UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANALISIS “ANALISIS MICROBIOLOGICO DEL YOGUR NO PASTEURIZADO, EN LA ZONA 3 DE XALAPA, VER." T E S IS QUE PARA OBTENER EL TITULO DE LICENCIADO EN QUIMICA CLINICA PRESENTAN: OSCAR DOMINGUEZ ESPINOSA JUSTO FERNANDEZ GARCIA ROMAN GAZTON MORENO ALONSO MARIA DE LOURDES SANCHEZ JIMENEZ OSCAR ADRIAN ZAMALETA LARA ASESOR Q.C. CLAUDIA BELEN ORTEGA PLANELL XALAPA-EQUEZ., VER. 1999 A MIS PADRES: Por su am or y confianza depositada en mi. A MIS HERMANOS: Por su ejemplo y apoyo incondicional en todo momento. Y SODRE TODO A TI DIOS: Por e xistir y ayudarme a superar esos pequeños obstáculos. OSCAR DOMINGUEZ ESPINOSA A DIOS: Porque sin su ayuda, nada hubiera podido ioqrar. A TODA M I F A M ILIA : Por todo el apoyo y cariño incondicional que me brindaron cuando mas lo necesitaba. JU S T O F E R N A N D E Z G ARCIA A M IS PADRES: Por haberme apoyado en todo momento y confiar en mi. A M IS HERMANOS: Por brindarme su ayuda sin la cual no podría culminar este trabajo. A LULU, OSCAR D O M IN G U EZ, JU S T O Y OSCAR ZAYALETA: Por su am istad y compañerismo en \a realización de este trabajo. A DIOS: Por permitirme term inar este trabajo. R O M AN GAZTON MORENO A LO N SO A TI DIOS: Por enseñarme el camino, por tu cuidado y compañía y por hacerme quien ahora soy... A M IS PADRES: LIC. HECTOP MANUEL SANCHEZ GALINDO. Con amor, respeto y admiración a mi papi, por su apoyo a lo largo de mi vida y por impulsarme a ser mejor cada día. LIC. MA. DE LOURDES JIMENEZ PANIAGUA. Por su paciencia, dulzura, comprensión y amor y por supuesto por ser la mejor mamá del mundo estando conmigo en todo momento. A MI HERM ANO: LIC. HECTOR MANUEL SANCHEZ JIMENEZ. Por el am or que a su manera me ha sabido dar y hermano ha sido mi mejor regalo. el tenerlo como A M IS ADUELO S: Por contar siempre con su ayuda, bondad, sabiduría y buenos consejos. A TI OSCAR: Porque desde el primer semestre de la carrera hasta la impresión de esta Tesis estuviste presente con tu cariño y comprensión; y por todos los momentos compartidos... A M IS CO MPAÑEROS DE TESIS : OSCAR DOMINGUEZ, JUSTO, ROMAN Y OSCAR ZAVALETA. Por su am istad, paciencia y dedicación. A M IS F A M IL IA R E S CON AFECTO: A todas \as personas que a lo largo de mi vida han dejado algo bueno en mi. A los que están y a los que se han ido, y que permanecerán siempre como parte de mi ser. A M IS M AESTRO S: Deben sentirse satisfechos por lo que aprendimos con ellos en nuestras aulas, por cuanto a mi persona, agradezco su enseñanza y sabiduría com partida y en especiaI a los maestros: Q.C. SANDRA LUZ GONZALEZ HERRERA LE. GUADALUPE ANTONIO MUNGUIA LIMON Q.C. CIRENIA HERNANDEZ TREJO Q.C. CLAUDIA PELEN ORTEGA PANELL que participaron en mi trabajo de tesis. Estén seguros que mi m eta es d e sta ca r profesionalmente: estudiando, aplicando mis conocimientos y empeño para ser un profesionista con éxito, siguiendo su ejemplo. A LA Q.C. CLAUD IA PELEN ORTEGA PANELL: Por su valiosa orientación en forma directa en mi trabajo de Tesis. M U C H AS G R A C IA S M A. DE LOURDES S A N C H E Z JIM E N E Z . A PIOS: Por perm itir la culminación de mis estudios, por darme salud y poder realizar una de las mas grandes metas de mi vida. A M I F A M ILIA : A TI PAPA: Por m ostrarme el mejor de los caminos y darme el apoyo cuando lo necesitaba. ATI MAMA: Por e s ta r siempre a mi lado, escucharme y orientarme hacia \a mejor solución de mis problemas. A TI HERMANO: Por darme tu apoyo y confianza incondicional. A MI ESPO SA E HIJO: A t i Alina y Kevin Adrián, por darme la fuerza para seguir adelante y por ser los mas grandes motivos para seguir preparándome. OSCAR A D R IA N ZAVALETA LA R A INDICE PAGS. INTRODUCCION 1 OBJETIVOS 4 JUSTIFICACION 4 CA PITU LO I DATOS HISTORICOS DEL YOGUR 5 DEFINICION 9 CARACTERISTICAS DEL YOGUR Y SU CONSUMO EN MEXICO 9 LA LECHE COMO MATERIA PRIMA EN LA ELABORACION DE YOGUR 10 COMPOSICION DE LA LECHE EN GENERAL 10 COMPOSICION QUIMICA DE LA LECHE DE DIFERENTES ESPECIES 11 PROCESO DE ELABORACION DEL YOGUR 11 ESQUEMA DE ELABORACION DEL YOGUR 12 COMPOSICION DEL YOGUR 13 DIETETICA, BENEFICIOS Y VENTAJAS 13 C A PITU LO II MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS FACTORES QUE INFLUYEN EN EL DESARROLLO DE ASOCIACIONES MICROBIANAS EN LOS ALIMENTOS 15 16 CONTENIDO DE NUTRIENTES 17 pH, y CAPACIDAD TAMPON I7 POTENCIAL REDOX 18 ACTIVIDAD DEL AGUA 19 CONSTITUYENTES Y ESTRUCTURAS ANTIMICROBIANOS 19 FACTORES AMBIENTALES 19 ATMOSFERA GASEOSA 20 MICROBIOLOGIA DE LACTEOS 21 RIESGOS 23 CLASIFICACION DE COLIFORMES ( BERGEY ) 24 CA PITULO III ELABORACION DE LAS NORMAS OFICIALES MEXICANAS 26 CA PITULO IV ZO NA LOCALIZACION, COLONIAS PERTENECIENTES Y NIVEL SOCIOECONOMICO 33 TIPO DE ESTABLECIMIENTO Y COMERCIALIZACION 37 CA PITU LO V METODOLOGIA 39 C A PITU LO VI ANALISIS DE RESULTADOS Y GRAFICOS 43 CONCLUSIONES Y SUGERENCIAS 53 BIBLIOGRAFIA 54 INTRODUCCION La fermentación de la leche para la elaboración de diversos productos, es una práctica muy antigua, la cual se originó sin la más mínima intención al almacenar el alimento liquido, por ejemplo un producto