO
100 µl
100 µl
Mezclar bien e incubar a +37°C durante 3 minutos, añadir
sustrato (R2)
M
VALORES PREVISTOS
Los valores normales con el reactivo Randox AT III están
comprendidos dentro del 75 y 125%.
AA
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Calibrador de coagulación Randox (N.º cat. CG5037)
Controles de coagulación Randox de nivel 1, 2 y 3 (N.º cat.
CG5021, CG5022 y CG 5023)
Micropipetas
Micropuntas
Analizador de coagulación foto-óptico
Temporizador
SA
MATERIALES SUMINISTRADOS
Reactivo de trombina
Tampón
Sustrato
100 µl
Mezclar bien y tras 5 segundos leer la absorbancia inicial a
405 nm. Volver a leer la absorbancia transcurridos 30
segundos.
Determinar la velocidad de cambio de absorbancia
(∆Abs/min)
Siga las instrucciones del fabricante del instrumento
para realizar la prueba.
CALIBRACIÓN
Para la calibración se recomienda el calibrador de coagulación
Randox (valor específico de lote). Use salino como calibrador
del 0%, con el calibrador de coagulación Randox como 50% y
100%. Se recomienda calibrar cambiando el lote de reactivo o
tal como indican los procedimientos de control de calidad.
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango de referencia, ya que pueden existir diferencias entre
instrumentos, laboratorios y poblaciones locales.
INTERFERENCIA
Evite utilizar muestras fuertemente hemolizadas y lipémicas,
ya que pueden interferir con el ensayo.
Se comprobaron los siguientes analitos, hasta los niveles que
se indican, sin encontrar interferencias:
Bilirrubina conjugada
Bilirrubina libre
Intralípidos
Triglicéridos
Hemoglobina
12 mg/dl
12 mg/dl
300 mg/dl
320 mg/dl
140 mg/dl
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Se han obtenido los siguientes datos de rendimiento
mediante un coagulómetro semiautomático a +37ºC.
SENSIBILIDAD
La actividad mínima detectable de la antitrombina III se
determina como 30,0%.
LINEALIDAD
Este método es lineal hasta un 130% de actividad de la
antitrombina III. Si la muestra excede este valor, diluya las
muestras previamente diluidas (1+40) de plasma aún más 1+1
con salino al 0,9% y repita el análisis. Multiplique el resultado
por 2.
PÁGINA 2 DE 3
MANUAL ANT 2754
PRECISIÓN
Intraensayo
Media (%)
DE
CV (%)
n
Normal
102
1.89
1.86
20
Patológica
65,5
2,35
3,59
20
Normal
85.0
1.86
2.19
20
Patológica
59.4
2.24
3.77
20
Interensayo
Media (%)
DE
CV (%)
n
CORRELACIÓN
Este método (Y) se ha comparado con otro método
disponible en el mercado (X) y se ha obtenido la siguiente
ecuación de regresión lineal:
Y = 1,00X + 0,22
y un coeficiente de correlación de 1,00
M
G
AA
REFERENCIAS
1. Tolefsen DM and Blank MK, J. Clin. Invest. 68: 589-596,
1981.
2. Odegard OR, Lie M and Abildgaard U: Thromb Res. 6:
287-294, 1975.
3. Friberger P, Egberg N, Holmer E, Hellgren M and
Blomback M, Thromb. Res. 25: 433-436, 1982.
4. Rosemary
Biggs,
Human
blood
Coagulation,
Haemostasis and Thrombosis, Blackwell Scientific
Publications, Oxford, England, 1972.
SA
Se analizaron 40 muestras de pacientes que abarcaron un
rango del 38,3 al 113,7%
Revisado 25 may 12 rw
Rev. 002
PÁGINA 3 DE 3
ALP
ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS
REACTIVOS
R1a. Tampón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8C.
Fosfatasa Alcalina
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de la Fosfatasa Alcalina
(ALP) en suero yl plasma. Este producto es adecuado para un
uso manual o en el analizador Rx Monza.
No. Cat.
AP 542
20 x 3 ml
R1a. Tampón
R1b. Substrato
1 x 70 ml
20 x 3 ml
AP 307
10 x 10 ml
R1a. Tampón
R1b. Substrato
1 x 105 ml
10 x 10 ml
R1b. Substrato
Reconstituir un frasco de Substrato R1b con el
volumen apropiado de Tampón R1a:3 ml para el kit de 20 x 3 ml (AP 542)
10 ml para el kit de 10 x 10 ml (AP 307)
Estable durante 30 días entre +2 y +8C ó 3 días entre
+15 y +25C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón
Substrato
METODO COLORIMETRICO (1)
Este es una método estándar optimizado de acuerdo a las
recomendaciones del Deutsche Gesellschaft für Klinische
Chemie.
MATERIALES NECESARIOS PERO NO
SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351).
Salino  (Cat. No. SA 3854)
PRINCIPIO
ALP
p-nitrofenilfosfato + H2O
fosfato + p-nitrofenol
PROCEDIMIENTO
Aspire H2O de doble destilación y realice una nueva
calibración de la ganancia en el modo de célula de flujo.
Seleccione ALP en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y
lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.
R1b.
AA
Tampón
Tampón Dietanolamina
MgCl2
Substrato
p-nitrofenilfosfato
1 mol/l, pH 9,8
0,5 mmol/l
G
R1a.
Concentraciones en la Prueba
M
Pipetee en un tubo de ensayo:
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes
SA
MUESTRA(2)
Suero o plasma heparinizado.
Las muestras son estables durante 5 días cuando se conservan
entre +2 y +8C.
10 mmol/l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo
de reactivos de laboratorio.
La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante
agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar
atención médica inmediatamente.
La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las
cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando
se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes
de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies
metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio
al 10%.
La Solución R1a contiene dietanolamina que puede dañar
seriamente los ojos y que es dañino si se traga. Evitar la
ingestión y llevar protección adecuada para los ojos.
Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.
Los reactivos deben utilizarse solamente para su
propósito por personal de laboratorio cualificado, y
bajo condiciones de laboratorio apropiadas.
Muestra
Reactivo
0,01 ml
0,5 ml
Mézclelo y aspírelo en Rx Monza.
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Se recomienda el uso de suero fisiológico y suero de
calibración de nivel 3 de Randox para la calibración. Es
aconsejable cambiar el lote del reactivo para la calibración o
seguir lo indicado por los procedimientos de control de
calidad.
PARA USO MANUAL
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
Pipetear en la cubeta:
Muestra
Reactivo (25C, 30C, 37C)
Hg 405 nm
1 cm de espesor
25C, 30C, 37C
frente al aire
Macro
SemiMicro
Micro
0,05 ml
3,00 ml
0,02 ml
1,00 ml
0,01 ml
0,50 ml
Mezclar, leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar
simultáneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 minutos.
MANUAL / RX MONZA - ALP - FOSFATASA ALCALINA - AP542 / AP 307
MANUAL CALCULO
Utilizar la siguiente formula para calcular la actividad
de ALP:
PRECISION
U/l = 3300 x A 405 nm/min MACRO
U/l = 2760 x A 405 nm/min SEMI-MICRO
U/l = 2760 x A 405 nm/min MICRO
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y
Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles
distintos de controles al menos una vez al día. Los valores
obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si
los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye
error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte (028) 94422413.
Análisis Inter
Análisis Intra
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
Hombres/Mujeres 60-170 U/l
30C
Nivel 3
486
17.01
3.50
20
Y = 1.076X - 14.5
y un coeficiente de correlación de r = 0.9975
se hicieron análisis a 43 pacientes abarcando un rango
de 52 a 965 U/l.
SA
REFERENCIAS
1. Rec. GSCC (DGKC); J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1972;
10: 182.
2. Englehardt A., et al, Aerztl Labor 1970 16 42.
37C
73-207 U/l
98-279 U/l
G
25C
Nivel 2
262
11.59
4.43
20
AA
VALORES DE NORMALIDAD EN EL SUERO
Nivel 3
486
9.49
1.95
20
M
300 mol/l (17 mg/dl)
2%
22,75 mmol/l (2010 mg/dl)
1 g/l (100 mg/dl)
Nivel 2
262
8.11
3.10
20
CORRELATION
Este método (Y) se comparó con otro método disponible en
el mercado (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
INTERFERENCIA
Evitar la hemólisis ya que interfiere con el análisis. Los
siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes niveles y
se encontró que no interfieren:
Bilirrubina
Intralípidos®
Triglicéridos
Hemoglobina
PAGINA 2 OF 2
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geográfica de la población.
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Los siguientes datos de rendimiento se obtuvieron mediante el
analizador Rx Monza a una temperatura de 37 oC.
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de ALP con un nivel
aceptable de precisión se ha determinado en 49,9 U/l
LINEALIDAD
El método es lineal hasta 1609 U/l. Si la concentración
sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 9 con una
solución del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de
nuevo. Multiplicar el resultado por 10.
Revisado el 10 Sep 2010 bm
Rev. 001
Aspartato Aminotransferasa
IFCC
MANUAL
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de aspartato aminotransferasa
(AST) en suero y plasma. Este producto es adecuado para su
utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza.
Cat. No.
AS 1202
20 x 2 ml
R1a.
R1b.
Tampón/Sustrato
Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato
1 x 70 ml
20 x 2 ml
AS 1204
10 x 10 ml
R1a
R1b
Tampón/Sustrato
Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato
1 x 105 ml
10 x 10 ml
AS 1267
5 x 20 ml
R1a
R1b
Tampón/Sustrato
Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato
1 x 105 ml
5 x 20 ml
AS 2359
5 x 100 ml
R1a
R1b
Tampón/Sustrato
Enzima/Coenzima/
-oxoglutarato
5 x 100 ml
5 x 100 ml
METODO UV
Este es un método estándar optimizado según las
concentraciones recomendadas por la IFCC.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
R1a.
R1b.
Concentraciones en la prueba
Tampón/Sustrato
Tampón Tris
80 mmol/l, pH 7,5
L-aspartato
240 mmol/l
Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
-oxoglutarato
12 mmol/l
MDH
≥ 420 U/l
LD
≥ 600 U/l
NADH
0,18 mmol/l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o
contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel,
lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En
caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente
a un médico.
G
AA
M
SIGNIFICADO CLINICO(1,2,3,4)
Las aminotransferasas son un grupo de enzimas que catalizan las
inter conversiones de aminoácidos y -oxoácidos por medio de la
transferencia de grupos amino. La GOT (aspartato
aminotransferasa o transaminasa de oxaloacetato glutamato) se ha
encontrado en el citoplasma y mitocondrias de las células
estudiadas. En caso de un ligero daño del tejido como por ej. el
hígado, la forma predominante de la GOT en suero es la del
citoplasma, con una cantidad más pequeña proviniente de las
mitocondrias. Un daño más severo del tejido dará como resultado
una mayor liberación de enzima mitocondrial. Los niveles elevados
de AST pueden ser una señal de infarto de miocardio, enfermedad
hepática, distrofia muscular y daño de órganos.
Los músculos del corazón son los que muestran más actividad de
ésta enzima, sin embargo también se ha encontrado en el cerebro,
hígado, mucosa gástrica, tejido adiposo y riñones humanos.
La IFCC recomienda actualmente (1980) procedimientos
estandarizados para los análisis de GOT incluyendo:1. optimización de las concentraciones de substrato.
2. Empleo de tampones Tris (en lugar de fosfato, el cual se ha
demostrado que inhibe la recombinación de la apoenzima con
el fosfato piridoxal).
3. Preincubación de suero y tampón combinado para permitir que
tengan lugar posibles reacciones con NADH.
EXTRACCION Y PREPARACION DE MUESTRAS (5)
Suero:Use serum free from hemolysis.
Plasma:- Se puede utilizar EDTA o heparina como anticoagulante.
El plasma se degerá separar de las células durante la
hora siguiente a su extracción. Las muestras se deberán
refrigerar si no se utilizan inmediatamente:Las muestras que se almacenen durante más de 3 días se
deberán congelar a -20C.
SA
AST
4. Substrato de inicio (-oxoglutarato)
5. Activación de fosfato piridoxal opcional.
Este es un método estándar optimizado de acuerdo a las
recomendaciones de la IFCC.
PRINCIPIO
El -oxoglutarato reacciona con la L-aspartato en presencia de
GOT para formar L-glutamato mas oxaloacetato. La reacción
indicadora utiliza el oxaloacetato para la determinación cinética
del consumo de NADH.
-oxoglutarato + L-aspartato
oxaloacetato + NADH + H+
AST
MDH
L-glutamato + oxaloacetato
L-malato + NAD+
La Azida Sódica reacciona con el cobre y el plomo de las
tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se
deseche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para
evitar la formación de estas azidas explosivas. Las superficies
metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica
deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si
se desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
MANUAL/RX MONZA - AST - AS 1202/ AS 1204/ AS 1267/ AS 2359
R1b. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
Reconstituir un vial de Enzima/Coenzima/-oxoglutarato 2
con el volumen adecuado de Tampón/Sustrato 1:
2 ml para el kit de
20 x 2 ml (AS1202)
10 ml para el kit de
10 x 10 ml (AS1204)
20 ml para el kit de
5 x 20 ml (AS1267)
Es estable durante 14 días conservado entre +2 y +8C ó
24 horas entre +15 y +25C
Cat. No. AS 2359 5 x 100 ml
Disolver el contenido de una botella de Enzima/
Coenzima/-oxoglutarato 2 con un pequeño volumen de
Tampón/Sustrato 1 y luego transferir el contenido a la
botella 1, enjuagando varias veces la botella 2. Es estable
durante 14 días cuando se conserva entre +2 y +8oC ó 24
horas entre +15 y +25oC.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón/Sustrato
Enzima/Coenzima/-oxoglutarato
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)
Salino  (Cat. No. SA 3854)
U/l = 1746 x A 340 nm/min
U/l = 1780 x A Hg 334 nm/min
U/l = 3235 x A Hg 365 nm/min
NORMALIZACIÓN
El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en
el material de referencia JSCC TS01 de AST.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano
puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
ESPECIFICIDAD/INTERFERENCIA(6,7)
La hemólisis bruta producirá falsos resultados elevados.
Se deberá tomar en consideración los efectos de varios fármacos
en la actividad de La GOT en los casos de pacientes que estén
recibiendo grandes dosis de fármacos.
AA
M
PROCEDIMIENTO
Aspire H2O de doble destilación y realice una nueva calibración
de la ganancia en el modo de célula de flujo. Seleccione AST en la
pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de
agua de la forma indicada.
MANUAL CALCULOS
Para calcular la actividad de la GOT utilizar las fórmulas
siguientes:
SA
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
R1a. Tampón/Sustrato
Listo para su uso. Estables hasta la fecha de caducidad
cuando se conservan entre +2 y +8C.
PAGE 2 OF 3
Muestra
Reactivo
0.05 ml
0.5 ml
Mix and aspirate into the Rx Monza.
G
Pipetee en un tubo de ensayo:
Los siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes niveles y
se encontró que no interfieren:
Hemoglobina
Bilirrubina libre
Bilirrubina conjugada
Triglicéridos
Intralipid®
250 mg/dl
25 mg/dl)
25 mg/dl)
1000 mg/dl)
200 mg/dl
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Se recomienda el uso de suero fisiológico y suero de calibración
de nivel 3 de Randox para la calibración. Es aconsejable cambiar
el lote del reactivo para la calibración o seguir lo indicado por los
procedimientos de control de calidad.
Young et cols y Friedman et cols dan una lista de sustancias y
condiciones que se conoce que afectan a la actividad in vivo de La
GOT . La integridad de esta lista y la exactitud de la información
que en ella se suministra no representa necesariamente la
opinión de Randox Laboratories, Ltd.
PARA USO MANUAL
VALORES NORMALES EN SUERO(8,9)
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
340 nm (Hg 334 nm ó Hg 365 nm)
1 cm de espesor
25/30/37C
Frente al aire
Pipetear en cubeta:
Macro
Micro
Muestra
Enzima/Coenzima/-oxoglutarato 2
0,2 ml
2,0 ml
0,1 ml
1,0 ml
Mezclar, leer la absorbancia inicial al cabo de 1 min. Leer de
nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min. Observar si la variación de la
absorbancia por minuto se sitúa entre
0,11 y 0,16 a 340/Hg 334 nm
0,06 y 0,08 a Hg 365 nm
para el cálculo usar sólo los valores obtenidos durante los 2
primeros minutos.
25C
Hombre:
Mujer :
Hasta 18 U/l
Hasta 15 U/l
30C
37C
Hasta 25 U/l
Hasta 21 U/l
Hasta 37 U/l
Hasta 31 U/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la
población.
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante
el analizador Rx Monza a una temperatura de 37oC.
MANUAL/RX MONZA - AST - AS 1202/ AS 1204/ AS 1267/ AS 2359
PAGE 3 OF 3
LINEALIDAD
Este método es lineal hasta una concentración de 562 U/l. Si la
concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 +
9 con una solución de NaCl del 0,9% y debe someterse a ensayo
de nuevo. Multiplicar el resultado por 10.
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de AST con un nivel
aceptable de precisión se determinó en 9,3 U/l.
PRECISION
Análisis (Intra)
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
Nivel 2
35.6
1.66
4.65
20
Nivel 3
153
1.47
4.63
20
Nivel 2
35.6
1.77
4.86
20
Nivel 3
153
7.10
4.63
20
Análisis (Inter)
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
SA
CORRELATION
Este método (Y) se comparó con otro método disponible en el
mercado (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
AA
se hicieron análisis a 43 pacientes abarcando un rango de 28 a
559 U/l.
M
Y = 1.07X + 4.9
y un coeficiente de correlación de r = 0.9975
G
REFERENCIAS
1. Wroblewski F, La Due J.S: Ann Intern Med. 1956; 45: 801.
2. Wroblewski F, La Due J.S: Proc Soc Exp Biol Med 1956;
91: 569.
3. Bergmeyer HU, Bowers GN Jr, et al: Clin Chem 1977; 23:
887.
4. Bergmeyer HU, Bowers GN Jr, et al: J.Clin Chem Clin
Biochem 1980; 18: 521-534.
5. Tietz N W: Fundamentals of Clinical Chemistry ed 3.
Philadelphia, WB Saunders Co. 1987, pg 372.
6. Young D S, et al: Clin Chem 1975, 21; No5.
7. Friedman RB, et al: Clin Chem 1980, 26; No4.
8. Wallnofer H, Schmidt.E, Schmidt FW, eds: Synopsis der
Leberkrankheiten Stuttgart, Georg Thieme Verlag, 1974.
9. Thefeld W, et al: Dtsch Med Wschr 1974; 99: 343.
Revisado 10 Sep 10 bm
Rev. 001
AMILASA (AMY)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo
de reactivos de laboratorio.
Etilideno Bloqueado-pNPG7
MANUAL
RX MONZA
La Solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante
agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar
atención médica inmediatamente.
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de la Amilasa en el
suero y orina. Este producto es adecuado para su utilización
de forma manual y en el analizador Rx Monza.
R1a. Tampón
R1b. Substrato
1 x 50 ml
20 x 2 ml
AY 1580
20 x 5 ml
R1a. Tampón
R1b. Substrato
1 x 105 ml
20 x 5 ml
AY 1582
9 x 20 ml
R1a. Tampón
R1b. Substrato
2 x 105 ml
9 x 20 ml
La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las
cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando
se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes
de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies
metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio
al 10%.
Existen hojas de Salud y Seguridad disponibles.
METODO COLORIMETRICO(1,2)
El método utiliza etilideno bloqueado
p-nitrofenil-maltoeptaosida como substrato. También se utiliza
en este método el indicador enzima glucosidasa, utilizado para
liberar el p-nitrofenol. La glucosa terminal del sustrato se
bloquea químicamente, previniendo la división por el enzima
indicador.
-amilasa
etilideno-G7 pNP
etilideno -Gx + Gx-pNP
- glucosidasa
= glucosa
= paranitrofenol
= 2 to 5
G
G
pNP
x
glucosa + pNP
AA
glucosa + pNP-glucosido
pNP-glucosido
MUESTRA
Suero, plasma heparinizado u orina.
Diluir la orina 1+2 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el resultado
por 3.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
Concentración Inicial de los Reactivos
R1a. Tampón
Tampón Pipes
Cloruro de Calcio
Cloruro Sódico
R1b. Substrato
Tampón Pipes
etilideno-G7 pNP
-glucosidasa
ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO
Reconstituir el contenido de un frasco de Substrato R1b con
el volumen apropiado de Tampón R1a:2 ml para el kit de 20 x 2 ml (AY 2751)
5 ml para el kit de 20 x 5 ml (AY 1580)
20 ml para el kit de 9 x 20 ml (AY 1582)
Estable durante 21 días entre +2 y + 8oC.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón
Substrato
M
-glucosidase
Gx-pNP
Los reactivos deben utilizarse solamente para su
propósito por personal de laboratorio cualificado, y
bajo condiciones de laboratorio apropiadas.
SA
No. Cat.
AY 2751
20 x 2 ml
50 mmol/l, pH 7.0
5.0 mmol/l
50 mmol/l
12.5 mmol/l, pH 7.0
1.0 mmol/l
≥12 U/ml
MATERIALES NECESARIOS PERO NO
SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Suero de Calibración Randox Nivel 3 (No. Cat. CAL 2351).
NOTA
Evitar la hemólisis ya que puede disminuir los resultados.
Evitar la contaminación del reactivo, muestras y material de
cristal por medio de la saliva o sudor, dado que poseen altos
contenidos de amilasa. No pipetear con la boca.
PROCEDIMIENTO
Seleccione AMY en la pantalla de prueba de funcionamiento y
lleve a cabo un blanco de agua según las instrucciones.
Pipetee en un tubo de ensayo:
Muestra
Reactivo
0.01 ml
0.5 ml
Mezclar y aspirar en el Monza RX
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Se recomienda el uso de Calibración Randox nivel 3 para la
calibración. Se recomienda calibrar cada cambio de lote del
reactivo o como se indica en los procedimientos de control
de calidad.
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MANUAL/ RX MONZA AY 2751
PARA USO MANUAL
405 nm (400-420 nm)
1 cm de espesor
37C
frente al aire
PRECISION
Intraensayo
Pipetee en una cubeta:
Muestra
Reactivo
Media (U/l)
DE
CV (%)
n
0.02 ml
1.0 ml
Mezclar, leer la absorbancia inicial después de 60 segundos y al
mismo tiempo iniciar el temporizador. Leer de nuevo pasados
1, 2 y 3 minutos.
CÁLCULO MANUAL
Para calcular la actividad de la amilasa utilizar la siguiente
fórmula:
U/l = 4712 x A 405 nm/min
Nivel 2
72.1
3.17
4.39
20
Nivel 3
251
7.35
2.93
20
Nivel 2
72.1
3.97
5.50
20
Nivel 3
251
8.81
3.51
20
Interensayo
Media (U/l)
DE
CV (%)
n
CORRELACION
Se comparó este método (Y) con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
NORMALIZACIÓN
El suero de Calibración Randox nivel 3 es trazable a los
materiales de referencia amilasa IFCC456 y BCR476.
Y = 1.077 X - 8.548
con un coeficiente de correlación r = 0.9963
se analizaron 49 muestras de pacientes abarcando un rango de
28 - 838 U/l.
REFERENCIAS
1. Ranscher, E. et al (1986) Fresenius Z. Analyt. Chem. 324:
304.
2. Kruse - Jarres, J.D. et al (1989). J. Clin. Chem. Clin.
Biochem. 27: 103.
G
AA
M
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda para el control de calidad diario Multisueros
Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3. Se deberá de analizar
dos niveles de controles al menos una vez al día. Los valores
obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si
los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye
error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de
bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus
componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
SA
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de la amilasa con un nivel
aceptable de precisión ha sido determinada en 17.9 U/l.
VALORES NORMALES
Suero:
hasta 95 U / l (37°C)
Orina:
Aleatorias hasta 490 U / l (37°C)
24 horas de orina hasta 450 U/24 horas (37°C)
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango de referencia para considerar las diferencias en edad,
sexo, dieta y localización geográfica.
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador de Rx
Monza en el modo de flujo de células a 37C.
LINEARIDAD
El método es lineal hasta una concentración de 880 U / l.
Diluir las muestras con mayor concentración en 1 + 9 con
0,9% de Solución NaCl y repetir el test. Multiplique el
resultado por 10.
Revised 14 Sep 10 bm
Rev. 001
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CALCIO (Ca)
PREPARACION DE LOS REACTIVOS DE TRABAJO Y
ESTABILIDAD
Mezclar volúmenes iguales de las soluciones R1 y R2 en cantidad
suficiente para el número de muestras que se vayan a ensayar.
Estable durante 7 días cuando se conserve entre +2 y +8°C ó 3
días entre +15 y +25°C.
Método Colorimétrico
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de Calcio en el suero, plasma y
orina. Este producto es adecuado para un uso manual o en el
analizador RX monza.
CAL.
R1.
R2.
R3.
Patrón
Tampón
Cromógeno
EDTA
5.5 ml
1 x 100 ml
1 x 100 ml
10 ml
METODO COLORIMETRICO(1)
O-cresolftaleína complexona sin desproteinización.
PROCEDIMIENTO DE NOTA
Si la muestra tiene un color fuerte intrínseca (hemoglobina: >
200 mg/dl, bilirrubina> 20 mg/dl, o lipemia marcada), un blanco
de muestra se debe ejecutar. (Ver abajo)
PRINCIPIO
Los iones calcio forman un complejo violeta con la
o-cresolftaleína complexona en medio alcalino.
Esta prueba es muy sensible, por lo tanto el uso de material
desechable es aconsejable. Recipientes de vidrio deberán lavarse
con ácido clorhídrico diluido y luego enjuagar con agua destilada
antes de su uso.
MUESTRA
Suero, plasma heparinizado u orina. Diluir la orina
1 + 1 en NaCl 0,9%. Multiplicar el resultado por 2.
COMPOSICION DEL REACTIVO
Concentraciones iniciales
de las soluciones
PROCEDIMIENTO
Seleccione Calcio CPC en la pantalla de Ejecución de prueba y
llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones.
M
Componentes
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)
SA
No. Cat.
CA 590
200 ml
MATERIALES SUMINISTRADOS
Patrón
Tampón
Cromógeno
EDTA
Pipetear en la cubeta:
AA
Vedi inserto lotto-specifico
3.5 mol/l, pH 10,7
G
CAL. Patrón
Calcio
R1.
Tampón
2-amino-2-metilpropan-1-ol
R2.
Cromógeno
o-Cresolftaleína
complexona
8-hidroxiquinolina
Acido clorhídrico
R3.
EDTA
0,16 mmol/l
ddH20
Muestra
Patrón
Reactivo
Blanco de reactivo S0
Patrón S1
Muestra
12.5 µl
500 µl
12.5 µl
500 µl
12.5 µl
500 µl
6,89 mmol/l
60 mmol/l
150 mmol/l
Mezclar, incubar por 5 min a +25, +30 o +37C Inserte la cubeta
en el porta-RX monza celda de flujo y pulse Leer.
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
Para ejecutar un blanco de muestra:
Después de medir la absorbancia de la muestra de acuerdo con
el procedimiento de ensayo, añadir una gota de solución R3
(EDTA) a la muestra y la solución del reactivo. Cuando las
muestras han convertido incoloro (después de aproximadamente
10 segundos) insertar la cubeta en el porta-RX monza celda de
flujo y pulse leer. Este resultado debe ser manualmente resta de
la muestra para obtener el valor corregido de calcio.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Recomendó el uso de CAL Patrón proporcionado en el kit. La
calibración se recomienda con un cambio en la cantidad de
reactivo o como se indica por procudures de control de calidad.
PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD
Todas las soluciones están listas para su uso. Mantener las
botellas cerradas después de utilizarlas. Estables hasta la fecha de
caducidad cuando se conservan entre +15 y +25°C.
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MANUAL/ RX MONZA CA 590
PARA USO MANUAL
Hg 578 nm (550-590 nm)
570 nm
1 cm de espesor
frente a blanco de reactivo
sólo se requiere un
blanco por serie
+20 y +25°C/+37°C
Temperatura:
1. Para ensayos individuales
Pipetear en tubos de ensayo:
Muestra
Agua destilada
CAL
Solución R1
Solución R2
Blanco de
Reactivo
Patrón
Muestra
--25 µl
--0,5 ml
0,5 ml
----25 µl
0,5 ml
0,5 ml
25 µl
----0,5 ml
0,5 ml
Mezclar, leer la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón
(Apatrón) frente al reactivo blanco al cabo de 5 a 50 min.
2. Para ensayos en serie
Patrón
Muestra
--25 µl
--1,0 ml
----25 µl
1,0 ml
25 µl
----1,0 ml
AA
G
Para ejecutar un blanco de muestra: Después de medir la
absorbancia de la muestra de acuerdo con el procedimiento de
ensayo, añadir una gota de solución R3 (EDTA) a la muestra y la
solución del reactivo.
Cuando las muestras han convertido incoloro (después de
aproximadamente 10 segundos) insertar la cubeta en el porta-RX
monza celda de flujo y pulse leer. Este resultado debe ser
manualmente resta de la muestra para obtener el valor corregido
de calcio.
Concentración =
(mmol/l)
Concentración =
(mg/dl)
Gadodiamida (OMNISCAN: se utiliza en la RM) interfiere con el
calcio sérico causando que los niveles bajos (3).
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geográfica de la población.
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante
el analizador RX monza en el modo de cubeta a +37ºC.
SUERO
LINEALIDAD
El método es lineal hasta 5,67 mmol / l (22,7 mg/dl). Las muestras
con concentraciones superiores deben diluirse 1 +1 con el 0,9%
de NaCl y volver a ensayar, multiplicar el resultado por 2.
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de calcio con un nivel
aceptable de precisión se determinó como 1,16 mg/dl
(0,290 mmol/l).
PRECISION
Intra Assay
Amuestra
Apatrón
Amuestra
Apatrón
500 mol/l (29 mg/dl)
2%
22,75 mmol/l (2010 mg/dl)
6 g/l (600 mg/dl)
M
Blanco de
Reactivo
Mezclar, leer la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón
(Apatrón) frente al reactivo blanco al cabo de 5 a 50 min.
Aunque la absorbancia se puede leer durante los 5 a 50 minutos
siguientes, el tiempo de intervalo desde la adición de la muestra a
la lectura deberá ser exactamente el mismo para el
Patrón/Control y Muestra.
CALCULOS
Bilirrubina
Intralipid®
Triglicérido
Hemoglobina
VALORES NORMALES(2)
Suero:
2,02 -2,60 mmol/l (8,10-10,4 mg/dl)
Orina:
2,5 -6,2 mmol/24hrs (100 - 249 mg/24 hrs)
Pipetear en tubos de ensayo:
Muestra
Agua destilada
Patrón
Reactivo de trabajo
INTERFERENCIA/LIMITACIONES
Los siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes niveles y
se encontró que no interfieren:
SA
Longitud de onda:
Espectrofotómetro:
Cubeta:
Medición:
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
x Concentración del patrón
(mmol/l)
Mean (mg/dl)
SD
CV(%)
n
x Concentración del patrón
(mg/dl)
Inter Assay
STANDARDISATION
Randox Calibration Serum Level 3 is traceable to Calcium
reference material NIST 909b and NIST 956b.
Mean (mg/dl)
SD
CV(%)
n
Nivel 1
9.02
0.220
2.44
20
Nivel 2
12.4
0.249
2.01
20
Nivel 1
9.02
0.352
3.91
20
Nivel 2
12.4
0.317
2.56
20
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MANUAL/ RX MONZA CA 590
CORRELACION
Este método (Y) se comparó con otro método disponible en el
mercado (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y=0.9914 X -0.089
con un coeficiente de correlación r = 0.9931
Se analizaron 42 muestras con valores de entre 4,1 y 16,5 mg/dl.
ORINA
LINEALIDAD
El método es lineal hasta 7,13 mmol / l (28,6 mg / dl). Las
muestras con concentraciones superiores deben diluirse 1 +1
con el 0,9% de NaCl y volver a ensayar, multiplicar el resultado
por 2.
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de calcio con un nivel
aceptable de precisión se determinó como 1,29 mg/dl
(0,321 mmol/l).
G
AA
M
SA
REFERENCIAS
1. Ray Sarkar,B.C., and U.P.S. Chauhan., Anal Biochem. 1967;
20: 155.
2. Barnett, R.N., et al. (1973) Amer. J. Clin. Path. 59: 836.
3. Prince et al, Radiology 2003; 227: 639-646
Revisado 17 nov 11 rw
Rev. 002
PÁGINA 3 DE 3
CALCIO (Ca)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar
las precauciones normales requeridas para el manejo de
reactivos de laboratorio.
ARSENAZO III
Método Colorimétrico
MANUAL
RX MONZA
Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.
No. Cat.
CA 2390
R1. Reactivo Arsenazo
6 x 100 ml
SIGNIFICADO CLINICO(1)
El calcio es el quinto elemento más abundante en el cuerpo. La
mayor parte del calcio en el adulto humano es extracelular y el
99% existe como hidroxiapatita cristalina en los huesos y los
dientes donde confiere rigidez. El calcio en el suero existe en
tres formas: unido a proteínas (45%); ionizado (45%) y un 10%
forma un complejo con pequeños ligantes difusibles tales como
citrato, lactato, fosfato y bicarbonato. El calcio juega un papel
importante en los mecanismos de transmisión del impulso
nervioso, la contracción muscular y la coagulación sanguínea. El
calcio también participa en la regulación de la actividad de la
adenilato ciclasa y fosfodiesterasa a través de la combinación
reversible con la calmodulina. La secreción de las glándulas
paratiroides, células tiroideas C y las células pancreáticas B está
controlada por la concentración de calcio ionizado extracelular
en la superficie celular.
Los reactivos deben ser utilizados sólo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
Reactivo listo para usar. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conservan entre +15 y +25C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Reactivo Arsenazo
MATERIALES NECESARIOS PERO NO
SUMINISTRADOS
Pipetear el dispositivo para suministrar 5 µl y 1 ml.
Sincronizar el dispositivo y el lavado de agua o el bloque
calefactor para mantener la temperatura a 25, 30 ó 37C.
Espectrofotómetro con capacidad de longitud de onda de 640 a
660 nm.
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Suero de Calibración Randox Nivel 3 (No. Cat. CAL 2351).
G
AA
M
Los niveles elevados de calcio en suero se encuentran en los
casos de hiperparatiroidismo, los carcinomas, sobredosis de
vitamina D y son de valor diagnóstico en la detección de la
enfermedad renal crónica y enfermedad pancreática aguda. Los
bajos niveles de calcio sérico se asocian con hipoparatiroidismo,
deficiencia de vitamina D y la insuficiencia renal.
Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos
según las pautes locales.
SA
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de Calcio en suero,
plasma u orina. Este producto es adecuado para su utilización de
forma manual y en el analizador RX monza.
PRINCIPIO
Arsenazo III se une específicamente al calcio formando un
complejo coloreado que puede medirse a 650 nm.
Ca++ + Arsenazo III
Complejo Coloreado
La cantidad de calcio presente en la muestra es directamente
proporcional a la intensidad del complejo coloreado.
