LIAISON® Anti-HBs (310120), Anti-HBs Plus (310190)

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LIAISON ® Anti-HBs (310120), Anti-HBs Plus (310190)
1. FINALIDAD DEL ENSAYO
El ensayo LIAISON ® Anti-HBs emplea la tecnología de la quimioluminiscencia (CLIA) en un ensayo inmunológico para la determinación cuantitativa de los anticuerpos dirigidos contra el antígeno de superficie de la hepatitis viral B (anti-HBs) en
muestras de suero o plasma humano.
El ensayo debe realizarse en el instrumento LIAISON ®.
2. SUMARIO Y EXPLICACIÓN DEL TEST
La hepatitis es una enfermedad inflamatoria con etiología tanto no infecciosa como infecciosa, bacteriana o viral, que puede
causar daños severos al hígado.
La hepatitis viral B es endémica en todo el mundo (2). La infección se propaga sobre todo por vía parenteral, por ejemplo
mediante transfusiones de sangre o hemoderivados no controlados para la presencia de HBV, o bien por el uso comunitario
de agujas entre drogadictos (1, 18). El virus de la hepatitis B (HBV) se encuentra también en prácticamente todos los líquidos biológicos humanos y puede propagarse mediante el contacto genital. El virus HBV puede ser transmitido también de
la madre al hijo por vía perinatal (17).
El período de incubación de la hepatitis viral B es de 90 días en promedio (entre 40 y 180 días). Entre los síntomas más
comunes se encuentran el agotamiento, la fiebre, la gastroenteritis y la ictericia. La infección por HBV puede causar las siguientes condiciones patológicas: (a) hepatitis ictérica; (b) hepatitis anictérica subclínica; (c) hepatitis fulminante; (d)
hepatitis crónica activa o persistente (7). Más del 90% de los pacientes adultos con hepatitis B se recupera completamente
de la enfermedad aguda, aproximadamente el 1% muere de hepatitis fulminante y aproximadamente el 6-10% se vuelve
portador crónico activo o persistente (10, 15).
El diagnóstico de la hepatitis B se ha basado en la detección de los marcadores serológicos, que ayuda a determinar la presencia de infección por HBV pasada o presente, la fase aguda o crónica de la enfermedad, la respuesta a la terapia y/o el
estado inmunitario del paciente (4).
El HBsAg es detectable en la circulación antes del comienzo de la enfermedad sintomática y durante toda la fase clínica de
la enfermedad. Después de la enfermedad clínica, el título de HBsAg comienza a disminuir paulatinamente hasta llegar a
unos valores inferiores al nivel de detección. Después de la desaparición del HBsAg del suero, aparecen los anticuerpos
anti-HBs, aunque a menudo existe un intervalo llamado el período de ventana inmunológica de la infección entre la desaparición del HBsAg y la aparición del anti-HBs (seroconversión). En el 10% de los pacientes aproximadamente, el HBsAg
persiste en el suero por toda la vida y los anticuerpos anti-HBs no aparecen; esto indica un estado de portador crónico (9).
La presencia de anticuerpos anti-HBs en el suero indica la pasada exposición de un sujeto al virus de la hepatitis B y la inmunidad duradera adquirida (13). Sin embargo, los títulos bajos de anticuerpos anti-HBs pueden indicar la falta de
inmunidad hacia futuras infecciones por HBV.
Por consiguiente, la detección de los anticuerpos anti-HBs es fundamental para determinar la completa remisión de la infección y la adquisición de la inmunidad tanto de tipo natural (debida a la infección por HBV), como en respuesta a la
vacuna. La amplia disponibilidad de las vacunas basadas en HBsAg de origen humano o recombinante (6, 14, 16) ha evidenciado la necesidad de cuantificar exactamente la respuesta de anticuerpos (3, 5): el ensayo de los anticuerpos anti-HBs
en los vacunados es esencial para determinar la duración de la protección otorgada por el ciclo de vacunación y la necesidad de inoculaciones de refuerzo (8, 11, 12). El ensayo de los anticuerpos anti-HBs también es crucial para identificar a los
individuos susceptibles a la infección por HBV en el estudio de las categorías que corren más riesgos y que hay que someter a vacunación.