lácteo obtenido por fermentación es el yogur, el cual se comenzó a consumir en Mesopotamia hace unos 7 000 años, y producido alrededor del mundo por lo menos hace unos 4 000 años. De esa fecha hasta nuestros días, el yogur ha tenido una aceptación importante, la cual va en aumento, al grado de que en algunos países el consumo de este producto es superior al de la leche fresca, y podemos decir que de la población mundial, un 30 % consume yogur regularmente. (1, 17) Como podemos imaginar México no es la excepción, ya que existe en muchos hogares la costumbre de elaborar leches fermentadas a nivel casero, por ejemplo: el Kéfir o mejor conocido como búlgaro y obviamente el yogur. (1) Actualmente el yogur es aceptado por los consumidores por ser un alimento delicioso y nutritivo, aumentando cada vez más su popularidad gracias a los atributos que se le han dado de ser extraordinario para prolongar la longevidad humana. Aunque aseguran que esos atributos son causa directa de la presencia o consumo de bacterias lácticas es seguramente incorrecto, ya que la longevidad y la salud son muy complejos y depende de muchos factores, sin embargo en épocas recientes, se han publicado evidencias sobre la implantación de bacterias lácticas en el tracto intestinal y los posibles beneficios de este tipo de flora para la salud. Ciertamente, y basándonos en estudios realizados, el yogur es un alimento muy nutritivo y podemos decir que contiene calcio, hierro, fósforo, vitaminas (B l, B2, B6, B12), además de proteínas, carbohidratos y un alto porcentaje de humedad Todas estas propiedades son benéficas para el consumidor, sin embargo es necesario mencionar que al mismo tiempo hacen del yogur un excelente medio de cultivo, tanto para microorganismos no patógenos, como para aquellos que si son patógenos para el ser humano, cuando los factores de temperatura y pH son favorables para su crecimiento. (14) Entre los microorganismos no patógenos que se encuentran en el yogur incluimos a las bacterias lácticas, que son utilizadas para la fermentación de la leche, las cuales son: Lactobacillus delhruecku ss bulgaricvs, y Streptococcus salivarius ss thermophilus También hay bacterias propionicas y levaduras de los géneros Candida y Saccharomyces ( 12) Dentro del grupo de los patógenos, encontramos: Mycobacterium tuberculosis, Brucella abortus. Estreptococos hemolíticos, Staphylococcus aureus, y enterobacterias nocivas, Eschenchia coli, Salmonella, Shigella, por mencionar algunas. Como vemos, hablar de yogur implica varios aspectos, pudiendo enfocar su estudio desde diferentes puntos de vista, por ejemplo; se puede estudiar su valor nutritivo, o sus características curativas, etc., pero en esta ocasión la investigación se enfoca a su análisis microbiológico, el cual es importante de acuerdo a lo antes mencionado Ahora, para comprender todo esto, se debe hablar de lo que es la pasteurización y comenzaremos diciendo que fue en 1860 cuando Luis Pasteur descubre la vida microscópica y nace asi la microbiología, además con ella el descubrimiento de algunos procesos industriales, al principio para conservar vino y posteriormente para preservar la salud humana a lo que hoy en dia conocemos como pasteurización o pasterización. Esta 3 consiste en calentar líquidos a temperatura moderada durante un tiempo definido, a menudo 60°C durante 30 minutos (5,13) La pasteurización de la leche es sin lugar a dudas la más utilizada, además, también es el comienzo de un control de calidad físico - químico que garantiza un resultado microbiológico. El objetivo de la pasteurización es la destrucción de bacterias patógenas, y el retraso de manera considerable del desarrollo de otras, como las antes mencionadas que tienen la capacidad de aprovechar los nutrientes requeridos para permanecer viables en la leche que se industrializa como leche bronca u otros productos, entre ellos quesos o yogur, elaborados a partir de leche sin pasteurizar. Con esta breve información , podemos explicar que nuestro tema de investigación es un análisis microbiológico del yogur no pasteurizado. Por último, al realizar dicha investigación, nos encontramos ante la necesidad de ubicarla en un lugar, esto con la finalidad de realizar el estudio práctico, el cual debe llevarse a cabo en condiciones óptimas de higiene, de procesamiento de muestras y de material requerido. Por tal motivo, se escogió el laboratorio 2 de la facultad de Bioanalisis, que se encuentra en la Unidad de Ciencias de la Salud de la Ciudad de Xalapa También, tomando en cuenta que no seria válido estudiar algo que no aporte ningún beneficio a la comunidad, y en este caso estamos seguros que esta investigación interesa a muchos, pues como es bien sabido Xalapa es una ciudad que cuenta con una gran cantidad de expendios de yogur, algunos de los cuales son exclusivos de este producto, pero otros no lo son y comparten espacio con otros productos, como verduras, carnes frias, refrescos, comidas, etc., que pueden influir de manera directa en la contaminación microbiológica del yogur. Es importante decir que estos establecimientos