COPEG PROCEDIMIENTO PARA EL ENSAYO INMUNOENZIMÁTICO DE DOBLE ANTICUERPO (SÁNDWICH)- PREPARACIÓN DE LA MUESTRA-PUNTO CRÍTICO 1.0 OBJETIVO: Conocer los procedimientos necesarios para el Ensayo Inmunoenzimático de Doble Anticuerpo, específicamente para la Preparación de la Muestra. 2.0 ALCANCE: Este paso debe hacerse dentro de la cámara de bioseguridad tomando en cuenta todas las buenas prácticas microbiológicas. Toda muestra es considerada altamente infecciosa hasta tener un resultado negativo por ELISA o por Cultivo Celular. 3.0 PROCEDIMIENTO: Paso Descripción 3.1 Este paso está diseñado para tres (3) tipos de muestras: Líquido del Cultivo Celular, fluido vesicular y tejidos epiteliales de lesiones. El fluido del cultivo celular y el líquido vesicular son usados directamente. Los tejidos epiteliales son usados en una suspensión al 10 %. Responsable Personal de Ladives 3.2 Remueva la muestra del vial con una pinza estéril del frasco donde fue recogido, pese 1 gramo en un plato Petri. 3.3 Multiplique el peso del tejido por 9 el resultado es la cantidad de medio MEM que contenga solución alta de antibióticos que se le va adicionar al macerado. Por ejemplo muestra que pese 0.7g, se le adicione 6.3 ml. del medio. 3.4 Debe picar y macerar el tejido utilizando arena estéril, un mortero, pilón, tijera y pinzas estériles. 3.5 Transfiera la suspensión a un tubo de centrífuga estéril y centrifugue a 2.000 r.p.m x 30’ a 4°C. 3.6 Transfiera el sobrenadante que debe estar claro, a un vial limpio y estéril, el cual servirá para la prueba de ELISA que utiliza 300 ul. para cada serotipo de la prueba y 1 ml. para el aislamiento del virus. Código: PO-LAD-22 Revisión: 01 Aprobado por: Directores de Operaciones de Campo Página 1 de 2 Documento vigente de INTERNET Propiedad de COPEG, cualquier versión impresa es una copia no controlada COPEG PROCEDIMIENTO PARA EL ENSAYO INMUNOENZIMÁTICO DE DOBLE ANTICUERPO (SÁNDWICH)- PREPARACIÓN DE LA MUESTRA-PUNTO CRÍTICO Paso Descripción 3.7 PUNTO CRITICO: Cuando la muestra es poca se debe hacer inoculación en células VERO y Riñón de Cordero para aislar el virus. Dejando la prueba de ELISA por hacer en caso que se observe efecto citopático. 4.0 DOCUMENTOS DE REFERENCIA 5.0 HISTORIAL DE MODIFICACIONES FECHA 28/10/08 Código: PO-LAD-22 Responsable Personal de Ladives MODIFICACIONES Se modifica el código, antes PT-LAD-28 Revisión: 01 Aprobado por: Directores de Operaciones de Campo Página 2 de 2 Documento vigente de INTERNET Propiedad de COPEG, cualquier versión impresa es una copia no controlada