3. PRINCIPIO DEL ENSAYO
El método para la determinación cuantitativa de anticuerpos anti-HBs es un ensayo directo, a dos sitios (sandwich), basado
en el principio de la quimioluminiscencia (CLIA). El antígeno HBsAg humano (subtipos ad y ay) se emplea para recubrir las
partículas magnéticas (fase sólida) y está enlazado a un derivado del isoluminol (conjugado antígeno HBs-isoluminol). Durante la primera incubación, los anticuerpos anti-HBs presentes en los calibradores, en las muestras o en los controles
enlazan la fase sólida y el antígeno HBs conjugado, formando así un sandwich. Durante la segunda incubación, el antígeno
HBs conjugado reacciona con el complejo inmune ya enlazado a la fase sólida. Después de cada incubación, se elimina el
material no enlazado mediante un ciclo de lavado.
A continuación, se añaden los reactivos starter que inducen una reacción de quimioluminiscencia. La señal luminosa, y por
lo tanto la cantidad de conjugado antígeno HBs-isoluminol, se mide con un fotomultiplicador en unidades relativas de luz
(RLU, relative light units) e indica la concentración de anticuerpos anti-HBs presente en los calibradores, en las muestras
o en los controles.
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4. MATERIALES SUMINISTRADOS
Integral de reactivos
Partículas magnéticas
(2,3 mL)
Partículas magnéticas recubiertas con HBsAg de origen humano tratado mediante calentamiento
(subtipos ad y ay equilibrados), albúmina sérica bovina, tampón fosfato, < 0,1% azida sódica.
Calibrador 1
(2,0 mL)
Suero/plasma humano que contiene niveles bajos de anticuerpos dirigidos contra el HBsAg de reactividad equilibrada para los subtipos ad y ay, EDTA, 0,2% ProClin ® 300 y conservantes. Las
concentraciones de los calibradores (mUI/mL) son calibradas contra el Segundo Estándar Internacional para Inmunoglobulinas humanas anti-antígeno de superficie del virus de la Hepatitis B (anti-HBs)
de la Organización Mundial de la Salud, OMS (2008).
Calibrador 2
(2,0 mL)
Suero/plasma humano que contiene niveles altos de anticuerpos dirigidos contra el HBsAg de reactividad equilibrada para los subtipos ad y ay, EDTA, 0,2% ProClin ® 300, conservantes y un colorante
azul inactivo. Las concentraciones de los calibradores (mUI/mL) son calibradas contra el Segundo
Estándar Internacional para Inmunoglobulinas humanas anti-antígeno de superficie del virus de la
Hepatitis B (anti-HBs) de la Organización Mundial de la Salud, OMS (2008).
Tampón G (2,4 mL)
Albúmina sérica bovina, tampón fosfato, EDTA, 0,2% ProClin ® 300, conservantes y un colorante rojo
inactivo.
Conjugado
(11 mL)
HBsAg de origen humano tratado mediante calentamiento (subtipos ad y ay equilibrados), conjugado
con un derivado del isoluminol, albúmina sérica bovina, tampón fosfato, 0,2% ProClin ® 300.
Tampón D (21 mL)
Suero bovino, albúmina sérica bovina, tampón TRIS, 0,2% ProClin ® 300, conservantes.
Diluyente de muestras
(28 mL)
Suero/plasma humano, EDTA, 0,2% ProClin ® 300, conservantes y un colorante azul inactivo (solo
para LIAISON ® Anti-HBs Plus, código 310190).
Número de ensayos
100
Todos los reactivos se suministran listos para su uso. El orden de los reactivos refleja el orden con el que se han ensamblado los contenedores en el integral de reactivos.
Materiales requeridos, pero no suministrados
Otros materiales requeridos
LIAISON ®
LIAISON ®
LIAISON ®
LIAISON ®
LIAISON ®
Controles LIAISON ® Anti-HBs (negativo y positivo)
(código 310121).