existen y aumentan cada dia, gracias a la demanda de la comunidad, que en este caso es la Xalapeña, que por razones de trabajo tiempo, y factores culturales, toma como una buena alternativa, el consumo de yogur, sin imaginar los riesgos que consigo trae Para facilitar el muestreo, se localizaron los establecimientos que venden yogur, ubicándolos correctamente de acuerdo a la zona 3 de la división que realiza el H. Ayuntamiento de la Ciudad de Xalapa, Veracruz, se obtuvieron muestras seriadas en tres ocasiones, estas muestras se analizaron para obtener resultados más confiables y lograr establecer si cumplen o no con la NOM para su consumo El interés primario de la presente investigación es aportar resultados que sirvan para conocer el grado de contaminación microbiológica del yogur no pasteurizado expendido en establecimientos fijos y móviles en la zona 3 de Xalapa, Ver, y al mismo tiempo establecer si el tipo de giro del local incide en los resultados, esto ultimo se hace apoyándonos en cuestionarios para determinar características sanitarias del local y del personal. Estos resultados se reportaran estadísticamente y en tablas de contingencia 4 OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL • Determinar si la calidad del yogur no pasteurizado esta influenciada por el giro del establecimiento. OBJETIVOS ESPECIFICOS • Detectar la presencia de bacterias patógenas en muestras de yogur no pasteurizado a analizar. • Cuantificar las UFC/ml en muestras positivas • Obtener la proporción de muestras que no cumplen con los requisitos microbiológicos para su consumo. • Comprobar si la causa de la contaminación de yogur se relaciona con productos que se expenden en el mismo establecimiento • Identificar si las muestras de yogur cumplen con el pH establecido por la SSA. • Verificar si las muestras de yogur cumplen con los requisitos establecidos por la NOM para el consumo de este producto JUSTIFICACION La realización de este estudio se llevara a cabo con la finalidad de comprobar si existe contaminación del yogur no pasteurizado expendido en establecimientos fijos y móviles de la zona 3 de Xalapa. Ver teniendo como interés principal el demostrar a través de un análisis microbiologico la presencia de bacterias patógenas en las muestras a analizar y loerar establecer causas o factores de riesgo que aumenten la contaminación del yogur por su asociación con el tipo de giro CAPITULO DATOS HISTORICOS I DEL YOGUR 6 Yogur (del turco yugurt) es una variedad de leche que se prepara reduciéndola por evaporación a la mitad de su volumen.(6) El yogur ha sido producido y comido alrededor de todo el mundo hace por lo menos 4000 años, como es de suponer varios idiomas han creado su propia palabra para nombrarlo. Su definición también depende de cada país Por ejemplo, países como Francia tienen muy precisa la definición de yogur y solamente productos con bacterias lácticas pueden ser llamados por este nombre, por otra parte, los EUA, también permiten que esa palabra sea utilizada para nombrar a productos que no contengan colonias de esas bacterias. Alrededor del yogur se entrelazan una serie de mitos acerca de su origen y de los beneficios que aporta a la salud. (17, 2 1) La aparición del yogur a principios del siglo XVI tuvo lugar en la corte del rey francés Francois I. (17) A principios de este siglo el científico ganador de un premio Nobel Ilya Metchnikoff, estudió cómo la producción de ácido láctico por bacterias del yogur pueden aumentar la longevidad humana, y gracias a este estudio el interés del yogur se extendió gradualmente alrededor de Europa y América.(18) Gracias a estas contribuciones han aparecido pequeñas fábricas en escena. Una de las primeras fue la de Issac Carasso que inició ésta producción en Barcelona España en 1919 dando origen a una de las compañías mas grandes alrededor del mundo. (17) A partir de 1950, los expendios de yogur aumentaron considerablemente por ser una fuente de salud y nutrición. Desde 1960 varias empresas se han dado a la tarea de crear nuevas variedades de yogur que han dado por resultado que el 30 % de la población mundial, consuma yogur regularmente.(17) Por miles de años el yogur ha sido disfrutado como una rica tradición ya que es considerado una comida saludable que aumenta las defensas naturales del organismo (21) Ya que no es posible estudiar los efectos del yogur en humanos acerca de la prevención del cáncer o modificando el sistema inmune, se han utilizado animales de experimentación, los cuales pueden servir para establecer qué efectos producen en ellos y posteriormente estos estudios podrán realizarse en humanos Uno de estos estudios, se llevo a cabo con conejos alimentados con una dieta heterogénea y con yogur, demostrando que desarrollan lesiones artereoescleróticas menos intensas que aquellos sometidos a dieta exclusiva de colesterol, estos animales presentan colesterolemia y presión arterial sensiblemente menor a los que se alimentan con tal dieta, además de tener un mejor sistema inmune.