MUESTRA(4)
Suero/Plasma:
(Lithium heparinzed)
Orina:
NO USAR oxalato sódico, EDTA
fluoruro sódico como anticoagulantes,
ya que interfieren. El suero es estable
durante 8 horas a temperatura
ambiente o 24 horas cuando se
conservan entre +2 y +8C
Se recomienda realizar un ensayo
sobre la orina dentro de las dos horas
posteriores a la recolección.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
Concentración Inicial de las soluciones
R1. Reactivo Arsenazo III
Acetato Sódico
Arsenazo
Estabilizadores No reactivos
54.2 mmol/l, pH 5.9
approx. 250 mol/l
PROCEDIMIENTO
Seleccione Ca en la pantalla Ejecutar prueba y llevar a cabo un
blanco de agua según las instrucciones.
Pipetee en una cubeta:
Blanco de reactivo/ S0
Patrón S1
Muestra
7.5 l
500 l
7.5 l
500 l
7.5 l
500 l
ddH2O
Muestra
Calibrador
Reactivo
Mezclar, incubar por 5 min a 25ºC, 30ºC o 37ºC.
Inserte la cubeta en el soporte de la célula de flujo del Rx Monza
y pulse Leer.
PARA USO MANUAL
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura
Medición:
650 nm (640 nm - 660 nm)
1 cm light path
25/30/37C
against air
Pipetee en una cubeta:
Blanco de
reactivo
Agua destilada
Muestra
Calibrador
Reactivo 1
15 l
1.0 ml
Calibrador
Muestra
15 l
1.0 ml
15 l
1.0 ml
Mezclar y leer la absorbencia de la muestra (Amuestra) y
calibrador (Acalibrador) contra el blanco de reactivo después de
5 minutos.
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MANUAL/ RX MONZA CA 2390
Concentración =
Amuestra
──────
Acalibrador
PRECISION
x calibrador de valor
CALIBRACIÓN
Se recomienda el uso de solución salina y Suero de Calibración
Randox Nivel 3 para la calibración. La calibración se recomienda
en los cambios de lote del reactivo o como se indica en los
procedimientos de control de calidad.
INTERFERENCIAS / LIMITACIONES (5)
Gadodiamida (OMNISCAN: usado en el RM imagin) interfiere
con el calcio sérico causando niveles bajos.
Nivel 3
12.8
0.392
3.07
20
Precisión Total
Muestra
Media (mg/dl)
DE
CV (%)
n
Nivel 3
12.8
0.371
2.90
20
Nivel 2
10.1
0.424
4.20
20
METHOD COMPARISON
El método Randox (Y) se comparó con un método alternativo
disponible comercialmente (X). Cuarenta muestras de los
pacientes con valores que abarca el rango de 1,7 a 12.1mg/dl se
pusieron a prueba. El análisis de regresión lineal resultó en la
siguiente ecuación:
Y = 0.961 X + 0.4
con un coeficiente de correlación r = 0.9929
ORINA
LINEARIDAD
Este método es lineal hasta 14,5 mg / dl. Diluir las muestras por
encima de esta concentración a 1+1 con el 0,9% de NaCl y
repetir el test. Multiplique el resultado por 2.
M
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda para el control de calidad diario Multisueros
Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3. Se deberá de analizar dos
niveles de controles al menos una vez al día. Los valores
obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los
valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error,
se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de
bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
Precisión Dentro del Análisis
Muestra
Nivel 2
Media (mg/dl)
10.1
DE
0.337
CV (%)
3.34
n
20
SA
CÁLCULO MANUAL
AA
VALORES NORMALES(3)
Suero:
2.02 - 2.60 mmol/l ( 8.10 - 10.4 mg/dl )
Orina:
2.5 - 6.2 mmol/24 hrs (100 - 249 mg/24 hrs)
G
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia para considerar las diferencias en edad, sexo, dieta
y localización geográfica.
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador Rx
Monza funcionando a una temperatura de 37ºC.
SENSIBILIDAD
El nivel mínimo detectable de calcio con un nivel aceptable de
precisión ha sido determinada como 0,78 mg / dl.
REFERENCIAS
1. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry 2nd Edition
W.B. Saunders Co., Philadelphia (1976)
2. Michaylova, V., and IIIkova, P., Anal Chem Acta, 53: 194
(1971).
3. Barnett, R.N., et al. (1973) Amer. J. Clin. Path. 59: 836.
4. Young, D. Pestaner L., Clin Chem. 21: 5 (1975).
5. Prince et al, Radiology 2003; 227: 639-646.
SUERO
LINEALIDAD
Este método es lineal hasta 14,4 mg / dl. Diluir las muestras por
encima de esta concentración a 1 +1 con el 0,9% de NaCl y
repetir el test. Multiplique el resultado por 2.
SENSIBILIDAD
El nivel mínimo detectable de calcio con un nivel aceptable de
precisión ha sido determinada como 0,54 mg / dl.
Revised 17 Nov 11 bm
Rev. 002
PAGE 2 OF 2
CO2 TOTAL (CO2)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Y CONSEJOS
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar
las precauciones normales requeridas para la manipulación de
reactivos de laboratorio.
PARA SU USO
Determinación cuantitativa in vitro de dióxido de carbono en
suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización en
Manual.
La solución R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua
durante 10 minutos. En caso de contacto con los ojos o
ingestión, buscar atención médica inmediatamente.
340 nm
Manual
No. Cat.
CD 127
10 x 10 ml
CD 129
10 x 50 ml
R1a. Tampón
R1b. Reactivo CO2
CAL. Standard
1 x 105 ml
10 x 10 ml
1 x 5.5 ml
R1a. Tampón
R1b. Reactivo CO2
CAL. Standard
10 x 50 ml
10 x 50 ml
1 x 5.5 ml
La azida sódica reacciona con el plomo y el cobre de las cañerías,
formando azidas potencialmente explosivas. Cuando se eliminen
dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para
evitar la formación de azidas. Las superfcies metálicas expuestas
deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%.
SIGNIFICADO CLÍNICO(1)
El incremento de CO2 sanguíneo (hipercapnia) provoca una
acidosis respiratoria. El CO2 aumenta cuando la ventilación
alveolar está disminuida en patologías pulmonares o bronquiales,
o también al respirar aire con niveles elevados de CO2. La
depresión de la capacidad pulmonar total provocada por algunos
medicamentos puede conllevar una retención de CO2.
PEPC
Fosfoenolpiruvato + HCO3-
oxaloacetato + H2P04-
AA
La disminución de la absorbancia a 340 nm provocada por la
oxidación del NADH es directamente proporcional a la
concentración de bicarbonato en la muestra.
M
malato + NAD+
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE REACTIVOS
R1a.
Tampón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8oC.
R1b.
MDH
oxaloacetato + NADH + H+
Los reactivos deben ser utilizados solamente para su
propósito por personal de laboratorio cualificado y bajo
condiciones de laboratorio apropiadas.
SA
PRINCIPIO(2,3)
Existen hojas sanitarias y de seguridad disponibles previa
solicitud.
G
RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS(4)
Suero o plasma heparinizado.
No deben usarse como anticoagulantes EDTA, oxalato ó citrato,
ya que podrían afectar a los resultados. Sumergir la muestra en
hielo y analizarla en la hora que sigue. Las muestras se deberán
conservar cerradas herméticamente, ya que el CO2 se difunde de
la muestra, causando valores erróneos (hasta 6 mmol/hr)
COMPOSICIÓN DE LOS REACTIVOS
Contents
NOTA: No agitar el reactivo cuando se
reconstituya, ya que esto puede causar una absorción
de CO2 excesiva. Es suficiente con invertir el frasco
con cuidado una vez.
Concentration in the Test
R1a. Tampón
Tampón Tris
25 mmol/l, pH 6.5
R1b. Reactivo CO2
Fosfoenolpiruvato (PEP)
6.3 mmol/l
NADH
0.45 mmol/l
Fosfoenolpiruvato Carboxilasa (PEPC)
200 U/l
Malato Deshidrogenasa (MDH)
600 U/l
Mg2+
8.0 mmol/l
CAL. Patrón
Vedi inserto lotto-specifico
Reactivo CO2
CD 127
Reconstituir 1 vial de CO2 R1b con 10 ml de tampón
R1a. Estable durante 15 días entre +2 y +8C, en su
frasco original sellado, 70 horas entre +2 y +8C o 25
horas entre +15 y +25C expuesto a la atmósfera
cuando se almacena en el recipiente original o en un
recipiente con un cuello estrecho. Véase la nota 4.
CD 129
Reconstituir el contenido de un vial de CO2 R1b con
una parte de tampón R1a. Transferir todo el
contenido de la botella de tampón 1, enjuagando el
vial 2 varias veces. Estable durante 15 días entre +2 y
+8C, en su frasco original sellado, 70 horas entre +2
y +8C o 25 horas entre +15 y +25C expuesto a la
atmósfera cuando está en su envase original o en en
un recipiente con un cuello estrecho. Véase la nota 4.
CAL.
Patrón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8oC.
MATERIAL SUMINISTRADO
Tampón
Reactivo CO2
Patrón
MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO
Randox Assayed Multisera, Nivel 2, No. Cat. HN1530 y Nivel 3,
No. Cat. HE1532.
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MANUAL CD 127
NOTAS DE PROCEDIMIENTO
1. Para permitir que el reactivo para alcanzar el equilibrio, se
recomienda que se reconstituye preferiblemente la noche
antes, pero por lo menos 4 horas antes de su uso. El reactivo
es entonces estable durante 15 días entre +2 y +8C en su
vial original sellado o 70 horas entre +2 y +8C expuesto a la
atmósfera.
2. No exponer el reactivo al aire más de lo necesario y
almacenarlo cerrado herméticamente.
3. No pipetear con la boca.
4. No agitar el reactivo vigorosamente ya que se podría
producir una absorción excesiva de CO2 .
PROCEDIMIENTO
Muestra
Agua bidestilada
Patrón
Reactivo
Patrón
5 l
--1000 l
-5 l
-1000 l
--5 l
1000 l
REFERENCIAS
1. Tietz, N. N., et al "Textbook of Clinical Chemistry" W. B.
Saunders Co., 1986; 1172-1253.
2. Jacobs, N., et al "Laboratory Test Handbook" 2nd. ed.,
Williams and Wilkins 1990.
3. Forrester, R.L., Wataji, L.J., Silverman, D.A., Pierre K.J., Clin,
Chem. 1976; 22/2: 243-245.
4. Young D.S., Effects of Drugs on Chemical Laboratory Tests,
3rd ed., AACC Press 1990.
5. Norris, K.A., Atkinson, A.R., Smith, W.G., Clin. Chem. 1975;
21/8: 1093 - 1101.
M
G
AA
CACULO
Amuestra
CO2 Total = ──── x conc. de patrón
(mmol/l)
Apatrón
17,2 -23,6 mmol/l
19,0 -23,9 mmol/l
SENSIBILIDAD
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
se sensibilidad, ya que está limitada por el espectrofotómetro
utilizado. Bajo las condiciones del análisis, un cambio de la
absorbancia de 0,001 unidades es equivalente a 0,8 mmol/l.
Incubar durante 5 min. a 37oC y medir la absorbancia del patrón
(Apatrón), de la muestra (Amuestra), y del reactivo blanco (Ablanco).
Amuestra = Ablanco - Amuestra
Recién nacidos
Niños pequeños
LINEALIDAD
Este método es lineal hasta una concentración de 50 mmol/l. Las
muestras con concentraciones superiores deberán diluirse 1+1
con solución NaCl al 0,9% y multiplicar el resultado por 2.
Pipetear en la cubeta:
Blanco
Arterial
21 - 28 mmol/l
22 -29 mmol/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia para referirse a la edad, el sexo, la dieta y la
situación geográfica de la población.
340 nm
1 cm de espesor
37C
frente a agua destilada
Test
VALORES NORMALES EN SUERO(5)
Adultos :
Arterial
Venoso
SA
Longitud de onda:
Cuveta:
Temperatura:
Medición:
SUSTANCIAS QUE INTERFIEREN(4)
La mayor interferencia en este ensayo la constituye el CO2 del
aire o del aliento del analista. Existen otros medicamentos y
sustancias que modifican los niveles de CO2 sanguíneo. La
hemoglobina no afecta en el ensayo hasta una concentración de 2
g/l.
CALIBRACIÓN
Se recomienda para la calibración el patrón CO2 Randox
suministrado con el kit. El patrón está preparado
gravimétricamente utilizando bicarbonato sódico grado A.C.S. Se
recomienda recalibrar para cada serie de muestras analizadas.
CONTROL DE CALIDAD
Se aconseja Randox Assayed Multisera, Nivel 2 y Nivel 3 para un
control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de control
como mínimo una vez al día. Los valores obtenidos deben
encontrarse dentro de un rango específico. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye el error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar los parámetros del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo el material esté limpio.
3. Comprobar el agua y la contaminación (el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados).
4. Comprobar la temperatura de reacción.
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y de sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442
2413.
Revised 01 Feb 11 bm
Rev. 002
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COLESTEROL (CHOL)
RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS(5)
Suero: Puede ser utilizado.
Plasma: Tratado con EDTA (1 mg/ml) o heparina (up to 75
U/ml) No utilizar citrato, oxalato o fluor.
Las muestras de Plasma y Suero pueden almacenarse durante 4
días +4°C.
Método Enzimático de Punto Final
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de Colesterol en suero y
plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma
manual y en el analizador Rx Monza.
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes
R1.
R1.
CAL.
Reactivo
Patrón
6 x 30 ml
1 x 5.5 ml
CH 201
6 x 100 ml
R1.
CAL.
Reactivo
Patrón
6 x 100 ml
1 x 5.5 ml
CH 202
8 x 250 ml
R1.
CAL.
Reactivo
Patrón
8 x 250 ml
1 x 5.5 ml
AA
En Química Clínica, los lípidos han sido asociado durante la
última década con el metabolismo de las lipoproteínas y la
ateriosclerosis
G
El método descrito por Abell y cols (1952) se refiere a la
extracción del colesterol con disolventes orgánicos y una
posterior hidrólisis alcalina de los ésteres de colesterol.
La reacción és altamente específica, pero la metodología es
laboriosa y requiere reactivos corrosivos, siendo por tanto
impracticable en la rutina diaria del laboratorio
Richmond (1973) describió el método de la colesterol oxidasa,
trás la saponificación de la muestra. Este método fué el primer
paso hacia un procedimiento totalmente enzimático. Allain y cols
junto con Roeschaw y cols publicaron en 1974 el primer
procedimiento completamente enzimático para determinar
colesterol, reemplazando así la saponificación química por la
saponificación enzimática.
PRINCIPIO(4)
El colesterol se determina tras una hidrólisis enzimática y una
oxidación. El indicador quinoneimina se forma a partir de
peróxido de hidrógeno y 4-aminoantipirina en presencia de fenol
y peroxidasa.
colesterol
Ester de colesterol + H2O
colesterol + Acidos grasos
esterasa
colesterol
Colesterol + O2
Colesten-3-ona + H2O2
0,30 mmol/l
6 mmol/l
≥0,5ml
≥0,15 U/ml
≥0,1 U/ml
80 mmol/l;pH 6,8
Vedi inserto lotto-specifico
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
La solución R1 contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel,
lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En
caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente
a un médico.
La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo
que podría producir azidas explosivas. Cuando se deseche este
reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la
formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas
con hidróxido sódico al 10%.
M
UTILIDAD CLÍNICA(1,2,3)
El análisis de Colesterol és utilizado para el diagnóstico y
tratamiento de dislipemias y desórdenes metabólicos.
Los lípidos representan un importante papel en el cuerpo
humano: ya sea cómo homonas o precursores hormonales,
ayuda a la digestión, fuente o almacén de recursos energéticos,
componentes estructurales y funcionales de membranas
biológicas, o funcionando como aislantes para prevenir pérdidas
de calor y permitir la conducción nerviosa
CAL.
Reactivo
4-aminoantipirina
Fenol
Peroxidasa
Colesterol esterasa
Colesterol oxidasa
Tampón Pipes
Patrón
SA
Cat. No.
CH 200
6 x 30 ml
Concentración inicial de la solución
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos
según las pautas locales.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
(R1) Reactivo
Listo para su uso. Es estable hasta la fecha de caducidad cuando
se conserva entre +2 y +8°C en ausencia de contaminación y
protegido de la luz.
(CAL.) Patrón
Listo para su uso. Es estable hasta la fecha de caducidad cuando
se conserva entre +2 y +8°C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Reactivo
Patrón
oxidasa
peroxidasa
2H2O2+fenol+4-aminoantipirina
quinoneimina + H2O
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351).
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MANUAL/ RX MONZA CH 200
PROCEDIMIENTO
Utilice H2O de doble destilación para realizar una nueva
calibración de la ganancia en el modo cubeta. Seleccione CHOL
en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco
de agua de la forma indicada.
Pipetear en tubos de ensayo:
Blanco de reactivo S0
Patrón S1
Muestra
5 l
500 l
5 l
500 l
5 l
0.5 ml
ddH2O
Patrón
Muestra
Reactivo
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano
puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
Mézclelo e incúbelo durante 10 minutos a 20-25C o durante 5
minutos a 37C.
Introdúzcalo en el soporte de la celda de flujo de RX Monza y
pulse Read (Leer) en un plazo de 60 minutos.
INTERFERENCIA
Valores de hemoglobina hasta 200 mg/dl y de bilirrubina hasta 5
mg/dl y de triglicérido hasta 4,64 mmol/l, no interfieren en la
prueba.
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Recomendó el uso de CAL estándar en el kit de calibración o de
suero Randox Nivel 3. La calibración se recomienda con un
cambio en la cantidad de reactivo o como se indica por los
procedimientos de control de calidad.
VALORES NORMALES EN SUERO/PLASMA(6)
Niveles de riesgo
Interpretación
500 nm, Hg 546 nm
1 cm de espesor
20-25°C, 37°C
frente a reactivo blanco
≥ 6,20 mmol/l (240 mg/dl)
Colesterol en sangre deseado
Colesterol en sangre
límite-alto
Colesterol en sangre alto
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la
población.
Pipetear en la cubeta:
Reactivo Blanco (l)
Patrón (l)
--10
--1000
Muestra (l)
G
10
----1000
AA
M
Longitud de onda
Cubeta
Temperatura
Medición
SA
< 5,17 mmol/l (200 mg/dl)
5,17 - 6,18 mmol/l (200-239 mg/dl)
PARA USO MANUAL
Agua Destilada
Patrón
Muestra
Reactivo
Valor
----10
1000
Mezclar, incubar durante 10 min. a 20-25°C ó 5 min. a 37°C.
Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) frente al blanco
antes de 60 min.
CÁLCULO MANUAL
1. Utilizando un patrón:
Amuestra
Conc. de colesterol =
en la muestra
Apatrón
x Conc. de patrón
2. Utilizando un factor:
Longitud de onda
mmol/l
Hg 546 nm
500 nm
21,7 x A
14,3 x A
mg/dl
840 x A
553 x A
NORMALIZACIÓN
El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en
el material de referencia NIST 909b and NIST 1952a de la
Colesterol.
CARACTERÍSTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante
el analizador Rx Monza a una temperatura de 25oC.
LINEALIDAD
El método es lineal hasta una concentración de colesterol de 656
mmol/l (17.0 mg/dl). Las muestras con concentraciones de
colesterol superiores a ésta, deben ser diluidas 1+2 con NaCl al
0,9%. Multiplicar el resultado por 3.
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de Colesterol con un nivel
aceptable de precisión se determinó en 13,7 mg/dl (0,354
mmol/l).
PRECISION
Análisis (Intra)
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
Análisis (Inter)
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
Nivel 2
3.65
0.100
2.74
20
Nivel 3
7.18
0.088
1.23
20
Nivel 2
3.65
0.143
3.92
20
Nivel 3
7.18
0.333
4.64
20
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MANUAL/ RX MONZA CH 200
CORRELACION
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 0.963 X - 0.157
y un coeficiente de correlación r = 0,9943
Se analizaron 44 muestras de pacientes con valores de entre 0,42
y 15,85 mmol/l.
G
AA
M
SA
REFERENCIAS
1. Abell, L.L, Levey, B.B., Brodie B.B., et al, J. Biol Chem 195 :
357, 1952
2. Richmond, N., Clin Chem 19 : 1350 - 1356, 1973
3. Roeschlau, P., Bernt, E. and Gruber, J.W., Clin Chem Clin
Biochem. 12 : 403, 1974
4. Trinder, P., Ann clin Biochem 6 : 24, 1969.
5. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st Edition (1998) p169;
Lothar Thomas ed. TH-Books Verlagsgesellschaft mbH,
Frankfurt/Main, Germany
6. Third Report of the National Cholesterol Education
Programme (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation
and treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult
Treatment Panel III). JAMA Publication, Vol 285, No. 19,
P2486 - 2497; 2001.
Revisado 15 Sep 10 bm
Rev. 001
PAGE 3 OF 3
CK-NAC-activada
METODO UV(1)
Este es un método estándar optimizado según las
recomendaciones de la Deutschen Gesellschaft für Klinische
Chemie.
Creatina Quinasa
MANUAL
RX MONZA
PRINCIPIO
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de Creatina Quinasa en
suero y plasma. Este producto es adecuado para un uso manual o
en el analizador RX monza.
CK
Fosfato de creatina + ADP
Creatina + ATP
HK
Glucosa + ATP
Glucosa-6-P + ADP
G-6-PDH
Glucosa-6-P + NADP+
R1a. Tampón/Glucosa
R1b. Enzimas/Coenzimas/
Sustrato
1 x 70 ml
20 x 2,5 ml
R1a. Tampón/Glucosa
R1b. Enzimas/Coenzimas/
Sustrato
1 x 70 ml
20 x 3,0 ml
CK 522
10 x 10 ml
R1a. Tampón/Glucosa
R1b. Enzimas/Coenzimas/
Sustrato
1 x 105 ml
10 x 10 ml
CK 113
6 x 30 ml
R1a. Tampón/Glucosa
R1b. Enzimas/Coenzimas/
Sustrato
2 x 100 ml
6 x 30 ml
CK 335
20 x 3,0 ml
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
AA
G
La actividad de la CK es también útil en el diagnóstico del infarto
de miocardio y acidentes cerebrovasculares.
La determinación de la CK utilizando creatina fosfato y adenosin5’-difosfato (ADP) como substratos en lugar de creatina y
adenosin-5’-trifosfato (ATP), tiene varias ventajas en el
funcionamiento del test ya que permite un valor de reacción más
rápido resultando en una sensibilidad mayor. Se utilizan
cantidades de muestra pequeñas y no se necesitan los blancos de
muestra.
Debido a la oxidación de los grupos sulfidril en la zona activa de
la creatina quinasa, la enzima es muy inestable. Sin embargo, el
enzima se reactiva añadiendo compuestos tiol.
Por este motivo se incluye N-acetil-L-cisteina (NAC) en el test.
También se incluyen en el sistema del test adenosin-5'monofosfato (AMP) y diadenosin pentafosfato, para inhibir la
actividad mioquinasa la cual interfiere. En este sistema de test no
existen sulfatos ya que alteran la reacción ,
Concentraciones en la prueba
R1a. Tampón/Glucosa
Tampón Imidazol
Glucosa
Mg-Acetato
EDTA
R1b. Enzimas/Coenzimas/Sustrato
ADP
AMP
Pentafosfato de diadenosina
NADP
HK
G-6-PDH
N-Acetilcisteina
Fosfato de creatina
M
SIGNIFICADO CLINICO(3)
La Creatina Quinasa (CK) se encuentra principalmente en el
músculo estriado, el cerebro y los tejidos musculares. El análisis
de la actividad de la CK en plasma o suero, provee un marcardor
sensible para la detección de enfermedades del tejido muscular
esesquelético. Por ej. En la distrofia muscular del tipo Duchenne
se pueden encontrar niveles de CK hasta 50 veces superior al
límite de normalidad establecido. En el caso de la distrofia
muscular progresiva la actividad máxima de ésta enzima se
observa en niños y lactantes
Gluconato-6-P + NADPH + H+
MUESTRA
Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma.
SA
No. Cat.
CK 110
20 x 2,5 ml
0,10 mol/l, pH 6,7
20 mmol/l
10 mmol/l
2,0 mmol/l
2,0 mmol/l
5,0 mmol/l
10 mol/l
2,0 mmol/l
≥ 2,5 U/ml
≥ 1,5 U/ml
20 mmol/l
30 mmol/l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
La solución R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel,
lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En
caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente
a un médico.
La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo
que podría producir azidas explosivas. Cuando se deseche este
reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la
formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas
con hidróxido sódico al 10%
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
PAGE 1 OF 3
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
R1a. Tampón/Glucosa
Listo para usar. Estables hasta la fecha de caducidad
cuando se conservan entre +2 y +8C.
CALCULOS
Para calcular la actividad de la CK utilizar las fórmulas siguientes:
R1b. Enzimas/Coenzimas/Sustrato
Reconstituir un vial de Enzimas/Coenzimas/Sustrato R1b
con el volumen adecuado de Tampón/Glucosa R1a:
2,5 ml para el kit de 20 x 2,5 ml (CK 110)
3,0 ml para el kit de 20 x 3,0 ml (CK 335)
10 ml para el kit de 10 x 10 ml (CK 522)
30 ml para el kit de 6 x 30 ml (CK 113)
Estables durante 3 semanas entre +2 y +8C ó 3 días
entre +15 y +25C.
U/l = 4127 x ∆A340 nm/min
U/l = 4207 x ∆A Hg 334 nm/min
U/l = 7429 x ∆A Hg 365 nm/min
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Randox Calibration Serum Level 3 (Cat. No. CAL 2351).
PROCEDIMIENTO PARA RX MONZA
Aspirar ddH2O fresco y realizar una nueva calibración de
ganancia en el modo de flujo de células. Seleccione la NAC en la
pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua
según las instrucciones
NORMALIZACIÓN
El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en
el material de referencia AD455 (IFCC) de la CK-NAC.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
M
10 µl
500 µl
VALORES NORMALES EN SUERO(2,3)
AA
Muestra
Reactivo
Mezclar y aspirar a la RX monza.
G
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Se recomienda el uso de suero fisiológico y suero de calibración
de nivel 3 de Randox para la calibración. Es aconsejable cambiar
el lote del reactivo para la calibración o seguir lo indicado por los
procedimientos de control de calidad.
MANUAL PROCEDURE
340 nm, Hg 365 nm o Hg 334 nm
1 cm de espesor
25C/30C/37C
Frente al aire
25/30C
Hombre
Mujer
25C
30C
37C
10 - 80 U/l
10 - 70 U/l
15 - 130 U/l
15 - 110 U/l
24 - 195 U/l
24 - 170 U/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la
población.
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante
el analizador RX monza en el modo de flujo de células a 37C.
LINEARIDAD
Este método es lineal hasta 2804 U / l. Si la concentración de la
muestra supera este valor, diluir la muestra 1 +9 con el 0,9% de
NaCl y repetir el test. Multiplique el resultado por 9 +1.
Pipetear en la cubeta:
Macro
Enzimas/Coenzimas/
Sustrato
2,5 ml
Muestra
0,1 ml
U/l = 8095 x ∆A340 nm/min
U/l = 8252 x ∆A Hg 334 nm/min
U/l = 14571 x ∆A Hg 365 nm/min
INTERFERENCIA
Evitar la hemólisis ya que interfiere con el ensayo.
Pipetear en tubos de ensayo:
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
37C
SA
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón/Glucosa
Enzimas/Coenzimas/Sustrato
25/30C
37C
Semi Micro
Macro
Semi Micro
1,0 ml
0,04 ml
2,5 ml
0,05 ml
1,0 ml
0,02 ml
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de la Creatina Quinasa con
un nivel aceptable de precisión se determinó como 21,7 U/l.
Mezclar, incubar durante:
3 min a 25C
2 min a 30C
1 min a 37C
Leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar el tiempo
simultáneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min.
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PRECISION
Análisis (Intra)
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
Análisis (Inter)
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
Nivel 1
215
4.97
2.31
20
Nivel 2
549
8.51
1.55
20
Nivel 1
215
8.41
3.91
20
Nivel 2
549
18.4
3.35
20
CORRELACION
Se comparó este método (Y) con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 0.9538 X + 7.5746
con un coeficiente de correlación r = 0.9988
G
AA
M
REFERENCIAS
1. Rec. GSCC (DGKC); J. Clin. Chem. Clin. Biochem 1977; 15:
255.
2. Stein, W. (1985), Med. Welt 36: 572.
3. Szasz, G., et al. Clin. Chem 1976; 22: 650.
SA
Se analizaron 47 muestras con valores de entre 37 y 2755 U/l.
Revisado 15 Sep 10 bm
Rev. 001
PAGE 3 OF 3
CK-MB (NAC-act.)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar
las precauciones normales requeridas para el manejo de
reactivos de laboratorio.
Método UV
MANUAL
RX MONZA
La solución R1a contiene Azida Sódicas. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua.
En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención
médica inmediatamente.
No. Cat.
CK 1296
R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa 1 x 70 ml
19 x 2.5 ml R1b. Enzima/Coenzimas/
Substrato/Anticuerpo
19 x 2.5 ml
CONTROL
1 x 2 ml
Las azidas sódicas reaccionan con el plomo y cobre de las
cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se
eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua
para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas
expuestas, deberán limpiarse con hidróxido sódico al 10%.
CK 1553
5 x 20 ml
Atención: Suero de Control
El material de origen humano del que se deriva este producto ha
sido analizado a nivel de donante para el anticuerpo del Virus de
Inmunodeficiencia Humano (HIV 1, HIV 2), el Antígeno de
Superficie de Hepatitis B (HbsAg), y el anticuerpo del Virus de
Hepatitis C (HCV) y se ha encontrado que es NO-REACTIVO.
Sin embargo, dado que ningún método puede ofrecer una
seguridad total de la ausencia de agentes infecciosos, este
material y todas las muestras de pacientes se deberán manejar
como posibles transmisores de enfermedades infecciosas.
R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa 1 x 105 ml
R1b. Enzima/Coenzimas/
Substrato/Anticuerpo
5 x 20 ml
CONTROL
2 x 2 ml
Hojas de Salud y Seguridad están disponibles si se desean.
Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos
según las pautes locales.
AA
M
SIGNIFICADO CLINICO(1)
La Creatina Kinasa (CK) está aceptada internacionalmente como
un indicador sensitivo y específico del infarto de miocardio agudo
(AMI). Existen 3 tipos de iso-enzimas CK, CK-MM, CK-MB y
CK-BB. El CK-BB lo produce el cerebro a partir del tejido del
esqueleto y el corazón y el CK-MB se produce a partir del
músculo del corazón. En la mayoría de los casos la actividad de
CK aumenta durante las 6 horas posteriores a un infarto agudo.
Los valores máximos se observan al cabo de unas 20 horas. La
actividad de CK normalmente vuelve a su normalidad durante el
cuarto o quinto día posterior al infarto.
SA
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de CK-MB en suero y plasma.
Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y
en el analizador RX monza.
G
PRINCIPIO(3)
Análisis de Inmunoinhibición: Se incorpora un anticuerpo en el
reactivo CK. Este anticuerpo se unirá e inhibirá la actividad de la
subunidad M de CK-MB. Esto significa que sólo se mide la
actividad de la subunidad B en el suero. Si la actividad se
multiplica por el factor 2, nos dará la actividad de la CK-MB en
suero.
MUESTRA
Suero, plasma heparinizado o EDTA
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes
Concentraciones en la Prueba
R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa
Tampón Imidazola
0.10 mol/l, pH 6.7
Glucosa
20 mmol/l
Mg-acetato
10 mmol/l
EDTA
2.0 mmol/l
R1b. Enzima/Coenzimas/Substrato/Anticuerpo
ADP
2.0 mmol/l
AMP
5.0 mmol/l
Pentafosfato de Diadenosina
10 μmol/l
NADP
2.0 mmol/l
HK
≥ 2.5 U/ml
G-6-PDH
≥ 1.5 U/ml
N-acetilcisteina
20 mmol/l
Fosfato de Creatina
30 mmol/l
Antibody to CK-M
CONTROL
Los reactivos deben utilizarse solamente para su
propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo
condiciones de laboratorio apropiadas.
ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS
R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8C.
R1b. Enzima/Coenzimas/Substrato/Anticuerpo
Reconstituir un frasco de Enzimas/Coenzimas/
Substrato/Anticuerpo R1b con el volumen adecuado de
Tampón/Glucosa R1a:
2,5 ml para el kit de 19 x 2,5 ml (CK 1296)
20 ml para el kit de
5 x 20 ml (CK 1553)
Estable durante 21 días entre +2 y +8C y 3 días entre
+15 y +25C.
CONTROL
Abrir un frasco de suero de control cuidadosamente,
evitando la pérdida de material, y reconstituir en
exactamente 2 ml de agua doblemente destilada. Cerrar el
frasco y dejar reposar durante 15 minutos, disolver el
contenido completamente agitando o rotando suavemente.
La CK-MB es estable en suero durante 5 días entre +2 y +
8C, 8 horas a +25C y 4 semanas a -20C cuando se
congela sólo una vez.
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MANUAL/ RX MONZA CK 1296
CÁLCULO MANUAL
MATERIALES NECESARIO NO SUMINISTRADOS
Control CKMB Randox No. (Cat. CK 1212)
Control Cardíaco de Tres Niveles Randox, No. (Cat.
CQ 3100 Nivel y Nivel 3)
Randox CK-MB Calibración (Cat. No. CK 2393)
NOTA DE PROCEDIMIENTO(4)
La Macro-CK es una forma atípica de CK y se compone de
complejos de Inmunoglobulina de Isonenzimas normales. Esta
forma migra entre MM y MB y se observa principalmente en
mujeres ancianas. Esto no tiene significación clínica, pero su
presencia puede causar resultados falsamente elevados. Si se
sospecha la contribución de Macro-CK se deberá confirmar su
presencia por medio de electroforésis.
PROCEDIMIENTO
Antes de llevar a cabo el análisis para medir la actividad de la CKMB en suero, es necesario medir la actividad de la CK total
utilizando el método NAC activado.
PARA RX MONZA
Seleccione CK-MB en la pantalla ejecutar prueba y lleve a cabo
un blanco de agua según las instrucciones.
Pipetear en tubos de ensayo:
Patrón
S1
Muestra
50 µl
500 µl
50 µl
500 µl
50 µl
500 µl
Mezclar y aspirar en la Rx Monza.
AA
G
Salino
Patrón
Muestra
Reactivo
CK-B (U/l)
CK-MB (U/l)
340 nm
Hg 334 nm
Hg 365 nm
825 x ∆A
841 x ∆A
1486 x ∆A
1651 x ∆A
1683 x ∆A
2972 x ∆A
El cambio de absorbancia por minuto (∆A/min) también se puede
medir y la media de las 5 mediciones de deberá utilizar en el
cálculo.
Los factores a utilizar entonces serán:Longitud de onda
CK-B (U/l)
CK-MB (U/l)
4127
4207
7429
8254
8414
14858
∆A 340 nm/min
∆A Hg 334 nm/min
∆A Hg 365 nm/min
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda para el control de calidad diario el Control de
CKMB Randox o el Control Cardíaco de Tres Niveles Randox.
Se deberán analizar dos niveles de controles al menos una vez al
día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango
especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su
repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano
puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
M
Blanc
Reactivo S0
Long. de onda
SA
MATERIAL SUMINISTRADO
CK NAC/CK-MB Buffer/Glucose
Enzimas/Coenzimas/Substrato/Anticuerpo
Suero de control
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Se recomienda el uso de solución salina y el Calibrador Randox
CKMB para calibración.
INTERFERENCIAS
La hemólisis interfiere con el análisis.