LIAISON ® Cleaning Kit (código 310990).
Module (código 319130).
Starter Kit (código 319102).
Light Check (código 319101).
Wash/System Liquid (código 319100).
Waste Bags (código 450003).
5. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Sólo para uso diagnóstico in vitro.
Todas las unidades de suero y plasma utilizadas para la fabricación de los componentes de este kit se han analizado y se
han encontrado no reactivas para la presencia de HBsAg, anti-HCV, anti-HIV-1 y anti-HIV-2, excepto la fase sólida y el conjugado, que son reactivos para HBsAg. El antígeno de superficie del virus de la hepatitis B ha sido tratado mediante
calentamiento (60°C por 10 horas) durante el proceso productivo. A pesar de ello, no es seguro que la inactivación sea
completa.
Sin embargo, visto que ningún método de análisis puede asegurar que los agentes patógenos estén ausentes, todo el material de origen humano se deberá considerar potencialmente infeccioso y manipularlo como tal.
6. NORMAS DE SEGURIDAD
No coma, beba, fume o se maquille durante la ejecución del ensayo.
No pipetee las soluciones con la boca.
Evite el contacto directo con el material potencialmente infeccioso usando batas de laboratorio, gafas de protección y guantes desechables. Lávese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo.
Evite salpicaduras o formación de aerosoles. En caso de que esto sucediera, cada gota de reactivo se debe eliminar con
una solución de hipoclorito sódico al 5% y el medio utilizado se deberá tratar como material residuo potencialmente
infeccioso.
Todas las muestras, los reactivos biológicos del kit y los materiales usados para efectuar el ensayo se deben considerar capaces de transmitir agentes infecciosos; por lo tanto los residuos se deberán eliminar de acuerdo con las reglamentaciones
de las agencias autorizadas que tengan jurisdicción sobre el laboratorio, y con las normativas de cada país. El material desechable deberá ser incinerado; los residuos líquidos deberán ser descontaminados con una solución de hipoclorito sódico
a una concentración final del 5% durante media hora como mínimo. Cualquier material que pueda ser reutilizado deberá ser
tratado en autoclave con un tratamiento de exceso (overkill) (USP 24, 2000, p. 2143). Generalmente se considera que una
hora a 121°C es un tiempo de esterilización adecuado; sin embargo se recomienda a cada usuario que verifique la eficacia
del ciclo de descontaminación mediante una validación inicial y el uso rutinario de indicadores biológicos.
Los reactivos que contienen ProClin ® 300 se clasifican como irritantes según las Directivas Europeas aplicables:
R 43 - Posibilidad de sensibilización en contacto con la piel.
S 24 - Evítese el contacto con la piel.
S 37 - Úsense guantes adecuados.
S 60 - Elimínense el producto y su recipiente como residuos peligrosos.
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7. PREPARACIÓN DEL INTEGRAL DE REACTIVOS
Antes de quitar la protección de los contenedores, es esencial agitar horizontalmente el integral de reactivos con delicadeza
y sumo cuidado. Evite la formación de espuma. Elimine la protección de los contenedores y gire hacia adelante y hacia
atrás la ruedecilla dentada situada por debajo del contenedor de las partículas magnéticas hasta que la suspensión adopte
una coloración morena. Este procedimiento da inicio a la resuspensión de las partículas magnéticas. Seque con sumo cuidado la superficie de cada pared para eliminar el líquido residual. Coloque el integral de reactivos en el área de los
reactivos del instrumento con la etiqueta de los códigos de barras situada a la izquierda y déjelo agitar durante 30 minutos
antes del uso. Durante este tiempo las partículas magnéticas serán mantenidas en agitación automáticamente para garantizar una resuspensión completa. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para cargar las muestras e iniciar
el ensayo.
8. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD DEL INTEGRAL DE REACTIVOS
En el momento de su llegada, el integral de reactivos se debe mantener en posición vertical para facilitar la resuspensión de las partículas magnéticas. Si el integral se conserva sellado y se mantiene en posición vertical, los reactivos
son estables a 2-8°C hasta la fecha de caducidad. No congele. El integral de reactivos no se debe usar pasada la fecha de
caducidad indicada en las etiquetas del kit y del integral. Después de la eliminación de la protección, el integral de reactivos
es estable durante ocho semanas si se conserva refrigerado a 2-8°C o bien en el área de los reactivos del instrumento.
9. RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
El ensayo se puede efectuar en muestras de suero o plasma humano. Se pueden utilizar anticoagulantes como el citrato,
el EDTA y la heparina. El ensayo efectuado en muestras de plasma obtenido con citrato ha demostrado una disminución de
la señal, que provoca una subestimación de los resultados (del 20% aproximadamente). Recoja la sangre mediante punción
venosa, déjela coagular y separe el suero del coágulo lo antes posible. Clarifique por filtración o centrifugación antes del
ensayo las muestras que presenten material en suspensión, opalescencia, lipemia o residuos eritrocitarios. No use muestras fuertemente hemolizadas o lipémicas, ni muestras que presenten material suspendido o evidente contaminación
microbiana. Elimine las eventuales burbujas de aire que pueda haber antes del ensayo. Si el ensayo se lleva a cabo dentro
de los siete días sucesivos a la recogida, las muestras se pueden conservar a 2-8°C. En caso contrario, se deben subdividir
en alícuotas congeladas a –20°C o a temperaturas inferiores. Si las muestras han sido descongeladas, agítelas con cuidado
antes de realizar el ensayo. Cinco muestras de diferente reactividad se han conservado durante siete días a 2-8°C y se han
sometido a cuatro ciclos de congelación y descongelación. Los resultados no han presentado diferencias significativas. El
volumen mínimo de muestra necesario es 300 μL (150 μL de muestra + 150 μL de volumen muerto).
10. CALIBRACIÓN
El ensayo de los calibradores contenidos en el integral de reactivos permite ajustar la curva predefinida memorizada por el
fabricante (curva patrón) en el instrumento como se indica en los códigos de barras que aparecen en la etiqueta del integral
de reactivos.
El instrumento se debe calibrar en triplicado cada vez que se verifique una de las siguientes condiciones:
– Se usa un nuevo lote de integral de reactivos o un nuevo lote de reactivos starter.
– La calibración anterior fue realizada más de cuatro semanas antes.
– El instrumento ha sufrido una intervención de asistencia técnica.
– Los valores de los controles están fuera de los rangos esperados.
11. PROCEDIMIENTO OPERATIVO
Para obtener unas prestaciones analíticas ideales hay que respetar estrictamente las instrucciones del manual operativo del
instrumento. Cada parámetro del test es identificado mediante el código de barras en la etiqueta del integral de reactivos.
En caso de que el lector del código de barras no funcione correctamente, se deberán introducir manualmente los datos convenientes. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para una información más detallada.
El instrumento realiza las operaciones siguientes:
1. Distribuye calibradores, controles o muestras en el módulo de reacción.
2. Distribuye el conjugado.
3. Distribuye las partículas magnéticas recubiertas.
4. Distribuye el tampón G.
5. Incuba.
6. Lava con el líquido de lavado.
7. Distribuye el conjugado en el módulo de reacción.
8. Distribuye el tampón D.
9. Incuba.
10. Lava con el líquido de lavado.
11. Añade los reactivos starter y mide la luz emitida.
12. CONTROL DE CALIDAD
El control de calidad se debe realizar (a) por lo menos una vez por cada día de trabajo, (b) cuando se usa un nuevo integral
de reactivos, (c) cuando se calibra el kit, o según las disposiciones legislativas y las reglamentaciones vigentes en cada
país.
Los controles LIAISON ® se deben analizar individualmente para evaluar las prestaciones del test. Los valores de los controles tienen que estar comprendidos entre los rangos esperados: cada vez que los valores estén fuera de los rangos
esperados habrá que volver a efectuar la calibración y probar de nuevo los controles. Si los valores experimentales de los
controles estén de nuevo fuera de los rangos predefinidos después de la calibración, habrá que repetir el test usando un
frasco de control no abierto. Si los valores de los controles estén fuera de los rangos esperados, los resultados no deben
ser notificados.