(18, 19 y 15) .Algunos de los beneficios que podemos mencionar del yogur son los siguientes: reduce la mala digestión e intolerancia a la lactosa, reduce incidencia y duración de algunas clases de diarrea, ayuda a restablecer y mantener saludable el tracto intestinal, es bueno para la digestión y para la salud (18, 19) También puede elaborarse yogur con la adición de leche de soya, aunque su aceptación se ve un poco disminuida por los consumidores, sin que represente una gran importancia, ya que en recompensa aporta un mayor valor nutricional y un menor costo (15) 7 De estas aportaciones a la salud y a la nutrición podemos decir que el yogur se digiere mejor que la leche y retiene una mayor cantidad de hierro , calcio, fósforo; además conserva las vitaminas B l, B2, B6 y B12, indispensables para el buen funcionamiento del sistema nervioso; por tales características, la leche es un medio en el cual pueden desarrollarse microorganismos que puedan ser de origen mamario o bien durante o después de la ordeña Estos microorganismos pueden clasificarse en patógenos y no patógenos. (12,14) Entre los no patógenos encontramos las bacterias lácticas y propionicas, asi como levaduras de los géneros Candida y Saccharomyces. (12) El primer estudio microbiològico del yogur fue realizado por Grigoroff en 1905 quien observó la presencia de 3 tipos distintos de microorganismos denominados diploestreptococcus, lactobacilos de forma cocobacilar y lactobacilos de forma bacilar La misma observación fue realizada en 1908 por Luerssen y Kuhn. Sin embargo, esto tomó importancia en 1910 con el estudio ya antes mencionado de Metchnicoff que describió la bacteria Bulgarian bacillus, que era en realidad el Thermobacterium bulgaricus, hoy en dia llamado Lactobacillus bulgaricus. En 1931 Orla-Jensen realizó una clasificación de las bacterias ácido lácticas, la cual es aceptada como un método de diferenciación de estos microorganismos, los de forma esférica se conocen como Streptococcus y los bacilos como Thermobacterium, Streptobacterium y Betabacterium, según esta clasificación las bacterias ácido lácticas son termófilas ya que crecen a temperatura de 40 a 45°C. Estos microorganismos se denominan Lactobacillus bulgaricus y Streptococcus thermophilus. Según el manual de Bergey s (1974), pertenecen a las familias Lactobacillaceae y Streptococcaceae respectivamente Según investigaciones realizadas por Bautista, Dahiya, Speck en 1966, el Lactobacillus bulgaricus estimula el crecimiento del Streptococcus thermophillus, por liberación de lisina al medio de cultivo Por su parte Bracquart, Lorien y Alais en 1978-1979, concluyeron que la deficiencia de valina, histidina, ácido glutamico, triptofano, leucina e isoleucina en el medio, disminuyen la estimulación de Streptococcus thermophilus en un 50 %, Higashio , Yoshiokan y Kiruchi incluyeron también a la metionina, sin embargo el aminoácido más importante y con mucho es la valina.(2) Por otra parte Galesloot, Hassing, y Veringa, en 1968 demostraron que el Streptococcus thermophilus en condiciones anaerobias produce un factor parecido al ácido fórmico, el cual estimula el crecimiento del Lactobacillus bulgaricus. (2) Por lo que respecta a las especies patógenas, el yogur puede mantener viables a Mycobacterium tuberculosis. Brucella abortus, Streptococcus hemolyticus. Staphylococcus aureus, Enterobacterias nocivas, E coli. Salmonella, Shigella, Pseudomonas, por mencionar algunas, que también pueden deteriorar el producto. (2,12) En esto, el pH tiene una gran importancia, pues yogures con acidez de 1% de ácido láctico, son bastante desfavorables para Salmonellas, los coliformes también se inactivan a pH bajos o por acción de las bacterias lácticas Sin embargo no se sabe si Staphylococcus en particular coagulasa positiva sobreviven en medios ácidos Por lo pronto en estudios realizados en Inglaterra no se mencionan casos de intoxicación por Staphylococcus por consumo de yogur. (2) 8 Otro estudio se llevo a cabo en Argentina en 1990 aislando cepas de este patógeno productor de toxinas del síndrome de choque toxigénico (TSST-1) en manipuladores de elementos lácticos, tanto en leche cruda como en productos fermentados. Las cepas se aislaron en agar sal y marútol y agar Baird Parker, identificándose tres cepas de S. aureus: 1) Biotipo A (Ecovar humano), 2) Biotipo B (Ecovar aviario porcino) y 3) Biotipo C (Ecovar bovino ovino). De 39 operadores analizados, en 8 se aisló S aureus; 7 cepas fueron Biotipo A y 1 Biotipo B. De las 7 cepas A, 3 produjeron TSST-1. Del número total de operadores, el 7 6 % fue portador de cepas toxigénicas (15) También se aislaron 3 cepas de S. aureus en leche cruda de las cuales 1 fue biotipo B y 2 biotipo C. Y en productos fermentados, se aislaron 13 cepas: 5 biotipo A, 1 biotipo B y 7 biotipo C. De estas ninguna produjo TSST-1. El Staphylococcus aureus, además de producir estas enterotoxinas que son responsables del síndrome de choque toxigénico, también producen enterocolitis necrotizantes e intoxicación alimentaria Uno de los últimos problemas mundiales fue una gastroenteritis transmitida a cualquier persona y que se manifestaba por nauseas, vomito, dolor