P7. FISIOLOGÍA DE LA HEMOSTASIA

P7. María Llidó Cañada
P7. FISIOLOGÍA DE LA HEMOSTASIA
1. Objetivos de la práctica
-
Conocer las pruebas para el estudio de las diferentes vías coagulación y su
significado clínico.
Adquirir los conceptos de tiempo de sangría, tiempo de protrombina, tiempo
de cefalina y tiempo de trombina.
Aprender los pasos para realizar las tres técnicas.
Procesos que alteran las pruebas de coagulación.
Determinar el tiempo de cefalina y de sangría del alumno.
2. Conceptos básicos
La hemostasia es un proceso en el que intervienen mecanismos biológicos diversos
interdependientes cuyo objetivo es evitar las hemorragias y mantener la fluidez de la
sangre.
Reacción vascular: Al producirse lesión vascular el vaso afectado se contrae.
Función plaquetaria: A continuación las plaquetas se adhieren al colágeno del
tejido subendotelial y liberan ADP que facilitará la agregación de las mismas y la
formación del trombo plaquetario.
Coagulación sanguínea: El trombo plaquetario que detiene la hemorragia
mientras es reforzado y sustituido por fibrina.
Fibrinólisis: Finalmente se inicia la cicatrización de la herida y la fibrina es
digerida por un sistema enzimático.
3. Componentes de la hemostasia
Plaquetas: Los trombocitos o plaquetas son células, de unas 3 micras de
diámetro, son irregulares, sin núcleo ni otros orgánulos. Tienen una vida media de 7 a
10 días.
Las plaquetas forman coágulos gracias a que poseen en su citoplasma
diferentes tipos de gránulos que contienen sustancias activadoras de la coagulación.
Los gránulos pueden ser gránulos lisosomales y gránulos de glucógeno,
similares a los encontrados en otras células, o gránulos característicos de las plaquetas:
los gránulos alfa y los gránulos densos o delta.
Los gránulos alfa contienen Factor de Crecimiento Plaquetario (Platelet-Derived
Growth Factor o PDGF), que desempeña un papel fundamental en la proliferación de
las células musculares lisas dentro del vaso sanguíneo. Otras substancias son el Factor
de Crecimiento del Endotelio Vascular (Vascular Endothelial Growth Factor oVEGF),
Factor de Crecimiento básico de los fibroblastos (basic Fibroblast Growth Factor o
bFGF), Factor de Crecimiento Epidérmico (EGF), entre otros. También contienen
endostatina, Factor Plaquetario 4, trombospondina-1, alfa-2 macroglobulina, inhibidor
del activador del palsminogeno, y angiostatina.
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4. Factores de la coagulación.
- Grupo I: Factores de coagulación vitamina K dependientes: (factor II, VII, IX, X):
proteína C, proteína S.
- Grupo II: Factores de coagulación sensibles a la trombina: (factor V, VIII, XII).
- Grupo III: Factores de contacto: (factor XII,XI, precalicrína y quininógeno de
alto peso molecular)
- Tromboplastina mística y ion calcio (Ca++)
Los diferentes métodos de se diferencian por el tipo de reactivo utilizado, pero en ésta
práctica sólo hemos realizado el tiempo de Quick, que es el más importante.
TIEMPO DE SANGRADO O HEMORRAGIA
Concepto
Esta técnica mide el funcionamiento de las plaquetas que son las primeras en acudir
para formar un tapón temporal.
Material
- Lanceta de punción.
- Papel de secar.
- Cronómetro.
TIEMPO DE PROTROMBINA O TIEMPO DE QUICK
Exploración de la vía extrínseca
Es el tiempo necesario para la coagulación de un plasma recalcificado en presencia de
un exceso de tromboplastina hística.
Material
- Plasma pobre en plaquetas a partir de sangre recogida en citrato sódico 0,1
mol/L en proporción 1 volumen de citrato 9 volúmenes de sangre.
- Suspensión de tromboplastina hística.
- Aparato de incubación clot 1 A.
- Imán activador del coagulo.
- Pocillos especiales para colocar muestra en
incubación.
Muestras de plasma
Máquina centrifugadora
Pipeta, tromboplastina e imanes
Aparato de incubación de Clot 1A
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Método
1. Colocar pocillos vacios en la máquina para incubar a 37ºC (porque es la
temperatura corporal y queremos simular una reacción orgánica)
2. Colocar el imán dentro del pocillo.
3. Colocar el pocillo dentro del rotador e introducir 1000λ de muestra dentro del
pocillo.
4. Resetar la máquina a 0,0.
5. Introducir 200λ de solución de tromboplastina.
6. Medir el tiempo en segundos que tarda en aparecer el coágulo.
Interpretación
Si la tromboplastina es adecuada, el valor correspondiente al plasma testigo debe
variar entre 12 y 14 segundos.
Valores de referencia:
Tiempo de protombina: 12.00” - 14.00”
Actividad de la protombina: 110% - 85%
TIEMPO DE CEFALINA O DE TROMBOPLASTINA PARCIAL
Exploración de la vía intrínseca
Material
- Plasma disuelto en citrato sódico 0,1 mol/L en proporción: 1 citrato-9 sangre.
- Cefalina.
- Cloruro cálcico CaCl2 0,025 mol/L.
- 2 tubos de hemólisis.
Interpretación
El tiempo normal oscila entre 30 y 40 segundos. Un alargamiento de más de 8
segundos respecto al testigo indica una alteración de los factores antihemofílicos VIII y
IX o de los factores pertenecientes a la vía común.
TIEMPO DE TROMBINA
Exploración de la fase final.
Consiste en añadir un exceso de trombina al plasma para conseguir una
transformación del fibrinógeno en fibrina
Material
- Plasma.
- Reactivo de trombina.
- Mezcla testigo de plasmas normales.
- tubos de hemólisis
Interpretación
El tiempo normal de coagulación son 20 segundos un alargamiento de la muestra
superior a 10 segundos sobre este tiempo orienta sobre un trastorno del fibrinógeno o
de la presencia en el plasma de un inhibidor de la trombina (heparina).
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