RANGO DE REFERENCIA
Infarto de Miocardio(MI)
La probabilidad de daño del miocardio es elevado cuando se
presentan los siguientes 3 factores:-
PARA USO MANUAL
Temperatura
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
340 nm, Hg 334 nm o Hg 365 nm
1 cm de espesor
25C, 30C y 37C
frente al aire
30C
37C
Semi-micro
Macro
1 CKhombres
>80 U/l1
>130 U/l2
>195 U/l*
CKmujeres
>70 U/l1
>110 U/l2
>170 U/l*
2 CK-MB
>10 U/l1
> 16 U/l2
> 25 U/l*
3 una actividad de CK-MB entre 6 y 25% de la actividad CK
total
0,04 ml
0,1 ml
*Valores calculados
1,0 ml
2,5 ml
Se puede sospechar un MI aunque los valores obtenidos sean
inferiores a los límites especificados. Para confirmar si ha
ocurrido un infarto reciente, el test se deberá repetir al cabo de
4 horas.
Pipetear en la cubeta:
Muestra
Enzimas/Coenzimas/
Substrato/Anticuerpo
25C
Mezclar, y dejar reposar a la temperatura apropiada durante 10
minutos. Después añadir a la cubeta, y leer la absorbancia A1.
Leer la absorbancia A2 exactamente 5 minutos más tarde.
∆A = A2 - A1
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia para reflejar la edad, sexo, dieta y localidad
geográfica de la población.
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MANUAL/ RX MONZA CK 1296
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante
el analizador RX monza.
LINEARIDAD
El Anticuerpo inhibe hasta 2000 U/l de CK-MM.
Este ensayo es linear hasta 2044 U/l de actividad CKMB.
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de CKMB con un nivel de
precisión aceptable se determinó como 23,5 U/l.
PRECISION
Precisión Dentro del Análisis
Nivel 1
Nivel 1
Mean (U/l)
136
161
SD
4.89
7.03
CV(%)
3.61
4.37
n
20
20
Y = 1.0756 X - 18.799
con un coeficiente de correlación r = 0.9903
AA
CORRELACION
Se comparó este método (Y) con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
SA
Nivel 2
161
6.56
4.08
20
M
Precisión Total
Nivel 1
Mean (U/l)
136
SD
6.83
CV(%)
5.04
n
20
G
Se analizaron 43 muestras con valores de entre 34,4 y 1733 U/l.
REFERENCIAS
1. Stein, W., Med. Weit 1985; 36: 572.
2. Szasz, G., and E. W. Busch. Paper presented at 3rd Eur. Congr.
Clin. Chem., Brighton/England, June 1979; 3 - 8 (abstract).
3. Wurburg, U., et al., Clin. Chem. 1976; 54: 357.
4. Jacobs et al, The Laboratory Test Handbook, 2nd edition
Revisado 29 July 11 bm
Rev. 001
PAGE 3 OF 3
CREATININA (CREA)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de Creatinina en suero
plasma u orina. Este producto es adecuado para su utilización de
forma manual y en el analizador Rx Monza.
Cat. No.
CR 510
200 ml
CR 524
6 x 500 ml
CAL. Patrón
R1a. Acido pícrico
R1b. Hidróxido sódico
1 x 5.5 ml
1 x 100 ml
1 x 100 ml
CAL. Patrón
R1a. Acido pícrico
R1b. Hidróxido sódico
1 x 30 ml
3 x 500 ml
3 x 500 ml
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos
según las pautas locales.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
CAL. Patrón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conservan entre +2 y +25°C.
R1a. Acido pícrico
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conservan entre +15 y +25°C.
R1b. Hidróxido sódico
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conservan entre +15 y +25°C.
G
AA
M
SIGNIFICADO CLINICO
La creatinina se deriva de la creatina y la creatina fosfato en
tejido muscular y puede ser definida como un producto de
desecho del nitrógeno.La creatinina no es reutilizada pero es
excretada por el cuerpo en la orina via renal. La creatinina es
producida y excretada con un ratio constante ,el cual es
proporcional a la masa muscular del cuerpo.Como consecuencia
de la forma en que la creatinina es excretada por el riñon, la
determinación de creatinina se utiliza principalmente para
diagnosticar el funcionamiento del riñon.La creatinina es
considerada como el marcador endógeno más útil en el
diagnostico y tratamiento de enfermedades renales.
La creatinina se mide principalmente para valorar el
funcionamiento del riñon y tiene ciertas ventajas sobre la
determinación de urea.Los niveles de creatinina en plasma son
relativamente independientes de la ingesta proteica, de agua
,ratio de producción de orina y del ejercicio.Siendo su ratio de
producción constante,una elevación de creatinina en plasma es
un indicativo de infraexcreción sugiriendo un mal funcionamiento
de riñon.Los niveles bajos de creatinina en plasma son raros y
no son clinicamente significativos.
La solución R1a contiene ácido pícrico que es tóxico.
La sólucion R1b contiene hidróxido sódico que es cáustico.
SA
MANUAL
RX MONZA
METODO COLORIMETRICO(1)
PRINCIPIO
La creatinina en solución alcalina reacciona con ácido pícrico para
formar un complejo coloreado. La cantidad del complejo
formado es directamente proporcional a la concentración de
creatinina.
EXTRACCION Y PREPARACION DE LA MUESTRA
Suero, plasma heparinizado o EDTA-plasma. Estable durante 7
días cuando se conserva entre +2 y +8C.
Orina: extraer la orina sin aditivos. Diluir 1+49 con agua
bidestilada. Estable durante 4 días cuando se conserva entre +2 y
+8C.
ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO DE
TRABAJO
Mezclar volúmenes iguales de Soluciones R1a y R1b. Estable
durante 3 días cuando se conserva entre +15 y +25C.
MATERIAL SUMINISTRADO
Patrón
Acido pícrico
Hidróxido sódico
MATERIAL REQUERIDO PERO NO SUMINISTRADO
Pipetas apropiadas para suministrar 50 l, 100 l, 200 l, 1 ml y
2 ml.
Material para cronometrar y bloque de calentamiento o baño de
agua para mantener temperaturas de 25, 30 ó 37°C.
Espectrofotómetro con longitud de onda de 490 - 510 nm.
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)
NOTAS
El grado de reacción y la absorbancia del producto de la reacción
son muy sensibles a la temperatura. La temperatura especificada
debe ser por lo tanto mantenida.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
CAL. Patrón
R1a. Acido pícrico
Surfactante
R1b. Hidróxido sódico
Concentraciones iniciales
de las soluciones
Vedi inserto lotto-specifico
35 mmol/l
0,32 mol/l
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MANUAL/ RX MONZA CR 510
Pipetee en una cubeta:
Blanco de reactivo S0
ddH2O
Patrón
Muestra
Reactivo de Trabajo
Patrón S1
Muestra
50 l
500 l
50 l
500 l
50 l
500 l
Mezclar, inserte en el soporte de Rx Monza celda de flujo y
oprima Leer.
PARA USO MANUAL
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
492 (490-510 nm)
1 cm de espesor
25/30/37°C
Frente al aire
Pipetear en la cubeta:
Muestra
Macro
Semi
Micro
2.0 ml
0.2 ml
-
2.0 ml
0.2 ml
1.0 ml
0.1 ml
-
1.0 ml
0.1 ml
AA
Mezclar, leer la absorbancia A1 del patrón y de la muestra al cabo
de 30 segundos. Exactamente 2 min después leer la absorbancia
A2 del patrón y de la muestra.
G
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Recomendaciones sobre el cambio de lote del reactivo o como
se indica en los procedimientos de control de calidad, utilizando
suministrado Standard CAL en el kit de calibración o de suero
Randox Nivel 3.
CÁLCULO MANUAL
A2 - A1 = Amuestra ó Apatrón
Concentración de creatinina en suero o plasma:
Amuestra
x 177 = mol/l
Apatrón
Amuestra
Apatrón
x 2
= mg/dl
Apatrón
x 100
Aclaramiento
de creatinina =
mg creatinina/dl suero x 1440
VALORES NORMALES(2)
Suero:
Hombre
Mujer
Orina:
CARACTERÍSTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante
el analizador Rx Monza a una temperatura de 37oC.
SUERO
LINEALIDAD
Si la concentración excede 2168 mol/l (24.5 mg/dl) en suero,
diluir suero, plasma u orina diluida 1+4 con NaCl al 0,9% y
repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 5.
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de Creatinina con un nivel
aceptable de precisión se ha determinado en 14.0 mol/l (0.158
mg/dl).
Análisis (Inter)
[ml/min]
53 - 97 mol/l(0,6 - 1,1 mg/dl)
44 - 80 mol/l (0,5 - 0,9 mg/dl)
8,84 - 13,3 mmol/24 hrs
1 - 1,5 g/24 hrs
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia reflejando edad, sexo, dieta y localización
geográfica de la población
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
= mg/dl
mg creatinina/dl orina
x ml orina 24 hrs.
INTERFERENCIA
La hemólisis interfiere en la prueba. No usar sueros lipémicos. El
método es susceptible a interferencias por altos niveles de
sustancias reductoras. Hervir la orina antes de la prueba puede
ayudar a reducir estas interferencias.
PRECISION
Análisis (Intra)
Concentración de creatinina en orina:
Amuestra
x 8,85 = mmol/l
Apatrón
Amuestra
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
M
Reactivo de trabajo
Solución Patrón
Muestra
Patrón
Macro
Semi
Micro
NORMALIZACIÓN
Randox Nivel de calibración Suero 3 es atribuible a la creatinina
materiales de referencia NIST y 909b del NIST 967.
SA
PROCEDIMIENTO
Usando ddH2O realizar una nueva calibración de ganancia nueva
en el modo de cubeta. Seleccione CREA en la pantalla de
Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las
instrucciones.
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
Nivel 2
1.46
0.040
2.75
20
Nivel 3
4.19
0.068
1.63
20
Nivel 2
1.46
0.042
2.86
20
Nivel 3
4.19
0.122
2.91
20
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MANUAL/ RX MONZA CR 510
CORRELACION
Se comparó este método (Y) con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 1.098 X - 0.27
con un coeficiente de correlación r = 0.9995
Se analizaron 47 muestras con valores de entre 0,24 y 15,3 mg/dl.
ORINA
LINEALIDAD
Si la concentración excede 85309 mol / l (963 mg / dl) en la
orina, diluir la orina 1 +4 con agua destilada y repetir el ensayo.
Multiplicar el resultado por 5.
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de Creatinina con un nivel
aceptable de precisión se ha determinado en 2221 mol/l
(25.1 mg/dl).
G
AA
M
SA
REFERENCIAS
1. Bartels, H., Bohmer, M., (1972) Clin. Chem. Acta 37: 193.
2. Schirmeister, J., H. Willmann, and H. Kiefer. (1964). Dtsch.
Med. Wschr. 89: 1018.
Revised 15 Sep 10 bm
Rev. 001
PAGE 3 OF 4
G
AA
M
SA
MANUAL/ RX MONZA CR 510
PAGE 4 OF 4
NEFA
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro, no pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se
requieren al manejar reactivos de laboratorio.
Acidos Grasos No Esterificados
MANUAL
RX MONZA
Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y
Químicos según las pautas locales.
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de Acidos Grasos No
Esterificados (NEFA) en suero y plasma. Este producto es
adecuado para su utilización de forma manual y en el
analizador RX monza.
Cat. No.
FA 115
3 x 10 ml
R1a.
R1b.
R2a.
R2b.
R2c.
CAL
Tampón
Enzima/Coenzimas
Diluyente de la Enzima
Maleimida
Reactivo Enzima
Patrón
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si
se desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado
cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas
de laboratorio.
1 x 70 ml
3 x 10 ml
3 x 20 ml
3 x 20 ml
3 x 20 ml
1 x 5.5 ml
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS
REACTIVOS
R1a.
Tampón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8C.
METODO COLORIMETRICO
PRINCIPIO(3,5,6)
R1b.
Enzima/Coenzimas
Reconstituir un vial de Enzima/Coenzimas R1b con
10 ml de Tampón R1a. Estable durante 5 días entre
+2 y +8C. No congelar. Proteger de la luz.
R2a.
Diluyente del Enzima
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
conservado entre +2 y +8C.
R2b.
Maleimida
Reconstituir el contenido de una botella de
Maleimida R2b con el contenido entero de una
botella de diluyente del Enzima R2a. Asegurarse de
que la Maleimida está completamente disuelta. Usar
inmediatamente para reconstituir la botella R2c.
R2c.
Reactivo Enzima
Reconstituir el contenido de un vial de Reactivo
Enzima R2c con una botella de Solución R2b
reconstituida. Estable durante 5 días entre +2 y
+8C. No congelar. Proteger de la luz.
CAL
Patrón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8C.
Acetil CoA Sintetasa
NEFA+ATP+CoA
Acil CoA+AMP+PPi
Acetil CoA Oxidasa
2,3 trans-enoil-CoA + H2O2
SA
Acil CoA + O2
Peroxidasa
4-AAP
TOOS
Aducto Púrpura + 4H2O
= 4-Aminoantipirina
= N-etil-N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-m-toluidina
G
AA
MUESTRA(1)
Suero, plasma.
No usar plasma heparinizado, ya que la heparina interfiere en
el análisis. Los anticoagulantes adecuados son los siguientes:
EDTA
Citrato de Sodio
Fluoruro de Sodio
Oxalato de Amoníaco
M
2H2O2 + TOOS + 4-AAP
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
Concentración inicial de las Soluciones
R1a. Tampón
Tampón fosfato
0,04 mol/l, pH 6,9
Cloruro de magnesio
3 mmol/l
Surfactante
R1b. Enzima/Coenzimas
Acil Coenzima A Sintetasa
≥ 0,3 U/ml
Ascorbato oxidasa
≥ 1,5 U/ml
Coenzima A
0,9 mmol/l
ATP
5,0 mmol/l
4-amino antipirina
1,5 mmol/l
R2a. Diluyente del Enzima
Fenoxietanol
0,3% (w/v)
Surfactante
R2b. Maleimida
10,6 mmol/l
R2c. Enzima reactivo
Acil coenzima A oxidasa
≥ 10 U/ml
Peroxidasa
7,5 U/ml
TOOS
1,2 mmol/l
CAL Patrón
Vedi inserto lotto specifico
R1= Tampón / Enzima/ Coenzimas
R2 = Diluyente del Enzima / Maleimida / Enzima
Reactivo
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón
Enzima/Coenzimas
Diluyente del Enzima
Maleimida
Reactivo Enzima
Patrón
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2
(No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532).
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MANUEL FA 115
NOTAS(1,7)
1. Muestras visiblemente lipémicas requieren una muestra
blanco.
RX MONZA PROCEDURE
Seleccione NEFA en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y
lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.
2.
Pipetee en un tubo de ensayo:
Muestras con niveles de bilirrubina o hemoglobina
superiores a los indicados a continuación, requieren una
muestra blanco:
Nivel Máximo
permitido para
pruebas de exactitud
Efecto sobre
el resultado
10 mg/dl
100 mg/dl
Disminuido
Aumentado
Bilirrubina
Hemoglobina
dd H2O
Patrón
Muestra
Reactivo 1
Estas muestras necesitarán un blanco de muestra* para llevarse
a cabo (Ablanco de muestra). En el caso de un procedimiento
manual, la concentración de NEFA se calculará de la siguiente
manera:x Conc. de patrón
Apatrón
S1
*
10 µl
200 µl
10 µl
200 µl
Blank
200 µl
Reactivo 2
Muestra
400 µl
-
400 µl
-
400 µl
-
400 µl
10 µl
Consulte las notes 1 y 2.
MANUAL PROCEDIMIENTO(6)
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
550 nm
1 cm de espesor
+37C
Frente al reactivo blanco
AA
M
SA
Muestra - Muestra Blanco = Muestra Concentration (mmol/l)
G
4. La muestra que va a ser analizada no debe heparinizarse, ya
que esto estimularía la actividad de la lipoproteín-lipasa,
provocando la liberación de NEFA de los triglicéridos
asociados a las lipoproteínas sanguíneas. En consecuencia,
la sangre extraida de pacientes que están recibiendo
tratamiento terapéutico con heparina, o sangre recogida
en envases con heparina no es adecuada para esta prueba.
5. Debido a la incorporación de ascorbato oxidasa en el
Reactivo Enzima 4, niveles de ácido ascórbico superiores a
20 mg/dl (es decir > 10 veces el valor normal) no
interfieren en la prueba.
6. Las determinaciones de NEFA deben llevarse a cabo con
suero obtenido de individuos en ayunas, de lo contrario los
resultados no pueden ser directamente comparados con
los rangos normales de controles en ayunas.
7. Si la muestra de suero permanece a temperatura ambiente
durante un tiempo considerable, el nivel de NEFA aumenta
debido a la acción enzimática. Por tanto, si el análisis no es
inmediato, las muestras de suero pueden congelarse
a -20C durante un máximo de 24 horas.
Blanc S0
10 µl
200 µl
Muestra
Mézclelo, incúbelo durante 5 minutos a +37°C.
*
En el caso del RX monza, la concentración de NEFA se
calculará de la siguiente manera:
3. Durante la recuperación de los materiales de control de
calidad se puede observar al leer monocromático. Para
corregir este tomar lecturas adicionales para Amuestra y
APatrón a 700 nm, y la resta de las lecturas de longitud de
onda principales.
Patrón
Mézclelo, incúbelo durante 5 minutos a +37°C.
Introduzca la cubeta en el soporte de la celda de flujo del
RX monza y pulse Read (Leer).
Amuestra - Amuestra blanco
mmol/l =
Reactivo
Muestra
Pipetear en la cubeta:
Agua destilada
Patrón
Muestra
Solución R1
React.
blanco
Patrón
50 l
----1,0 ml
--50 l
--1,0 ml
Muestra *Muestra
blanco
----50 l
1,0 ml
------1,0 ml
Mezclar e incubar a +37C durante 10 minutos.
Solución R2
Muestra
2,0 ml
---
2,0 ml
---
2,0 ml
---
2,0 ml
50 l
Mezclar e incubar a +37C durante 10 min. Leer la
absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón)
frente a reactivo blanco a 550 nm.
*
Consulte las notes 1, 2 y 3.
N.B.: Tiempo de lectura debe ser exactamente
10 min.
8. Si Apatrón - Areactivo blanco es < 0,180 repetir la prueba con
reactivo fresco.
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MANUEL FA 115
INTERFERENCIA
Si se realiza la técnica de los NEFA de forma automática, el
reactivo no debería colocarse en el instrumento tras los
triglicéridos
CALCULOS
1. Utilizando una curva de calibración
La curva de calibración debe ser confirmada para cada
nuevo lote de reactivos de la forma siguiente:
No. de Tubo
Nombre
1
Blanco
2
Patrón
bajo
3
Patrón
normal
4
Patrón
elevado
NEFA Patrón
Agua
Solución R1
--50 l
1,0 ml
25 l
25 l
1,0 ml
50 l
--1,0 ml
100 l
--1,0 ml
2,0 ml
2,0 ml
CARACTERÍSTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron
mediante el analizador RX monza a una temperatura de
+37ºC.
LINEALIDAD
El método es lineal hasta 2,24 mmol/l. Para muestras con
concentraciones superiores, diluir 1+3 con agua bidestilada y
repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 4.
Mezclar e incubar a +37C durante 10 min.
Solución R2
2,0 ml
2,0 ml
SENSIBILIDAD
El nivel mínimo detectable con una precisión aceptable se ha
determinado en 0,072 mmol/l
Mezclar e incubar a +37C durante 10 min.
Abs
0,000
*valores estandares 0,000
(leer)
(leer)
(leer)
PRECISION
valores estandares
x 0,250 x 0,500 x 1,000
Precisión Dentro del Análisis
Nivel 1
Media (mmol/l)
1.73
DE
0.082
CV(%)
4.74
n
20
* Se puede encontrar valores estandares en la insercion
especifica del lote, incluido en el kit.
Amuestra
Apatrón
x Concentración de patrón
G
mmol/l =
Ensayo total
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y
Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles
distintos de controles al menos una vez al día. Los valores
obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si
los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye
error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte + 44 (0) 28
9442 2413.
RANGO NORMAL(2,8)
En ayunas: 0,1 - 0,9 mmol/l.
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de
la población.
Media (mmol/l)
DE
CV(%)
n
M
AA
2. Utilizando un patrón
La concentración de NEFA en una muestra puede ser
determinada por medio de la siguiente ecuación.
SA
Representar absorbancias (A550 nm) frente a concentraciones
de NEFA (mmol/l). Debe ser una línea recta, ya que sigue la
Ley de Beer y es lineal entre 0.0 y 2.0 mmol/l.
Nivel 2
1.20
0.058
4.81
20
Nivel 1
1.73
0.078
4.51
20
Nivel 2
1.20
0.052
4.32
20
CORRELATION
This method (Y) was compared with another commercially
available method (X) and the following linear regression
equation obtained:
Y = 1.0372 X + 0.0457
and a correlation coefficient of r = 0.9855
49 patient samples were analysed spanning the range
0.09 to 2.08 mmol/l.
REFERENCIAS
1. DeVries, G.H., Mamunes, P., Miller, C.D. and Hayward,
D.M., Analytical Biochem. 1976; 70: 156-166.
2. Henry, R. J., Clinical Chemistry, Principles and Techniques,
2nd Edition, Harper and Row, 1974;
p. 1451.
3. Matsubara, C., Neshikawa, Y., Yoshida, Y., and Tateamura,
K. Analytical Biochem. 1983; 130: 128-133.
4. Mulder. C. J., Clin. Chem. Clin. Biochem. 1983; 21:
823-827.
5. Hosaka, K., Kiteucki, T., Mitsukida, N., and Kawagucki, A.
J., Biochem. 1981;89: 1799-1803.
6. Shimizu, S., Tani, Y., Yamada, H., Tabata, M., and Murachi,
T., Analytical Biochem. 1980; 107: 193-198.
7. Okabe, H., Uji, Y., Nagaehima, K. and Noma, A. Clin,
Chem. 1980; 26111: 1540-1543.
8. Duncombe, W.G., Biochem. J. 1963; 88: 7.
Revisado 31 oct 12 rw
Rev. 005
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GLUCOSA (GLUC-PAP)
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
GOD/PAP
MANUAL
RX MONZA
Componentes
Cat. No.
GL 364
10 x 100 ml
R1a. Tampón
R1b. Reactivo GOD-PAP
CAL. Patrón
10 x 100 ml
10 x 100 ml
1 x 5.5 ml
GL 1021
2 x 500 ml
R1a. Tampón
R1b. Reactivo GOD-PAP
CAL. Patrón
2 x 500 ml
2 x 500 ml
1 x 5.5 ml
GL 366
6 x 500 ml
R1a. Tampón
R1b. Reactivo GOD-PAP
CAL. Patrón
6 x 500 ml
6 x 500 ml
1 x 5.5 ml
PRINCIPIO DE LA REACCION(1)
GOD
Acido glucónico + H2O2
2H2O2+ 4-aminofenazona + fenol
POD
AA
Glucosa + O2 + H2O
quinoneimina + 4H2O
RECOGIDA DE MUESTRAS Y ALMACENAMIENTO
La glucosa es estable durante 24 horas entre +2 y +8°C si el
suero se prepara a los 30 minutos después de la recolección.
Mediante la adición de un inhibidor de la glicólisis (NaF, KF), la
muestra se pueden almacenar hasta 24 horas entre +15 y +25°C
o 3 días entre +2 y +8ºC. Para el almacenamiento a largo plazo
las muestras se deben colocar en envases sellados y congelarse a
-20°C.
Las muestras hemolizadas no deben utilizarse, ya que la hemólisis
interfiere con esta prueba.
Plasma: se permite el uso de heparina de litio como un
anticoagulante.
Orina: orina de 24 horas se debe recoger en un frasco oscuro y
mantener en hielo.
Orina al azar – se debe usar una muestra fresca. La muestra debe
ser almacenada entre +2 y +8°C si no se utiliza inmediatamente.
G
0,1 mol/l, pH 7,0
11 mmol/l
0,77 mmol/l
≥ 1,5 kU/l
≥ 1,5 kU/l
Ver inserto del lote específico
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la
piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar
inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de
ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un
médico.
La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo
que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este
reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la
formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas
con hidróxido sódico al 10%.
M
PRINCIPIO
La glucosa se determina después de una oxidación enzimática en
presencia de glucosa oxidasa. El peróxido de hidrógeno formado
reacciona, catalizado por la peroxidasa, con fenol y
4-aminofenazona para formar un indicador de quinoneimina
rojo-violeta.
R1a. Tampón
Tampón fosfato
Fenol
R1b. Reactivo GOD-PAP
4-Aminofenazona
Glucosa oxidasa
Peroxidasa
CAL. Patrón
Glucosa
SA
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de Glucosa en suero,
plasma y orina. Este producto es adecuado para un uso manual o
en el analizador Rx Monza.
Concentración inicial de las soluciones
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
R1a. Tampón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8C
R1b. Reactivo GOD-PAP
Reconstituir el contenido de un vial de Reactivo R1b con
un pequeño volumen de Tampón R1a y transferir el
contenido entero a la botella R1a, enjuagando varias
veces la botella R1b. El reactivo de trabajo es estable
durante 3 meses entre +2 y +8C ó 5 días entre +15 y
+25C.
CAL. Patrón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
entre +2 y +8C.
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MANUAL GL 364
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón
Reactivo GOD-PAP
Patrón
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)
PROCEDIMIENTO
Usando ddH2O realizar una nueva calibración de ganancia en el
modo de cubeta. Seleccione GLU en la pantalla de Ejecución de
prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano
puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
Pipetear en la Cubeta:
Muestra/Patrón
Reactivo 1
INTERFERENCIAS
Esta prueba no se ve afectada por el ácido úrico, ácido ascórbico,
glutatión, anticoagulantes, bilirrubina y creatinina a
concentraciones fisiológicas.
Reactivo Blanco S0
5 l
500 l
0 l
500 l
Mezclar, incubar durante 25 min a 15-25C ó 10 min a 37C.
Insertar en el soporte de flujo de célula de Rx Monza y oprima
Leer dentro de los 60 minutos.
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la
población.
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un
analizador Rx Monza en funcionamiento a 37C.
M
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Se recomienda el uso de glucosa estándar Randox
proporcionado o Suero de calibración Randox Nivel 3.
Es aconsejable cambiar el lote del reactivo para la calibración o
seguir lo indicado por los procedimientos de control de calidad.
VALORES NORMALES(2)
Suero,plasma (en ayuno)
4,2-6,4 mmol/l ó 75-115 mg/dl
SA
Patrón S1 or Muestra
PARA USO MANUAL
SUERO
500 nm, Hg 546 nm
1 cm de espesor
15-25oC ó 37oC
frente a reactivo blanco
G
AA
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
Pipetear en tubos de ensayo:
Macro
Semi-Micro
Patrón o
Muestra
Reactivo
Blanco
Patrón o
Muestra
Reactivo
Blanco
Patrón o muestra
20 l
Reactivo
2000 l
--2000 l
10 l
1000 l
--1000 l
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de Glucosa con un nivel
aceptable de precisión se determinó en 0,343 mmol/l (6.18
mg/dl).
LINEALIDAD
El método es lineal hasta una concentración de glucosa de 32,1
mmol/l (578 mg/dl). Para muestras con valores superiores a
dichas concentraciones diluir 1+2 con NaCl al 0,9% y multiplicar
el resultado por 3.
PRECISION
Análisis (Intra)
Mezclar, incubar durante 25 min a 15-25C ó 10 min a 37C y
medir la absorbancia del patrón (Apatrón) y de la muestra (AMuestra)
frente al reactivo blanco antes de 60 min.
CÁLCULO MANUAL
AMuestra
Concentración de glucosa (mmol/l) =
x
Patrón conc.
(mmol/l)
APatrón
Amuestra
(mg/dl) =
x
Patrón conc.
(mg/dl)
APatrón
Media (mmol/l)
DE
CV(%)
n
Nivel 2
6.53
0.203
3.11
20
Nivel 3
15.0
0.640
4.26
20
Nivel 2
6.53
0.269
4.11
20
Nivel 3
15.0
0.774
5.15
20
Análisis (Inter)
Media (mmol/l)
DE
CV(%)
n
NORMALIZACIÓN
El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en
el material de referencia NIST 917b y NIST 965a de Glucosa.
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MANUAL GL 364
CORRELACIÓN
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 0.9091 X + 0.5645
y un coeficiente de correlación r = 0,9898
Se analizaron 40 muestras de pacientes con valores de entre 0.39
y 21.3 mmol/l.
ORINA
LINEALIDAD
El ensayo es lineal hasta una concentración de glucosa de
30,6 mmol/l (551 mg/dl). Para muestras con valores superiores a
dichas concentraciones diluir 1+2 con NaCl al 0,9% y multiplicar
el resultado por 3.
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de Glucosa con un nivel
aceptable de precisión se determinó en 0,295 mmol/l (5,32
mg/dl).
PRECISION
Nivel 2
2.68
0.073
2.71
20
Nivel 3
15.8
0.723
4.59
20
Nivel 2
2.68
0.068
2.53
20
Nivel 3
15.8
0.738
4.68
20
M
Media (mmol/l)
DE
CV%
n
G
AA
Análisis (Inter)
Media (mmol/l)
DE
CV%
n
SA
Análisis (Intra)
REFERENCIAS
1. Barham, D, and Trinder, P. Analyst 1972; 97: 142.
2. Teuscher, A. and Richterich, P. Schweiz Med. Wschr. 1971;
101: 345 and 390.
3. Tietz, N.W. Clinical Guide to laboratory tests. 2nd edition.
Philadelphia, Pa: WB Saunders Co.; 1990: 246-250
Revisado 15 Sep 10 bm
Rev. 001
PAGE 3 OF 3
GLUTAMATO
DESHIDROGENASA
(GLDH)
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
R1a. Tampón/Substrato
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conservan entre +2 y +8°C.
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de Glutamato Deshidrogenasa
(GLDH) en el suero. Este producto es adecuado para su
utilización de forma manual y en el analizador RX monza.
No. Cat.
GL 441
8 x 6 ml
GL 442
5 x 100 ml
R1a.
R1b.
R2.
Tampón/Substrato
Enzima/Coenzima
-oxoglutarato
1 x 70 ml
8 x 6 ml
2 x 10 ml
R1a.
R1b.
R2.
Tampón/Substrato
Enzima/Coenzima
-oxoglutarato
5 x 100 ml
5 x 100 ml
2 x 20 ml
R1b. Enzima/Coenzimas
No. Cat. GL 441
Reconstituir el contenido de una botella de Enzima/
Coenzima 2 con 6 ml de Tampón/Substrato 1. Estable
durante 1 semana entre +2 y +8°C.
No. Cat. GL 442
Reconstituir el contenido de un frasco de Enzima/
Coenzima 2 con una parte de Tampón/Substrato 1 y
transferir todo el contenido a la botella 1 enjuagando el
frasco 2 varias veces. Estable durante 1 semana entre +2
y +8°C.
R2.
Este es un método estándar optimizado de acuerdo a las
recomendaciones del Deutsche Gesellschaft für Klinische
Chemie. Este procedimiento mide la reacción de arrastre no
específica.
PRINCIPIO(1)
MUESTRA
Suero.
Los sueros hemolíticos y lipémicos interfieren con el análisis.
Concentraciones en la Prueba
50 mmol/l, pH 8,0
100 mmol/l
2,5 mmol/l
G
R1a. Tampón/Substrato
Tampón Trietanolamina
Acetato de Amoniaco
EDTA
R1b. Enzima/Coenzima
ADP
NADH
LD
R2.
-oxoglutarato
AA
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes
Nota: Si utiliza este ensayo en un sistema automatizado, por favor
consulte la hoja de procedimiento de ese sistema, según las
instrucciones de reconstitución puede ser diferente.
glutamato+NAD++H2O
SA
GLDH
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón/Substrato
Enzima/Coenzima
-oxoglutarato
M
-oxoglutarato + NADH + NH4+
-oxoglutarato
Reconstituir el contenido de un frasco de
-oxoglutarato 3 con el volumen apropiado de agua
doblemente destilada:10 ml para el kit de
8 x 6 ml
(GL 441)
20 ml para el kit de
5 x 100 ml (GL 442)
Estable durante 8 semanas entre +2 y +8°C ó 7 días entre
+15 y +25°C.
1,0 mmol/l
0,2 mmol/l
≥ 2 U/ml
7 mmol/l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar
las precauciones normales requeridas para el manejo de
reactivos de laboratorio.
Las soluciones R1a y R2 contienen Azida Sódica. Evitar su
ingestión o el contacto con la piel o las membranes mucosas. En
caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante
agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar
atención médica inmediatamente.
La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías,
formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen
dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para
evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas,
deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%.
MATERIALES NECESARIOS PERO NO
SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)
Salino RX series (No. Cat. SA 3854)
PROCEDIMIENTO
Seleccione GLDH en la pantalla de ejecución y llevar a cabo un
blanco de agua según las instrucciones.
Pipetear en tubos de ensayo:
Sample
Reactivo R1
0.10 ml
0.50 ml
Mezclar e incubar durante exactamente 5 minutos a 37°C o 10
minutos a 20-25°C
Reactivo R2
0.02 ml
Mezclar y aspirar en el Monza Rx inmediatamente.
RX MONZA CALIBRACIÓN
El uso de solución salina y la calibración Randox Nivel 3 en suero
se recomienda para la calibración. La calibración se recomienda a
los cambios en el lote del reactivo o como se indica en los
procedimientos de control de calidad.
Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.
Los reactivos deben ser utilizados sólo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
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MANUAL/ RX MONZA GL 441
PARA USO MANUAL
340 nm (Hg 334 nm or Hg 365 nm)
1 cm de paso de la luz
25°C
contra el aire
Introducir en una cubeta:
Macro
Semi Micro
Enzima/Coenzima (25°C) (R1)
Suero
2.5 ml
0.5 ml
1.0 ml
0.2 ml
Mezcle bien y deje reposar a 25 ° C durante 3 minutos, luego
medir la absorbancia A1, deje reposar durante exactamente 5
minutos y leer absorbancia A2 (no específica de reacción lenta).
-oxoglutarato (R2)
0.1 ml
0.04 ml
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de Glutamato
Deshidrogenasa con un nivel aceptable de precisión se
determinó en 2,90 U/l.
PRECISION
Precisión Dentro del Análisis
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
Mezclar bien y leer la absorbancia A3, deje reposar durante
exactamente 5 minutos a 25 ° C y leer la absorbancia A4.
(A3-A4) - (A1-A2) = A / 5 minutos
MANUAL DE CÁLCULO
Para calcular la actividad de la GLDH utilizar la siguiente fórmula:
U/l (25°C) = 197 x A 340 nm / 5 min.
U/l (25°C) = 365 x A Hg365 nm / 5 min.
U/l (25°C) = 201 x A Hg334 nm / 5 min.
Nivel 2
28.3
0.985
3.48
20
Nivel 1
13.5
0.764
5.66
20
Nivel 2
28.3
1.56
5.53
20
Precisión Entre Análisis
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
CORRELACIÓN
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
G
AA
M
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
Nivel 1
13.5
0.562
4.16
20
SA
Longitud de onda:
cubeta:
Temperatura:
Medición:
LINEALIDAD
El método es lineal hasta una concentración de 77,3 U/l. Si la
concentración de la muestra supera este valor, diluir la muestra
1 +4 con el 0,9% de NaCl y repetir el test. Multiplique el
resultado por 5.
INTERFERENCIAS NO ESPECIFICAS
Se ha observado una interferencia no específica con la medición
de la actividad del glutamato deshidrogenasa en el 60% de los
sueros. En una actividad normal del glutamato deshidrogensa
equivale a 0,4 U/l por regla general y en ocasiones excede 1 U/l.