abdominal, diarrea Estas enterotoxinas son termoresistentes y se involucraron directamente a la leche y a sus derivados(15) Un estudio más se realizó en Brasil, tomando en cuenta factores químicos y microbiológicos del yogur casero, se estudiaron pH, porcentaje de ácido láctico y concentración de sustancias reductoras en dos tipos de yogur casero y leche a partir de la cual se produjo el yogur Los resultados demostraron que la leche estaba contaminada por coliformes en un 100 %, mientras que el yogur no permitió la proliferación de los coliformes en la mayoría de los casos, sin embargo, vale la pena llevar a cabo pruebas de rutina de detección de coliformes ya que aunque la elevada acidez limita su crecimiento, una lenta acidificación puede permitir un desarrollo de los mismos, suficiente para alterar el producto y ocasionar riesgos para la salud Las pruebas se pueden llevar a cabo fácilmente en agar McConkey que es muy adecuado para tal determinación, pudiendo obtenerse el número de coliformes totales, por la técnica del número más probable, sembrando 3 muestras seriadas (2,15) El control de microorganismos patógenos tiene la finalidad de proteger al consumidor de algunos posibles daños causados por estos patógenos y garantizar que el producto final no sufra alteraciones microbianas durante su vida útil. (2) 9 YOGUR DEFINICION La definición del yogur depende de cada país, algunos definen a este como la leche que se prepara reduciéndola por evaporación a la mitad de su volumen. (6) Pero la mayoría de los países lo definen como una variedad de leche fermentada que se prepara con el cultivo de bacterias lácticas como el Lactobacillus delbruecki ss bulgaricus y Streptococcus salivarius ss. thermophilus en leche (1) CARACTERISTICAS DEL YOGUR Y SU CONSUMO EN MEXICO El yogur es un líquido suave y viscoso de textura firme y uniforme, con un sabor característico Este puede elaborarse a partir de leche de vaca, pero también de otras especies mencionadas más adelante (1,2) Existe una gran variedad de yogur, sobresaliendo tres tipos principales que son firme, batido y liquido, aunque podemos mencionar otras variedades como lo son el yogur deshidratado, congelado, etc., que pueden ser naturales o con saborizantes artificiales o fruta. (1) Aunque el yogur y otros alimentos similares han ocupado un papel importante en la dieta de los habitantes de Oriente medio y de Europa central, en Occidente sólo se consumía ocasionalmente hasta que empezaron a surgir teorías sobre sus beneficiosos aportes a la salud. (2) El alto grado de acidez del yogur no es del agrado de muchos consumidores, por lo que frecuentemente se le añaden saborizantes y endulzantes, como la sacarosa, miel de abeja, jarabe de maiz, etc Existe en el mercado del mundo occidental, una marcada preferencia por el yogur saborizado o con fruta sobre el yogur natural En México el tipo de yogur que más se consume es el líquido, y existen cifras reales de su consumo nacional, por ejemplo: en 1980 se consumieron 15 000 toneladas lo cual represento un 8 % del total de productos lácteos de ese año; en 1985 el consumo aumentó a 32,000 toneladas que represento el 13 % de derivados lácteos, en 1990 se consumieron 49,000 toneladas de yogur en México, esto lo podemos generalizar al mundo entero, variando el tipo de yogur preferido de acuerdo al país del que se hable. Tomando en cuenta estos datos, hoy en dia podemos decir que un 30 % de la población mundial consume yogur regularmente. El aumento de consumo de yogur por habitante y año observado en la mayoría de los países, ha sido atribuido también a la gama cada vez mayor de yogures de fruta y/o también distintos sabores, por ejemplo en un estudio del consumo en Inglaterra, del total de yogur comercializado, un 90 % son yogur con fruta y/o sabores y el 10 % restante correspondiente a yogur natural En México existe una tendencia muy parecida, y los sabores mas consumidos son fresa y durazno (1,2) Sin embargo el yogur natural y aún el saborizado presentan un sabor característico y aroma agradable, de estas características, los principales responsables pueden ser agrupados de la siguiente manera: • ácidos no volátiles: láctico, pirúvico, oxálico o succinico 10 • ácidos volátiles: fórmico, acético, propiónico o butírico. • compuestos con grupo carbonilo: acetaldehido, acetona, acetoina o diacetilo. • un grupo heterogéneo de sustancias: aminoácidos, productos de proteolisis, degradación de grasa o lactosa por efectos de temperatura. (2) De todos estos elementos mencionados el principal componente responsable del sabor del yogur es el acetaldehido, que es producido por las dos bacterias lácticas encargadas de la fermentación del yogur Esta producción de acetaldehido es superior cuando ambas se encuentran en el yogur, es decir en cultivos mixtos. (1,2) LA LECHE COMO MATERIA PRIMA EN LA ELABORACION DE YOGUR La leche es un líquido que segregan las hembras de los mamíferos, tras el nacimiento de sus crías, a través de las glándulas mamarias. (12) El ingrediente básico de la mayoría de los tipos de yogur es la leche, entera o