ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA MALATO

ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA MALATO DESHIDROGENASA EN SEMEN
PORCINO FRESCO Y CRIOPRESERVADO CON O SIN VITAMINA E
Fuente: Satorre M, Dubois, D; Rodriguez, P; Breininger, E*. Trabajo extraído de Memorias del XI
Congreso Nacional de Producción Porcina, Salta, Argentina de 2012
Cátedra de Química Biológica, INITRA, Chorroarín 280 CABA, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de
Buenos Aires. ebreininger@fvet.uba.ar.
INTRODUCCIÓN
El uso de semen porcino congelado puede
aportar ciertas ventajas sobre el fresco o el
refrigerado, como el transporte a largas distancias
o la conservación durante períodos de tiempo
prolongados. La sensibilidad del espermatozoide
porcino al congelamiento representa el principal
inconveniente en el establecimiento de un
protocolo de congelación para esta especie. El
efecto de los antioxidantes, como la vitamina E,
protege la integridad de las membranas del
espermatozoide, conservando la habilidad de
generar energía oxidativa requerida para el
mantenimiento de la movilidad y mejorando la
calidad post-descongelamiento [1;2]. Existen
pocos estudios que demuestran a un nivel
bioquímico el perfil metabólico de las gametas
porcinas y su relación con los parámetros de
calidadespermática.Laenzimamalato
deshidrogenasa (MDH) juega un papel central en
el transporte de los equivalentes de reducción a
través de la membrana mitocondrial a causa de la
existenciadeisoenzimascitosólicasy
mitocondriales.
El objetivo de este trabajo fue estudiar la
actividad de la enzima malato deshidrogenasa en
semen porcino fresco y criopreservado con o sin el
agregado de vitamina E.
MATERIALES Y MÉTODOS
La actividad de la enzima MDH se
determinó espectrofotométricamente a 340 nm
durante 1,5 minutos, a 37 °C, en extractos
provenientes de espermatozoides frescos y
criopreservados con o sin vitamina E. Las
unidades enzimáticas se definieron como la
cantidad de enzima MDH que cataliza la reducción
de 1 µmol de NAD/minuto. Como parámetros
espermáticos se evaluaron la vitalidad por la
técnica de eosina/nigrosina, la movilidad por
microscopía óptica en platina termostatizada, la
criocapacitación por la técnica fluorescente de
clorotetraciclina y la integridad acrosomal por
microscopía DIC combinada con azul tripán. Los
resultados se expresaron como promedio ±SD y
fueron evaluados por el Análisis de Varianzas
(ANOVA). El test de Bonferroni se utilizó como
método post-ANOVA, en los casos en que se
detectaron diferencias significativas entre las
medias correspondientes a cada uno de los
tratamientos.
RESULTADOS
Aunque el proceso de criopreservación
mostró una tendencia a disminuir la actividad de
MDH y el agregado de vitamina E pareció revertir
parcialmente este efecto, el estudio de la actividad
de la enzima demostró que no existen diferencias
significativas en los valores de actividad de MDH
en semen fresco o criopreservado con o sin
vitamina E. Como se observó un significativo
“efecto macho” en los resultados de parámetros
espermáticos, los datos de actividad enzimática se
re-evaluaron realizando un análisis de covarianza
para bloquear este efecto. En función de este
análisis, se observó que la actividad de MDH en
10semenfresco(13,4±5,9UE/10
espermatozoides) mostró diferencias significativas
con los resultados de semen congelado. Sin
embargo, si bien se observó un aumento de la
actividad de MDH en aquellas muestras
congeladas en presencia de vitamina E (10,1 ± 3,7
1010UE/10 espermatozoides vs. 8,2 ± 2,2 UE/10
espermatozoides), esta diferencia no fue
significativa.
DISCUSIÓN
Si bien son necesarias nuevas experiencias
que profundicen el estudio de la actividad de MDH,
nuestros resultados demuestran que la actividad
de la MDH es superior en semen fresco, disminuye
con el proceso de criopreservación y esa
disminución es parcialmente revertida con el
agregado de vitamina E, indicando que este
antioxidante ejercería un efecto protector que
preserva la actividad de esta enzima. El hecho de
que ya en semen fresco se observó una diferencia
en la actividad de MDH en los diferentes animales,
siendo significativamente menor en el verraco que
muestra los parámetros más bajos postdescongelado, nos permite suponer que la
actividad de la MDH sería un buen “predictor” de la
congelabilidad del animal.
BIBLIOGRAFÍA
1) Breininger E, Beorlegui NB, O'Flaherty
CM, Beconi MT (2005) Alpha-tocopherol
improves biochemical and dynamic parameters
in cryopreserved boar semen. Theriogenology
63, 2126-2135.
2) Satorre MM, Breininger E, Beconi MT,
Beorlegui NB (2007) α-Tocopherol modifies
tyrosine phosphorylation and capacitation-like
state of cryopreserved porcine sperm.
Theriogenology 68, 958-965.