Para tener en cuenta la interferencia no específica es necesario
estimar un blanco de suero con -oxoglutarato.
Y = 0.9585 X +0.1913
y un coeficiente de correlación r = 0,9944.
se analizaron 40 muestras de pacientes abarcando un rango de
3,13 a 58,06 g/l.
REFERENCIAS
1. Schmidt, E. and Schmidt, F.W. In: Method of Enzymatic
Analysis, 3rd ed. H.K. Bergmeyer, J. Bergmeyer, and M.
Grosse, Eds. Weirheim, Verlag Chemie, 1983, 3: 216-227.
2. In: Clinical Guide to Laboratory Tests 2nd ed. N. W. Tietz,
Eds. W.B. Saunders Company. Philadelphia 1990 p.260.
3. Schmidt, E. et al (1992) Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 30
pp 493-502.
VALORES DE NORMALIDAD EN EL SUERO(2,3)
25°C
37°C
Hombres:
Mujeres:
< 4,0 U/l
< 3,0 U/l
<7,0 U/l
<5,0 U/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la
población.
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un
analizador RX monza en funcionamiento a 37ºC.
Revisado 12 Aug 11 bm
Rev. 002
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GLUCOSE
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de Glucosa en el sangre, suero,
plasma y orina. Este producto es adecuado para uso Manual.
Cat. No.
GL 2623
GL 2614
R1.
CAL.
Glucosa Reactivo
Patrón
6 x 100 ml
1 x 5.5 ml
R1.
CAL.
Glucosa Reactivo
Patrón
2 x 500 ml
1 x 5.5 ml
SIGNIFICADO CLINICO
La medición exacta de la glucosa en suero o plasma es
importante en el diagnóstico y el tratamiento de trastornos del
metabolismo de hidratos de carbono tales como diabetes
mellitus, hipoglucemia neonatal, hipoglucemia idiopática y de
carcinoma de células de islotes pancreáticos. La glucosa se mide a
menudo en colaboración con diversas pruebas de tolerancia tras
la administración de dosis de la leucina, la insulina, el glucagón o
glucosa.
La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo
que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este
reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la
formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas
con hidróxido sódico al 10%.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos
según las pautas locales.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
R1.
Glucose Reactivo
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
entre +2 y +8°C.
PRINCIPIO DE LA REACCION(1)
GOD
Glucosa + O2 + H2O
Acido glucónico + H2O2
G
POD
2H2O2+ 4-aminofenazona + fenol
AA
M
PRINCIPIO
La glucosa se determina después de una oxidación enzimática en
presencia de glucosa oxidasa. El peróxido de hidrógeno formado
reacciona, catalizado por la peroxidasa, con fenol y
4-aminofenazona para formar un indicador de quinoneimina
rojo-violeta.
Reactivo contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto
con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar
inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de
ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un
médico.
SA
GOD/PAP
(LIQUIDO)
MANUAL
quinoneimina + 4H2O
RECOGIDA DE MUESTRAS Y ALMACENAMIENTO
Suero, plasma de litio y orina. Si es posible, los componentes
celulares separados de suero o plasma de inmediato, ya más
tardar una hora después de recoger la muestra de sangre.
Mediante la adición de un inhibidor de la glicólisis (NaF, KF), las
muestras se pueden almacenar hasta 24 horas entre +15 y +25 °
C o hasta 7 días a 4 ° C. La orina: orina de 24 horas se debe
recoger en un frasco oscuro y se mantuvieron en hielo. Orina al
azar - una muestra fresca debe ser utilizado. La muestra debe ser
almacenado entre +2 y +8 ° C si no se utiliza inmediatamente.
CAL. Patrón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
entre +2 y +8°C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Glucosea Reactivo
Patrón
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Uranil Acetato 0,16% (Cat. No. DP 647 2 x 500 ml)
NOTAS
Es normal que este reactivo sea de un color rosa pálido que se
oscurezca con el tiempo. Este hecho no afecta al funcionamiento
del mismo.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
Concentración inicial de las soluciones
R1.
Glucosa Reactivo
Tampón fosfato
Tampón MOPS
Fenol
4-Aminofenazona
Glucosa oxidasa
Peroxidasa
CAL. Patrón
Glucosa
50 mmol/l, pH 7,0
50 mmol/l, pH 7,0
mmol/l
0,77 mmol/l
≥ 1,5 kU/l
≥ 1,5 kU/l
Vedi inserto lotto-specifico
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MANUAL GL 2623
PROCEDIMIENTO PARA EL ENSAYO DE GLUCOSA
GOD-PAP SIN DESPROTEINIZACION
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
500 nm, Hg 546 nm
1 cm de espesor
15-25°C ó 37°C
frente a reactivo blanco
VALORES NORMALES(3,4)
Suero,plasma
4.2-6.4 mmol/l (75-115 mg/dl)
Orina al azar
0.1 – 0.8 mmol/l (1 – 15 mg/dl)
Orina de 24 horas
<2.78 mmol/d (<0.5 g/d)
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la
población.
Macro
Semi-Micro
Patrón o
Muestra
Reactivo
Blanco
Patrón o
Muestra
Reactivo
Blanco
Patrón o muestra 20 l
Reactivo
2000 l
--2000 l
10 l
1000 l
--1000 l
Mezclar, incubar durante 25 min a 15-25°C ó 10 min a 37°C y
medir la absorbancia del patrón (Apatrón) y de la muestra (AMuestra)
frente al reactivo blanco antes de 60 min. Aunque la absorbancia
se puede leer en cualquier momento durante un período de
hasta 60 minutos después del tiempo especificado de incubación,
el intervalo entre la adición de la muestra y la lectura debe de ser
exactamente el mismo que para el Patrón/Control y la Muestra.
(mg/dl) =
AMuestra
APatrón
Amuestra
APatrón
x Patrón conc.
(mmol/l)
REFERENCIAS
1. Barham, D, and Trinder, P. Analyst 1972; 97: 142.
2. Clinical Chemistry Principles and Techniques, Second Edition,
R.J. Henry, D.C. Cannon and J.W. Winkelman Editors, Harper
and Row, Maryland, USA, 1288, 1974.
3. Teuscher, A. and Richterich, P. Schweiz Med. Wschr. 1971;
101: 345 and 390.
4. Tietz, N.W. Clinical Guide to laboratory tests. 2nd edition.
Philadelphia, Pa: WB Saunders Co.; 1990: 246-250.
M
Concentración de glucosa (mmol/l) =
SENSIBILIDAD
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
intervalo de sensibilidad ya que esto está limitado por la
sensibilidad del espectrofotómetro utilizado. Bajo las condiciones
del ensayo un cambio de 0,01 unidades de absorbancia es
equivalente a 0,013 mmol/l (0,23 mg/dl).
x Patrón conc.
(mmol/l)
AA
CALCULOS
LINEALIDAD
El método es lineal hasta una concentración de glucosa de 22,2
mmol/l (400 mg/dl). Para muestras con valores superiores a
dichas concentraciones diluir 1+2 con agua destilada y multiplicar
el resultado por 3.
SA
Pipetear en tubos de ensayo:
G
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
INTERFERENCIAS
Se analizaron los siguientes analitos hasta los niveles indicados y
se encontró que no interfieren:
Haemoglobin
Free Bilirubin
Conjugate Bilirubin
Triglycerides
Intralipid
1000 mg/dl
25 mg/dl
25 mg/dl
1000 mg/dl
400 mg/dl
Revisado 13 Nov 08, bm
Rev. 001
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GLUTATION
REDUCTASA (GLUT RED)
MANUAL
RX MONZA
Componentes
R1a.
R1a. Tampón
R1b. Substrato
R2. NADPH
1 x 70 ml
5 x 5 ml
5 x 3 ml
SIGNIFICADO CLINICO
El análisis de Glutation Reductasa se ha utilizado en la detección
de enfermedades hepáticas y malignas, en la valoración de la
nutrición (estado de la riboflavina) y la detección de estados de
deficiencia determinados genéticamente.
Nota: Asegurarse de que los estados aparentes de deficiencia
enzimática no son debidos a la reducción de la riboflavina.
R2.
Tampón
Fosfato Potásico
EDTA
Substrato
GSSG
NADPH
250 mmol/l pH 7,3
0,5 mmol/l
2,2 mmol/l
0,17 mmol/l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar
las precauciones normales requeridas para el manejo de
reactivos de laboratorio.
Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.
Los reactivos deben ser utilizados sólo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS
R1a. Tampón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8°C.
(GSH = Glutation Reducido)
R1b.
Substrato
Reconstituir el contenido de un frasco de Substrato 2
con 5 ml de Tampón 1. Estable durante 2 días cuando
se conserva entre +2 y +8°C.
R2.
NADPH
Reconstituir un frasco de NADPH 3 con 3 ml de H20
bidestilada. Estable durante 2 días cuando se conserva
entre +2 y +8°C.
NADP+ + 2 GSH
G
GR
NADPH + H+ + GSSG
AA
M
Principio del Análisis (1)
El Glutation reductasa cataliza la reducción de glutation (GSSG)
en presencia de NADPH, el cual se oxida a NADP+. La
disminución en la absorbancia se mide a
340 nm.
R1b.
Concentraciones en la Prueba
SA
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de Glutation Reductasa en el
suero, el plasma y los eritrocitos. Este producto es adecuado
para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza.
No. Cat.
GR 2368
5 x 5 ml
COMPOSICION DEL REACTIVO
PREPARACION DE LA MUESTRA
Suero, Plasma o Eritrocitos.
Preparación del Eritrocito.
Centrifugar 0,5 ml de sangre entera durante 5 min a
2000 rpm. Eliminar el plasma y la capa de color de ante,
asegurandose de que no se quiten demasiados eritrocitos,
arriesgando así un muestreo de células no representativo. Lavar
los eritrocitos tres veces volviendo a suspenderlo en NaCl al
0,9%, y centrifugando durante 5 min a 2000 rpm después de cada
lavado.
Lisar las células volviendo a suspenderlas en H20 bidestilada fría,
guardar hasta 0.5 ml. Dejar reposar durante 10 min entre +2 +8°C. Centrifugar el lisado durante 5 min a 2000 rpm para
eliminar el estroma. Diluir 100 l de lisado con 1,9 ml de
solución NaCl al 0,9% para el análisis.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón
Substrato
NADPH
MATERIALES NECESARIOS PERO NO
SUMINISTRADOS
Suero de Control de Glutation Reductasa Randox GR 2608
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MANUAL/ RX MONZA GR 2368
Pipetear en tubos de ensayo:
ddH2O
Patrón
Muestra
R1
Mezclar bien
R2
Reagent Blank
S0
20 µl
500 µl
100 µl
Patrón
S1
20 µl
500 µl
Muestra
20 µl
500 µl
100 µl
100 µl
Mezclar y aspirar en el Monza RX.
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Se recomienda para la calibración el uso de solución salina y
suero de calibración Randox glutatión reductasa. La calibración
se recomienda con el cambio de lote o como se indica por los
procedimientos de control de calidad.
PARA USO MANUAL
340 nm
1 cm de espesor
37°C.
frente al aire
Mezclar bien
AA
G
Pipetear en la cubeta
Lisado Diluido
Substrato (R1)
ESPECIFICIDAD
El Glutation Reductasa es altamente específico para
Glutation(GSSG).
RANGO DE REFERENCIA(2)
Plasma/Suero
33 - 73 U/l
Eritrocitos
4,7 –13,2 U/gHb
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de normalidad, ya que pueden darse variaciones regionales.
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante
el analizador RX monza a una temperatura de 37oC, con el
volumen de aspiración fijado en 500 µl.
M
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Sueros de Control de Glutation Reductasa
para el control de calidad diario. Analizar el control al menos una
vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del
rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y
su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
SA
PROCEDIMENTO
Seleccione GR en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a
cabo un blanco de agua según las instrucciones.
NADPH (R2)
40 l
1000 l
200 l
LINEARIDAD
El ensayo es lineal hasta 387 U/. Las muestras mayores que este
debe ser diluido con 1 +9 0,9% de solución de NaCl y re-ensayó.
Multiplicar el resultado por 10.
Mezclar, y empezar a cronometrar simultáneamente. Leer la
absorbancia inicial al cabo de 1 minuto. Leer de nuevo al cabo
de 2, 3, 4 y 5 minutos.
SENSIBILIDAD
Se deberá de considerar como el límite de detección un valor de
9.69 U/l.
CÁLCULO MANUAL
La actividad del Glutation Reductasa se puede calcular a partir de
la siguiente fórmula:
PRECISION
a)
Mean (U/l)
SD
CV (%)
n
b)
U/l sangre entera = 4983 x ∆A 340 nm/min x Factor de
Dilución (20)
Convirtiendo a u/g Hemoglobina
ejemplo
Una muestra contiene un nivel de hemoglobina de
16 g/dl ó 160 g/l.
Valor de Glutation Reductasa: 1488 U/l.
Por lo tanto el valor de la muestra =
1488
───
160
Within run precision
Level 2
42.0
2.03
4.84
20
Level 3
86.9
2.24
2.58
20
Level 2
42.0
2.75
6.55
20
Level 3
86.9
3.75
4.32
20
Total precision
=
9,3 u/gHb
Mean (U/l)
SD
CV (%)
n
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MANUAL/ RX MONZA GR 2368
CORRELACION
El método de Randox (Y) se comparó con otro método
comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de
regresión lineal:
Y = 1.017 X + 1.54
con un coeficiente de correlación r = 0.9888.
Se analizaron 42 muestras con valores de entre 14 y 309 U/l.
S.S.,
G
AA
M
SA
REFERENCIAS
1. Goldberg D.M. & Spooner RJ (1983) in Methods of
Enzymatic Analysis (Bergmeyen, H.V. Ed.) 3rd edn.
vol 3, pp 258-265, Verlog Chemie, Deerfield Beach,
Fl.
2. Melissinos, K.G.,Delidov, A.Z., Varsov, A.G., Begietti,
Drivas, G.J., Nephron, 28: 76-79, (1981).
Revisado 15 Sep 10 bm
Rev 001
PAGE 3 OF 3
IgA
ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS
R1. Tampón Ensayo
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando
se conserva entre +2 y +8°C.
IMMUNOTURBIDIMETRIC ASSAY FOR IgA
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de IgA en el suero y el plasma.
Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y
en el analizador Rx Monza.
No. Cat.
IA 2447
R1. Tampón Ensayo
R2. Reactivo Anticuerpo
1 x 60 ml
1 x 5 ml
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón Ensayo
Reactivo Anticuerpo
MATERIALES NECESARIOS PERO NO
SUMINISTRADOS
Calibrador de Proteína Específica Valorado Líquido Randox para
análisis de muestras diluídas, No. Cat IT 2692
Controles de Proteína Específica Valorados Líquidos Randox
Nivel 1
No. Cat. PS 2682
Nivel 2
No. Cat. PS 2683
Nivel 3
No. Cat. PS 2684
Solución de NaCl al 0,9%
EXTRACCION Y CONSERVACION DE LA MUESTRA
Se puede utilizar el suero, plasma heparinizado o plasma EDTA.
El IgA es estable durante 3 días entre +15 y +25°C, 7 días entre
+2 y +8°C, o 6 meses a -20°C.
PROCEDIMIENTO (Análisis Manual)
Diluir las muestras 1+20 con solución de NaCl al 0,9%.
COMPOSICION DEL REACTIVO
SA
PRINCIPIO
La muestra que contiene IgA humano se diluye adecuadamente y
después se reacciona con antisuero específico para formar un
precipitante que se mide turbidimétricamente a 340 nm. Se
puede determinar la concentración de IgA en la muestra
construyendo una curva estándar a partir de las absorbancias de
los patrones.
R2. Reactivo Anticuerpo
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando
se conserva entre +2 y +8°C.
M
máximo 6%
20 mmol/l, pH 7,4
150 mmol/l
AA
R1. Tampón de Ensayo
Glicol de Polietileno
Tampón Tris/HCl
Cloruro Sódico
R2. Reactivo Anticuerpo
Anti IgA (humano)
Concentraciones Iniciales
en la Prueba
G
Componentes
Se recomienda que todos los reactivos y muestras de suero se
equilibren a temperatura ambiente antes de usar. Se deberá
preparar una curva estándar para cada análisis que se realice y se
recomienda que las muestras se analicen en duplicado junto con
controles apropiados. Experiencia con el kit podría permitir al
operador realizar el análisis un cierto número de veces sin recalibración con tal que se utilizen el mismo reactivo de trabajo,
espectrofotómetro, cubeta y condiciones del análisis tales como
la temperatura.
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar
las precauciones normales requeridas para el manejo de
reactivos de laboratorio.
Los Reactivos R1 y R2 contienen Azida Sódica. Evitar su ingestión
o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua.
En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención
médica inmediatamente.
El Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías,
formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen
dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para
evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas,
deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%.
Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
En caso de elegir esta alternativa se deberá prestar especial
consideración a los resultados del control.
Seleccone la IgA en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a
cabo un blanco de agua según las instrucciones.
Pipetear en la Cubeta:
S0
Blanco
SO*
S1
S1
Blanco
ddH2O
50 l
50 l
---
Diluido CAL
Patrón
---
---
---
---
500 µl
500 µl 500 µl 500 µl
---
Muestra Muestra
Blanco
---
---
50 l 50 µl
---
---
---
50 µl
Diluido
Muestra
Tampón
Ensayo (R1)
---
50µl
500 µl 500 µl
Mezclar bien y se incuba a 25ºC fuera del analizador durante 10
minutos
Reactivo
Anticuerpo (R2) ---
50 µl ---
50 µl
---
50 µl
Mezclar bien y se incuba a 25˚C fuera del analizador durante 30
minutos. Inserte en el soporte de RX monza celda de flujo y
pulse leer.
*Blanco de Reactivo
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MANUAL/ RX MONZA IA 2447
PARA USO MANUAL
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
340 nm
1 cm de espesor
25°C
frente al aire
Pipetear en la cubeta apropiada:
Patrones Diluidos
Muestra Diluida
Tampón de Ensayo R1
Patrones
Muestra
100 l de cada
1,0 ml
100 l
1,0 ml
RANGOS DE NORMALIDAD (1,2)
Adultos:
54 - 268 IU/ml
(0,9 – 4,5 g/l)
90 - 450 mg/dl
Niños:*
90 ± 33 IU/ml
(8-10 años)
(1,5 ± 0,5 g/l)
151 ± 55 mg/dl
Recién Nacidos:*
0,18 ± 0,6 IU/ml
(2-8 días)
(0,003 ± 0,01 g/l)
0.3 ± 1.0 mg/dl
* valor medio ± desviación estándar
Mezclar bien, medir la A1 al cabo de 10 mins.
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geográfica de la población.
Pipetear en la cubeta apropiada:
FACTORES DE CONVERSIÓN
IU/ml x 1,68
mg/dl x 0,595
100 l
Mezclar bien, medir la A2 al cabo de 30 mins.
= mg/dl
= IU/ml
(Relacionado al estándar de inmunoglobulina WHO 67/86)
CÁLCULO MANUAL
Calcular el cambio en absorbancia para cada patrón y muestra.
ei. A = A2 - A1
LINEALIDAD
Este ensayo es lineal hasta 785 mg/dl.
AA
M
Después trazar la media de las concentraciones estándar frente a
los valores A correspondientes utilizando papel gráfico.
[Utilizar un programa de ordenador apropiado para curva, si está
disponible, en una transformación logit/log]. La concentración de
la muestra IgA se obtiene leyendo el valor A a partir de la curva
de calibración. No intentar extrapolar por encima o debajo del
rango de patrones
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante
el analizador Rx Monza a una temperatura de 37°C.
SA
Reactivo Anticuerpo R2 100 l
G
CALIBRACION
Recomendamos el Calibrador de Proteína Específica Valorado
Líquido Randox para análisis de muestras diluídas.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Controles de Proteína Específica Valorados
Líquidos Randox, Nivel 1, 2 y 3 para el control de calidad diario.
Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día.
Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango
especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su
repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de IgA es 45.6 mg/dl.
NOTA:
Si el valor de la muestra excede el patrón más alto:
Diluir la muestra diluida previamente (1+20) otra vez 1+1 con
solución NaCl al 0,9% (w/v). Multiplicar el resultado por 2. (P.S.:
ver gammopatía a continuación).
Si el valor de la muestra es inferior al patrón más bajo:
Diluir la muestra pura 1+10 con solución NaCl al 0,9% (w/v).
Multiplicar el resultado por 0,52.
(P.S.: Ver gamopatía a continuación)
GAMMOPATIA
Las muestras que se sospecha tienen gammopatía monoclonal o
policlonal deberán de someterse siempre a electrofórosis de la
proteína para poder detectar cualquier exceso de antígeno. El
exceso de antígeno puede resultar en resultados bajos falsos.
También se podría sospechar Hipergammoglobulinemia si al
volver a empezar la reacción con 100 l de la muestra diluida no
resulta en un incremento significativo en la absorbancia.
ESPECIFICIDAD
No existe una reacción cruzada con IgG y IgM bajo las
condiciones del análisis.
Las muestras extremadamente lipémicas o hemolíticas y los
niveles elevados de detergentes iónicos pueden interferir en el
análisis.
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MANUAL/ RX MONZA IA 2447
PRECISION
Precisión Dentro del Análisis
Nivel 1
Media (mg/dl)
192
DE
2.98
CV (%)
1.55
n
20
Nivel 2
291
5.62
1.93
20
Precisión Total
Media (mg/dl)
DE
CV (%)
n
Nivel 1
192
13.2
6.86
20
Nivel 2
291
17.8
6.12
20
CORRELACIÓN
El método Randox (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 0.9955 X + 0.4802
y un coeficiente de correlación r = 0,9975
Se analizaron 45 muestras de pacientes con valores de entre 49 y
669 U/l.
G
AA
M
SA
REFERENCIAS
1. Becker, W.: Laboratoriumblätter 1980; 30: 25.
2. Geiger, H. & Hoffman, P.: Z. Kinderheilk 1970; 109: 22.
3. Whicher, J.J., Price, C.P., Spencer, K., Critical Reviews in
Clinical Laboratory Sciences, 1983; 18: 213-216.
Revisado 15 Sep 10 bm
Rev. 001
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IgG
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
R1. Tampón Ensayo
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando
se conserva entre +2 y +8°C.
PARA SU USO.
Para el análisis cuantitativo in vitro de la IgG en suero y plasma.
Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y
en el analizador Rx Monza.
Cat. Nos.
IG 2448
R1. Tampón Ensayo
R2. Reactivo Anticuerpo
1 x 60 ml
1 x 5 ml
PRINCIPI
La muestra que contiene IgG humana se diluye adecuadamente y
después se hace reaccionar con antisuero específico para formar
un precipitante que se mide turbidimétricamente a 340 nm. Se
puede determinar la concentración de IgG en la muestra
construyendo una curva estandar a partir de las absorbancias de
los patrones.
EXTRACCION Y CONSERVACION DE LA MUESTRA
Se puede utilizar suero, plasma heparinizado o plasma EDTA.La
IgG es estable durante 3 días entre +15 y +25°C, 7 días entre +2
y +8°C, o 6 meses a -20°C.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
máximo 6%
20 mmol/l, pH 7,4
150 mmol/l
AA
R1. Tampón Ensayo
Glicol Polietileno
Tampón Tris/HCl
Cloruro Sódico
R2. Reactivo Anticuerpo
IgG Anti (humana)
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón Ensayo
Reactivo Anticuerpo
MATERIALES NECESARIOS PERO NO
SUMINISTRADOS
Solución de NaCl al 0,9% (w/v).
Calibrador de Proteína Específica Líquido Randox para análisis de
muestras diluídas, (No. Cat IT 2692)
Controles de Proteínas Específicas Valorados Líquidos
Nivel 1
No. Cat. PS 2682
Nivel 2
No. Cat. PS 2683
Nivel 3
No. Cat. PS 2684
PROCEDIMIENTO (Análisis Manual)
Diluir las muestras 1+20 con solución de NaCl al 0,9%.
Se recomienda que todos los reactivos y muestras de suero se
equilibren a temperatura ambiente antes de usar. Se deberá
preparar una curva estandar para cada análisis que se realice y se
recomienda que las muestras se analicen en duplicado junto con
controles apropiados. La frecuencia de recalibración (tras un
cierto número de usos) podrá ser establecida a partir de la
experiencia en el uso de este kit, siempre y cuando se utilizen el
mismo reactivo de trabajo, espetrofotómetro, cubeta y
condiciones del análisis tales como la temperatura.
M
Concentraciones Iniciales en la Prueba
G
Componentes
R2. Reactivo Anticuerpo
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando
se conserva entre +2 y +8°C.
SA
ENSAYO INMUNOTURBIDIMETRICO PARA IgG
Análisis Manual
RX MONZA
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar
las precauciones normales requeridas para el manejo de
reactivos de laboratorio.
Los Reactivos R1 y R2 contienen Azida Sódica. Evitar su ingestión
o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua.
En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención
médica inmediatamente.
La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías,
formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen
dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para
evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas,
deberán limpiarse con hidróxido sódico al 10%.
Hojas de Salud y Seguridad están disponibles si se desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
En caso de elegir esta alternativa se deberá prestar especial
consideración a los resultados del control.
Seleccone la IgG en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a
cabo un blanco de agua según las instrucciones.
Pipetear en la Cubeta:
S0
Blanco
ddH2O
Diluido CAL
Patrón
Diluido
Muestra
Tampón
Ensayo (R1)
SO*
S1
S1
Blanco
10 l
10 l
---
---
---
---
---
---
10 l
10 µl
---
---
---
---
---
---
10 µl
500 µl
500 µl
500 µl 500 µl
Muestra Muestra
Blanco
500 µl
10µl
500 µl
Mezclar bien y se incuba a 25C fuera del analizador durante 10
minutos
Reactivo
Anticuerpo (R2) ---
50 µl
---
50 µl
---
50 µl
Mezclar bien y se incuba a 25C fuera del analizador durante 30
minutos. Inserte en el soporte de RX monza celda de flujo y
pulse leer.
*Blanco de Reactivo
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MANUAL/ RX MONZA IG 2448
PARA USO MANUAL
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
340 nm
1 cm de espesor
25C
frente al aire
Pipetear en la cubeta apropiada:
Patrones diluidos
Muestra diluida
Tampón ensayo (R1)
Patrones
Muestra
20 l de cada
1,0 ml
20 l
1,0 ml
ESPECIFICIDAD
No existe ninguna reacción con IgA e IgM bajo las condiciones
del análisis.
Las muestras extremadamente lipémicas o hemolíticas y altos
niveles de detergentes iónicos pueden interferir con la prueba.
RANGOS DE NORMALIDAD (1,2)
Adultos:
92 - 207 IU/ml
(8 - 18 g/l)
(800 - 1800 mg/dl)
Niños:*
(8-10 años)
122 ± 23,0 IU/ml
(10,6 ± 2 g/l)
(1055 ± 200 mg/dl)
Neonatos:*
(2-8 días)
134 ± 34,7 IU/ml
(11,6 ± 3,0 g/l)
(1164 ± 301 mg/dl)
Mezclar bien, medir A1 al cabo de 10 minutos.
Pipetear en la cubeta apropiada:
Reactivo Anticuerpo (R2)
100 l
100 l
* valor medio ± desviación estandar
Mezclar bien, medir A2 al cabo de 30 minutos.
A = A2 - A1
FACTORES DE CONVERSIÓN
IU/ml x 8,68
= mg/dl
mg/dl x 0,1152
= IU/ml
(Relacionado al patrón de inmunoglobulina WHO 67/86)
AA
M
Después trazar la media de las concentraciones del patrón frente
a los valores A correspondientes utilizando papel gráfico.
[Utilizar un programa de ordenador apropiado para curva, si está
disponible, en una transformación logit/log]. La concentración de
IgG en la muestra se obtiene leyendo el valor A a partir de la
curva de calibración. No intentar extrapolar por encima o debajo
del rango de patrones.
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la
población.
SA
CÁLCULO MANUAL
Calcular el cambio en absorbancia para cada patrón y muestra.
G
CALIBRACION
Se recomienda el Calibrador de proteína Específica Líquido
Randox para análisis de muestras diluídas.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Controles de Proteínas Específicas Valorados
Líquidos Randox, Niveles 1, 2 y 3 para el control de calidad diario.
Se deberá de analizar dos niveles distintos de controles al menos
una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro
del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango
y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes
pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador de RX
monza en el modo de cubeta funcionando a una temperature de
25ºC.
LINEALIDAD
Este ensayo es lineal hasta 5025 mg/dl.
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de IgG es 337 mg/dl.
NOTA:
Si el valor de la muestra excede el patrón más alto:
Diluir la muestra diluida previamente (1+20) otra vez 1+1 con
solución NaCl al 0,9% (w/v). Multiplicar el resultado por 2. (P.S.:
ver gammopatía a continuación).
Si el valor de la muestra es inferior al patrón más bajo:
Diluir la muestra pura 1+10 con solución NaCl al 0,9% (w/v).
Multiplicar el resultado por 0,52.
(P.S.: Ver gamopatía a continuación)
GAMMOPATIA
Las muestras que se sospecha tienen gammopatía mononuclear o
polinuclear deberán someterse siempre a electroforosis de la
proteína para poder detectar cualquier exceso de antígeno. El
exceso de antígeno puede resultar en falsos resultados bajos.
También se podría sospechar Hipergamaglobulinemia si al volver
a empezar la reacción con 100 l de la muestra diluida no resulta
en un incremento significativo en la absorbancia.
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MANUAL/ RX MONZA IG 2448
PRECISION
Análisis (Intra)
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
Nivel 2
1043
10.3
0.99
20
Nivel 3
1648
19.6
1.19
20
Nivel 2
1043
43.2
4.14
20
Nivel 3
1648
26.4
1.60
20
Análisis (Inter)
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
CORRELACIÓN
El método Randox (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 0.9780 X + 18.137
y un coeficiente de correlación r = 0,9980
M
G
AA
REFERENCIAS
1. Becker, W.: Laboratoriumblätter 1980; 30: 25.
2. Geiger, H. & Hoffman, P.: Z. Kinderheilk 1970; 109: 22.
3. Whicher, J.J., Price, C.P., Spencer, K., Critical Reviews in
Clinical Laboratory Sciences, 1983; 18: 213-216.
SA
Se analizaron 49 muestras de pacientes con valores de entre 399
y 4859 mg/dl.
Revisado 15 Sep 10 bm
Rev. 001
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L-LACTATO (LAC)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo
de reactivos de laboratorio.
PAP
Determinación Enzimática de L-Lactato
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de L-Lactato en plasma
y CSF. Este ensayo és específico para la determinación de LLactato. Este producto es adecuado para un uso manual o en
el analizador Rx Monza.
R1a. Tampón
R1b. Reactivo Enzima
CAL Patrón
1 x 100 ml
16 x 6 ml
1 x 5.5 ml
METODO COLORIMETRICO
La concentración de L-Lactato en la muestra se determina de
acuerdo a la siguiente reacción.
L-Lactato + O2
Lactato Oxidasa
Existen hojas de Salud y Seguridad disponibles
Los reactivos deben utilizarse solamente para su
propósito por personal de laboratorio cualificado, y
bajo condiciones de laboratorio apropiadas.
piruvato + H2O2
H2O2 + 4-aminoantipirina + TOOS
Peroxidasa
TOOS =
La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las
cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando
se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes
de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies
metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio
al 10%.
Producto púrpura + 4H2O
N-etil-N-(2 hidroxi-3-sulfopropil)
m-toluidina
R1b. Reactivo Enzima
Reconstituir el contenido de un frasco de Reactivo
Enzima R1b con 6 ml de Tampón R1a. Estable
durante 6 semanas entre +2 y +8C ó 2 semanas entre
+15 y +25C, cuando se conserva protegido de la luz.
G
AA
M
El L-Lactato es uno de resultados netos de la gluconeogénesis
producida en el músculo esquelético activo. El L_Lactato és
metabolizado en el hígado. El NADH és producido en la
glucólisis en los tejidos por oxidación aeróbica. Si no hay
presencia suficiente de oxígeno para que se produzca esta
oxidación, se regenera NAD+ a partir de NADH en la
reducción de piruvato a lactato
Una concentración incrementada de lactato en la sangre es
así un indicador de metabolismo anaeróbico hecho que se da,
por ejemplo, si disminuye el flujo de sangre a los tejidos y el
suministro de oxígeno es insuficiente. En casos de reducciones
de oxígeno severas, podría darse la “Acidosis Láctica”. El LLactato por lo tanto se puede utilizar como un indicador de
fallo circulatorio severo.
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS
REACTIVOS
R1a. Tampón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8C.
SA
Cat No.
LC 2389
16 x 6 ml
La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel o las membranes mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante
agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar
atención médica inmediatamente.
MUESTRA
Plasma (anticoagulantes: litio heparina lodoacetato, fluoruro
EDTA, fluoruro oxalato, fluoruro sódico).
CSF Utilizar sin modificación.
La sangre se toma de una vena libre de estasis y se conserva
en un baño de hielo. El plasma se separa por medio de la
centrifugación durante los 30 minutos siguientes. La demora
en la separación puede llevar a un incremento de los valores
de lactato observados. El análisis se deberá llevar a cabo
inmediatamente.
CAL Patrón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón
Reactivo Enzima
Patrón
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
NOTAS
Evitar la contaminación del reactivo, muestras y material de
cristal por medio de la saliva o el sudor dado que tienen
contenidos elevados de lactato.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
R1a. Tampón
Tampón Pipes
TOOS
Azida Sódica
R1b. Reactivo Enzima
4-aminofenazono
Peroxidasa
Lactato oxidasa
Ascorbato oxidasa
CAL Patrón
Concentraciones Iniciales
100 mmol/l, pH 7,20
2,1 mmol/l
1 g/l
0,4 mmol/l
≥ 1000 U/l
≥ 600 U/l
≥ 10000 U/l
Especifico para cada lote
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PROCEDIMIENTO
Seleccione LAC en la pantalla de Monza ejecutar prueba y
llevar a cabo un blanco de agua con agua dulce doble destilada
(ddH2O) como se indica en las instrucciones.
VALORES DE NORMALIDAD(5)
mmol/l
Plasma
0,5 – 2,22
Pipetear en la Cubeta:
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de
la población.
dd H2O
Patrón
Muestra
Reactivo
Reactivo Blanco S0
5 µl
500 µl
Patrón S1
5 µl 500 µl
Muestra
5 µl
500 µl
Mezclar e incubar por 5 minutos a 37°C. Inserte la cubeta en
el soporte del flujo de célula y oprima leer.
PARA USO MANUAL
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de L-lactato con un nivel
aceptable de precisión se determinó en 0,165 mmol/l (1,49
mg/dl).
550 nm
1 cm de espesor
20-25C, 37C
frente al blanco de reactivo
PRECISION
Muestra
(l)
10
-1000
CÁLCULO MANUAL
Concentración de L-Lactato =
Concentración de L-Lactato =
Amuestra
Apatrón
Amuestra
Apatrón
G
AA
Mezclar, incubar durante 10 minutos entre 20 - 25C ó 5
minutos a 37C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra)
y el patrón (Apatrón) frente al blanco del reactivo dentro de los
siguientes 30 minutos.
x Concentración
del patrón (mg/dl)
x Concentración
del patrón (mmol/l)
NORMALIZACIÓN
El L-Lactato Randox Estándar incluido en este Kit es trazable a
L-Lactato método de referencia Gravimétrico.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y
Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles
distintos de controles al menos una vez al día. Los valores
obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si
los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye
error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus
componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
Precisión Dentro del Análisis
Nivel 2
Media (mg/dl)
13.1
DE
0.106
CV(%)
0.81
n
20
Nivel 3
53.3
0.458
0.86
20
M
Muestra
Patrón
Reactivo
Patrón
(l)
-10
1000
SA
Pipetear en los tubos de ensayo:
Blanco del
Reactivo (l)
--1000
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Las siguientes características de rendimiento se obtuvieron
utilizando un Rx Monza en modo cubeta funcionando a 37°C y
calibrado en el estándar proporcionado por el Kit.