desnatada, pero libre de antibióticos. Esta se puede concentrar por la adición de leche descremada en polvo u otros sólidos de leche como caseinatos, o por evaporación normal con un solo efecto por osmosis inversa. (1,2,3) La leche que con mucho es la mas utilizada, es la de vaca, sin embargo, también se puede utilizar la de otras especies como cabra, oveja, etc., también se puede utilizar la leche de soya. La leche es un excelente medio de cultivo para microorganismos patógenos y no patógenos, y que por no ser pasteurizada, puede ocasionar una contaminación posteriormente en el producto fermentado que en este caso es el yogur Tal contaminación puede deberse a microorganismos que contiene en forma natural, tras el padecimiento de enfermedades como la mastitis del ganado lechero, o a aquellos microorganismos que se introducen en ella como consecuencia de una manipulación deficiente, de negligencia, y/o contaminación ambiental. (2, 12) El tratamiento de esas enfermedades, puede representar problemas de crecimiento lento o nulo, debido a la presencia de antibióticos o residuos de estos en la leche Por ejemplo la penicilina ocasiona inhibición de la fermentación láctica, ya que los estreptococos lácticos son muy sensibles a este antibiótico Además residuos de antibióticos presentes en leche representa un riesgo potencial para la salud pública, por ello leches de vacas que han sido sometidas a tratamiento en las 72 horas siguientes, deben ser rechazadas (2,3) COMPOSICION DE LA LECHE EN GENERAL La leche está compuesta por una mezcla de sustancias definidas como carbohidratos que se encuentran en una concentración de 50g por litro de leche y son: lactosa y ciertos polisacaridos, glucosaminas, y oligosacaridos Contiene lípidos que se encuentran en forma de glóbulos y pueden clasificarse en: triglicéridos (96 %), fosfolípidos (0 8 a 1 % ) y sustancias ¡nsaponificables (1%). Il Proteínas, que forman el 95 % de las sustancias nitrogenadas de la leche y son: caseína B, caseína alfa, caseína K, B-lactoglobulina, alfa lactoalbúmina, inunoglobulina y seroalbúmina También contiene sustancias nitrogenadas no proteicas, como aminoácidos libres, urea, creatinina y nucleótidos, y también enzimas relacionadas a la albúmina, por ejemplo: reductasas, fosfatasas, proteasas, catalasas, lipasas y amilasas. Tienen además nutrimentos inorgánicos como: cloruros, fosfatos y citratos de calcio, magnesio, sodio y potasio. Aunque en cantidades pequeñas, la leche es uno de los alimentos que contiene una amplia variedad de vitaminas, liposolubles e hidrosolubles. (12) COMPOSICION QUIMICA DE LA LECHE DE DIFERENTES ESPECIES Para la producción de yogur se ha utilizado la leche de diferentes especies animales, las cuales presentan diferencia en su composición química. Lo que hace que existan variedades de yogur con diferencia en su calidad, por ejemplo el yogur elaborado con leches de elevado contenido en grasa (oveja, búfala o rena), es más rico y cremoso, con un excelente cuerpo en comparación con el producido de leche pobre en grasa (yegua o burra) que es menos viscoso A continuación se muestra la composición quimica de la leche de distintas especies (%). ESPECIES .Asna Búfala Camella Vaca Cabra Yegua Rena Oveja AGUA 89 0 82 1 87.1 87.6 87.0 89.0 63.3 81.6 GRASAS 2.5 80 4.2 3.8 4.5 1.5 22.5 7.5 PROTEINA 2.0 4.2 3.7 3.3 3.3 2.6 10.3 5.6 LACTOSA 6.0 4.9 4.1 4.7 4.6 6.2 2.5 44 CENIZAS 0.5 0.8 0.9 0.6 0.6 0.7 0.4 0.9 ( 2 ). PROCESO DE ELABORACION DEL YOGUR Como ya sabemos, el yogur se elabora a partir de la concentración de la leche, por adición de leche descremada en polvo u otros sólidos También puede concentrarse por evaporación. Partiendo de esto, lo primero que debe hacerse es la pasteurización, con el fin de destruir microorganismos viables en la leche y que son patógenos, y al mismo tiempo crear un medio óptimo para el cultivo de las bacterias lácticas La pasteurización reduce el potencial óxido-reducción, ya que evita la absorción del oxigeno disuelto, además de haber producción de grupos sulfhidrilos libres por la desnaturalización de las proteínas Gracias a esto el crecimiento del lactobacilo se ve favorecido. Por otra parte hay asociación de caseínas, B-lactoglobulinas y alfalactoalbumina, mejorando la viscosidad del yogur Sin embargo si el yogur no se calienta bien el resultado es un yogur de textura débil; y un sobrecalentamiento ocasiona yogur con 12 textura granular y tendencia densa, lo más recomendable en cuanto a tratamiento térmico se refiere a temperatura alta por tiempo corto, por ejemplo: 98°C por 1.5 minutos. (1) Otro paso de la elaboración es la homogeneización, que consiste en hacer una mezcla homogénea de dos líquidos inmiscibles (aceite o grasa y agua). Esta puede hacerse antes o después de la pasteurización, a una temperatura de óOX y presiones de 2.6 a 6.8 kpa (1 000 - 3 000 psi), después de esto se enfria la leche un poco y se cultivan o inoculan un 2-5 % de mezcla de las dos bacterias lácticas con una dilución 1:1, o bien puede utilizarse cultivo congelado o liofilizado directo. Posteriormente se incuba la leche unas 3 