Seminario sobre apoptosis general

“APOPTOSIS”
“Apoptosis vs Necrosis”
Características de las células apoptóticas
• Reducción del volumen celular
• Compactación de las organelas
• Condensación de la cromatina
• Degradación
ADN
internucleosomal
del
•Exposición de fosfatidil-serinas en el
lado
externo
de
la
membrana
plasmática
• Formación de “cuerpos apoptóticos”
Extrusión de la célula apoptótica
Apoptosis en células derivadas de epitelio uterino
Línea celular RENTROP
tratadas en medio con 1% de
libre de esteroides durante 24 h
A: Control
B: RU486 10-6 M
C: R5020 10-8 M
Pecci et al,J.B.C. 1997,272:11791
Tinción con DAPI
TUNEL
Ensayo de Anexina V
C. elegans.... el principio....
Vías principales de apoptosis
en mamíferos
Hengartner et al, Nature, 2000, 407: 770
Caspasas
cysteine-dependent aspartate-specific proteases
Tabla de caspasas
Vías principales de apoptosis
en mamíferos
Hengartner et al, Nature, 2000, 407: 770
Activación por receptores de muerte
Eventos mitocondriales
Efecto de la dexametasona sobre la
liberación del citocromo C
Marcador
Mitocondrial
Control
Dexa 10-8 M
Citocromo C
Superposición
de imágenes
Proteínas de la familia de Bcl-2
I - Antiapoptóticos
II y III - Proapoptóticos
II - Multidominio
III - Solo dominio BH3
Gross et al,Genes Dev. 1999,13:1899
Miembros de la familia de Bcl-2
• Los niveles relativos de los miembros anti/proapoptóticos determinan el destino celular.
• Los miembros antiapoptóticos se localizan en
membranas. Los proapoptóticos principalmente en
citoplasma y se translocan a la mitocondria ante un
estímulo de muerte.
• Regulan la liberación desde la mitocondria de
proteínas que inducen la apoptosis.
Vías principales de apoptosis
en mamíferos
Hengartner et al, Nature, 2000, 407: 770
Translocación de GFP-Bax
Biochem. J. (2002) 367 (169–178)
(A) GFP–Bax-transfected cells, stimulated with staurosporine. (B) GFP–Bax and GFP were
immunoprecipitated and analysed for GFP–Bax, VDAC and ANT. The non-immunoprecipitated
VDAC and actin in the supernatant (SN) were also measured. (C) Shows the selectivity of the antiANT polyclonal and anti-VDAC monoclantibodies used on mitochondrial extracts.
Biochem. J. (2002) 367 (169–178)
Posibles mecanismos de acción de los
miembros de la familia de Bcl-2
La dexametasona aumenta los niveles de
Bax y disminuye los de Bcl-XL en timocitos
in vitro
Control
in vivo
Control
Dexa
Dexa
Bax
1
2,35
Bax
1
1,6
Bcl-2
Bcl-2
1
1
0,9
1,1
Bcl-XL
Bcl-XL
Bcl-XC
1
1,02
1
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Regulación por IAPs
Vías principales de apoptosis en mamíferos