LINEALIDAD
El test es lineal hasta una concentración de L-Lactato de 19,7
mmol/l (178 mg/dl). Diluir las muestras superiores a esta
concentración 1+1 con NaCl al 0,9% y multiplicar el resultado
por 2.
CALIBRACION
Se recomienda la calibración durante el cambio de lote de
reactivo, o como se indica en los procedimientos de control
de calidad, usando el estándar proporcionado en el Kit.
Longitud de onda
Cubeta
Temperatura de Reacción
Medición
mg/dl
4,5 - 20
Precisión Total
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
Nivel 2
13.1
0.749
5.72
20
Nivel 3
53.3
1.93
3.62
20
CORRELACIÓN
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 0.9382 X + 0.2605
y un coeficiente de correlación r = 0,9980
Se analizaron 49 muestras de pacientes con valores de entre
6.5 y 123 mg/dl.
REFERENCIAS
1. Shimojo N et al, CLIN CHEM 1989; 35(9): 1992 - 1994.
2. Shimojo N, Fujino K et al, CLIN CHEM 1991; 37(11) 1978
- 1980.
3. Lehninger Al: Principles of Biochemistry, Worth Publishers,
New York, 1993, p 416.
4. Mascini M et al, CLIN CHEM. 1987; 34(4) 591 - 593.
5. Jacobs DS, Kasten BL, Demott WR and Wolfson WL:
Laboratory Test Handbook, LEXI COMP INC, OHIO,
1990, p. 245.
Revisado 15 Sep 10 bm
Rev. 001
PAGE 2 OF 2
LIPASA (LPS)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
Triacilglicerol Lipasa
Método UV
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de Lipasa en el suero y plasma.
Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador
Rx Monza.
No. Cat.
LI 188
20 x 2.5 ml
1 x 70 ml
20 x 2.5 ml
4 x 3.0 ml
R1a. Tampón
R1b. Substrate
CAL. Patrón
2 x 70 ml
4 x 30 ml
4 x 3.0 ml
La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo
que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este
reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la
formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas
con hidróxido sódico al 10%.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
SIGNIFICADO CLINICO(1)
El sistema de test de la lipasa es un medio para medir la actividad
del enzima lipasa en el suero y el plasma. La medición de la lipasa
se utiliza en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades del
páncreas tales como pancreatitis aguda y obstrucción del
conducto pancreático.
Los reactivos deben ser utilizados sólo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
METODO TURBIDIMETRICO(3)
SA
LI 194
4 x 30 ml
R1a. Tampón
R1b. Sustrato
CAL. Patrón
La solución R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel,
lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En
caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente
a un médico.
Lipasa
monoglicérido + 2 ac. oléico
Se mide la disminución de la turbidez a 340 nm.
AA
Trioleína + 2H2O
G
MUESTRA
Suero o plasma heparinizado.
La lipasa es estable en la muestra durante 5 días entre
+2 y +8°C ó 24 horas entre +20 y +25°C.
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes
R1a. Tampón
Tampón Tris
R1b. Sustrato
Desoxicolato sódico
Cloruro cálcico
Trioleína
Colipasa
CAL. Patrón
R1b. Sustrato
Reconstituir el contenido de un vial de Sustrato R1b con
el volumen apropiado de Tampón R1a.
2,5 ml para el kit de
20 x 2,5 ml (LI 188)
30 ml para el kit de
4 x 30 ml (LI 194)
Estable durante 2 semanas cuando se conserva entre +2 y
+8°C ó 5 días entre +15 y +25°C.
M
PRINCIPIO
PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD
R1a. Tampón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conservan entre +2 y +8°C.
Concentración en la prueba
26 mmol/l, pH 8,9
16,7 mmol/l
0,04 mmol/l
0,3 mmol/l
4 mg/l
Ver valor asignado
en el inserto del lote específico
CAL. Patrón
Disolver el contenido de un vial de Patrón 3 en 3,0 ml
de agua bidestilada, rotar lentamente durante 30 min
antes de utilizar. Estable durante 5 días entre +2 y +8°C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón
Sustrato
Patrón
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
NOTAS(2)
En raras ocasiones, el suero del paciente puede presentar un
aumento de la absorbancia en vez de un descenso. La actividad
de la lipasa en estas muestras normalmente se encuentra dentro
del rango normal. Actividades extremadamente elevadas de lipasa
pueden conducir a un considerable consumo de sustrato, siendo
estos casos A1 menor de 0,500. Cuando esto ocurra, diluir la
muestra 1+9 con una solución de NaCl 0,9% y repetir la prueba.
Multiplicar el resultado por 10. Es preferible utilizar cubetas
desechables. Las cubetas de cristal deben lavarse
abundantemente, especialmente después de haber sido utilizadas
para ensayos de triglicéridos o colesterol.
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MANUAL/ RX MONZA LI 188
PROCEDIMIENTO
Seleccione LIP en la pantalla ejecutar prueba y lleve a cabo un
blanco de agua según las instrucciones.
INTERFERENCIA
La hemólisis interfiere en la prueba.
Reactivo Blanco S0
ddH20
Muestra
CAL Patrón
Reactivo
Patrón S1
20uL
500uL
Muestra
20uL
500uL
20uL
500uL
Mezclar cuidadosamente para evitar la formación de espuma,
entonces inserte la cubeta en el soporte de flujo de células de
RX monza y oprima leer.
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Se recomienda la calibración usando el CAL estándar
proporcionado en el Kit. Calibrar en el cambio de lote de
reactivo o según se indica en los procedimientos de control de
calidad.
PARA USO MANUAL
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
340 nm (Hg 365 nm o Hg 334 nm)
1 cm de espesor
37°C
frente al aire
Pipetear en la cubeta:
2,5 ml
--0.1 ml
2,5 ml
0,1 ml
---
1,0 ml
--0,04 ml
1,0 ml
0,04 ml
---
G
Mezclar. Evitar la formación de espuma. Leer la absorbancia A1
del patrón y de la muestra al cabo de 4 min. Después de otros 5
min leer la absorbancia A2 del patrón y de la muestra.
A de la muestra o del patrón = A1 - A2
CÁLCULO MANUAL
Calcular el factor de la prueba de la siguiente manera:
Factor =
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de
referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la
población.
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un
analizador Rx Monza en funcionamiento a 37ºC.
LINEALIDAD
Si la actividad de la lipasa excede 940 U/l, diluir la muestra 1+1
con NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por
2.
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de lipasa con un nivel
aceptable de precisión se determinó en 24,5 U/l.
PRECISION
Precisión Dentro del Análisis
Nivel 1
Media (U/l)
129
DE
6.05
CV(%)
4.69
n
20
M
Muestra
Macro Semi Micro
AA
Reactivo
Muestra
Patrón
Patrón
Macro
Semi Micro
VALORES NORMALES(4)
Suero: Hasta 190 U/l (37°C)
SA
Pipetear en la Cubeta:
Actividad(patrón)
──────
Apatrón
Actividad lipasa en la muestra = Factor x Amuestra
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Ensayados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Se deberá de analizar dos niveles
distintos de controles cada día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción.
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
Precisión Total
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
Nivel 1
129
6.57
5.09
20
Nivel 2
403
16.2
4.02
20
Nivel 2
403
17.8
4.41
20
CORRELACIÓN
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 1.0495 x -10.67
y un coeficiente de correlación r = 0,9832
Se analizaron 45 muestras de pacientes con valores de entre
43-918U/l.
REFERENCIAS
1. Tietz NW et al. Lipase in serum-the elusive enzyme: An
overview. Clin Chem 1993; 39:746-756.
2. Lott, J. A., et al. Clin. Chem. 1986; 32: 1920.
3. Ziegenhorn J., et al. Clin. Chem. 1979; 25: 1067.
4. Weisshaar, H.D., et al. (1981). Dtsch. Med. Wschr.
106: 239.
Revisado 15 Sep 10 bm
Rev. 001
PAGE 2 OF 2
MAGNESIO
(AZUL DE XILIDIL)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar
las precauciones normales requeridas para el manejo de
reactivos de laboratorio.
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de Magnesio en el suero, el
plasma y la orina. Este producto es adecuado para un uso manual
o en el analizador RX monza.
No. Cat.
MG 531
3 x 100 ml
R1.
Reactivo de color
CAL. Patrón
3 x 100 ml
1 x 5.5 ml
SIGNIFICADO CLINICO
El Magnesio es uno de los principales cationes intracelulares en el
cuerpo. Su acción está relacionada con la del calcio. La deficiencia
de magnesio, hipomagnesemia, puede resultar en varias
enfermedades neuromusculares, debilidad, temblores, tetania y
convulsiones. Se asocia con hipocalcemia, terapia intravenosa,
diabetes mellitus, alcoholismo, diálisis y embarazo.
Los niveles elevados de magnesio en suero se asocian con
deshidratación, acidez diabética grave y Enfermedad de Addison.
Las condiciones que interfieren con la filtración glomerular como
en el caso de fallo renal resultan en retención de magnesio y por
ello aumento de sus niveles en suero.
La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías,
formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen
dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para
evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas,
deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%.
Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.
Los reactivos deben utilizarse solamente para su
propósito por personal de laboratorio calificado, y bajo
condiciones de laboratorio apropiadas.
PREPARACION Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS
Todos los reactivos están listos para su uso. Estables hasta la
fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +25C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Reactivo de Color de Magnesio
Patrón de Magnesio
MATERIALES NECESARIOS PERO NO
SUMINISTRADOS
Material de pipeteo para el suministro de 10 l y 1,0 ml.
Cronómetro y baño de agua o bloque de calentamiento para
mantener una temperatura entre 20 - 25C.
Un espectrofotómetro con una longitud de onda de 520 nm.
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532).
Multisueros de Precisión Humanos Randox Nivel 2 (No. Cat.
UN1557) y Nivel 3 (No. Cat. UE1558).
AA
M
PRINCIPIO(1-5)
Los iones de magnesio reaccionan con azul de xilidilo en un
medio alcalino para formar un quelato soluble en agua de color
morado-rojizo. La intensidad del color es proporcional a la
concentración de magnesio en la muestra. El Calcio se excluye
de la reacción por medio de su conjugación con el EGTA.
La solución R1 contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua.
En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención
médica inmediatamente.
SA
Método Colorimétrico
MANUAL
RX MONZA
G
EXTRACCION Y CONSERVACION DE LA MUESTRA
Suero, Plasma (no plasma tratado con EDTA) u orina. La
muestra de orina de 24 horas puede contener sedimentos que
absorben el magnesio. Añadir unas gotas de ácido clorhídrico
concentrado (pH 3-4) para disolver el sedimento y diluir con
DDH2O 1+4 (resultado x 5).
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes
Concentración Inicial de los Reactivos
R1.
Reactivo de Color
Azul de Xilidilo
Tampón Tris
Carbonato Potásico
EGTA
CAL. Patrón
0,1 mmol/l
0,2 mmol/l
77 mmol/l
0,04 mmol/l
Ver inserto lote específico
NOTA
Todo el material deberá estar libre de contaminación de
Magnesio. Las fluctuaciones en valores de blanco de más de un
10% en una serie, son más probables debido a la contaminación
del material con magnesio. Lavar la muestra y los contenedores
del reactivo con solución al 10% de Triton X 100, sumergir en
ácido clorhídrico o Nítrico diluido de 1 a 2 horas y enjuagar con
agua destilada. Invertir y dejar gotear hasta que se seque.
PROCEDIMIENTO
Seleccione Mg en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a
cabo un blanco de agua según las instrucciones.
Pipetear en la Cubeta:
Reactivo Blanco S0
Patrón S1
Muestra
ddH2O
5 l
Muestra
5 l
Calibrador 5 l
Reactivo
500 l
500 l
500 l
Mezclar, incubar durante 5 minutos a 20-25 º C. Inserte la cubeta
en el porta-RX monza celda de flujo y pulse Leer.
CALIBRACION
Recomendó el uso de CAL estándar suministrado en el kit de
calibración o de suero Randox Nivel 3. Calibrar el cambio de
lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de
control de calidad.
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MANUAL/ RX MONZA MG 531
VALORES DE NORMALIDAD(6)
PARA USO MANUAL
Longitud de onda:
Cubetas:
Temperatura:
Medición:
520 nm
1 cm de espesor
20 - 25C
frente al blanco de reactivo
Procedimiento Macro
ADULTOS
Suero
Orina
0.65 – 1.05 mmol/l
(1.58 - 2.55 mg/dl)
3.00 – 5.00 mmol/24 hrs (73 - 122 mg/24 hrs)
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geográfica de la población.
Blanco de Reactivo
Patrón
Muestra
Reactivo de Color
Agua Destilada
Patrón
Muestra
2,0 ml
20 l
-
2,0 ml
20 l
-
2,0 ml
20 l
Mezclar bien e incubar durante 5 minutos a temperatura
ambiente. Medir la absorbancia final de la muestra (Amuestra) y del
patrón (Apatrón) frente al Blanco de Reactivo. El color resultante
es estable durante 3 horas a temperatura ambiente.
Procedimiento Semi Micro
Blanco de Reactivo
Patrón
Muestra
Reactivo de Color
Agua Destilada
Patrón
Muestra
1,0 ml
10 l
-
1,0 ml
10 l
-
1,0 ml
10 l
AA
x Conc.
G
CÁLCULO MANUAL
Amuestra
Concentración de Magnesio (mmol/l) =
Apatrón
Estándar
(mmol/l)
Amuestra
Concentración de Magnesio (mg/dl) =
Apatrón
Estándar
(mg/dl)
SUERO
LINEARIDAD
El método es lineal hasta 2,34 mmol/l (5,69 mg/dl). Las muestras
con concentraciones más elevadas se deberán diluir 1+1 con
agua doblemente destilada y repetir el análisis. Multiplicar el
resultado por 2.
SENSIBILIDAD
El nivel mínimo detectable se ha determinado como
0,036 mmol/l (0,088 mgl/dl).
PRECISION
Intra assay
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
M
Mezclar bien e incubar durante 5 minutos a temperatura
ambiente. Medir la absorbancia final de la muestra (Amuestra) y del
patrón (Apatrón) frente al Blanco de Reactivo. El color resultante
es estable durante 3 horas a temperatura ambiente.
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador de
RX monza, en el modo de cubeta, calibrado en Calibración de
nivel Randox Suero 3.
SA
Pipetear en las cubetas:
x Conc.
NORMALIZACIÓN
Standard Randox magnesio incluido en el kit se puede rastrear al
magnesio de materiales de referencia NIST 909b.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción.
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
INTERFERENCIA
Se analizaron los siguientes analitos hasta los niveles indicados y
se encontró que no producen interferencias:
Hemoglobina
<1000 mg/dl (10 g/l)
Bilirrubina
<25 mg/dl (427 mol/l)
Triglicéridos
<1000 mg/dl (11 mmol/l)
Inter assay
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
Nivel 2
2.43
0.017
0.70
20
Nivel 3
4.50
0.020
0.44
20
Nivel 2
2.43
0.066
2.71
20
Nivel 3
4.50
0.081
1.79
20
MÉTODO DE COMPARACIÓN
El método Randox (Y) se comparó con otro equipo de prueba
disponible en el mercado (X). Cuarenta muestras de pacientes
con valores que abarca el intervalo 1,75 a 5,58 mg / dl se
ensayaron. El análisis de regresión lineal de los datos como
resultado la siguiente ecuación.
Y = 0.997 X - 0.0004
con un coeficiente de correlación, r = 0,9989
ORINA
LINEARIDAD
Este método es lineal to12.6 mmol/l (30,6 mg/dl).
SENSIBILIDAD
El nivel mínimo detectable se ha determinado como
0,618 mmol/l (1,50 mg/dl).
REFERENCIAS
1. Mann, C.K., Yoe, J.H., Anal. Chem. (1956), 28: 202-205.
2. Mann, C.K., Yoe, J.H., Anal. Chim. Acta (1957), 16: 155-160.
3. Ogata, H., Hiroi, L., Anal. Chem. (1959), 8: 21.
4. Bohuon, C., Clin. Chim. Acta. (1962), 7: 811-817.
5. Rice E.N., Lapara, C.Z., Clin. Chim. Acta. (1964) 10: 369.
6. Teitz N.W. Clinical Guide to Laboratory Tests. W.B.
Saunders Co (1983).
Revisado 15 Sep 10 bm
Rev. 001
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SODIO (Na)
CALIBRACIÓN
Se recomienda el uso de la Calibración Randox Nivel 3 (CAL
2351), utiliza el blanco como S2 y lo diluye 4+1 como S1 (4 partes
Cal Nivel 3 + 1 parte de agua) con agua doblemente destilada. Se
recomienda realizar una calibración diaria de 2 puntos como se
indica en el procedimiento de control de calidad.
1
USO DEL REACTIVO
La cuantificación in vitro de Sodio se determina en suero y
plasma. Este producto es apto para utilizarse en los
Analizadores de la RX Series.
No. Cat.
NA7167
R1a.
R1b.
R2a.
R2b.
4 x 45 ml
4 x 45 ml
2 x 39 ml
2 x 39 ml
Solución Tampón
Enzima
Diluyente
Sustrato
MUESTRA
Suero, plasma tratada con heparina o litio.
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
R1.Solución Tampón/Enzimas
Transferir el contenido de un frasco de solución
tampón R1 al frasco de Enzima R1b y disolver
agitando suavemente, asegurando que el contenido
1. Verificar la configuración del analizador
2. Verificar la limpieza del analizador
3. Verificar la calidad del agua
4. Verificar la temperatura de reacción
5. Verificar la fecha de caducidad del reactivo
6. Contactar a Soporte Técnico de Randox
Los requerimientos de control de calidad deberían ser
determinados en concordancia con las regulaciones
gubernamentales o con los requerimientos acreditativos
correspondientes.
CARACTERÍSTICAS ESPECÍFICAS DEL DESEMPEÑO
Se obtuvieron las siguientes características específicas de
funcionamiento al utilizar un analizador de la Rx Series.
LINEALIDAD
Este método es lineal hasta la concentración de Sodio de
182 mmol/l. Muestras por debajo de esta concentración
deberen diluirse 1+1 con agua doblemente destilada (no usar
solución salina 0.9% ) y repetir el ensayo. Multiplar el
resultado por 2.
G
MATERIALES PROPORCIONADOS
Solución Tampón
Enzima
Diluyente
Sustrato
AA
M
R2.
quede disuelto completamente. Transferir el
contendido de la solución tampón R1a enjuagando el
vial R1b varias veces. Evite la formación de espuma.
Estable por 2 semanas de +2 hasta +8°C o 5 días de
+15 hasta +25°C.
Diluyente/Sustrato
Transferir el contendio del frasco de Diluyente R2a
en el frasco de Sustrato R2b y disolver agitando
suavemente, asegurando que el contenido quede
dusuelto completamente en el diluyente. Transferir
el contendio en el diluyente R2b varias veces. Evite
la formación de espuma. Estable por 2 semanas de
+2 hasta +8°C o 5 días de +15 hasta +25°C.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda utilizar el Multi-suero de ensayo Randox Nivel 2 y
Nivel 3 para realizar el control de calidad diario. Deben evaluarse
al menos dos niveles de calidad una vez al día. Los valores
obtenidos del control de calidad deben caer dentro del rango
de valores específicos. Si los valores caen fuera del rango,
deberá repetir y excluir los errores siguiendo los siguientes
pasos:
SA
Prueba Colorimétrica Enzimática
RX Series
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO
SUMINISTRADOS
Multi-suero de ensayo Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532).
Calibrador Randox Nivel 3 (No. Cat. CAL 2351).
NOTAS DE PROCEDIMIENTO
Cuando el Sodio y Potasio se solicitan en conjunto, el Sodio
debe determinarse inmediatamente antes de analizar el Potasio.
PROCEDIMIENTO
Seleccionar NA en la pantalla "Run Test" y realice un blanco de
agua.
Pipetear en la cubeta:
Blanco de Reactivo S0 Estándar S1 Muestra
ddH2O
20 µl
Estándar
20 µl
Muestra
20 µl
R1
500 µl
500µl
500 µl
Mezclar e incubar por 5 minutos a 37ºC. Posteriormente adicionar:
R2
200 µl
200 µl
200 µl
Mezclar adecuadamente, inserte la cubeta en el espacio del
RX Monza para la celda de flujo y presione "Read".
SENSITIVITY
La concentración mínima detectable para Sodio con un nivel
de precisión adecuado se determinó como 57.8 mmol/l.
PRECISIÓN
Precisión dentro de la Corrida
Media (mmol/l)
DE
CV(%)
n
Level 2
139
3.82
2.75
20
Level 3
159
4.94
3.11
20
Level 2
139
3.78
2.72
20
Level 3
159
5.66
3.56
20
Precisión entre Corridas
Media (mmol/l)
DE
CV(%)
n
CORRELACIÓN
Se comparó este método (Y) con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de
regresión lineal:
Y = 0.9955 X + 1.2358
y un coeficiente de correlación de r = 0.9813
Se analizaron 41 muestras de pacientes abarcando
un rango de 87.85 hasta 188.51 mmol/l.
Revisado 08 Mar 11 lm
ESTADO DE LOS
ANTIOXIDANTES
TOTALES (TAS)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
MANUAL
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro del Estado de los
Antioxidantes Totales en suero, plasma, vino, cerveza o zumos de
fruta. Este producto es adecuado para su utilización en Manual.
Cat No.
NX 2332
5 x 10 ml
5 x 10 t
R1.
R2.
R3.
CAL
Tampón
Cromógeno
Sustrato
Patrón
1 x 100 ml
5 x 10 ml
2 x 5 ml
5 x 1 ml
ABTS® + .X - [FeIV = 0]
.X
- [FeIV = 0] + H2O
ABTS®*+ + HX - FeIII
AA
HX-FeIII = Metamioglobina
.X - [FeIV = 0] = Ferrilmioglobina
ABTS®= 2,2'-Azino-di-[3-etilbenzotiazolín sulfonato]
ABTS® es marca registrada de Boehringer Mannheim.
G
MUESTRA(2)
Suero fresco o plasma heparinizado. Evitar muestras hemolizadas.
La muestra puede ser conservada hasta 36 Hs entre +2 y +8°C.
El plasma/suero puede ser congelado durante un máximo de 14
días. Evitar ciclos repetidos de congelación-descongelación. Para
el vino tinto diluya 1 + 3. Los zumos de frutas pueden ser
analizados también, pero deben filtrarse con un filtro de 0.45 µl.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
R1.
Concentraciones en la prueba
Tampón
Tampón Fosfato Salino
R2.
Cromógeno
Metamioglobina
ABTS®
R3.
Sustrato
Peróxido de hidrógeno
(forma estabilizada)
CAL Patrón
6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcromán
-2-ácido carboxílico
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
R1.
Tampón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8°C.
R2.
Cromógeno
Reconstituir un vial de cromógeno R2 con 10 ml de
Tampón R1. Estable 2 días cuando se conserva entre +2
y +8°C u 8 horas entre +15 y +25°C.
R3.
Sustrato
Diluir 1 ml de sustrato R3 con 1.5 ml de Tampón R1.
Estable 24 horas cuando se conserva entre +2 y 8°C. En
la forma no diluida es estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8°C
M
HX-FeIII + H2O2
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
SA
PRINCIPIO DEL ANALISIS
ABTS® (2,2'-Azino-di-[3-etilbenzotiazolín sulfonato]) se incuba
con peroxidasa (metamioglobina) y H2O2 para generar el radical
catión ABTS®*+. Este radical presenta una coloración verdeazulada relativamente estable, que se mide a 600 nm. La
presencia de antioxidantes en la muestra produce una supresión
de esta coloración, siendo esta supresión, proporcional a la
concentración de antioxidantes presentes en la muestra.
Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos
según las pautas locales.
80 mmol/l, pH 7,4
6,1 Hmol/l
610 Hmol/l
250 Hmol/l
Específico por lotes
CAL Patrón
Reconstituir un vial de Patrón con 1 ml de agua
doblemente desionizada. Estable durante 2 días cuando se
conserva entre +2 y +8°C ó 1 mes a -20°C.
Nota: Si este análisis se utiliza en un sistema
automatizado, por favor, referirse a la hoja de
procedimiento para ese sistema, ya que las
instrucciones de reconstitución podrían diferir.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón
Cromógeno
Sustrato
Patrón
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Control Randox de Antioxidantes Totales Cat.No. NX 2331
0,9% de NaCl de la solución (Na Sin azida)
NOTAS
1. Es muy importante controlar exactamente el tiempo de
reacción. Los resultados se verán afectados si se
cambian los volúmenes, los tiempos de incubación y las
temperaturas. El kit del Estado Antioxidante Total sόlo
se puede utilizar con un espectrofotόmetro atemperado.
2. Azida de sodio interfiere en el ensayo y no debe ser añadió a
la solución 0,9% de NaCl que puede ser utilizado para diluir las
muestras que exceden la linealidad del ensayo.
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MANUAL NX 2332
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medida:
600 nm
1 cm de espesor
37°C
frente al aire
Pipetear en cubeta:
Agua Bidestilada
Patrón
Muestra
Cromógeno (R2)
Reactivo
Blanco
Patrón
Muestra
20 Hl
1 ml
20 Hl
1 ml
20 Hl
1 ml
Mezclar bien, incubar hasta alcanzar la temperatura y leer
absorbancia inicial (A1)
Añadir:
Sustrato (R3)
200 Hl
200 Hl
LINEALIDAD
Muestras que presentan concentraciones superiores a
2,5 mmol/l deberían ser diluidas con NaCl al 0,9% y analizadas
otra vez. Se recomienda diluir las muestras únicamente cuando
sea necesario ya que una dilución lleva consigo un aumento de
hasta 20% en los valores. La mayor parte de las muestras no
necesitarán ser diluidas porque los resultados serán más bajos de
2,5 mmol/l.
PATENTES
Este producto está sujeto a Patente UK 2250819 y Patentes y
Aplicaciones derivadas de PCT Aplicación de Patente
PCT/GB91/02228.
REFERENCIAS
1. Miller, N.J., Rice-Evans, C., Davies,
M.J., Gopinathan, V. and Milner, A., Clinical Science (1993)
84, 407-412.
2. Data on file at Randox.
200 Hl
Mezclar y empezar a cronometrar simultáneamente. Leer la
absorbancia (A2) al cabo de exactamente 3 minutos.
SA
A2 - A1 = A de muestra/patrón/blanco
AA
M
CALCULO
Estado de los Antioxidantes Totales:
conc del patrón
Factor =
──────────────────
(A blanco - A patrón)
mmol/l = Factor x (A Blanco- A Muestra)
G
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan Control Randox de Antioxidantes Totales para el
control de calidad diario. Este control debería procesarse como
mínimo una vez al día Los valores obtenidos deberán encontrarse
dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del
rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes
pasos:
1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación, por ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
VALORES DE REFERENCIA
Rango: 1,30 - 1,77 mmol/l Plasma
Este rango fue determinado en población activa Europea. Se
recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que
refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.
Revisado 13 Nov 09 ck
Rev. 001
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GLUCOSA-6-FOSFATO
DESHIDROGENASA
(G-6-PDH)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
La solución R1, R2, R3 y R4 contiene azida sódica. Evitar su
ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con
agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos
llamar inmediatamente a un médico.
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de
Glucosa-6-Fosfato Deshidrogenasa en eritrocitos. Este producto
es adecuado para un uso manual o en el analizador RX monza.
Cat. No.
PD 410
100 ml
R1. Tampón
R2. NADP
R3. Sustrato
R4. Digitonina
1 x 100 ml
1 x 2 ml
1 x 2 ml
1 x 20 ml
METODO UV
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos
según las pautas locales.
PRINCIPIO(1)
La actividad del enzima se determina midiendo la variación de la
absorbancia a 340 nm que se produce por la reducción del
NADP+.
G-6-PDH
gluconato-6-P + NADPH + H+
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
R1. Tampón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando
se conserva entre +2 y +8°C.
M
MUESTRA
Eritrocitos.
G
AA
PREPARACION DE LA MUESTRA
Lavar 0,2 ml de sangre con 2 ml alícuotos de solución de NaCl al
0,9%. Centrifugar después de cada lavado a 3000 rpm durante 10
minutos. Repetir 3 veces. Repetir 3 veces. Suspender el
centrifugado de eritrocitos en 0,5 ml de solución 4, dejar durante
15 min a +4C y centrifugar de nuevo. Use el sobrenadante en
el ensayo en un plazo de 2 horas.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
R1. Tampón
Tampón trietanolamina
EDTA
R2. NADP
R3. Sustrato
R4. Digitonina
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
SA
G-6-P + NADP+
La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo
que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este
reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la
formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas
con hidróxido sódico al 10%.
Concentraciones en la prueba
31,7 mmol/l, pH 7,6
3,2 mmol/l
0,34 mmol/l
0,58 mmol/l
R2. NADP
Reconstituir el contenido de la botella 2 con 2 ml de agua
bidestilada. Estable durante 4 semanas entre +2 y +8°C.
R3. Sustrato
Reconstituir el contenido de la botella 3 con 2 ml de agua
bidestilada. Estable durante 4 semanas entre +2 y +8°C.
R4. Digitonina
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando
se conserva entre +2 y +8°C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón
NADP
Sustrato
Digitonina
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Control para G-6-PDH Randox
Deficiente
No. Cat. PD 2617
Normal
No. Cat. PD 2618
Agua bi destilada
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MANUAL/ RX MONZA PD 410
PROCEDIMIENTO
Determinar el número de eritrocitos/ml de sangre.
1. RX MONZA
Seleccione G6PD en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a
cabo un blanco de agua según las instrucciones.
La actividad G-6-PDH se expresa como eritrocitos mU/109 o
como hemoglobina mU / g . Para el cálculo de actividad G-6PDH como eritrocitos mU/109 para la comparación con el
valor normal, se divide la actividad calculada (mU / ml de sangre
por los eritrocitos) con el recuento de los glóbulos rojos por ml.
eg.
Pipetear en tubos de ensayo:
Conteo de RBC por ml
= 5.3 x 109
mU/eritrocitos per ml
= 695
mU/109 eritrocitos
=
Mestra
Haemolysate
Reagent R1
Reagent R2
7.5 l
500 l
15 l
7.5 l
Mezclar bien y aspirar en el RX monza.
340 nm (Hg 334 nm o Hg 365 nm)
1 cm de espesor
37°C
frente al aire
Mezclar, incubar durante 5 min a 37°C y añadir:
0.05 ml
0.015 ml
G
R3
100
=
Factor para convertir de ml a dl
Hb(g/dl)
=
Concentración de hemoglobina
determinó para cada muestra
Mezclar, leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar
simultáneamente.
Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min.
CÁLCULO MANUAL
Para calcular la actividad de la G-6-PDH utilizar las
siguientes fórmulas:
Macro
mU/erythrocytes per ml sangre* = 30476 x A 340 nm/min
mU/erythrocytes per ml sangre* = 54857 x A Hg 365 nm/min
mU/erythrocytes per ml sangre* = 31068 x A Hg 334 nm/min
Semi Micro
mU/erythrocytes per ml sangre* = 33650 x A 340 nm/min
mU/erythrocytes per ml sangre* = 60571 x A Hg 365 nm/min
mU/erythrocytes per ml sangre* = 34304 x A Hg 334 nm/min
eg.
M
Semi Micro
1.00 ml
0.03 ml
0.015 ml
AA
Macro
3.00 ml
0.10 ml
0.05 ml
mU.eritrocitos por ml x 100
=
Hb (g/dl)
mU/ ml por eritrocitos
SA
Pipetear en tubos de ensayo:
R1
R2
Haemolysate
= 131
G-6-PDH mU/gHb
2. PARA USO MANUAL
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
5.3
Para el cálculo de actividad G-6-PDH como
hemoglobina mU/g.
La siguiente ecuación se utiliza.
Mezclar, incubar durante 5 min a 37°C y añadir:
Reagent R3
695
= 695
Hb(g/dl)
= 15.0
G-6-PDH mU/gHb
=
695 x 100
15.0
= 4633
Corrección de la Temperature
Tenga en cuenta que la corrección de la temperatura por
debajo solo puede ser utilizada para las muestras de pacientes.
Cuando la temperatura es de 37 ° C, no se requiere ningún
factor de corrección de temperatura (TCF). Si los resultados de
muestras de los pacientes se presentan a una temperatura que
no sea 37 ° C, se debe utilizar un TCF.
Cubeta de
Temperatura (°C)
TCF
25
30
2.076
1.515
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Control para G-6-PDH Randox , Deficiente y
Normal para el control de calidad diario. Analizar dos niveles
distintos de controles al menos una vez al día. Los valores
obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los
valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error,
se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de
bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
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MANUAL/ RX MONZA PD 410
INTERFERENCIAS
Los reticulocitos tienen un nivel de G6-PDH más elevado que el
de los hematies maduros. No se recomienda por tanto que se
realice este análisis trás una crisis hemolitica severa, ya que esto
puede ofrecer resultados falsaments elevados. El análisis puede
resultar util una vez que los hematies hayan vuelto a su nivel
normal.
VALORES NORMALES(3)
En eritrocitos: 245 - 299 mU/109 eritrocitos (37°C)
6.97 - 20.5
REFERENCIAS
1. Kornberg, A. et al., Methods in Enzymology 1,
Academic Press, New York, 1955; p.323.
2. Makarem, A., Clinical Chemistry-Principles and
Techniques. 2nd Ed. R.F. Henry, D. C. Cannon, J.W.
Winkelman, Editors. Harper and Row, Hagerstown
[MD], 1974; 1128-1135.
3. Lohr GW, Waller HD: Glucose-6-Phosphate
Dehydrogenase. Methods of Enzymatic Analysis,
3rd Edition - Varlag Chemie, Wehnheim: 1974; p. 636.
U/g Hb (37°C)
Hemoglobina en sangre (g/dl)
Hombres Adultos
Mujeres Adultos
Recién nacidos
13 - 18
11 - 16
14 - 23
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la
población.
AA
M
LINEALIDAD
Este método es lineal hasta una concentración de 4303 U / l.
Diluir las muestras con concentraciones mayores con 0,2 ml de
hemolizado con 1,8 ml de solución de NaCl al 0,9% y repita la
prueba. Multiplicar el resultado por 10.
SA
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un
analizador RX monza en funcionamiento a 37ºC.
G
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de G6PDH en los
eritrocitos con un nivel aceptable de precisión ha sido
determinada como 154 U/l.
PRECISION
Análisis (Intra)
Media (U/l)
DE
CV (%)
n
Nivel 1
784
33.2
4.24
20
Nivel 2
1533
71.3
4.65
20
Nivel 1
784
50.5
6.45
20
Nivel 2
1533
78.3
5.11
20
Análisis (Inter)
Media (U/l)
DE
CV (%)
n
CORRELACIÓN
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 1.0069 x + 47.644
y un coeficiente de correlación r = 0,9903
Se analizaron 50 muestras de pacientes con valores de entre 162
y 1200U/l.