a 6 horas a 40 o 45°C para que tenga una acidez de 0.8 y 1.4 de ácido láctico con un pH entre 3.7 4.6, por último, el yogur es envasado en recipientes químicamente inertes y enfriado a una temperatura entre 5 y 7°C a la cual la fermentación se detiene y el producto se acidifica ya muy poco, con lo que puede conservarse y almacenarse por varios dias, asegurando la distribución del producto hasta el consumidor final en adecuadas condiciones. (1,2) Por otra parte se le pueden agregar saborizantes, colorantes y frutas, esto se hace obviamente antes de envasarlo. A continuación se presenta un esquema de la elaboración del yogur. Tipo firme I Adición de sabor o fruta I Envasado 1 Fermentación I Enfriado en el envasado I Refrigeración Concentración de la leche I Pasteurización y homogeneización I Inoculación--------------- Tipo batido I Fermentación I Batido I Enfriado I Adición de sabor o fruta I Envasado I Refrigeración (1) Ya elaborado, el producto final en el caso del yogur tipo firme es un producto de consistencia rígida con apariencia del gel semisólido, que puede tener saborizantes y colorantes antes de la fermentación, ó también frutas. El yogur batido tiene consistencia cremosa y uniforme y también puede contener saborizantes. colorantes y frutas 13 La formación del coagulo durante la elaboración del yogur se debe al hecho de que a un pH de 4.6 las moléculas de caseína, forman conglomerados en los cuales queda atrapado el suero. COMPOSICION DEL YOGUR La composición química de los alimentos es la mejor indicación de su potencial valor nutritivo. Y es por demás hablar de todos los componentes del yogur, ya que esto se trató al hablar de la leche como materia prima. Sin embargo algunos componentes como proteínas, lípidos, pH y ácido láctico, si experimentan cambios importantes, gracias a la acción de las bacterias lácticas encargadas de la fermentación del yogur, representando ventajas dietéticas y para la salud, que más adelante se mencionarán. (1,2) Por lo pronto se incluye una tabla que muestra la composición típica del yogur (g/100 g de producto) y sus principales características en México. NATURAL BAJO EN GRASA CON FRUTA COMPONENTE 85.7 Agua 4.6 Lactosa 1.6 Galactosa 6.2 Azucares totales 5.0 Proteínas (N x 6.48 Proteína verdadera 1.0 Grasa 3 .7 -4 .7 PH 0.8 - 1.4 % de ácido láctico EN MEXICO NATURAL 7 8 -8 4 74.9 3.3 2.0 -5 .7 17.9 4.8 48 -80 0.4 -4 .0 1.0 1 .2 -2 .0 ( 1) Una de las características más importantes del yogur, lo representa su alto grado de acidez, cada microorganismo tiene un pH máximo, minimo y óptimo para su crecimiento, las levaduras y los mohos resisten más la acidez que las bacterias. Los alimentos con pH bajos (inferior a 4.5) no son fácilmente alterados por las bacterias, y son mas estables microbiològicamente que los que tienen pH neutros. Y es gracias a su pH que se conservan como es el caso del yogur. Esta acidez se desarrolla por la formación o acumulación de ácido láctico durante su fermentación. Por el contrario pH alcalinos favorecen el desarrollo de la mayoría de las bacterias, e incluso pH próximos a su neutralidad son beneficiosos para las mismas. (2,4). DIETETICA, BENEFICIOS Y VENTAJAS Por miles de años el yogur ha sido disfrutado como una rica tradición, pues es un alimento delicioso y nutritivo, que representa una importante contribución en cualquier dieta, gracias a esto y a estudios realizados por la comunidad científica, el consumo de este producto ha aumentado considerablemente, debido a la reputación que se le ha dado de 14 brindar muchos beneficios a la salud y de aumentar la longevidad humana Por tanto, es importante evaluar su valor nutricional, sus beneficios y ventajas que representa. (21) La teoria de Metchnicoff, sostenía que el envejecimiento humano se debía a absorción intestinal y paso al torrente sanguíneo de productos nocivos de bacterias de la putrefacción, en la porción terminal del íleon y el colon. Si esto se lograba evitar, se gozaría de una vida más larga y sana Como la mayoria de las bacterias solo crecen a pH casi neutros, y las bacterias lácticas si resisten pH ácidos, además producen ácido láctico que al consumirlo en el yogur elimina flora indeseable, convirtiéndose las bacterias lácticas en la flora dominante, lo que aseguraría la ausencia de microorganismos de putrefacción, que a su vez determinaría mayor vitalidad al consumidor. (2) Estas bacterias lácticas producen también sustancias antimicrobianas, demostrando actividad contra bacterias como Pseudomonas ssp y E. coli, así como frente a salmonelas. Dentro de los beneficios que se le ha atribuido al yogur encontramos los siguientes: reduce la mala digestión e intolerancia a la lactosa, reduce la incidencia y duración de algunas clases de diarrea, ayuda a restablecer y mantener saludable el tracto intestinal, es bueno para la digestión y para la salud, aumenta las defensas naturales del organismo, ayuda a mantener niveles séricos de colesterol bajos, también puede ayudar a disminuir riesgos de contraer cáncer sobre todo colorectal. (1, 18, 19) Además de estos beneficios, el yogur