Las prestaciones de otros controles se deben evaluar para asegurar su compatibilidad con este test antes del uso. Por lo
tanto es indispensable establecer los intervalos de los valores de los materiales usados para el control de calidad.
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13. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
El instrumento calcula automáticamente las concentraciones de anticuerpos anti-HBs expresadas en mUI/mL y clasifica los
resultados. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para una información más detallada.
El valor límite que discrimina entre la presencia y la ausencia de anticuerpos anti-HBs en niveles compatibles con la inmunidad contra la infección por HBV es 10 mUI/mL. Los resultados de las muestras deben ser interpretados como sigue:
Las muestras con concentraciones de anticuerpos anti-HBs por debajo de 9 mUI/mL se deben clasificar negativas.
Las muestras con concentraciones de anticuerpos anti-HBs entre 9 y 11 mUI/mL se deben clasificar dudosas. Se recomienda repetir en duplicado el test de las muestras dudosas para confirmar el primer resultado.
Las muestras con concentraciones de anticuerpos anti-HBs iguales o por encima de 11 mUI/mL se deben clasificar
positivas.
El análisis de la distribución de los valores expresados en mUI/mL observados en una población negativa para anti-HBs indica que el 99% de la población estudiada presenta una concentración aparente de anticuerpos anti-HBs inferior a 5 mUI/
mL.
Intervalo de medición. 5-1000 mUI/mL de anticuerpos anti-HBs (LIAISON ® Anti-HBs).
5-90.000 mUI/mL de anticuerpos anti-HBs (LIAISON ® Anti-HBs Plus).
Las muestras que contengan concentraciones de anticuerpo superiores al intervalo de medición pueden ser pre-diluidas
mediante la función Dilute del instrumento y reanalizadas (los factores de dilución aconsejados son 1:50 y 1:90, solo para
LIAISON ® Anti-HBs Plus). Los resultados se multiplicarán automáticamente por el factor de dilución para obtener los niveles
de anticuerpos de las muestras no diluidas. El diluyente de muestras disponible en el integral de reactivos permite realizar
la pre-dilución 1:50 de 100 muestras o la pre-dilución 1:90 de 55 muestras.
En la práctica clínica se considera que una concentración de anticuerpos anti-HBs superior a 10 mUI/mL indica la remisión
de la infección o la respuesta a la vacunación. En ambos casos se piensa que el individuo es inmune a la infección por
HBV. Una concentración de anticuerpos menor que 10 mUI/mL indica la ausencia de inmunidad, dado que un nivel de
10 mUI/mL se considera el límite inferior de protección.
Sin embargo, la concentración de anticuerpos anti-HBs después del ciclo inicial de inmunización con la vacunación antiHBV disminuye a lo largo del tiempo. Por este motivo en la literatura (12) se aconseja suministrar las inoculaciones de refuerzo anti-HBV en base al título de anticuerpos presente en circulación, como se muestra a continuación.
Concentración de anti-HBs después del ciclo de inmunización
inferior a 10 mUI/mL
10-100 mUI/mL
100-1.000 mUI/mL
1.000-10.000 mUI/mL
superior a 10.000 mUI/mL
Tiempo aconsejado para la inoculación de refuerzo
inmediatamente
después de 3-6 meses
después de un año
después de 3,5 años
después de 7 años
Por consiguiente en la práctica clínica puede ser útil un método cuantitativo que permita determinar la concentración de anticuerpos de las muestras. Sin embargo, en la clasificación de las muestras con una concentración de 10 ± 1 mUI/mL hay
que tener en cuenta la variabilidad de la dosis debida a la imprecisión del ensayo. Por eso, estas muestras se deben evaluar con atención y considerar prudencialmente con una concentración de anticuerpos anti-HBs menor que 10 mUI/mL
cuando se espere saber mediante el test si una muestra contiene seguramente una concentración mayor o igual a 10 mUI/
mL.