Revised 17 Nov 11 ml
Rev.002
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FOSFORO INORGÁNICO
(PHOS)
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DE SEGURIDAD
Sólo para uso diagnóstico in vitro. No pipetee con la boca.
Aplique las precauciones habituales necesarias para la
manipulación de reactivos de laboratorio.
Método UV
MANUAL
RX MONZA
Las soluciones R1a y R1b contienen ácido sulfúrico. Evite la
digestión de estos productos y su contacto con la piel o las
membranas.
N.° de cat.
PH 1016
300 ml
R1a. Blanco de reactivo
1 x 210 ml
R1b. Reactivo de molibdato 1 x 90 ml
CAL. Patrón
1 x 5,5 ml
AA
PRINCIPIO DEL ENSAYO (1)
El fósforo inorgánico reacciona con el molibdato armónico en
presencia de ácido sulfúrico para formar un complejo de
fósfomolibdato que se mide a 340 nm.
RECOGIDA DE LA MUESTRA Y PREPARACIÓN (2)
El suero es la muestra recomendada.
El suero es estable durante 5 días si se almacena a +2-8 ºC. Es
estable durante 3 meses si se almacena congelado a -20C. Evite
las muestras hemolíticas ya que la hemolisis interfiere en la
prueba.
Orina: La orina de 24 horas se debe recolectar en una botella
lavada con ácido y libre de detergentes. Tras la recolección de la
muestra, acidifíquela hasta alcanzar un pH <3,0.
Diluir la orina 1+19 con solución de 0,9% NaCl. Multiplicar el
resultado por 20.
G
Están disponibles previa petición las fichas técnicas de salud y
seguridad.
Los reactivos deben utilizarse sólo para la finalidad
prevista y por personal de laboratorio adecuadamente
cualificado, en unas condiciones de laboratorio
apropiadas.
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
Todos los reactivos están listos para usar. Estable hasta la fecha
de caducidad si se almacena a una temperatura de +15 C a
+25C.
M
RELEVANCIA CLÍNICA
El cuerpo humano contiene aproximadamente 1 kg de fósforo.
Las sales calcificadas del fosfato que constituye la sustancia
inorgánica del hueso suponen aproximadamente el 80% del total
de fósforo. El resto está distribuido por las restantes células del
cuerpo, principalmente como fósforo orgánico en fosfolípidos y
fosfoproteínas. En el suero, la mayor parte del fósforo
inorgánico se encuentra en forma libre, estando ligado el 15%
aproximadamente a proteínas. Cuando aparecen niveles
anómalos de fosfato sérico, suelen acompañar a enfermedades
del riñón, óseas y paratiroideas. El fosfato se suele medir junto
con el calcio sérico, ya que cada una de las mediciones resulta de
utilidad para interpretar la otra.
El CAL contiene azida sódica. Evite la digestión de estos
productos y su contacto con la piel o las membranas. En caso de
contacto con la piel, lave la zona afectada con gran cantidad de
agua.
En caso de contacto con los ojos o, si se produce digestión,
acuda de inmediato al médico.
La azida sódica reacciona con las tuberías de cobre y de plomo y
forma azidas metálicas explosivas en potencia. Al desechar
reactivos de este tipo, lave con gran cantidad de agua para evitar
que se acumulen azidas. Las superficies metálicas expuestas a
estos reactivos se deben limpiar con hidróxido sódico al 10%.
SA
USO PREVISTO
Para la determinación cuantitativa in vitro del fósforo inorgánico
en suero y orina. Este producto es adecuado para uso manual y
para el analizador Rx Monza.
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE
TRABAJO
Mezcle un envase de Blanco de reactivo R1a con un envase de
Reactivo de molibdato R1b (300 ml de reactivo de trabajo).
Cuando se trata de volúmenes menores, prepare el reactivo de
trabajo conforme a lo que indica la tabla siguiente:
Blanco de reactivo (R1a) Reactivo de molibdato (R1B)
7,0 ml
14,0 ml
28,0 ml
3,0 ml
6,0 ml
12,0 ml
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Estable durante 8 semanas a una temperatura de +15 a +25C.
Contenido
MATERIALES SUMINISTRADOS
Blanco de reactivo
Reactivo de molibdato
Patrón
Concentración inicial de las soluciones
R1a. Blanco de reactivo
Ácido sulfúrico
0,36 mol/l
Cloruro de sodio
154 mmol/l
Detergente
R1b. Reactivo de molibdato
Molibdato armónico
3,5 mmol/l
Ácido sulfúrico
0,36 mol/l
Cloruro de sodio
154 mmol/l
CAL. Patrón
Fosfato potásico Consulte el prospecto de cada lote
MATERIALES NECESARIOS QUE NO SE
SUMINISTRAN
Dispositivos de etiquetado capaces de entregar 10 l y 1 ml.
Temporizador y baño de agua o bloque calefactor para mantener
la temperatura a +20-+25C o +37C.
Espectro fotómetro que pueda medir a 340 nm.
Multisueros analizados de nivel 2 de Randox (Nº de cat.
HN 1530) y nivel 3 (Nº de cat. HE 1532).
Suero de calibración de nivel 3 de Randox Nivel (Nº de cat.
CAL 2351).
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MANUAL/ RX MONZA PH 1016
PROCEDIMIENTO
Realice una nueva calibración de ganancia [Gain Calibration] con
una cubeta que contenga ddH2O recién preparada. Seleccione el
programa PHOS en la pantalla Run Test [ejecución de prueba] y
realice un blanco de agua la ley como se indica.
Pipetee en la cubeta:
Blanco de reactivo
S0
Agua destilada
Muestra
Patrón
Reactivo de trabajo
5 l
----0,5 ml
Patrón
S1
Muestra
----5 l
0,5 ml
--5 l
--0,5 ml
Mezcle, cubre durante 10 minutos a +20 - +25C antes de
realizar la lectura, tal y como se indica en la pantalla.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda utilizar los Multisueros analizados de Randox de
nivel 2 y 3 para el control de calidad diario. Deben analizarse dos
niveles de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos
deben situarse dentro de un rango determinado. Si estos valores
están fuera del rango y la repetición excluye un posible error,
deben realizarse los pasos siguientes:
1. Comprobar los ajustes del instrumento y la fuente de luz.
2. Comprobar que todo el equipo utilizado esté limpio.
3. Comprobar el agua; los contaminantes, como un crecimiento
bacteriano, pueden contribuir a la obtención de resultados
imprecisos.
4. Comprobar la temperatura de la reacción.
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y su contenido.
6. Contactar con el servicio técnico de atención al cliente de
Randox Laboratories llamando al teléfono +44 (0) 28 9442
2413 (Irlanda del Norte).
SA
INTERFERENCIA
Los analitos indicados más abajo se sometieron a prueba hasta
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
alcanzar los niveles siguientes y se determinó que no interferían:
Se recomienda utilizar el patrón de calibrado CAL se proporciona en
Bilirrubina
500 mol/l
el kit o bien el Suero de calibración de nivel 3 de Randox para
Intralipid®
0,4%
muestras de suero.
Triglicéridos
4,05 mmol/l
Se recomienda utilizar el patrón de calibración CAL proporciona
Hemoglobina
7 g/l
en el kit para muestras de orina. Calibre cuando cambie de lote
VALORES NORMALES (2, 3)
de reactivo o bien cuando indiquen los procedimientos de
control de calidad.
Suero:
0,87 - 1,45 mmol/l (2,7 - 4,5 mg/dl)
PARA USO MANUAL
Pipetee en la cubeta:
Patrón
10 l
----1 ml
----10 l
1 ml
Muestra
G
Agua destilada
Muestra
Patrón
Reactivo de trabajo
Blanco
--10 l
--1 ml
Mezcle, incube durante 10 minutos a +20- +25C o a 5 min a
37C. Mida la absorbancia de la muestra (muestra A) y del patrón
(patrón A) frente al blanco de reactivo.
NOTA
Las muestras ictéricas y ligeramente lipémicas exigen realizar un
blanco de muestra. Utilizando el mismo esquema de pipeteo,
mezcle en 10 l de muestra con 1000 l de blanco de reactivo.
En el Rx Monza, la Concentración de la muestra (mmol/l) =
Muestra (mmol/l) – Blanco de muestra (mmol/l). En el caso de
los usuarios que realizan el método manual, a continuación la
absorbancia del blanco de muestra (blanco de muestra A) se resta de la
absorbancia de la muestra (muestra A).
ESTANDARIZACIÓN
El Suero de calibración de nivel 3 de Randox es trazable
conforme a lo que indican los materiales de referencia para
fósforo inorgánico NIST 186lg.
12,9 - 42,0 mmol/d
(0,4 - 1,3 g/d) Dieta libre
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
intervalo de referencia para reflejar la edad, sexo, dieta y
ubicación geográfica de la población.
M
340 nm
Recorrido luminoso de 1 cm
+20- +25C/+37C
frente a blanco de reactivo
AA
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
Orina de 24 horas:
CARACTERÍSTICAS DE EFICACIA ESPECÍFICAS
Los siguientes datos de rendimiento se han obtenido utilizando
un analizador Rx Monza, calibrado con el Suero de suero de
calibración de nivel 3 de Randox, a +37oC.
SUERO
SENSIBILIDAD
Se ha determinado que el nivel mínimo detectable era de 0,307
mmol/l (0,953 mg/dl).
LINEALIDAD
El método es lineal hasta 7,77 mmol/l (24,1 mg/dl). Las muestras
que presenten una concentración más elevada se deben diluir
1 + 4 con una solución 0,9% (p/v) NaCl y someterse a nuevo
ensayo, multiplicando el resultado por 5.
PRECISIÓN
Intraensayo
Promedio (mg/dl)
DT
CV(%)
n
Interensayos
Promedio (mg/dl)
DT
CV(%)
n
Nivel 2
4,60
0,040
0,88
20
Nivel 3
6,77
0,141
2,08
20
Nivel 2
4,60
0,199
4,32
20
Nivel 3
6,77
0,197
2,91
20
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MANUAL/ RX MONZA PH 1016
COMPARACIÓN CON OTROS MÉTODOS
El método de Randox (Y) se sometió comparación con otro kit
de prueba comercial (X). Se sometieron a prueba muestras de
71 pacientes, que presentaban un rango de 1,57 a 15,1 mg/dl. El
análisis de regresión lineal de los datos ha producido la siguiente
ecuación:
Y = 0,91 X - 0,6897
con un coeficiente de correlación r = 0,9990
ORINA
SENSIBILIDAD
Se ha determinado que el nivel mínimo detectable era de 1,12
mmol/l (3,48 mg/dl).
LINEALIDAD
El método es lineal hasta 57,7 mmol/l (179 mg/dl). Las muestras
que presenten una concentración más elevada se deben diluir
1 + 4 con una solución 0,9% (p/v) NaCl y someterse a nuevo
ensayo, multiplicando el resultado por 5.
Interensayos
Promedio (mg/dl)
DT
CV(%)
n
Nivel 2
29,5
1,06
3,60
20
Nivel 3
89,2
4,16
4,66
20
Nivel 2
29,5
1,08
3,68
20
Nivel 3
89,2
3,86
4,33
20
M
Promedio (mg/dl)
DT
CV(%)
n
AA
Intraensayo
SA
PRECISIÓN
G
REFERENCIAS
1. Henry, R.J., Clinical Chemistry, Principles and Techniques,
2nd Edition, Harper and Row, p. 525, 1974.
2. Tietz, N., Clinical Guide to Laboratory Tests, W.B.
Saunders Company, Philadelphia 1983; 5: 384.
3. Tietz, N.W. Clinical Guide to laboratory tests. 2nd edition.
Philadelphia, Pa: WB Saunders Co.; 1990: 444-446.
Revisado: 02 May 12 bm
Rev. 002
PÁGINA 3 DE 4
G
AA
M
SA
MANUAL/ RX MONZA PH 1016
PÁGINA DEJADA EN BLANCO INTENCIONADAMENTE
PAGE 4 OF 4
POTASIO (K)
MATERIALES SUMINISTRADOS
Reactivo Precipitante
Na-Tetrafenilboron
NaOH
Patrón
MANUAL
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de Potasio en el suero y
plasma. Este producto es adecuado para uso Manual.
R1.
R2a.
R2b.
CAL
Reactivo Precipitante
Na-Tetrafenilboron
NaOH
Patrón
1 x 100 ml
1 x 50 ml
1 x 50 ml
1 x 5.5 ml
PRINCIPIO
El tetrafenilboron sódico reacciona con los iones de potasio en
un medio alcalino libre de proteínas para producir una
suspensión túrbida de tetrafenilboron potásico. La cantidad de
turbidez producida es proporcional a la concentración de
potasio.
MUESTRA
Suero o plasma litio-heparin.
AA
0,3 mol/l
0,2 mol/l
2,0 mol/l
Vedi inserto lotto-specifico
G
R2a.
R2b.
CAL
Concentración Inicial de las Soluciones
Reactivo Precipitante
Acido Tricloro Acético
Tetrafenilboron Sódico
Hidróxido Sódico
Patrón
Pipetear en tubos de centrifugación:
Macro
Micro
100 l
1000 l
50 l
500 l
Mezclar y centrifugar durante 8 minutos a 12000 rpm.
2. Análisis de Potasio
Longitud de onda:
Cubeta:
Medición:
Temperatura:
578 nm, Hg 578 nm
1 cm de espesor
frente al reactivo blanco
+20 - +25C
M
COMPOSICION DEL REACTIVO
R1.
PROCEDIMIENTO
1. Precipitación
Muestra
Reactivo Precipitante (R1)
Las elevaciones en los niveles de potasio en suero / plasma puede
ocurrir debido a los posibles efectos de la manipulación de la
muestra. Por esta razón las muestras de sangre debe mantenerse
a temperatura ambiente y el retraso en la centrifugación debe ser
evitado. Recentrifugación no es recomendable.
Componentes
NOTAS PROCEDIMIENTO
Se recomienda utilizar material de plástico desechable durante el
análisis, ya que el material de cristal contaminado puede dar lugar
a grandes errores. Evitar la contaminación con detergentes.
SA
Cat. No.
PT 1600
100 ml
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Los reactivos deben ser utilizados sólo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD
Utilizar todas las soluciones sin diluir. Estable hasta la fecha de
caducidad cuando se conserva entre +15 y +25C.
Pipetear en tubos de ensayo:
Macro
Patrón Muestra
Reactivo de Trabajo (R2) 2000 l
Patrón (CAL)
200 l
Sobrenadante
--
2000 l
-200 l
Micro
Patrón
Muestra
1000 l
100 l
--
1000 l
-100 l
El patrón y el sobrenadante claro se deberán añadir en el medio
de la superficie del reactivo de trabajo para producir una
turbidez homogénea. Mezclar cuidadosamente y dejar reposar
durante al menos 5 minutos. Medir la absorbancia del patrón y la
muestra frente al reactivo blanco (A).
CALCULO
Concentración de Potasio
Amuestra
mmol/l =
x Patrón conc.
Apatrón
PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD
DE TRABAJO (R2)
Mezclar partes iguales de las soluciones R2a y R2b para formar
reactivo suficiente para el número de muestras a analizar. Estable
durante 30 días entre +15 y +25C y 60 días entre +2 y+8C.
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MANUAL PT 1600
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Ensayados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Se deberá de analizar dos niveles
distintos de controles cada día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
INTERFERENCIA
La hemólisis interfiere con el análisis debido al alto contenido de
potasio en las células sanguíneas rojas, por lo tanto las muestras
se deberán separar del coágulo lo antes posible.
VALORES NORMALES(4)
3,5 – 5,1 mmol/l (13,7 – 19,9 mg/dl)
M
LINEALIDAD
El método es lineal hasta una concentración de Potasio de 10
mmol/l. Para muestras con concentraciones superiores diluir 1+2
con NaCl al 0,9% y multiplicar el resultado por 3.
SA
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geográfica de la población.
G
AA
REFERENCIAS
1. Hillmann, G., Beyer, G., J. Clin. Chem. and Clin. Biochem.,
1967; 5: 93.
2. Henry, R. J., Clin. Chem., Harper and Row, New York, Sec.
Edit., 1974; 646.
3. Teitz, N. W., Fundamentals of Clinical Chemistry, Saunders,
Philadelphia, Sec. Edit., 1976; 876.
4. Teitz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry. W.B. Saunders
Company, Philadelphia, 1986; 1842.
Revisado 25 Jan 10 ck
Rev. 001
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RANSEL
COMPOSICIÓN DE LOS REACTIVOS ADICIONALES
Glutation Peroxidasa
SOLO PARA INVESTIGACION
MANUAL
RX MONZA
Componentes
Cat. No.
RS 504
8 x 6,5 ml
8 x 6 t Semi micro
8 x 2 t Macro
RS 505
8 x 10 ml
8 x 10 t Semi micro
8 x 4 t Macro
R1a. Reactivo
R1b. Tampón
R2. Hidroperóxido
de cumeno
R3. Diluyente
8 x 6,5 ml
1 x 70 ml
1 x 1 ml
2 x 200 ml
R1a. Reactivo
R1b. Tampón
R2. Hidroperóxido
de cumeno
R3. Diluyente
8 x 10 ml
1 x 100 ml
1 x 1 ml
2 x 200 ml
Complementario del lote:
HG 1539
Hemoglobina Reactivo
5 x 100 ml
10,3 mmol/l
6.08 mmol/l
7,68 mmol/l
0.1% v/v
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
La solución R1b contiene azida sódica. Evitar su ingestión o
contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel,
lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En
caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente
a un médico.
La azida sódica reacciona con el cobre y el plomo de las tuberías,
lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se deseche este
reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la
formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas
con hidróxido sódico al 10%.
La solución R2 es nociva, si se traga o inhala, causa irritación y es
combustible.
La solución R2 es Hidroperóxido de cumeno que es cáustico.
GPX
2GSH + ROOH
G
PRINCIPIO DE LA REACCION
AA
M
METODO UV(1)
Este método está basado en el trabajo de Plagia and Valentine. La
Glutation Peroxidasa (GPX) cataliza la oxidación del Glutation
(GSH) por el hidroperóxido de cumeno. El Glutation oxidado
(GSSG) en presencia de Glutation Reductasa (GR) Y NADPH es
inmediatamente convertido en su forma reducida con una
oxidación concomitante de NADPH en NADP+. Se mide la
disminución de la absorbancia a
340 nm.
Fosfato Potásico
Ferricianida Potásica
Cianida Potásica
Surfactante
SA
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de Glutation Peroxidasa
en sangre entera. Este producto es adecuado para un uso
manual o en el analizador Rx Monza.
Concentraciόn inicial de las Soluciones
ROH + GSSG + H2O
GR
GSSG + NADPH + H+
NADP+ + 2GSH
La solución de Drabkin contiene cianuro por lo que puede ser
fatal si se ingiere.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio
MUESTRA
Utilizar sangre entera heparinizada. Si la muestra proviene de
oveja o cabra, diluir 0,05 ml con 3 ml de diluyente. Para ganado
vacuno, caballos y otras especies diluir 0,05 ml de muestra con 2
ml de diluyente. Para muestras humanas ver NOTA.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
Concentraciones en la prueba
R1a. Reactivo
Glutation
Glutation Reductasa
NADPH
R1b. Tampón
Tampón fosfato
EDTA
R2.
Hidroperóxido de cumeno
R3.
Diluyente
4 mmol/l
≥ 0,5 U/l
0,34 mmol/l
0,05 mol/l, pH 7,2
4,3 mmol/l
0,18 mmol/l
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MANUAL/ RX MONZA RS 504
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
R1a. Reactivo
Reconstituir un vial de Reactivo R1a con el volumen
apropiado de Tampón R1b:
6,5 ml para el kit de
8 x 6,5 ml
(RS 504)
10 ml para el kit de
8 x 10 ml
(RS 505)
Estable durante 48 horas entre +4 y +8°C u 8 horas
entre +15 y +25°C.
R1b. Tampón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8°C.
10 µl
500 µl
40 µl
Diluyente
Reconstituir el contenido de un vial de Diluyente R3 con
200 ml de agua bidestilada. Estable durante
4 semanas cuando se conserva entre +2 y +8°C ó
3 días entre +15 y +25°C.
CALIBRACIÓN DE RX MONZA
Se recomienda diariamente o como se indica en los
procedimientos de control de calidad, usando Control Randox
Ransel
PARA USO MANUAL
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
G
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Control de Ransel (Cat. No. SC 692)
Agua bidestilada
Reactivo Hemoglobina (Cat. No. HG 1539)
Diluyente Ransel (RS 2318)
NOTAS(2,3)
Cuando se utiliza sangre entera heparinizada humana, se
recomienda el uso de reactivo de Hemoglobina para la dilución.
Esto es debido a que la presencia de peroxidasas en sangre
humana puede conducir a falsos resultados (más elevados). La
adición de cianuro, sirve para inhibir esta interferencia positiva.
De todas formas, antes de añadir el reactivo de Hemoglobina, es
necesaria la dilución de la sangre con la solución de diluyente 4,
para convertir la glutation en su forma reducida. La forma
oxidada sería rápidamente inhibida por el cianuro. Se
recomienda el siguiente método utilizando reactivo de
Hemoglobina.
Preparación: Diluir el contenido de un vial de reactivo de
Drabkin con 480 ml de agua bidestilada. Conservar protegido de
la luz. Estable durante 6 meses o hasta la fecha de caducidad,
según sea más corto, cuando se conserva entre +15 y +25°C.
Diluir 0,05 ml de sangre entera heparinizada en 1 ml de solución
de diluyente (R3); incubar durante 5 min. y añadir
1 ml de reactivo de Hemoglobina. Mezclar bien y ensayar en la
forma normal. Se recomienda que las muestras sean analizadas en
los 20 min después de la adición del reactivo de Hemoglobina.
340 nm
1 cm de espesor
37°C
frente al aire
Pipette into cuvette:
Macro
SA
Hidroperóxido de cumeno
Diluir 10 Hl R2 con 10 ml de agua bidestilada y mezclar
bien, agitando vigorosamente, ya que el cumeno es difícil
de disolver. Debe utilizarse solución fresca preparada en
el día. Concentrado es estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8°C. Para medir el
volumen de hidroperóxido de cumeno se deberá utilizar
una pipeta con acción de desplazamiento positiva, y
capilares de cristal.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Reactivo
Tampón
Hidroperóxido de cumeno
Reactivo para diluir
Muestra
Reactivo R1
Cumeno R2
Muestra diluida
H2O destilada
Reactivo R1
Cumeno R2
M
R3.
Pipetear en tubos de ensayo:
Mézclelo y aspírelo en Rx Monza.
AA
R2.
PROCEDIMIENTO
Seleccione GPx en la pantalla de Ejecución de Prueba y llevar a
cabo un blanco de agua según las instrucciones.
Semi-Micro
Muestra Blanco de
diluida Reactivo
0.05 ml
--2.50 ml
0.10 ml
--0.05 ml
2.50 ml
0.10 ml
Muestra
diluida
Blanco de
Reactivo
0.02 ml
--1.00 ml
0.04 ml
--0.02 ml
1.00 ml
0.04 ml
Mezclar la muestra, R1 y R2. Leer la absorbancia inicial de la
muestra y blanco de reactivo después de un minuto y al mismo
tiempo iniciar el temporizador. Leer otra vez pasados 1 y 2
minutos. Restar el valor del blanco de reactivo al de la muestra.
MANUAL CALCULOS
La concentración de Glutation Peroxidasa puede calcularse a
partir de la siguiente fórmula:
U/l de hemolisado = 8412 x A 340 nm/minuto
(Ver instrucciones técnicas)
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan un control de Ransel para el control de calidad
diario. Este control debería procesarse como mínimo una vez al
día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango
especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su
repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano
puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
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MANUAL/ RX MONZA RS 504
VALORES NORMALES
27,5 - 73,6 U/g Hb
4171 - 10881 U/l
Este rango se tomó de una población trabajadora Europea. Se
recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
normal.
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador RX
Monza en el modo de flujo de células a 37°C con un volumen de
aspiración de 450 µl.
LINEALIDAD
El método es lineal hasta una concentración de 925 U/l. Diluir las
muestras con una concentration mayor con el agente diluyendo y
multiplicar el resultado por el factor de dilución
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de la peroxidasa de
glutación con un nivel aceptable de precisión ha sido
determinado como 75 U/l
Nivel 1
240
17.5
7.30
20
Nivel 2
456
19.9
4.37
20
AA
Media (U/l)
DE
CV(%)
n
G
Precisión Total
Nivel 2
456
14.6
3.20
20
M
Precisión Dentro del Análisis
Nivel 1
Media (U/l)
240
DE
11.7
CV(%)
4.86
n
20
SA
PRECISION
CORRELACION
Este método Randox (Y) se comparó con otro método
disponible en el mercado (X). Se analizaron 40 muestras de
pacientes con valores de entre 102 y 650 U/l. Se obtuvo la
siguiente ecuación de regresión lineal:
Y= 1.0155 X +8.637
con un coeficiente de correlación r = 0,9829
REFERENCIAS
1. Paglia, D.E. and Valentine, W.N., J. Lab. Clin. Med., 1967; 70:
158.
2. Kraus, R.J. & Ganther, H. E. Biochem. & Biophys. Res. Comm
1980; 96: 1116.
3. Prohaska, J.R., Oh, S.H., Hoekstra, W.G. & Ganther, H.E.
Biochem. & Biophys. Res. Comm. 1977; 74: 64.
Revisado 20 Sep 10 bm
Rev. 001
PAGE 3 OF 3
RANSOD
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Superoxido Dismutasa
MANUAL
RX MONZA
Componentes
No. Cat.
SD 125
5 x 20 ml
R1a.
R1b.
R2.
CAL
Sustrato Mixto
Tampón
Xantin Oxidasa
Patrón
5 x 20 ml
1 x 105 ml
3 x 10 ml
5 x 10 ml
PRINCIPIO
La función de la superóxido dismutasa (SOD) es acelerar la
dismutación de un radical tóxico, el radical superóxido (O2•.),
producido durante un proceso oxidativo enérgico, en peróxido
de hidrógeno y oxígeno molecular.
Este método emplea Xantina y Xantin oxidasa (XOD) para
formar radicales superóxido, los cuales reaccionan con cloruro
de 2-(4-yodofenil)-3-(4-nitrofenol)-5-fenil tetrazolio (I.N.T) para
formar un colorante formazán rojo. Se mide la actividad de la
superóxido dismutasa por el grado de inhibición de esta
reacción. Una unidad de SOD es la que causa un 50% de
inhibición del valor de reducción de INT bajo las condiciones del
análisis.
I.N.T
colorante formazán
O
SOD
O2•. + O2• + 2H+
O2 + H2O2
PREPARACION DE LA MUESTRA
Utilizar muestras de sangre entera heparinizada o con EDTA. Se
recomienda lavar los eritrocitos 4 veces con una solución de
NaCl al 0,9%.
Centrifugar 0,5 ml de sangre entera durante 10 min a 3000 rpm.
Después aspirar el plasma.
Después lavar los eritrocitos 4 veces con 3 ml de solución de
NaCl al 0,9 %, centrifugando durante 10 min a 3000 rpm después
de cada lavado.
El centrifugado lavado de eritrocitos deberá completarse con
2,0 ml de agua bidestilada fría. Mezclar y dejar reposar durante
15 min a 4C. El lisado se diluye con 0,01 mol/l de Tampón
Fosfato pH 7,0, de forma que el porcentaje de inhibición caiga
entre el 30 y el 60%.
Para muestras humanas se recomienda 25 partes de dilución de
lisado (Factor de dilución final = 100) y para muestras de bovinos
50 partes (Factor de dilución final = 200).
40 mmol/l, pH 10,2
0,94 mmol/l
80 U/l
Vedi inserto lotto specifico
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
R1a. Sustrato Mixto
Reconstituir un vial de Sustrato Mixto R1a con
20 ml de Tampón R1b. Es estable durante 10 días
cuando se conserva entre +2 y +8°C.
R1b.
Tampón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8°C.
R2.
Xantín Oxidasa
Reconstituir el contenido de un vial de Xantín Oxidasa
R2 con 10 ml de agua bidestilada. Estable durante 2
semanas cuando se conserva entre +2 y +8°C.
CAL
Patrones
Reconstituir el contenido de un vial de Patrón (CAL)
con 10 ml de agua bidestilada. Posteriormente las
diluciones de este patrón deben ser preparadas con
muestra diluyente Ransod. Se recomienda hacer las
siguientes diluciones del patrón CAL (o S6) para
construir la curva patrón:
G
O2•.
AA
Acido úrico + O2-.
0,05 mmol/l
0,025 mmol/l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
M
XOD
Xantina
R1a. Sustrato mixto
Xantina
I.N.T.
R1b. Tampón
CAPS
EDTA
R2. Xantín Oxidasa
CAL Patrón
SA
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de Superoxido Dismutasa
en sangre entera. Este producto es adecuado para un uso manual
o en el analizador Rx Monza.
Concentraciones iniciales de las Soluciones
R1 = Sustrato Mixto
R2 = Xantin Oxidasa
Es recomendable que todos los reactivos y muestras
estén equilibrados a temperatura ambiente antes de su
uso.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Sustrato mixto
Tampón
Xantín Oxidasa
Patrones
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Diluyente Ransod (No. Cat. SD 124) (0,01 mol/l Tampón Fosfato,
pH 7,0).
Control de RANSOD No. Cat. SD 126.
PAGE 1 OF 3
MANUAL SD 125
PROCEDIMIENTO
Seleccionar SOD en la pantalla Run Test (Realizar análisis), y
llevar a cabo un blanco de agua de la forma indicada.
CALCULOS
A2 - A1
= A/min de patrón o de muestra
3
Pipetear en la Cubeta:
Patrón
S1
Patrón
S2 TO S6
Diluente Prueba Ransod 15 µl
Patrón
Diluir la prueba
Diluir el control
Sustrato Mixto (R1)
500 µl
15 µl
500 µl
Pruebas Control
15 µl
500 µl
15 µl
500 µl
Indice de muestra diluyente (Indice S1) =Indice de reacción sin
inhibir = 100%
Todos los indices tanto de los patrones como de las muestras
diluidas deben ser convertidos en porcentajes del indice del
diluyente de muestra y sustraidos del 100% para obtener un
porcentaje de inhibición:
(Apatrón/min x 100)
100 -
Mezclar bien y añadir
= % inhibición
(AS1/min)
Xantin Oxidasa (R2)
75 µl
75 µl
75 µl
75 µl
(Amuestra/min x 100)
Mezclar bien, introducir la cubeta en el soporto de la celda de la
Rx Monza y pulsar Read (leer).
100 -
CALIBRACIÓN
Calibrar esta prueba usando el patrón proporcionado con el Kit.
Se recomienda que las siguientes diluciones estén realizadas con
el patrón Cal (ó S6) para producir una curva estándar:-
Representar el porcentaje de inhibición para cada patrón frente a
Log10 (concentración de patrón en unidades SOD/ml).
Patrón no diluido
5 ml of S6
5 ml of S5
5 ml of S4
3 ml of S3
5 ml
5 ml
5 ml
6 ml
Unidades de SOD/ml de sangre entera =
Unidades de SOD en la curva patrón/ml x factor de dilución
SA
Diluente Prueba
Conversión a unidades de SOD/g de Hemoglobina
Unid.SOD/ml
AA
S6
S5
S4
S3
S2
Volumen de
solución patrón
G
S1= Diluente Prueba (0,01 mol fosfato tampón pH 7,0)
Todos los patrones diluidos se mantienen estables durante dos
semanas entre +2 y +8°C.
Se requiere una nueva calibración para cada análisis.
PARA USO MANUAL
= Unidades de SOD/g de Hemoglobina
g Hemoglobina/ml
ILUSTRACION
(a) Una muestra de bovino diluida 1 en 300 veces con diluyente
de muestra Ransod produjo una inhibición del 33%.
Desde la curva patrón:
No de unidades SOD en la muestra = 0,575
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
505 nm
1 cm de espesor
37°C
frente al aire
(b) Conversión en unidades de SOD/ml de sangre entera
0,575 x 300 = 172,5 unidades de SOD/ml
(c) Conversión en unidades de SOD/g hemoglobina
Pipetear en la cubeta:
Muestra diluida
Patrón
Diluyente de Muestra
Ransod
Sustrato Mixto (R1)
Utilizar el porcentaje de inhibición de la muestra para obtener las
unidades de SOD de la curva patrón.
M
Patrón
= % inhibición
(AS1/min)
Muestra
Diluyente
Patrones
S2 - S6
Muestra
diluida
-----
--0,05 ml
0,05 ml
---
0,05 ml
1,7 ml
--1,7 ml
--1,7 ml
0,25 ml
0,25 ml
0,25 ml
Valor de muestra de hemoglobina = 0,118 g/ml
172,5
(Unid. SOD/ml)/(g hemoglobina/ml) =
= 1461,9
0,118
Mezclar bien
Xantina Oxidasa (R2)
Mezclar y leer la absorbancia inicial A1 al cabo de
30 segundos y empezar a cronometrar el tiempo
simultaneamente. Leer la absorbancia final A2 al cabo de
3 minutos.
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MANUAL SD 125
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan un control Ransod, para el control de calidad
diario. Analizar el control al menos una vez al día. Los valores
obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los
valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error,
se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción.
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
REFERENCIAS
1. Woolliams JA, Wiener G, Anderson PH, McMurray
CH Research in Veterinary Science 1983, 34: 253-256.
2. Suttle NF, The Veterinary Record 1986, 119: 519-522.
3. Suttle NF, McMurray CH Research in Veterinary Science
1983; 35: 47-52.
4. Arthur JR, Boyne R Life Sciences 1985 36: 1569-1575.
VALORES NORMALES
1102 - 1601 U/g Hb
164 - 240 U/ml
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geográfica de la población.
PRECISION
Precisión Dentro del Análisis
Media
DE
CV(%)
n
G
AA
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de SOD inferior a la
estándar debe ser relatada como <S1 valor estándar.
M
LINEALIDAD
Las muestras deben ser diluidas para conseguir una inhibición
entre el 30% y el 60% del porcentaje del diluyente de la muestra
(por ej. la reacción no inhibida).
SA
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un
analizador Rx Monza en funcionamiento a 37ºC.
Nivel 1
101.0
4.88
4.64
20
Nivel 2
131.5
4.30
3.58
20
Nivel 1
101.0
6.27
5.96
20
Nivel 2
131.5
8.50
7.07
20
Precisión Entre Análisis
Media
DE
CV(%)
n
CORRELACIÓN
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 0.9417 X + 0.1004
y un coeficiente de correlación r = 0,965
Se analizaron 41 muestras de pacientes con valores de entre 23318U/ml.
Revisado 15 Sep 10 bm
Rev. 001
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HIERRO SERICO (Fe)
Los reactivos deben ser utilizados sólo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
Método colorimétrico
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
La determinación cuantitativa in vitro de hierro en suero. Este
producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx
Monza.
R1.
R2.
R3.
CAL
Cromógeno
Reductor
Tampón
Patrón
1 x 10 ml
1 x 15 ml
2 x 100 ml
1 x 10 ml
El resto de los componentes están listos para usar. Estables
hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15
y +25oC.
SIGNIFICADO CLINICO
Medidas de hierro (no hemo) se utilizan en el diagnóstico y
tratamiento de enfermedades como la anemia por deficiencia de
hierro, hemocromatosis (una enfermedad asociada con el
depósito generalizado en los tejidos de dos pigmentos que
contienen hierro, de hemosiderina y de hemofuscin, y se
caracteriza por la pigmentación de la piel), y la enfermedad renal
crónica.
