BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA CENTRO DE INVESTIGACIONES EN CIENCIAS MICROBIÓLOGICAS Obtención de la mutante en el gen oppa de yersinia pseudotuberculosis y análisis del fenotipo mutante. Tesis profesional para obtener el titulo de Maestro en Ciencias Microbiólogicas Presenta: Rodea Montealegre, Gerardo Erbey. Asesor: Martínez Morales, Luis Javier. Puebla Pue Febrero 2011 Índice I.- Índice…………………………………………………………………………...2 II.- Introducción……………………………………………………………………4 III.- Antecedentes………………………………………………………………….8 IV.- Justificación…………………………………………………………………...9 V.- Hipótesis………………………………………………………………………10 VI.- Objetivos………………………………………………………………………19 VII.- Esquema de trabajo………………………………………………………….11 VIII.- Material y Métodos………………………………………………………......12 IX.- Resultados…………………………………………………………………….21 X.- Discusión……………………………………………………………………...39 XI.- Conclusión…………………………………………………………………….44 XII.- Perspectivas…………………………………………………………………..45 XIII.- Bibliografía…………………………………………………………………….46 XIV.- Anexos………………………………………………………………………...48 Introducción El género Yersinia es miembro de la familia Enterobacteriaceae, actualmente se conocen once especies. Yersinia es un bacteria gram-negativa, anaerobia facultativa, inmóvil, fermentadora, no esporulada, cocobacilo, con diámetro de 0.5 a 0.8 μm y de un largo de 1 a 3 μm. Cuando se le tiñe con Giemsa, Wright o Wayson se observa tinción bipolar. El microorganismo crece a temperaturas de 4 a 40 ºC, aunque la temperatura óptima es de 28 a 30 ºC. El rango de pH óptimo de crecimiento es de 7.2 a 7.6, sin embargo tolera pH extremos de 5 a 9.6. El crecimiento de Y. pestis requiere de 24 a 48 horas para la formación de colonias en la mayoría de medios enriquecidos (Brubaker, 1972 y 1991). Existen 3 especies que son patógenas para el humano; Yersinia pestis, Yersinia pseudotuberculosis y Yersinia enterocolítica. Las especies patógenas del género Yersinia causan enfermedades en humanos con síntomas que pueden ir desde enteritis a sepsis y muerte, principalmente por invasión de los tejidos. En el caso de infecciones por Y. enterocolítica las manifestaciones clínicas son gastroenteritis con dolor abdominal eventualmente desencadenan diarrea y apendicitis (Kenneth et al, 2004). Y. pseudotuberculosis Es una bacteria enteropatógena que produce enfermedades del tracto digestivo que varían entre gastroenteritis simple con diarrea y vomito, caracterizadas por lesiones que varían desde necrosis local e inflamación granulomatosa en ganglios linfáticos, bazo e hígado. La infección ocurre a través del tubo digestivo en el ser humano, posiblemente por consumo de alimentos o agua contaminada. Las bacterias invaden las células M de la placa de Peyer, la colonización de los nódulos linfáticos resulta en la destrucción de las placas de Peyer. La bacteria migra a los nódulos linfáticos mesentéricos, pudiendo ser encontrada en lugares más distantes como el hígado y el bazo (Kenneth et al, 2004). 5 Características genéticas del género Yersinia El tamaño del genoma es de 4380±135 kb con un estimado de 46 a 47% en su contenido de G/C, para Y. pestis (Brubaker, 1991). La mayoría de las cepas de Yersinia contienen 3 plásmidos de un peso de; 9.5, 70-75 y 100-110 kb. Estos plásmidos son pPCP1 (activador de pesticina, coagulasa y plasminógeno), pCD1 (dependiente de calcio) y pMT1 (toxina murina) (Brubaker, 1991). El estimulón de respuesta a baja concentración de calcio (LCRS) esta codificado en el plásmido pCD1 llamado pCad o pYV, en otras cepas de Yersinia, como Y. pseudotuberculosis y Y. enterocolítica, incluyen genes reguladores de la expresión de proteínas de virulencia (virulón Yop) y un sistema de secreción tipo III, el tamaño del plásmido varia de 68 a 75 kb, pero la región LCRS esta altamente conservada (figura 1). El plásmido LCRS es necesario para la virulencia de las tres cepas patógenas de Yersinia en humano (Filipov, 1990).