14. LIMITACIONES DEL ENSAYO
Para obtener resultados fiables es necesario atenerse estrictamente a las instrucciones de utilización y poseer una adecuada técnica manual.
La contaminación bacteriana de las muestras o la inactivación mediante calentamiento pueden modificar los resultados del
análisis.
Los resultados del test se muestran de manera cuantitativa como positivos o negativos para la presencia de anticuerpos
anti-HBs. Sin embargo, el diagnóstico de una enfermedad infecciosa no se debe formular en base al resultado de un solo
ensayo, sino que éste se debe validar con otras pruebas clínicas, procedimientos diagnósticos y con la opinión del médico.
La comparación de los datos cuantitativos obtenidos con los diferentes métodos analíticos sobre las mismas muestras presenta una discreta concordancia para la mayoría de las muestras. Sin embargo muestras individuales pueden suministrar
resultados discrepantes debidos a los siguientes motivos (3):
– variabilidad antigénica de HBsAg (presencia y características de enlace de los diferentes epítopes de HBsAg, procedimiento de purificación del antígeno, proceso de inactivación de HBsAg, conjugación o fijación del antígeno en la fase
sólida)
– composición de anticuerpo del analito (especificidad para diferentes epítopes, diferente afinidad para los mismos
epítopes)
– prestaciones metodológicas del test (por ejemplo, relación con el estándar primario, principio del ensayo, sistema tampón) o método de cálculo de los resultados
– efecto matriz en las muestras diluidas y no diluidas y entre muestras y calibradores (debido por ejemplo a proteínas o
lípidos).
15. PRESTACIONES METODOLÓGICAS DEL KIT
15.1. Especificidad analítica
La especificidad analítica se define como la capacidad que tiene el test para detectar exactamente el analito ante la presencia de factores potencialmente interferentes en la matriz de la muestra (por ejemplo, anticoagulantes, hemolisis, efectos
de tratamientos de la muestra) o de reacciones cruzadas con anticuerpos potencialmente interferentes.
Interferencias. Estudios controlados sobre los factores potencialmente interferentes han demostrado que las prestaciones
del test no están influenciadas por anticoagulantes (EDTA, heparina), hemolisis (hasta 100 mg/dL de hemoglobina), lipemia
(hasta 3000 mg/dL de triglicéridos), bilirrubinemia (hasta 20 mg/dL de bilirrubina) o por los ciclos de congelación y descongelación de las muestras. El ensayo efectuado en muestras de plasma obtenido con citrato ha demostrado una disminución
de la señal, que provoca una subestimación de los resultados (del 20% aproximadamente).
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Reacciones cruzadas. Por norma, la presencia de anticuerpos potencialmente interferentes no interfiere en el ensayo. Los
anticuerpos estudiados han sido: (a) inmunoglobulinas dirigidas contra varios agentes etiológicos – como hCMV, HSV, EBV,
virus de la rubeola, HCV, HIV, HTLV-I/II, HAV, Toxoplasma gondii, Treponema pallidum – (b) anticuerpos anti-nucleares
(ANA), anticuerpos anti-ratón (HAMA, human anti-mouse antibodies), anticuerpos heterófilos, hípergammaglobulinas y factor reumatoide (inmunoglobulinas anti-Fc).
15.2. Precisión
La repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo (es decir las variaciones intra-ensayo e inter-ensayo) han sido determinadas utilizando las muestras de referencia en diferentes concentraciones de analito. La variabilidad observada no ha dado
lugar a una clasificación errónea de las muestras.
Repetibilidad
A
Número de determinaciones
Media (mUI/mL)
Desviación estándar
Coeficiente de variación (%)
B
21
8,80
0,64
7,3
Reproducibilidad
21
28,30
2,75
9,7
A
Número de determinaciones
Media (mUI/mL)
Desviación estándar
Coeficiente de variación (%)
B
20
7,10
1,12
15,8
20
24,90
3,29
13,2
C
D
21
181,00
12,31
6,8
21
549,00
36,23
6,6
C
D
20
182,00
9,28
5,1
20
557,00
27,29
4,9
15.3. Veracidad
La veracidad del ensayo ha sido controlada mediante el test de dilución.