PRINCIPIO(1,2,3)
El ion férrico se disocia de su proteína transportadora,
transferrina, en medio ácido y se reduce simultá-neamente a su
forma ferrosa. Este ion ferroso forma un complejo con el
cromógeno, el cual es un indicador sensible al hierro, para
formar un cromóforo azul con un máximo de absorción a 595
nm.
R1.
Concentración inicial de las soluciones
Cromógeno
Ferene
R2. Reductor
Acido ascórbico
R3. Tampón
Tampón acetato
Dimetil sulfóxido
Surfactante
CAL Patrón
G
Componentes
AA
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
MATERIALES NECESARIOS PERO NO
SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Humanos Randox Nivel 2 (No. Cat. HN
1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532).
Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)
NOTAS SOBRE EL PROCEDIMIENTO
Es esencial que todos los aparatos utilizados en la recogida de las
muestras y en la prueba estén libres de contaminación con
trazas de hierro.
Para que los recipientes de cristal queden libres de hierro deben
lavarse con ácido clorhídrico diluido (aproximadamente 0,1 N) y
enjuagarse abundantemente con agua desionizada libre de
hierro.
No usar plasma en este análisis.
M
MUESTRA
Suero.
No utilizar plasma en este ensayo.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Cromógeno
Reductor
Tampón
Patrón
SA
No. Cat.
SI 257
2 x 100 ml
ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS
REACTIVOS
R2. Reductor
Disolver el contenido de un vial de Reductor R2 con
15 ml de agua desionizada libre de hierro. Estable durante 4
semanas entre +4 y +8oC.
22.2 mmol/l
1.3 mol/l
0.087 mol/l, pH 4.65
PROCEDIMIENTO
Usando fresco ddH2O realizar una nueva calibración de ganancia
en el modo de cubeta. Seleccione Fe en la pantalla de Ejecución
de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las
instrucciones.
Pipetear en la Cubeta:
Reactivo Blanco / S0
Vedi inserto lotto-specifico
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar
las precauciones normales necesarias, que se requieren al
manejar reactivos de laboratorio.
El Tampón R3 contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua.
En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención
médica inmediatamente.
La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías,
formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen
dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para
evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas
expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%.
El Tampón contiene también dimetil sulfóxido que es nocivo.
Evitar el contacto con la piel y los ojos.
Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.
Puffer
Reductor
Agua libre de hierro
Patrón
Muestra
500 l
25 l
125 l
-
Patrón S1
Muestra
500 l
25 l
125 l
-
500 l
25 l
125 l
Mezclar, insertar la cubeta en el soporte de flujo de célula del
RX Monza cuando se le pida para muestra en blanco y oprima
Leer.
Cromógeno
25 l
25 l
25 l
Mezclar, incubar durante 15 minutos a 20-25 º C. Inserte la cubeta
en el soporte de flujo de célula RX Monza cuando se le solicite
para la muestra y presione leer.
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Recomendado en un cambio de lote del reactivo o como se
indica en los procedimientos de control de calidad, utilizando el
CAL estándar proporcionado en el kit o Suero de calibración
Randox Nivel 3.
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MANUAL SI 257
PARA USO MANUAL
595 nm (590 nm - 610 nm)
1 cm de espesor
20-25oC
frente a reactivo blanco
PROCEDIMIENTO MACRO
Pipetear en la cubeta:
Tampón
Reductor
Agua libre de hierro
Patrón
Muestra
Reactivo
Blanco
Muestra
Patrón
2,0 ml
0,1 ml
0,5 ml
-
2,0 ml
0,1 ml
0,5 ml
2,0 ml
0,1 ml
0,5 ml
-
Mezclar, leer la absorbancia inicial de la muestra y del patrón
frente a reactivo blanco.
Cromógeno
0,1 ml
0,1 ml
0,1 ml
Mezclar, incubar durante 5 min entre 20-25oC. Leer la
absorbancia final frente a reactivo blanco. Restar la absorbancia
inicial de la absorbancia final para obtener el ∆A del patrón y de
la muestra.
PROCEDIMIENTO SEMI-MICRO
Muestra
Patrón
1,00 ml
0,05 ml
0,25 ml
-
1,00 ml
0,05 ml
0,25 ml
1,00 ml
0,05 ml
0,25 ml
-
AA
G
0,05 ml
0,05 ml
0,05 ml
Mezclar, incubar durante 15 min entre 20-25oC. Lea la
absorbancia final contra el blanco de reactivo.
 A = Absorbancia Final - Absorbancia Inicial
CALCULOS
Concentración =
Amuestra
A patrón
LINEALIDAD
El método es lineal hasta una concentración de 152 µmol/l
(854 µg/dl). Las muestras con concentraciones superiores se
deberán diluir 1+2 con agua desionizada, y repetir la prueba.
Multiplicar el resultado por 3.
SENSITIVITY
The minimum detectable concentration of Serum Iron with an
acceptable level of precision was determined as 0.964 µmol/l
(5.39 g/dl).
PRECISION
Media (g/dl)
DE
CV(%)
n
M
Reactivo
Blanco
Mezclar, leer la absorbancia inicial de la muestra y del patrón
frente a reactivo blanco.
Cromógeno
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un
analizador Rx Monza en funcionamiento a 25oC.
Análisis (Intra)
Pipetear en la cubeta:
Tampón
Reductor
Agua libre de hierro
Patrón
Muestra
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia para considerar las differencias en edad, sexo,
dieta y localización geográfica.
SA
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
VALORES NORMALES EN SUERO(4)
Adulto
Hombre:
10.6 - 28.3 mol/l (59 - 158 g/dl)
Mujer:
6.6 - 26 mol/l (37 - 145 g/dl)
x Conc. de patrón
NORMALIZACIÓN
Suero de Calibración Randox Nivel 3 es trazable al material de
de referencia NIST 937 Suero Hierro.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
Nivel 2
104
1.77
1.70
20
Nivel 3
196
3.96
2.02
20
Nivel 2
104
3.49
3.35
20
Nivel 3
196
6.26
3.20
20
Análisis (Inter)
Media (g/dl)
DE
CV(%)
n
CORRELACIÓN
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 0.902 X + 1.92
y un coeficiente de correlación r = 0,9995
Se analizaron 45 muestras de pacientes con valores de entre
10.23 y 599.01 g/dl.
REFERENCIAS
1. Ceriotti, F., and Ceriotti, G., Improved Direct Specific
Determination of Serum Iron. Clin. Chem. 26/2, 327-331
(1980).
2. Henry, R.J.: Clinical Chemistry Principles and Techniques,
New York, Harper and Row (1968) pg. 386.
3. Young, D.S., Hicks, J.M., Method for automatic
determination of serum iron, J. Clin. Pathol. 18: 98 - 102
(1965).
4. Weippl, G. et al. (1973). Blut 27:261.
Revisado 16 Sep 10 bm
Rev. 001
PAGE 2 OF 2
SIFILIS RPR (SYP-RPR)
TEST RAPIDO DE TARJETA DE REAGINA PLASMATICA
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
MANUAL
Suspensión de Antígeno de RPR
1. Suspensión de cardiolipina, que contiene carbono
microparticulado. Contiene timerosal.
No. Cat.
SY 1478
1. Suspensión de Antígeno
100 pruebas
de Carbono RPR
1 x 2 ml
1 x 0.5 ml
2. Control Positivo
3. Control Negativo
1 x 0.5 ml
4. Botella dispensadora de plástico
1
5. Aguja Dispensadora
calibrada para suministrar 16 µl
1
6. Tarjetas de Pruebas Desechables
10
7. Pipeta Desechable
100
SY 1479
1. Suspensión de Antígeno
de Carbono RPR
2 x 5 ml
500 pruebas
2. Control Positivo
1 x 1 ml
3. Control Negativo
1 x 1 ml
4. Botella dispensadora de plástico
1
5. Aguja Dispensadora
calibrada para suministrar 16 µl
1
50
6. Tarjetas de Pruebas Desechables
7. Pipeta Desechable
500
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Ejecutar las precauciones normales requeridas para el
manejo de reactivos de laboratorio.
Los controles contienen Azida Sódica. Evitar su ingestión o
el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso
de contacto con la piel, lavar la zona afectada con
abundante agua. En caso de contacto con los ojos o
ingestión, buscar atención médica inmediatamente.
El Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las
cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos.
Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes
volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las
superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con
hidróxido de sodio al 10%.
AA
M
Se pueden solicitar otras variaciones de los formatos arriba
indicados.
2. Suero de Control Positivo (Dispensador Rojo)
Control líquido estabilizado, reactivo con antígeno de
RPR.
3. Suero de Control Negativo (Dispensador Blanco)
Control líquido estabilizado, no reactivo con antígeno
de RPR.
SA
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de Sífilis en suero y
plasma. Este producto es adecuado para uso Manual.
G
INTRODUCCIÓN
La Sífilis es una enfermedad crónica, contagiosa y a
menudo venérea congénita producida por el Treponema
pallidum. Este organismo pertenece a un grupo de
bacterias gram-negativas llamadas Espiroquetas, las
cuales se definen por su estructura molecular única. La
infección resulta del contacto con superficies húmedas,
resultantes de lesiones del tejido epitelial de la piel o las
membranas mucosas. Si no se trata, esta enfermedad
puede resultar en cambios irreversibles del sistema
nervioso y cardiovascular. La sífilis continua siendo una
enfermedad de alta incidencia, a pesar de los avances en
la terapia antibiótica moderna.
PRINCIPIO
La prueba de Sífilis RPR es una prueba macroscópica de
floculación no treponémica para la detección y titración de
reaginas (anticuerpos en circulación producidos como
resultado de la lesión del tejido causada por la enfermedad)
en el suero o el plasma. El antígeno utilizado en el kit es
una modificación del antígeno de VDRL. Consiste en una
suspensión coloidal de cardiolipina equilibrada con licitina
y colesterol, y mezclada con carbono microparticulado. La
aglutinación ocurre en presencia de las reaginas, la cual es
visiblemente intensificada por la presencia del carbono
microparticulado.
MUESTRAS
Se puede utilizar plasma, suero calentado o sin calentar.
Las muestras hemolizadas o contaminadas no son
adecuadas para el test. Las muestras de suero fresco se
pueden conservar entre +2 y +8°C durante varios días
antes del análisis o a -20°C si se conservan durante más
tiempo.
El material de origen humano del que se deriva este
producto ha sido analizado a nivel de donante para el
anticuerpo del Virus de Inmunodeficiencia Humano (HIV 1,
HIV 2), el Antígeno de Superficie de Hepatitis B (HbsAg), y
el anticuerpo del Virus de Hepatitis C (HCV) y se ha
encontrado que es NO-REACTIVO. Los métodos utilizadon
están aprobados por el FDA.
Sin embargo, dado que ningún método puede ofrecer una
seguridad total de la ausencia de agentes infecciosos, este
material y todas las muestras de pacientes se deberán
manejar como posibles transmisores de enfermedades
infecciosas y eliminar apropiadamente.
Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se
desean.
Los reactivos deben ser utilizados sólo para los
propósitos indicados por personal adecuado
cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas
de laboratorio.
ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS
Sacar la caja que contiene la suspensión de antígeno de
R.P.R. y los controles séricos y refrigerarla a su llegada. El
antígeno de RPR y el control sérico son estables hasta la
fecha de caducidad cuando se conservan entre
+2 y +8°C. No guardar las tarjetas de la prueba en el
refrigerador, conservarlas a temperatura ambiente. No
tocar los círculos de la prueba con los dedos ya que esto
podría dejar restos aceitosos en el area de reacción
aumentando la probabilidad de resultados del test
inválidos.
MANUAL - SIFILIS (RPR) - SY 1478
MATERIALES NECESARIOS PERO NO
SUMINISTRADOS
1. Rotor mecánico con etapa horizontal, operando a
100 r.p.m.
2. Pipeta automática calibrada para suministrar 50 µl. Es
necesaria para la prueba cuantitativa.
AA
PROCEDIMIENTO
G
A. PRUEBA CUALITATIVA
1. Utilizando una pipeta desechable, dispensar una gota
(≈ 50 µl) de suero o plasma en el círculo de la tarjeta
de la prueba.
2. Con la parte plana de una pipeta desechable, extender
la muestra por toda el área del círculo de la prueba.
3. Repetir los pasos 1 y 2 para cada muestra utilizando
una pipeta nueva.
4. Agitar el ensamblaje de la botella dispensadora, invertir
y golpear suavemente la aguja para sacar las burbujas.
5. Poner la aguja en posición perpendicular a la tarjeta de
test y dejar que caiga una gota de antígeno en cada
muestra de la prueba.
6. Rotar la tarjeta de test a 100 r.p.m. durante 8 minutos
en un rotor mecánico. Tras la rotación mecánica es
necesario rotar e inclinar la tarjeta brevemente a mano
(de un lado para otro), para ayudar a diferenciar entre
los resultados reactivos y los no reactivos.
7. Después leer inmediatamente los resultados en el
macroscopio con buena luz.
LECTURA E INTERPRETACIÓN
Las lecturas se puntuan según el criterio siguiente:
PATRÓN OBSERVADO
Agregados grandes en el centro
periferia del area del test
Agregados más pequeños en
los ejes del area del test
o
Sin agregados, apariencia gris
suave
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
El último paso de dilución que contiene agregados
macroscópicos indica el titre de la muestra. Si la última
dilución da un resultado positivo, entonces las series de
dilución se deberán extender.
Cada grupo de resultados se deberá realizar con los
controles positivos y negativos suministrados para validar
de la prueba.
M
PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
Todos los reactivos están listos para su uso después de
alcanzar una temperatura ambiente (NOTA 1). Agitar la
suspensión de antígeno para obtener una suspensión
homogénea y transferir el contenido a la botella
dispensadora de plástico suministrada. Para ello, quitar la
tapa de la botella de plástico y colocar la aguja
dispensadora en el tapón de cierre-luer. Con cuidado
apretar la botella de plástico e insertar la punta de la aguja
en la suspensión de antígeno. Dejar que la botella se
expanda lentamente para que la suspensión de antígeno
entre en la botella (NOTA 2).
B. PRUEBA CUANTITATIVA
1. Utilizando una pipeta automática dispensar 50 µl de
salino fisiológico en los círculos del 1 al 5 de la tarjeta
de la prueba. No extender.
2. Utilizando una pipeta dispensar 50 µl de la muestra
(suero o plasma) que se va a valorar en el salino del
primer círculo. (Ver Figura. 1)
3. Utilizando el mismo final de la pipeta mezclar el salino y
la muestra moviendo la mezcla hacia arriba y abajo 5 o
6 veces y transferir 50 µl al salino en el segundo
círculo.
4. Realizar de la misma manera diluciones en serie hasta
el ultimo círculo. Quitar 50 µl del círculo final. (Ver
Figura 2)
5. Utilizando el extremo plano de una pipeta desechable
limpia para cada muestra, extender las muestras
diluídas por toda el area de cada círculo de la prueba
empezando por la dilución más alta. (No. de Círculo 5).
6. Proceder como en la prueba cualitativa a partir del
paso 4 en adelante.
SA
MATERIAL SUMINISTRADO
Suspensión de Antígeno de Carbono RPR
Control Positivo
Control Negativo
Botella Dispensadora de Plástico
Aguja Dispensadora Calibrada para suministrar 16 Hl
Tarjetas de Test Desechables
Pipeta Desechable
INTERPRETACIÓN
REACTIVO
REACTIVO DEBIL
LIMITACIONES DE LA PRUEBA
Al igual que todos los test no treponémicos, el test de sífilis
RPR puede dar resultados positivos falsos. Tales
reacciones han sido producidas por enfermedades tales
como lepra, mononucleosis infecciosa y enfermedades
autoinmunes. Por lo tanto, es importante que todas las
muestras reactivas sean confirmadas por otro test
serológico, preferiblemente un test específico del
treponema tal como FTA-ABS o TPHA. El diagnóstico final
se deberá basar en una correlación de los resultados del
test con el historial clínico del paciente.
La prueba se puede utilizar también para observar la terapia.
NOTAS
1. La sensibilidad puede verse reducida a temperaturas
bajas. Los mejores resultados se obtienen entre
23-29°C.
2. La estabilidad a largo plazo del producto se ve reducida
cuando el antígeno se conserva en la botella
dispensadora de plástico. Por lo tanto, se recomienda
que el antígeno restante se devuelva a la botella de
cristal original después del análisis del día. La botella
de plástico y el ensamblaje de la aguja se deberán
aclarar muy bien con agua destilada y secar al aire
antes de usar.
3. No volver a utilizar las tarjetas de test. Las tarjetas se
pueden secar al aire y archivar como documentos de
los resultados permanentes.
NO REACTIVO
PAG 2 DE 3
REFERENCIAS
1. McGrew, B.E. et al., Amer. J. Clin. Path., 1968; 50: 52.
2. Portnoy, J. et al., U.S. Publ. Health Report, 1962; 77:
645.
3. Stevens, R.W. & Stroebel, E., Amer. J. Clin. Path.,
1970; 53: 32.
4. Manual of Tests for Syphilis PHS Publications, No. 411,
U.S. Govt. Printing Office.
SA
Figura. 1
G
AA
M
Diluciones
Revisado 31 Julio 06 ne
Rev. 001
PAG 3 DE 3
PROTEINAS TOTALES
(TP)
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
R1. Reactivo Biuret
Diluir el contenido de una botella R1 con 400 ml de agua
bidestilada, enjuagando la botella a fondo. Es estable un
año cuando se conserva herméticamente cerrado entre +2
y +25C.
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de Proteinas Totales en
suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de
forma manual y en el analizador RX monza.
R2.
Método Biuret
MANUAL
RX MONZA
R1. Reactivo Biuret
R2. Reactivo blanco
CAL. Patrón
2 x 100 ml
1 x 100 ml
1 x 5.5 ml
PRINCIPIO
En medio alcalino, los iones cúpricos, interaccionan con los
enlaces peptídicos de las proteinas formando un complejo
coloreado.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Reactivo Biuret
Reactivo Blanco
Patrón
MUESTRA
Suero, plasma heparinizado, EDTA plasma.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
100 mmol/l
16 mmol/l
15 mmol/l
6 mmol/l
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisuero Valorado Randox Nivel 2 (No. Cat. HN1530) y Nivel
3 (No. Cat. HE 1532)
Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)
NOTAS
Si la lectura no puede llevarse a cabo a Hg 546 nm, debe
utilizarse un patrón para calcular la concentración de proteinas
totales en la muestra. La muestra blanco para sueros claros o
incoloros corresponde aproximadamente a 0,2 g de proteinas
totales/dl, y puede ser ignorada.
M
Reactivo Biuret
Hidróxido sódico
Tartrato Na-K
Yoduro potásico
Sulfato cúprico
R2. Reactivo blanco
Hidróxido sódico
Tartrato Na-K
CAL. Patrón
Proteína
100 mmol/l
16 mmol/l
Especifico para cada lote
G
R1.
Concentraciones de las soluciones
AA
Componentes
CAL. Patrón
Listo para usar. Es estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +25C.
SA
No. Cat.
TP 245
2 x 500 ml
Reactivo Blanco
Diluir el contenido de una botella R2 con 400 ml de agua
bidestilada, enjuagando la botella a fondo. Es estable un
año cuando se conserva herméticamente cerrado entre +2
y +25C.
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
Las soluciones R1 y R2 contienen hidróxido sódico que es
caústico. En caso de contacto accidental, lavar inmediatamente el
area afectada con agua abundante y buscar inmediatamente
atención médica.
CAL contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con
la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar
inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de
ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un
médico.
La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo
que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este
reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la
formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas
con hidróxido sódico al 10%.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
Cuando se analicen sueros ictéricos (5 mg bilirrubina/dl),
hemolíticos o lipémicos debe analizarse una muestra blanco
hecha con 0,02 ml de suero o plasma y 1,0 ml de la Reactivo
blanco R2. Esta debe medirse frente al agua y la absorbancia
obtenida debe restarse de la absorbancia de la muestra.
PROCEDIMIENTO
Realice una calibración de ganancia nuevo con una cubeta que
contiene ddH2O fresco. Seleccione el programa de TP en la
pantalla de ejecución de la prueba y llevar a cabo un blanco de
agua según las instrucciones.
Pipetear en la cubeta:
Reactivo blanco
S0
Agua destilada
Patrón (CAL)
Suero
R1
R2
0.01 ml
--0.5 ml
--
Patrón
S1
Muestra
Muestra
en blanco
-0.01 ml
-0.5 ml
--
--0.01 ml
0.5 ml
--
--0.01 ml
-0.5 ml
Mezclar, incubar durante 30 minutos a +20 a +25C, antes de
leer las instrucciones en la pantalla
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Recomendaciones sobre el cambio de lote del reactivo o como
se indica en los procedimientos de control de calidad, utilizando
CAL estándar proporcionado en el kit de calibración o Nivel
Randox Suero 3.
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MANUAL/ RX MONZA TP 245
PARA USO MANUAL
VALORES NORMALES EN SUERO(2)
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
Hg 546 nm (530 - 570 nm)
1 cm light path
20 to 25C
against reagent blank
Pipetear en la cubeta:
Agua destilada
Patrón (CAL)
Suero o plasma
R1
Reactivo
Blanco
Patrón
Muestra
0,02 ml
----1,0 ml
--0,02 ml
--1,0 ml
----0,02 ml
1,0 ml
Adultos
g/dl
g/l
6,4 - 8,3
64 - 83
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la
población.
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un
analizador RX monza en funcionamiento a 25ºC.
Mezclar, incubar durante 30 min entre +20 y +25C. Medir la
absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al
reactivo blanco.
LINEALIDAD
El método es lineal hasta una concentración de 13,0 g/dl
(130 g/l). Si la absorbancia de la muestra excede 0,7, diluir 1+1
con NaCl al 0,9%. Multiplicar el resultado por 2.
CÁLCULO MANUAL
1. Cuando la medición se lleva a cabo a Hg 546 nm, la
concentración de proteínas totales puede ser calculada de la
siguiente manera:
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de Proteinas Totales con un
nivel aceptable de precisión se determinó en 0,476 g/dl (4,76
g/l).
=
190 x Amuestra
Conc. de Prot. Tot
(g/dl)
=
19 x Amuestra
PRECISION
SA
Conc. de Prot. Tot
(g/l)
Análisis (Intra)
M
Amuestra
x Conc. Patrón
G
Apatrón
AA
2. Utilizando un patrón:
Conc. de Prot. Tot. =
Media (g/dl)
DE
CV(%)
n
NORMALIZACIÓN
El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en
el material de referencia NIST 927d de Proteinas Totales.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de
bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
Nivel 1
6.04
0.034
0.57
20
Nivel 2
4.48
0.024
0.53
20
Nivel 1
6.04
0.251
4.15
20
Nivel 2
4.48
0.135
3.01
20
Análisis (Inter)
Media (g/dl)
DE
CV(%)
n
CORRELACIÓN
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 0.9665 X - 0.0589
y un coeficiente de correlación r = 0,9850
Se analizaron 40 muestras de pacientes con valores de entre 4,29
y 10,40 g/dl.
REFERENCIAS
1. Weichselbaum, T.E., Amer. J. Clin. Path., 16: 40.
2. Tietz NW. Clinical Guide to Laboratory Tests. 3rd Edition. WB
Saunders Company. Philadelphia. PA pp 518-519 (1995)
INTERFERENCIA
Los siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes niveles y se
encontró que no interfieren:
Bilirrubina
Intralipid®
Triglicérido
Hemoglobina
500 mol/l (29 mg/dl)
2%
22,75 mmol/l (20,0 mg/dl)
10 g/l
Revisado 16 Sep 10 bm
Rev. 001
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TRIGLICERIDOS
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
Método GPO-PAP
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de Trigliceridos en suero y
plasma. Este producto es adecuado para un uso manual o en el
analizador RX monza.
Cat. No.
TR 210
6 x 15 ml
R1a. Tampón
R1b. Reactivo enzima
CAL. Patrón
1 x 100 ml
6 x 15 ml
1 x 5.5 ml
TR 213
10 x 50 ml
R1a. Tampón
R1b. Reactivo enzima
CAL. Patrón
10 x 50 ml
10 x 50 ml
1 x 5.5 ml
TR 212
5 x 100 ml
R1a. Tampón
R1b. Reactivo enzima
CAL. Patrón
5 x 100 ml
5 x 100 ml
1 x 5.5 ml
Glicerol + ATP
GK
Glicerol-3-fosfato + O2
lipasas
glicerol + ácidos grasos
glicerol-3-fosfato + ADP
GPO
G
Triglicéridos + H2O
AA
PRINCIPIO(2,3,4)
dihidroxiacetona fosfato + H2O2
POD
2H2O2 + 4-aminofenazona + 4-clorofenol
quinoneimina
+ HCl + 4H2O
PREPARACION DE LA MUESTRA(1)
Se puede utilizar el suero, plasma heparinizado o con EDTA.
Tomar la muestras después de 12 a 14 horas en ayunas. Tras la
separación las muestras son estables hasta 7 días cuando se
conservan entre +2 y +8C o 3 meses a -20C. Se deberán evitar
los tubos recubiertos con Glicerol cerrado al vacío, así como el
proceso repetido de congelación y descongelación.
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes
R1a. Tampón
Tampón Pipes
4-clorofenol
Magnesio-iones
R1b. Reactivo enzima
4-aminofenazona
ATP
Lipasas
Glicerol-kinasa
Glicerol-3-fosfato oxidasa
Peroxidasa
CAL. Patrón
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
R1a. Tampón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conservan entre +2 y +8C.
R1b. Reactivo enzima
Cat. No. TR 210
Reconstituir un vial de Reactivo enzima R1b con 15 ml de
Tampón R1a. Estable durante 21 días entre +2 y +8C ó 3
días entre +15 y + 25C conservar protegido de la luz.
M
METODO COLORIMETRICO(1)
Los triglicéridos se determinan tras hidrólisis enzimática con
lipasas. El indicador es una quinoneimina formada a partir de
peróxido de hidrógeno, 4-amino-fenazona y
4-clorofenol bajo la influencia catalítica de la peroxidasa.
La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo
que podría producir azidas explosivas. Cuando se deseche este
reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la
formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas
con hidróxido sódico al 10%.
SA
SIGNIFICADO CLINICO
Las medidas de Triglicéridos se utilizan en el diagnóstico y
tratamiento de enfermedades relacionadas con el metabolismo
lipídico (Hiperlipoproteinemias), diversos desordenes endocrinos
(neprosis diabetes mellitus) y obstrucción hepática (obstrucción
biliar extrahepática).
La reactivo R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel,
lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En
caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente
a un médico.
Concentraciones en la prueba
40 mmol/l, pH 7,6
5,5 mmol/l
17,5 mmol/l
0,5 mmol/l
1,0 mmol/l
≥ 150 U/ml
≥ 0,4 U/ml
≥ 1,5 U/ml
≥ 0,5 U/ml
Vedi inserto lotto-specifico
Cat. Nos. TR 213 y TR 212
Reconstituir un vial de Reactivo enzima R1b con un
pequeño volumen de Tampón R1a y después transferir
todo el contenido al frasco R1a, enjuagando el vial R1b
varias veces. Estable durante 21 días entre +2 y +8C ó 3
días entre +15 y +25C. Conservar protegido de la luz.
CAL. Patrón
Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad,
cuando se conserva entre +2 y +8C.
R1 = Reactivo enzima
R2 = Ninguno
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón
Reactivo enzima
Patrón
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)
NOTA DE PROCEDIMIENTO
Para corregir para libre de glicerol, restar 0,11 mmol/l (10 mg/dl)
al valor calculado de triglicérido.
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MANUAL/ RX MONZA TR 210
Pipetear en la Cubeta:
Reactivo Blanco S0
Patrón S1
Muestra
500 l
5 l
500 l
5 l
0.50 ml
ddH2O
Patrón
Muestra
Reagent R1
Mezclar, incubar durante 10 min a 20-25oC o 5 min a 37 º C.
Inserte en el soporte de RX Monza celda de flujo y oprima Leer
dentro de los 60 minutos.
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Recomendado con el cambio de lote de reactivos o como
inidicated por los procedimientos de control de calidad,
utilizando CAL estándar proporcionado en el kit de calibración o
de suero Randox Nivel 3.
PARA USO MANUAL
500 nm; Hg 546 nm
1 cm
20-25C ó 37C
frente a reactivo blanco
sólo es necesario un reactivo
blanco por serie
Patrón
l
1000
10
1000
Muestra
l
G
Reactivo Blanco
l
AA
Pipetear en tubos de ensayo:
Muestra
Patrón (CAL)
Reactivo (R1)
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y el la lámpara
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus
componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.
INTERFERENCIAS
El método no se ve influenciado por concentraciones de
hemoglobina de hasta 6 g/l (600 mg/dl) o por concentraciones de
bilirrubina de hasta 500 mol/l (29 mg/dl).
VALORES DE REFERENCIA(5)
Se recomiendan los siguientes límites superiores para la
determinación del factor de riesgo de hipertrigliceridemia:
Sospecha de hipertrigliceridemia a partir de:
1,71 mmol/l (150 mg/dl)
Hipertrigliceridemia incrementada a partir de:
2,29 mmol/l (200 mg/dl)
M
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medida:
NORMALIZACIÓN
Calibración Randox suero Nivel 3 es atribuible a hacer referencia
a ID-GC/MS método.
SA
PROCEDIMIENTO
Usando ddH2O realizar una nueva calibración de ganancia nueva
en el modo de cubeta. Seleccione el TRI en la pantalla de
Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las
instrucciones.
10
1000
Mezclar, incubar durante 10 minutos a 20-25C ó 5 minutos a
37C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y el patrón
(Apatrón) frente al reactivo blanco en los 60 minutos siguientes.
CÁLCULO MANUAL
1. Utilizando patrón:
Amuestra
Concentración triglicéridos =
x 2,29 = mmol/l
Apatrón
Amuestra
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geográfica de la población.
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un
analizador RX monza en funcionamiento a 25ºC.
LINEALIDAD
El análisis es lineal hasta una concentración de triglicéridos de
1172 mg/dl. Las muestras que presenten una concentración
superior, deben ser diluidas 1 + 4 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el
resultado por 5.
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de Trigliceridos con un nivel
aceptable de precisión se determinó en 22.9 mg/dl.
x 200 = mg/dl
Apatrón
2. Utilizando factor:
Longitud de onda
Hg 546 nm
500 nm
Concentración Triglicéridos
mmol/l
mg/dl
11,95
8,47
1048
743
PAGE 2 OF 3
MANUAL/ RX MONZA TR 210
PRECISION
Análisis (Intra)
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
Análisis (Inter)
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
Nivel 2
110
3.19
2.90
20
Nivel 3
259
6.42
2.48
20
Nivel 2
110
5.85
5.32
20
Nivel 3
259
9.89
3.82
20
CORRELACIÓN
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 0.902 X + 16.1
y un coeficiente de correlación r = 0,9965
G
AA
M
REFERENCIAS
1. Tietz N.W., Clinical Guide to Laboratory Tests, Second
Edition W.B. Saunders Company, Philadelphia, USA 554-556,
1990.
2. Jacobs N J, VanDemark, P.J., Arch Biochem Biophys 1960;
88: 250-255.
3. Koditschek L K, Umbreit, W W., J Bacteriol 1969; 98:
1063-1068.
4. Trinder P., Ann Clin Biochem 1969; 6: 24-27.
5. Study Group, European Atherosclerosis Society. Strategies
for the prevention of coronary heart disease: A policy
statement of the European Athersclerosis Society. (1987).
Eur. Heart. J. 8 : 77.
SA
Se analizaron 42 muestras de pacientes con valores de entre 45 y
417 mg/dl.
Revisado 16 Sep 10 bm
Rev. 001
PAGE 3 OF 3
ACIDO URICO (UA)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la
boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se
requieren al manejar reactivos de laboratorio.
Método Colorimétrico Enzimático
MANUAL
RX MONZA
La solución R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la
piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua
abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos
llamar inmediatamente a un médico.
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de Acido Urico en el suero,
plasma y orina. Este producto es adecuado para un uso
manual o en el analizador Rx Monza.
1 x 100 ml
6 x 15 ml
1 x 5.5 ml
R1a. Tampón
R1b. Reactivo Enzima
CAL Patrón
10 x 50 ml
10 x 50 ml
1 x 5.5 ml
METODO COLORIMETRICO(1)
El ácido úrico se convierte, catalizado por la uricasa, en
alantoina y peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno
formado, catalizado por la peroxidasa, oxida el ácido
3,5-dicloro-2-hidroxibencenosulfónico y la
4-aminofenazona para dar un compuesto de quinoneimina
rojo-violeta.
uricasa
Alantoina + CO2 + H2O2
G
Ac. úrico + O2 + 2H2O
2H2O2 + Ac. 3,5-dicloro-2-hidroxibencenosulfónico
+ 4-Amino-fenazona
peroxidasa
N-(4-antipiril)-3-cloro-5-sulfonato-p-benzoquinoneimina
MUESTRA
Suero, plasma heparinizado o plasma EDTA, orina.
Diluir la orina 1+10 con agua destilada.
COMPOSICION DEL REACTIVO
Componentes
R1a. Tampón
Tampón HEPES
3,5 DCHBS
R1b. Reactivo Enzima
4-Aminofenazona
Peroxidasa
Uricasa
CAL Patrón
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si
se desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado
cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas
de laboratorio.
AA
PRINCIPIO
La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías,
lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este
reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la
formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas
con hidróxido sódico al 10%.
SA
UA 233
10 x 50 ml
R1a. Tampón
R1b. Reactivo Enzima
CAL. Patrón
ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO
R1a. Tampón
Listo para su uso. Etable hasta la fecha de caducidad si
se conserva entre +2 to +8oC.
M
Cat. No.
UA 230
6 x 15 ml
Concentraciones en la prueba
50 mmol/l, pH 7,0
4 mmol/l
0,25 mmol/l
≥ 1000 U/l
≥ 200 U/l
Especifico para cada lote
R1b.
Reactivo Enzima
UA 230
Reconstituir un vial de R1b Reactivo enzimático con
15 ml de Buffer R1a. Estable 21 días entre +2 y +8°C
o 5 días entre +15 y +25°C si se almacena protegido
de la luz
UA 233
Reconstituir el contenido de un vial de R1b Reactivo
enzimático con una porción de Buffer R1a y luego
transferir todo el contenido a la botella R1a,
enjuagando el frasco R1b varias veces.
Estable por 21 días entre +2 y +8°C o 5 días entre
+15 y +25°C si se almacena protegido de la luz.
CAL. Patrón
Listo para su uso. Etable hasta la fecha de caducidad si
se conserva entre +2 to +8°C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón
Reactivo Enzima
Patrón
PAGE 1 OF 3
MANUAL/ RX MONZA UA 230
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisuero Valorado Randox Nivel 2 (No. Cat. HN1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)
CALCULO MANUAL
El uso de un patrón
Suero o plama
PROCEDIMIENTO
Usando ddH2O realizar una nueva Calibración de Ganancia en
el modo de cubeta. Seleccione UA en la pantalla Ejecutar
prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las
instrucciones.
Reactivo Blanco S0
Patrón S1
Muestra
500 l
10 l
500 l
10 l
500 l
ddH2O
Patrón
Muestra
Reactivo
x
(mg/dl)
Apatrón
Orina
Amuestra
Conc. Acido Urico =
patrón
conc.
x
patrón
conc.
x
(mol/l)
Apatrón
(mg/dl)
Apatrón
M
SA
Utilización de un factor:
520 nm; Hg 546 nm
1 cm de espesor
20-25°C / 37°C
frente a reactivo blanco
sólo se requiere un
reactivo blanco por serie
G
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura de reacción:
Medición:
(mol/l)
Apatrón
patrón
conc.
