“Péptidos sintéticos del GB virus C. Aplicación en el diagnóstico de

“Péptidos sintéticos del GB virus C. Aplicación en el diagnóstico de
infección y en el diseño de potenciales agentes terapéuticos contra el
VIH-1”
Numerosos trabajos asocian la coinfección del GBV-C y el VIH con una menor
progresión de la enfermedad y con una mayor supervivencia de los pacientes
una vez que el SIDA se ha desarrollado. Por ello, el estudio de la interacción
entre los virus GBV-C y VIH podría dar lugar a nuevos agentes terapéuticos
para el tratamiento del SIDA.
Debido a que actualmente no existe ningún sistema comercial para detectar
marcadores específicos de la infección por GBV-C, se ha llevado a cabo la
síntesis de moléculas peptídicas ramificadas conjugando regiones de la
proteína de envoltura E2 y de la proteína estructural NS4 del virus GBV-C, para
posteriormente estudiar su capacidad antigénica. Por otro lado, se ha estudiado
la capacidad de las moléculas sintetizadas de inhibir la fusión celular mediada
por la proteína de envoltura del VIH-1 con el fin de seleccionar potenciales
inhibidores de la entrada del virus a la célula.
En primer lugar, se ha realizado un estudio antigénico detallado de la proteína
E2 del GVB-C mediante la preparación de microarrays peptídicos con 124
secuencias lineales que cubren la totalidad de la estructura primaria de dicha
proteína, empleando sueros procedentes de pacientes infectados por el VIH-1 y
de personas voluntarias sanas. De esta manera, se han identificado dominios
potencialmente antigénicos de la proteína E2 del GBV-C.
Tras la realización de estos ensayos y del estudio del perfil de accesibilidad del
dominio potencialmente antigénico E2(7-26), se ha llevado a cabo la síntesis en
fase sólida, siguiendo una estrategia Fmoc/tBu, de péptidos lineales, cíclicos y
ramificados. Las construcciones peptídicas se han caracterizado mediante
HPLC, UPLC y espectrometría de masas (ESI y MALDI-TOF) y se han
purificado por HPLC semipreparativo.
Blood donor
HIV patient
GBV-C E2 negative
HIV patient
GBV-C E2 positive
Figura. Ejemplos de arrays imprimidos con péptidos del GBV-C e incubados
con diferentes sueros
Posteriormente, se han realizado ensayos de fusión celular con el fin de
evaluar la actividad anti-VIH-1 de las moléculas peptídicas que derivan del
dominio N-terminal de la proteína E2 del GBV-C. De este estudio pudo
concluirse que las construcciones de tipo cíclico tienen mayor tendencia hacia
una mayor inhibición de la entrada del VIH-1 en la célula.
Se ha estudiado la capacidad para detectar anticuerpos anti-GBV-C de todas
las construcciones peptídicas mediante el ensayo inmunoenzimático de ELISA
con sueros procedentes de pacientes con hepatitis C crónica, de pacientes
sometidos a hemodiálisis, infectados con VIH-1 y sueros de donantes
voluntarios sanos. Los resultados obtenidos demostraron la potencial utilidad
diagnóstica de la región E2(7-26) del GBV-C.
Por último, con un panel de sueros de pacientes infectados por el VIH-1, se ha
evaluado el valor diagnóstico de los dominios peptídicos identificados mediante
microarrays. La combinación de las secuencias peptídicas ensayadas ha
permitido establecer una reactividad del 47% en cuanto a la detección de
anticuerpos anti-E2 del GBV-C en personas infectadas por el VIH-1. Además,
esta tecnología ha permitido la miniaturización del ensayo inmunoenzimático de
ELISA y ha demostrado la utilidad de los péptidos sintéticos como potenciales
antígenos para el desarrollo de un sistema de diagnóstico de la infección del
GBV-C.