Test de dilución. Se han analizado diluciones en serie de seis sueros de concentración elevada de anticuerpos anti-HBs
realizadas con una muestra negativa. Las concentraciones medidas de anticuerpos anti-HBs obtenidas en función de las
concentraciones esperadas han sido analizadas con la regresión lineal. Los coeficientes de correlación (r) estaban comprendidos entre 0,996 y 0,999.
Dilución
Concentración
esperada,
mUI/mL
Concentración
medida,
mUI/mL
Dilución
Concentración
esperada,
mUI/mL
no diluido
1:16
1:32
1:64
1:128
1:256
1:512
–
348,2
174,1
87,0
43,5
21,8
10,9
5.570,4
374,1
198,1
99,7
47,1
19,7
11,8
–
107,5
113,8
114,5
108,2
90,5
108,5
no diluido
1:16
1:32
1:64
1:128
1:256
–
355,4
177,7
88,9
44,4
22,2
5.686,4
367,1
149,5
75,8
28,0
15,4
–
103,3
84,1
85,3
63,0
69,3
no diluido
1:32
1:64
1:128
1:256
1:512
1:1024
–
414,9
207,5
103,7
51,9
25,9
13,0
13.276,8
529,9
260,1
121,6
70,0
30,2
14,8
–
127,7
125,4
117,2
135,0
116,5
114,1
no diluido
1:8
1:16
1:32
1:64
1:128
1:256
–
456,1
228,1
114,0
57,0
28,5
14,3
3.648,8
506,1
211,4
109,2
52,4
17,6
11,9
–
111,0
92,7
95,8
91,9
61,7
83,5
no diluido
1:32
1:64
1:128
1:256
1:512
–
245,6
122,8
61,4
30,7
15,4
7.859,2
277,1
122,9
65,2
28,5
15,3
–
112,8
100,1
106,2
92,8
99,7
no diluido
1:32
1:64
1:128
1:256
1:512
1:1024
–
361,9
180,9
90,5
45,2
22,6
11,3
11.579,2
357,4
161,4
84,3
46,3
18,8
10,7
–
98,8
89,2
93,2
102,4
83,1
94,6
%
Recuperación
Concentración
medida,
mUI/mL
%
Recuperación
15.4. Efecto arrastre
El efecto arrastre (carryover) ha sido estudiado analizando tres muestras negativas tanto antes como después de dos muestras elevadamente positivas. Los resultados obtenidos permiten demostrar que no se verifica el efecto arrastre utilizando el
instrumento LIAISON ®.
15.5. Efecto gancho con altas concentraciones
Cuando se ensayen muestras que contengan unas concentraciones de anticuerpos sumamente elevadas con un método
sandwich, se pueden obtener unos niveles aparentes de anticuerpo inferiores al nivel real por efecto gancho. Para cuantificar las muestras correctamente, las muestras que contienen niveles mayores que el del intervalo de medición deben ser
diluídas con una muestra negativa o con el diluyente de muestras de LIAISON ® Anti-HBs Plus y analizadas de nuevo. Los
resultados deben ser multiplicados por el factor de dilución para obtener los niveles de las muestras no diluídas.
El kit ha sido desarrollado de modo que concentraciones de anticuerpos anti-HBs hasta 95.000 mUI/mL proporcionen una
señal analítica siempre superior al intervalo de medición.
La presencia de un efecto gancho ha sido evaluada analizando dos muestras positivas para anticuerpos anti-HBs con alto
título. Todas las muestras han presentado unos valores de concentración por encima del intervalo de medición, como se espera de las muestras con alto título, indicando que la clasificación de las muestras es correcta.
