_ MEDIO DE CULTIVO Bacteriología General Catálogo 1149 ___________________________________________________ MEDIO DE LOWENSTEIN JENSEN USO Para el cultivo de micobacterias, en especial de Mycobacterioum tuberculosis a partir de diversas muestras. PRINCIPIO La formulación de este medio es relativamente simple, requiere de suplementos para el soporte de crecimiento de micobacterias. La mezcla de glicerol y huevo son adicionados para espesar el medio. Estas sustancias proporcionan proteínas y ácidos grasos necesarios para el metabolismo de las micobacterias. La coagulación de la albúmina del huevo durante el proceso de esterilización proporciona un medio sólido para la inoculación de muestras. El verde de malaquita inhibe parcialmente el desarrollo bacteriano. - Dejar a temperatura ambiente antes de inocularlo. Sembrar masivamente el medio de cultivo en la superficie con pipeta Pasteur estéril. Incubar 24 – 48 h a 35ºC en posición inclinada con el tapón sin apretar. Continuar la incubación de los tubos inoculados cerrándolos herméticamente y en posición vertical. Examinar el crecimiento la primera semana, ya que entre 4 y 7 días puede haber desarrollo de las micobacterias de crecimiento rápido y después cada semana para identificar M. tuberculosis y otros cultivos de desarrollo lento. Prolongar la incubación hasta 12 semanas. Realizar frotis y teñir por la Técnica de Ziehl Neelsen. NOTA: Se pueden inocular 2 tubos, uno se incuba con luz y otro cubierto con papel estaño para diferenciar fotocromógenos y escotocromógenos En este medio puede aislarse Nocardia a partir de muestras clínicas como esputo, lavado gástrico, etc. L-Asparagina Citrato de magnesio Fécula de papa FORMULA EN GRAMOS POR 600 ml DE AGUA DESTILADA 3.6 Fosfato de potasio monobásico 0.6 Sulfato de magnesio 30.0 Verde de malaquita 2.5 0.24 0.4 PREPARACION Rehidratar 37.3 g del medio base en 600 ml de agua destilada. Adicionar 12 ml de glicerol. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar aproximadamente a 45ºC. Conservar en refrigeración de 2º a 8ºC. El medio preparado debe conservarse bien tapado hasta el momento de usarse. Preparar un litro de huevo completo obtenido asépticamente y mezclado sin formar burbujas. Mezclar el huevo y la base con suavidad. Distribuir en tubos de ensayo estériles con tapón de rosca. Colocarlos en posición inclinada, coagular y espesar el medio de 85º a 90ºC durante 45 minutos. La superficie del medio tiene un color verde claro. NOTA: Medio de Lowenstein – Jensen (Base). Catálogo 1149 Medio de Lowenstein – Jensen (Preparado). Catálogo 1149 - TM DIBICO S.A. DE C.V. MEXICO, D.F. 3 MEDIO DE CULTIVO Bacteriología General Catálogo 1149 _ ___________________________________________________ CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium kansasii Mycobacterium scrofulaceum Mycobacterium intracellulare Mycobacterium fortuitum CEPA ATCC 25177 ATCC 12478 ATCC 19981 ATCC 13950 ATCC 6841 CRECIMIENTO Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno BIBLIOGRAFIA Lowenstein. Ann. Inst. Pasteur %0 : 161, 1933 Sommers and Good 985. Manual of Microbiology, 4th ed. ASM Washington, D. C. 1985 PRESENTACION No. Cat. 1149 1149-E 1149-A Deshidratado 1000 g Deshidratado 500 g Deshidratado 450 g No. Cat. 1149-TM 1149-TMP Preparado tubo 16x125 mm individual Preparado paquete con 10 tubos DIBICO S.A. DE C.V. MEXICO, D.F. 3