Conc. Acido Urico =
AA
PARA USO MANUAL
x
Amuestra
Mezclar, incubar durante 15 min a 20-25°C ó 5 min a
37ºC. Insertar en el soporte de flujo de célula de RX monza
y oprima Leer dentro de los 30 minutos.
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Recomendado con el cambio de lote de reactivos o como se
indica en el procedimiento de control de calidad, utilizando el
CAL estándar proporcionado en el kit o suero de calibración
Randox Nivel 3.
patrón
conc.
Amuestra
Conc. Acido Urico =
Pipetear en la cubeta:
Pipetear en tubos de ensayo:
Muestra
Patrón (CAL)
Reactivo (R1)
Amuestra
Conc. Acido Urico =
Reactivo
Blanco (l)
Muestra (l)
Patrón (l)
1000
20
1000
20
1000
Mezclar, incubar durante 15 minutos a 20-25oC o durante
exactamente 5 min a 37oC. Medir la absorbancia de la muestra
(Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al reactivo blanco
durante los 30 minutos siguientes.
Longitud de
onda:
520 nm
Hg 546 nm
Conc. Acido Urico
(mol/l)
Suero/
Plasma
2029
3112
Orina
22306
34202
Suero/
Plasma
34.1
52.3
(mg/dl)
Orina
375
575
NORMALIZACIÓN
El suero de Calibración nivel 3 tiene trazabilidad con el
material de referencia ID-GC/MS.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Ensayados Randox, Nivel 2 y
Nivel 3 para el control de calidad diario. Se deberá de analizar
dos niveles distintos de controles cada día. Los valores
obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado.
Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición
excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y el origen de
luz.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de
bacterias puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus
componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
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MANUAL/ RX MONZA UA 230
CORRELACIÓN
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
INTERFERENCIA
Hemoglobina hasta 100 mg / dl y bilirrubina hasta 20 mg / dl
no afectan la determinación. Si las mediciones no puede
llevarse a cabo a 520 nm o Hg 546 nm se debe utilizar la
norma prevista.
VALORES NORMALES
Suero2:
Hombre
Mujer
Orina3:
Y = 0.933 X + 0.16
y un coeficiente de correlación r = 0,9808
Se analizaron 40 muestras de pacientes con valores de entre
1.05 y 15.16 mg/dl.
202 - 416
3.4 - 7.0
mol/l
mg/dl
142 - 339
2.4 - 5.7
mol/l
mg/dl
1.5 - 4.5
250 - 750
mmol/24 horas
mg/24 horas
ORINA
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de Acido Urico con un
nivel aceptable de precisión se determinó en 2.06 mg/dl.
LINEALIDAD
El método es lineal para una concentración de 26,7 mg/dl.
Para la muestras con concentraciones superiores diluir 1+1
con agua destilada y repetir la prueba. Multiplicar el resultado
por 2.
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geográfica de la población.
CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE
FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA
Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante
un analizador Rx Monza en funcionamiento a 37ºC.
G
SA
AA
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de Acido Urico con un
nivel aceptable de precisión se determinó en 0,599 mg/dl.
Análisis (Intra)
LINEALIDAD
El método es lineal para una concentración de 24,5 mg/dl.
Para la muestras con concentraciones superiores diluir 1+1
con solución de NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el
resultado por 2.
PRECISION
Análisis (Intra)
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
Nivel 2
5.81
0.022
0.38
20
Nivel 3
8.97
0.049
0.55
20
Nivel 2
5.81
0.328
5.64
20
Nivel 3
8.97
0.371
4.14
20
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
M
SUERO
PRECISION
Nivel 2
14.1
0.250
1.77
20
Nivel 3
23.8
0.362
1.52
20
Nivel 2
14.1
0.557
3.95
20
Nivel 3
23.8
0.912
3.83
20
Análisis (Inter)
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
CORRELACIÓN
Este método (Y) se comparó con otro método comercial
disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión
lineal:
Y = 0,9853 X + 0,669
y un coeficiente de correlación r = 0,9879
Se analizaron 45 muestras de pacientes con valores de entre
3,28 y 21,58 mg/dl.
Análisis (Inter)
Media (mg/dl)
DE
CV(%)
n
REFERENCIAS
1. Fossati, P., Prencipe, L., and Berti, G., Clin. Chem. (1980)
26/2, 227-231 .
2. Thefeld, W. et al. Dtsch. Med. Wschr. (1973) 98, 380.
3. Krieg, M. et al. J. Clin. Chem. Clin. Biochem.(1986) 24,
863.
Revisado 16 Sep 10 ck
Rev. 001
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ACIDO URICO (UA)
ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO
El reactivo enzima y el patrón están listos para usar. Los
reactivos son estables hasta la fecha de caducidad cuando se
conservan entre +2 y +8°C, protegidos de la luz.
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de Acido Urico en el suero,
plasma y orina. Este producto es adecuado para su utilización en
Manual.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Reactivo Enzima
Patrón
Reactivo Líquido
Método Colorimétrico Enzimático
MANUAL
No. Cat.
UA 1613
4 x 100 ml
R1. Reactivo Enzima
CAL Patrón
4 x 100 ml
1 x 5.5 ml
METODO COLORIMETRICO
El ácido úrico se convierte, catalizado por la uricasa, en alantoina
y peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno formado,
catalizado por la peroxidasa, oxida el ácido
3,5-dicloro-2-hidroxibencenosulfónico y la
4-aminofenazona para dar un compuesto de quinoneimina
rojo-violeta.
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisuero Valorado Randox Nivel 2 (No. Cat. HN1530) y Nivel
3 (No. Cat. HE 1532)
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura de reacción:
Medición:
520 nm; Hg 546 nm
1 cm de espesor
20-25oC ó 37oC
frente a reactivo blanco
sólo se requiere un
reactivo blanco por serie
PRINCIPIO(1,2)
Ac. úrico + O2 + 2H2O
uricasa
Pipetear en tubos de ensayo:
alantoina + CO2 + H2O2
2H2O2 + Ac. 3,5-dicloro-2-hidroxibencenosulfónico
+ 4-Amino-fenazona
20
1000
20
1000
M
AA
Concentraciones en la prueba
200 mmol/l, pH 7,55
0,25 mmol/l
4,0 mmol/l
≥ 200 U/l
≥ 1000 U/l
Especifico para cada lote
G
Reactivo Enzima
Tampón HEPES
4-Aminofenazona
3,5 DCHBS
Uricasa
Peroxidasa
CAL Patrón
1000
Mezclar, incubar durante 15 minutos a 20-25oC o durante
exactamente 5 min a 37oC. Medir la absorbancia de la muestra
(Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al reactivo blanco durante
los 15 minutos siguientes.
COMPOSICION DEL REACTIVO
R1.
Patrón l
SA
N-(4-antipiril)-3-cloro-5-sulfonato-p-benzoquinoneimina
Componentes
Muestra l
Muestra
Patrón (CAL)
Reactivo 1
peroxidasa
MUESTRA
Suero, plasma heparinizado o plasma EDTA, orina.
Diluir la orina 1+10 con agua destilada.
Reactivo Blanco l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca.
Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren
al manejar reactivos de laboratorio.
El R1 reactivo contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel,
lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En
caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente
a un médico.
Aunque la absorbancia se puede leer en cualquier momento
durante un período de hasta 15 minutos después del tiempo
especificado de incubación, el intervalo entre la adición de la
muestra y la lectura debe de ser exactamente el mismo que para
el Patrón/Control y la Muestra.
CALCULO DE LA CONCENTRACION DE ACIDO
URICO
Suero o plama
Amuestra
Conc. Acido Urico =
x conc. del patrón
Apatrón
Orina
Amuestra
Conc. Acido Urico =
x conc. del patrón x 11
Apatrón
La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo
que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este
reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la
formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas
con hidróxido sódico al 10%.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
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MANUAL UA 1613
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Ensayados Randox, Nivel 2 y
Nivel 3 para el control de calidad diario. Se deberá de analizar
dos niveles distintos de controles cada día. Los valores obtenidos
deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores
se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y el origen de
luz.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de
bacterias puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus
componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
VALORES NORMALES(3,4)
Suero:
Hombre
Mujer
M
Orina:
202 - 416 mol/l
3,4 - 7,0 mg/dl
142 - 339 mol/l
2.4 - 5.7 mg /dl
1,5 - 4,5 mmol/24 hrs.
250 - 750 mg/24 hrs.
SA
INTERFERENCIA
Haemoglobin up to 100 mg/dl and Bilirubin up to 20 mg/dl do not
affect the determination.
AA
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geográfica de la población.
G
LINEALIDAD
El método es lineal para una concentración de 1189 µmol/l ó 20
mg/dl. Para la muestras con concentraciones superiores diluir
1+1 con solución de NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar
el resultado por 2.
SENSIBILIDAD
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
intervalo de sensibilidad ya que esto está limitado por la
sensibilidad del espectrofotómetro utilizado. Bajo las condiciones
del ensayo un cambio de 0,004 unidades de absorbancia es
equivalente a 0,98 mmol / l.
REFERENCIAS
1. Barham, D., and Trinder, P., Analyst 97, 142-145 (1972).
2. Fossati, P., Prencipe, L., and Berti, G., Clin. Chem. 26/2,
227-231 (1980).
3. Thefeld, W. et al. Dtsch. Med. Wschr. (1973) 98, 380.
4. Krieg, M. et al. J. Clin. Chem. Clin. Biochem.(1986) 24, 863.
Revisado 28 June 10 lm
Rev. 001
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PROTEINAS TOTALES
(UP)
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar
las precauciones normales necesarias, que se requieren al
manejar reactivos de laboratorio.
PARA SU USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de Proteinas Totales en
orina y C.S.F. Este producto es adecuado para un uso manual o
en el analizador RX monza.
No. Cat.
UP 1570
3 x 100 ml
R1. Reactivo colorante
CAL. Patrón
3 x 100 ml
1 x 5.5 ml
UP 1571
6 x 100 ml
R1. Reactivo colorante
CAL. Patrón
6 x 100 ml
1 x 5.5 ml
SIGNIFICADO CLINICO(1)
El análisis de la Proteína Total en la orina y el líquido cerebro
espinal es de gran valor en el diagnóstico de enfermedades
renales y del sistema nervioso central. Las elevaciones en la
proteína urinaria son muy comunes en las siguientes condiciones:
ejercicio enérgico, fiebre e hipotermia, nefrosis y nefropatía
diabética e infecciones de las vias urinarias. El análisis de la
proteína total en el líquido cerebro espinal ayuda en el
diagnóstico de condiciones tales como meningitis, tumores CNS
y hemorragia cerebral.
La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo
que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este
reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la
formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan
sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas
con hidróxido sódico al 10%.
Precaución: Estándar
El material humano del que se deriva este producto ha sido
evaluado a nivel de donante para buscar anticuerpos del virus de
inmunodeficiencia humana (VIH 1, VIH 2), antígenos de superficie
de hepatitis B (HbsAg) y anticuerpos del virus de hepatitis C
(HCV), y resultó ser NO REACTIVO. Se han llevado a cabo los
métodos aprobados por la FDA estadounidense para realizar
dichas pruebas.
No obstante, puesto que ningún método puede garantizar
plenamente que está exento de agentes infecciosos, este material
y todas las muestras de pacientes deben manipularse teniendo en
cuenta su posibilidad de transmisión de enfermedades infecciosas
y deben tratarse en consecuencia.
AA
M
PRINCIPIO(2)
El rojo de pirogalol se acompleja con proteinas en un medio
ácido que contiene iones molibdato. El complejo azul resultante
presenta una absorción máxima a 600nm. La densidad óptica a
600 nm es directamente proporcional a la concentración de
proteinas totales de las muestras.
El Patrón (CAL) contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel,
lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En
caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente
a un médico.
SA
(ORINA)
MANUAL
RX MONZA
G
EXTRACCION Y PREPARACION DE LA
MUESTRA(3,4,10)
Orina : extracción de 24 horas, las muestras de orina se pueden
conservan entre +2 y +8C hasta 24 horas o congeladas hasta 3
meses hasta que se analizen.
C.S.F.(Líquido cerebro espinal): Se deberán de analizar durante la
½ hora siguiente a su extracción
OBSERVACIONES
1. Aditivos: No es necesario el uso de conservantes.
2. La heparina puede causar interferencias si se utiliza en
muestras de LCR.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
Componentes
Concentración inicial de la Solución
R1.
Reactivo colorante
Rojo de pirogalol
Molibdato disódico
Acido succínico
Oxalato sódico
Benzoato sódico
CAL. Patrón
Proteína (seroalbúmina humana)
60 mol/l
40 mol/l
50 mmol/l
1 mmol/l
3 mmol/l
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se
desean.
Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos
según las pautes locales.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
Listo para usar. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se
conservan entre +15 y +25C.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Reactivo a color de la proteína urinaria
Urinary Protein Standard
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
1. Material de pipetaje adecuado para suministrar 10 µl,
50 µl, 1 ml y 3 mls.
2. Cronómetro y bloque de calentamiento o baño de agua para
mantener +25C ó +37C.
3. Un espectrofotómetro con una capacidad de longitud de
onda de 600 nm.
4. NaCl al 0,9% para la dilución de la muestra (si es necesario).
5. Controles de orina ensayados de Randox de nivel 2,
(N.º cat. AU 2352) y nivel 3 (N.º cat. AU 2353) o controles
de LCR de Randox de nivel 2 (CF 1500) y nivel 3 (CF 1501).
Vedi inserto lotto
specifico
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MANUAL/ RX MONZA UP 1570
Mézclelo y déjelo incubar durante exactamente 10 minutos a
20-25ºC o 5 minutos a 37ºC.
Introduzca la cubeta en el soporte de la celda de flujo del RX
Monza y pulse Read (Leer).
PARA USO MANUAL
Longitud de onda:
Temperatura:
Medición:
600 nm
25/37°C
Frente al blanco de reactivo
Pipetear en tubos de ensayo:
Método Macro
Patrón
Muestra
50 l
----3000 l
--50 l
--3000 l
----50 l
3000 l
Métro Semi-micro
Patrón
20 l
----1000 l
--20 l
--1000 l
Agua bidestilada
Patrón
Orina o C.S.F
Reactivo
Muestra
G
Reactivo blanco
AA
Agua bidestilada
Patrón
Orina o C.S.F
Reactivo
----20 l
1000 l
Mezclar, incubar durante exactamente 10 minutos a 25°C ó 5
minutos a 37°C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y
del patrón (Apatrón) frente al blanco de reactivo.
CÁLCULO MANUAL
Amuestra
Concentración de la Proteína (g/l) =
Apatrón
x Patrón
conc.
Para determinar la Proteína Urinaria de 24 horas, medir el
volumen de la orina de 24 horas en ml y analizar el contenido de
proteína en la orina (g/l) según el procedimiento. Calcular la
Proteína Urinaria de 24h utilizando la siguiente fórmula:
Proteína (g/24h) = Proteína Urinaria (g/l) x TV/1000
donde
TV
1000
CONTROL DE CALIDAD
Controles de orina ensayados de nivel 2 y nivel 3 o controles de
LCR de Randox de nivel 2 y nivel 3. Analice dos niveles distintos
de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos
deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los
valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye
error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y el origen de
luz.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias
puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
(9)
INTERFERENCIA
Como en todos los métodos de tinción, la subestimación de
proteína puede ocurrir en muestras de orina que contengan
cadenas ligeras de inmunoglobulina (p. ej. proteína de Bence
Jones). Cuando se sospeche de dichas muestras, se deberían
analizar también mediante electroforesis.
M
Reactivo blanco
CALIBRACION
Se recomienda el patrón de Proteína Urinaria Randox
(1 g/l) suministrado con este kit para la calibración cuando se
analizen muestras de orina o CSF. La dilución del patrón antes de
su uso no es necesaria. El patrón se prepara gravimétricamente
utilizando un grado de reactivo de albúmina de suero humano. Se
recomienda la recalibración para cada serie de muestras
analizadas.
SA
PROCEDIMIENTO
Seleccione UP (Arriba) en la pantalla Run Test (Realizar análisis)
y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.
Pipetee en una cubeta:
Blanco de reactivo S0
Patrón S1 Muestra
Agua redestilada 10 µl
Patrón
10 µl
Muestra
10 µl
Reactivo R1
500 µl
500 µl
500 µl
VALORES NORMALES
Normalmente se recomienda que, siempre que sea possible, cada
laboratorio establezca su propio rango de valores esperados, o
intervalo de referencia para análisis que se lleven a cabo
normalmente. Dado que tales valores pueden variar con la edad,
sexo, dieta, localidad geográfica o instrumento.
Orina
C.S.F.
0.028
0.01
0.15
- 0.141 g/24h (2)
- 0.14 g/l (6)
- 0.45 g/l (6)
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO ESPECÍFICAS
Los siguientes datos de rendimiento se obtuvieron mediante el
analizador RX monza en funcionamiento a una temperatura de
37°C.
SENSIBILIDAD
La concentración detectable mínima de proteínas totales en orina
con un nivel aceptable de precisión se determinó en 0,022 g/l.
LINEARIDAD
Este método es lineal hasta una concentración de 2,14 g/l. Las
muestras con concentraciones superiores deben diluirse 1 + 4
con una solución del 0,9% (p/v) de NaCl y deben someterse a
ensayo de nuevo multiplicando los resultados por 5.
= volumen de orina de 24h en ml
= Convierte ml/día en l/día
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MANUAL/ RX MONZA UP 1570
PRECISIÓN
Precisión intraensayo
Media (g/dl)
DE
CV (%)
n
Nivel 1
0.065
0.002
2.93
20
Nivel 2
0.275
0.002
0.67
20
Nivel 1
0.065
0.003
5.34
20
Nivel 2
0.275
0.013
4.74
20
Interensayo
Media (g/dl)
DE
CV (%)
n
CORRELACIÓN
Se comparó este método (Y) con otro método comercial
disponible y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal:
Y = 0.9911 X + 0.0029
G
AA
M
REFERENCIAS
1. Pesce, A.J., Kaplan, L.A.: Methods in Clinical Chemistry
(1987).
2. Watanabe, N., Kamei, S., Ohkubo, A., Yamanaka, M.,
Ohsawa, S., Makino, K., and Tokuda, K., Clin. Chem., 1986;
32/8: 1551.
3. Laboratory Test Handbook, Jacobs et al. ed 2.
4. Orsonneau, J., Dowet, P., Massoubre, C., Lustenberger, P.,
and Bernard, S., Clin. Chem., 1989; 35/11: 2233.
5. Henry R.J., Cannon, D.C., Winkelman, J.W., "Clinical
Chemistry, Principles & Techniques," Harper & Row, 2nd Ed.
1974.
6. Teitz, N.W., "Fundamentals of Clinical Chemistry", W.B.
Saunders Company, 1970 Philadelphia.
7. Young, D.S., et al. Clin. Chem., 21: 5. ID, 1975.
8. Friedman, R.B., et al. Clin. Chem., 26: 4. ID, 1980.
9. Tietz N.W., Textbook of Clinical Chemistry. 2nd ed. W.B.
Saunders Co., 717-723, 1994.
10. Yang J.Y., Chien T.I., Lu J.Y. and Kao J.T.
Heparin Interference in the cerebrospinal fluid Protein Assay
Measured in the Pyrogallol Red – Molybdate Complex. Clin.
Chim Acta 2009 Oct; 408 (1-2): 75-78.
SA
con un coeficiente de correlación r = 0,9998
Se analizaron 46 muestras de pacientes con valores de entre
0,04 y 1,36 g/l.
Revisado 16 Sep 10 bm
Rev. 001
PAGE 3 OF 3
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de la Urea en suero, plasma y
orina. Este producto es adecuado para uso Manual.
No. Cat.
UR 107
5 x 100 ml
R1a.
R1b.
R2.
CAL.
Ureasa
Tampón Fosfato
Hipoclorito
Patrón
5 x 1 ml
5 x 100 ml
1 x 100 ml
1 x 5.5 ml
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar
las precauciones normales requeridas para el manejo de
reactivos de laboratorio.
La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el
contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de
contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua.
En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención
médica inmediatamente.
METODO COLORIMETRICO(1,2)
El Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías,
formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen
dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para
evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas,
deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%.
PRINCIPIO
El método se basa en la siguiente reacción:ureasa
2NH3 + CO2
El Salicilato y el hipoclorito en el reactivo reaccionan con los
iones de amonio para formar un complejo verde (2.2
dicarboxilindofenol).
Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.
MUESTRA
Suero, EDTA, plasma tratado con citrato o heparinizado.
Orina diluída 1+20 en agua destilada. Multiplicar el resultado por
21.
COMPOSICION DEL REACTIVO
ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS
La Ureasa R1a, el Tampón Fosfato R1b, el Hipoclorito Sódico R2
y el Patrón están listo para su uso. Estable hasta la fecha de
caducidad cuando se conservan entre +2 y +8°C.
ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO DE
TRABAJO (R1)
Añadir 1 frasco de ureasa a R1a botella de Tampón Fosfato R1b.
Estable durante 1 mes entre +2 y +8°C protegido de la luz.
M
≥ 5000 U/l
120 mmol/l, pH 7,0
63,4 mmol/l
5,00 mmol/l
1,5 mmol/l
18 mmol/l
750 mmol/l
Vedi inserto lotto-specifico
AA
R1a. Ureasa
R1b. Tampón Fosfato
Salicilato Sódico
Nitroprúsido Sódico
EDTA
R2.
Hipoclorito Sódico
Hidróxido Sódico
CAL. Patrón
Concentraciones Iniciales
de las soluciones
G
Componentes
Los reactivos deben ser utilizados sólo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
SA
Urea + H2O
MATERIALES SUMINISTRADOS
Ureasa
Tampón Fosfato
Hipoclorito Sódico
Patrón
MATERIALES NECESARIOS PERO NO
SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
NOTAS DE PROCEDIMIENTO
Utilizar cristal libre de iones de amonio.
El Reactivo 2 se puede diluir 1+4 con agua doblemente destilada
(estable durante 6 meses entre +2 y +8°C). Después se utiliza
1 ml de Reactivo 2 en la prueba. El volumen final de la reacción
será 2 ml y la linealidad
50 mmol/l (3 g/l).
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MANUAL UR 107
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
600 nm (Hg 578 nm - Hg 623 nm)
1 cm de espesor
25°C, 37°C
frente al blanco de reactivo
REFERENCIAS
1. Fawcett, J.K., Scott, J.E., J. Clin. Path., 1960; 13: 156-159.
2. Patton, C.J., Crouch, S.R., Anal. Chem., 1977; 49: 464-469
Pipetear en los tubos de ensayo:
Patrón
Muestra
Reactivo de
trabajo (R1)
LINEARIDAD
El método es lineal hasta 33,3 mmol/l (200 mg/dl) en el suero o
plasma, y 700 mmol/l (4195 mg/dl) en la orina. Las muestras con
concentraciones más elevadas se diluirán 1 + 1 con NaCl al 0,9%
y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 2.
Blanco de
Reactivo
Patrón
Muestrea
-
10 l
-
10 l
1000 l
1000 l
1000 l
Mezclar. Incubar durante al menos 3 min a 37°C ó 5 min a 2025C.
Sodio
Hipoclorito (R2)
200 l
200 l
200 l
SA
Mezclar. Incubar durante al menos 5 min a 37C ó 10 min a
20-25C. Medir la absorbancia del patrón (Apatrón) y la
absorbancia de la muestra (Amuestra) frente al blanco de reactivo
durante las siguientes 2 horas.
Amuestra
Conc. de urea =
x
Conc. de
patrón
(mmol/l)
x
Conc. de
patrón
(mg/dl)
Apatrón
Apatrón
AA
Amuestra
Conc. de urea =
M
CALCULO
G
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
VALORES DE NORMALIDAD
Suero o plasma:
2,5 – 7,5 mmol/l (0,15 – 0,45 g/l)
Orina:
338 - 583 mmol/24h (20 - 35 g/24h)
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad
geográfica de la población.
Revisado 30 Jan 09 bm
Rev. 001
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UREA
Método Enzimático Cinético
MANUAL
RX MONZA
PARA SU USO.
Para el análisis cuantitativo in vitro de la Urea en suero, plasma y
orina. Este producto es adecuado para un uso manual o en el
analizador Rx Monza.
No. Cat.
UR 220
6 x 15 ml
R1a. Tampón
R1b. Reactivo Enzima
CAL. Patrón
1 x 100 ml
6 x 15 ml
1 x 5.5 ml
UR 221
10 x 50 ml
R1a. Tampón
R1b. Reactivo Enzima
CAL. Patrón
10 x 50 ml
10 x 50 ml
1 x 5.5 ml
UR 2364
6 x 500 ml
R1a. Tampón
R1b. Reactivo Enzima
CAL. Patrón
6 x 500 ml
6 x 500 ml
1 x 5.5 ml
TOMA Y PREPARACION DE LA MUESTRA(3,4)
Suero/Plasma:
La Heparina se puede utilizar como
anticoagulante.
No utilizar heparinato de amonio.
Orina (24 h):
Recoger la orina sin aditivos: refrigerar tras la
toma4
Se recomienda una dilución de 1+20 con NaCl
al 0,9%. Multiplicar el resultado
por 21.
La Urea es estable en el suero/plasma durante 1 día a +25oC, 3
días a +2 y +8oC, ó 3 meses a -20oC.
La Urea es estable en la orina durante 4 días cuando se conserva
entre +2 y +8oC3.
COMPOSICION DEL REACTIVO
Concentración Inicial de las Soluciones
150 mmol/l, pH 7,6
≥ 10 U/ml
≥ 2 U/ml
0,26 mmol/l
3 mmol/l
14 mmol/l
Especifico para cada lote
SA
R1a. Tampón
Tampón Tris
R1b. Reactivo Enzima
Ureasa
GLDH
NADH
Adenosina-5-difosfato
-oxoglutarato
CAL. Patrón
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar
las precauciones normales requeridas para el manejo de
reactivos de laboratorio.
AA
M
SIGNIFICADO CLINICO(1,2)
La urea se sintetiza en el hígado a partir del amoníaco, como
resultado de la desaminación de amino ácidos. Esta biosíntesis es
el mecanismo principal de eliminación del exceso de nitrógeno
en el organismo. Las mediciones obtenidas en este análisis se
utilizan en el diagnóstico de anomalías metabólicas y sobre todo
renales. Se debe destruir más del 60% del riñón antes de que los
niveles de urea en plasma aumenten significativamente. Este test
se utiliza más frecuentemente junto con el de la creatinina sérica
para niveles de proteínas elevados (descompensación cardíaca,
reducción de agua).
Componentes
G
En 1913, Marshall1 introdujo un análisis utilizando ureasa para la
determinación de urea en la sangre. Se realizaba la valoración del
amoníaco liberado a partir de la urea por medición de la ureasa.
Desde entonces se han utilizado muchas otras técnicas para
medir el amoníaco producido.
En 1965 Talke y Schubert2 crearon un procedimiento enzimático
para la determinación de urea, utilizando el sistema enzimático
asociado de ureasa - GLDH (Glutamato deshidrogenasa).
METODO UV(1,2)
La urea se hidroliza en presencia de agua y ureasa para producir
amoníaco y dióxido de carbono. El amoníaco producido en la
primera reacción se combina con -oxoglutarato y NADH en
presencia de glutamato deshidrogenasa para producir glutamato
y NAD+.
La solución R1a y el Patrón contienen azida sódica. Evitar su
ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En
caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante
agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar
atención médica inmediatamente.
El Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías,
formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen
dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para
evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas,
deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%.
Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.
Los reactivos deben ser utilizados sólo para los
propósitos indicados por personal adecuado cualificado
de laboratorio bajo condiciones apropiadas de
laboratorio.
PRINCIPIO
ureasa
Urea + H2O
2 NH3 +
CO2
GLDH
2 -oxoglutarato + 2 NH4+ + 2 NADH
2 L- glutamato +
2 NAD+ + 2 H2O
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MANUAL UR 220
ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS
R1a. Tampón
Listo para usar. Estable hasta la fecha de caducidad cuando
se conserva entre +2 y +8ºC.
R1b. Reactivo Enzima
UR 220
Reconstituir un vial de Reactivo Enzima 2 con 15 ml de
Tampón 1. Estable durante 4 semanas entre +2 y +8ºC ó 2
días entre +15 y +25ºC.
UR 221, UR 2364
Reconstituir el contenido de un vial de Reactivo Enzima 2
con una parte de Tampón 1 y transferir el contenido
entero a la botella Tampón 1, enjuagando la botella
Reactivo Enzima 2 varias veces. Estable durante 4 semanas
entre +2 y +8ºC ó 2 días entre +15 y +25ºC.
PARA USO MANUAL
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura de reacción:
Medición:
340 nm (Hg 334 nm or Hg 365 nm)
1 cm de espesor
37C
Frente al blanco de reactivo
Pipetear en la cubeta:
Reactivo
Blanco (l)
Patrón
Muestra
Reactivo
Patrón
--1000
Muestra (l)
10
-1000
-10
1000
Mezclar, leer la absorbancia inicial después de 30 segundos y
activar el temporizador de forma simultánea. Leer de nuevo
después de 1, 2 y 3 minutos.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón
Reactivo Enzima
Patrón
CALIBRACIÓN PARA EL USO MANUAL
Se recomienda para la calibración urea estándar Randox. Por
favor, consulte la hoja de lote específico.
La recalibración se debe completar para cada serie de muestras
analizadas. Consulte el apropiado manual de operador o la hoja
de aplicaciones para instrucciones específicas de calibración del
analizador. La norma está preparada gravimétricamente
utilizando urea pura disponible comercialmente.
CÁLCULO MANUAL
Para calcular la concentracion de urea utilizar la siguiente
fórmula:
AMuestra
Conc de Urea
=
x Concentración del patrón
(mmol/l or mg/dl)
APatrón
AA
M
MATERIALES NECESARIOS PERO NO
SUMINISTRADOS
Dispositivos para pipeteo adecuados para la entrega de 10 µl y
1000 µl.
Dispositivo temporizador y bloque calentador o baño de de agua
para mantener 37°C. Un espectrofotómetro con capacidad de
longitud de onda de 340/334/365 nm.
Multisera ensayada Randox Nivel 2 (Cat. N º HN 1530) y Nivel 3
(Cat. Nº HE 1532)
Suero de calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)
SA
CAL. Patrón
Listo para usar. Estable hasta la fecha de caducidad
cuando se conserva entre +2 y +8ºC.
G
NOTA
Se pueden usar todos los anticoagulantes excepto heparinato de
amonio.
PROCEDURE
Usando ddH2O realizar una nueva calibración de ganancia en el
modo flujo de célula. Seleccione UREA en la pantalla Ejecutar
prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones.
Pipetear en tubos de ensayo:
ddH2O
Patrón
Muestra
Reactivo
Reactivo Blanco S0
Patrón S1
Muestra
5 l
500 l
5 l
500 l
5 l
500 l
Mezclar y aspirar en la Rx Monza.
CALIBRACIÓN PARA RX MONZA
Se recomiendan para calibración urea estándar Randox
proporcionado en el kit o suero de Calibración Randox Nivel 3.
La norma está preparada gravimétricamente utilizando urea pura
disponible comercialmente.
Calibrar en el cambio de lote del reactivo o como se indica en
los procedimientos de control de calidad.
Para convertir las unidades convencionales de SI4 unidades de
multiplicar las unidades convencionales por 0.166.
mg/dl urea x 0.166 = mmol/l urea
eg. 20 mg/dl Urea = 20 x 0.166 = 3.32 mmol/l
NORMALIZACIÓN
Suero Calibración Randox Nivel 3 es atribuible a la urea material
de referencia NIST 909b.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel
3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de
controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán
encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se
encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se
deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los
Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.
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MANUAL UR 220
ESPECIFICIDAD/LIMITACIONES(5,6)
Se analizó la posible interferencia de la Bilirrubina hasta 20 mg/dl
y se encontró que no interfiere. Las muestras altamente
lipémicas pueden causar errores de absorbancia, por lo que la
muestra se debe de diluir. Se analizó la posible interferencia de la
hemólisis hasta 500 mg/dl y se encontró que no interfiere.
Se debe tomar especial cuidado para prevenir la contaminación
con amoníaco de las muestras que se vayan a analizar para urea.
El amoníaco existente en la atmósfera, en la habitación, en el
agua o en el reactivo podría elevar los resultados del análisis.
CORRELATION
This method (Y) was compared with another commercially
available method (X) and the following linear regression equation
obtained:
Y = 1.089 X - 0.446
and a correlation coefficient of r = 0.9935
43 patient samples were analyzed spanning the range 4.1 to 49
mmol/l.
ORINA
VALORES DE NORMALIDAD (7)
Suero/Plasma
1.7-8.3 mmol/l (10-50 mg/dl)
Orina (24 Horas)
333-583 mmol/l (20-35 g/24 h)
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango
de referencia para considerar las differencias en edad, sexo, dieta
y localización geográfica.
SUERO
AA
LINEARIDAD
El método es lineal hasta 50.3 mmol/l (302 mg/dl). Para
concentraciones superiores diluir la muestra 1+1 con NaCl al
0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 2.
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de Urea con un nivel
aceptable de precisión se ha determinado en 43.2 mmol/l.
REFERENCIAS
1. Marshall EK Jr: J Biol Chem 1913; 15:487.
2. Talke H; Schubert GE: Klin Wschr 1965; 43:174.
3. Tietz N. W., Textbook of Clinical Chemistry.
W.B. Saunders Co, 1987, 1254-1316.
4. Tietz N.N: Clinical Guide to Laboratory Tests Philadelphia.
W.B. Saunders Co, 1983 pg 494.
5. Young D.S., Pestaner, L.C., Gibbermann, V. Clin. Chem,
1975; 21: No.5.
6. Friedmann R.B, et al: Clin Chem 1980; 26 No.4.
7. Kerscher,L; Tieqenhorn,J; “Methods of enzymatic Analysis”,
H.U. Bergmeyer Ed., VCH
Verlagsgesellschaft, Weinheim, 1985 3rd Ed; Vd VII, p.453.
M
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE
FUNCIONAMIENTO
Los siguientes datos de rendimiento se obtuvieron usando un
analizador Rx Monza funcionando a una temperatura de 37 ° C
con el volumen de aspiración fijado en 500 µl.
LINEARIDAD
El método es lineal hasta 958 mmol / l (5757mg/dl). Diluir las
muestras con una concentración más alta a 1 +1 con 0,9% de
solución de NaCl y repetir prueba. Multiplique el resultado por
2.
SA
Young et al5 y Friedman et al6 dan una lista de sustancias y
condiciones que se sabe afectan a los niveles de urea. Randox no
se hace responsable de la integridad o exactitud de la
información contenida en estas listas.
G
SENSIBILIDAD
La concentración mínima detectable de Urea con un nivel
aceptable de precisión se ha determinado en 2,13 mmol/l.
PRECISION
Análisis (Intra)
Media (mmol/l)
DE
CV(%)
n
Nivel 1
6.87
0.312
4.55
20
Nivel 2
19.5
0.515
2.64
20
Nivel 1
6.87
0.37
5.41
20
Nivel 2
19.5
1.18
6.02
20
Análisis (Inter)
Media (mmol/l)
DE
CV(%)
n
Revisado 16 Sep 10 bm
Rev. 001
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