15.6. Especificidad y sensibilidad diagnósticas
La especificidad y la sensibilidad diagnósticas han sido evaluadas analizando 1759 muestras provenientes de diversas poblaciones (donantes de sangre, sujetos nunca infectados por HBV, mujeres embarazadas, pacientes dializados, sujetos
sometidos a trasplante de órgano, sujetos con infección pasada por HBV, sujetos vacunados contra el HBV, pacientes afectados por hepatitis por HBV). Las muestras han sido examinadas con diferentes métodos de comparación y se ha empleado
la regla del consenso general y los datos clínicos y serológicos para establecer los resultados esperados. 17 muestras han
sido clasificadas dudosas con los métodos de referencia y por lo tanto han sido excluidas del análisis de los resultados.
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LIAISON® Anti-HBs (310120), Anti-HBs Plus (310190)
ES - 200/007-843, J - 11/2010
En la población presumiblemente negativa estudiada 3 muestras han resultado positivas, una muestra ha resultado dudosa
y 1182 muestras han resultado negativas en el primer test - especificidad diagnóstica: 99,66% (intervalo de confianza al
95%: 99,14-99,91%).
En la población presumiblemente negativa estudiada 4 muestras han resultado positivas y 1182 muestras han resultado negativas en el segundo test de las muestras dudosas - especificidad diagnóstica: 99,66% (intervalo de confianza al 95%:
99,14-99,91%).
En la población presumiblemente positiva estudiada ninguna muestra ha resultado negativa y 556 muestras han resultado
positivas en el segundo test de las muestras dudosas - sensibilidad diagnóstica: 100% (intervalo de confianza al 95%:
99,34-100%).
Además, se han analizado 10 paneles de seroconversión (seguimiento de la vacunación) con una recogida negativa inicial
e intervalos cortos entre las recogidas sucesivas. El test muestra una sensibilidad de detección sustancialmente equivalente
a la de los métodos de referencia.
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LIAISON® Anti-HBs (310120), Anti-HBs Plus (310190)
ES - 200/007-843, J - 11/2010
LIAISON ® Control Anti-HBs (310121)
1. Finalidad del ensayo. Los controles LIAISON ® Control Anti-HBs (310121) deben ser usados en el ensayo de quimioluminiscencia (CLIA) LIAISON ® para verificar la fiabilidad de los ensayos. Las prestaciones metodológicas de los controles
LIAISON ® no son definidas con otros ensayos o instrumentos automáticos.
2. Materiales suministrados
Control negativo (2 x 2,5 mL)
Suero/plasma humano que no contiene anticuerpos anti-HBs con tampón TRIS, 0,2%
ProClin ® 300 y conservantes.
Control positivo (2 x 2,5 mL)
Suero/plasma humano que contiene anticuerpos humanos anti-HBs, EDTA, 0,2%
ProClin ® 300 y conservantes.
Todos los reactivos se suministran listos para su uso. El intervalo de las concentraciones para cada control está impreso en
el certificado de análisis e indica los límites definidos por DiaSorin para los valores de los controles obtenidos con test fiables. Cada laboratorio es responsable de adoptar límites diferentes para cumplir exigencias específicas.
Los controles no son específicos para lote de kit. Se pueden intercambiar entre sí aunque pertenezcan a lotes diferentes.
3. Conservación y estabilidad. En el momento de su llegada, los controles se deben mantener a 2-8°C en posición vertical
para evitar el contacto de la solución con la tapa del frasco. No congele. Si los controles se conservan sellados y en posición vertical, ellos son estables a 2-8°C hasta la fecha de caducidad. Después de la apertura, los controles son estables
durante cuatro semanas si se conservan refrigerados a 2-8°C entre dos usos sucesivos. Evite la contaminación bacteriana
de los controles. Los controles no se deben usar pasada la fecha de caducidad indicada en las etiquetas de los frascos.
En el momento del uso, acondicione los controles a temperatura ambiente (20-25°C) antes de la apertura de los frascos y
déjelos en el área de las muestras del instrumento sólo durante el tiempo requerido para realizar el test de control de calidad. Después del uso, tape los frascos lo antes posible y manténgalos a 2-8°C en posición vertical. El volumen muerto es
400 μL.
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LIAISON® Control Anti-HBs (310121)
ES - 200/007-843, J - 11/2010