representa ventajas, como el digerirse mejor que la leche, además de retener ,mayor cantidad de nutrientes, como: fósforo, calcio, hierro, ademes de vitaminas B l, B2, B6, B12, indispensables para el buen funcionamiento del sistema nervioso. (1,14) También es una mejor fuente de proteínas con mayor valor biológico que presentan una elevada digestibilidad, mejorada por la proteólisis causada por las bacterias lácticas (por enzimas de estas); otra característica importante es que las proteínas se encuentran ya coaguladas antes de su ingestión, lo que representa una ventaja por ser más suaves, facilitando el acceso de las enzimas digestivas. Por otra parte, los ácidos grasos del yogur, aportan una buena cantidad de energía al organismo. (2) El yogur se ha utilizado terapéuticamente contra tuberculosis y problemas de constipación, colitis y gastritis. (1) Existen reportes científicos de todos estos beneficios, sin embargo no siempre han sido concluyentes y solo se sustentan en ensayos in vitro o en animales de experimentación, lo cual no necesariamente refleja lo que puede ocurrir con los humanos. Otro aspecto es saber si los beneficios se obtiene exclusivamente con bacterias vivas. (1, 18, 19) 15 C A P I T U L O II M ICR O BIO LO G IA DE A LIM EN TO S 16 La microbiología de los alimentos, se ocupa de estudiar la influencia que ejercen las bacterias, hongos, protozoos y algas sobre los alimentos, modificándolos en todos los aspectos (color, olor, sabor, consistencia, etc ), en ocasiones estos efectos son favorables y en otras son completamente perjudiciales. Los alimentos suelen contaminarse a partir el agua, suelo, aire y polvo, inclusive por los propios productos alimenticios (piel de los animales, frutas, legumbres, etc ), y aún más durante su industrialización, almacenamiento, transporte y comercialización (7). Los microorganismos requieren de agua, una fuente de energia (proteínas, carbohidratos, ácidos grasos), sales, minerales y, eventualmente, de oxigeno y/o factores de crecimiento, para su desarrollo. Los alimentos son los medios de cultivo ideales para el desarrollo de los microorganismos, por contener grandes propiedades nutritivas. (7) No obstante, debido a las características fisico-quimicas de algunas bacterias, el desarrollo microbiano se ve afectado por uno u otros elementos que componen el medio, es decir, por la naturaleza de la fuente de energia y de carbono, agua, minerales, factores de crecimiento, antioxidantes, ácidos orgánicos, pH, el potencial de oxido-reducción. Por otra parte dicho crecimiento bacteriano se va afectado también por parámetros que a menudo forman parte del ambiente del producto, como son el oxigeno del aire, el contenido de un determinado gas (C 02, N2), la temperatura, las radiaciones electromagnéticas, la humedad relativa o la presencia de ciertos inhibidores de origen exógeno. (7) Los microorganismos quimioorganótrofos son aquellos que contaminan los alimentos y utilizan preferentemente como fuente de energia los carbohidratos más que los ácidos grasos o sustancias nitrogenadas. Los protótrofos pueden desarrollarse a partir de una fuente de nitrógeno mineral y de un carbohidrato, como es el caso de algunas cepas silvestres de E. coli, Bacillus subtilis o varios aminoácidos y eventualmente de vitaminas o bases nitrogenadas, como el caso de Lactobacillus, Streptococcus, etc (7). A continuación hablaremos un poco sobre los factores que influyen en el crecimiento microbiano en los alimentos, divididos en 4 grupos de acuerdo con lo propuesto en una revisión elemental de Mossel e Igram hace 40 años Factores que Influyen en el Desarrollo de Asociaciones Microbianas en los Alimentos. Intrínsecos • Nutrientes • pH y capacidad tampón • Potencial redox • Actividad de agua • Constituyentes antimicrobianos • Estructuras antimicrobianas 17 Ambientales • Humedad relativa • Temperatura • Atmósfera gaseosa Implícitos • Velocidad de crecimiento especifico • Sinergismo • Antagonismo • Comensalismo Factores de la Elaboración • Cortado en rodajas • Lavado • Envasado • Irradiación • Pasteurización ( 8) CONTENIDO DE NUTRIENTES Cuando un organismo es incapaz de utilizar un componente mayoritano de un material alimenticio limitará su crecimiento y la pondrá en desventaja comparado con aquellos que si son capaces de utilizarlo. La adición de frutas que contienen azúcares al yogur aumenta los carbohidratos disponibles, permitiendo el desarrollo de una flora más variada causando alteración La concentración de nutrientes indispensables puede determinar la velocidad de crecimiento bacteriano. (8) pH y CAPACIDAD TAMPÓN. El pH es el logaritmo inverso de la concentración de iones hidrógeno de una solución. Proporciona una indicación de la actividad de estos iones sobre los componentes del medio Influye sobre las reacciones bioquímicas y, en consecuencia, sobre los microorganismos (7) El grado de acidez o alcalinidad de un medio tiene una gran influencia sobre el crecimiento y metabolismo de los microorganismos. Generalmente las bacterias crecen con más rapidez con valores de pH entre 6.0 y 8.0 un ejemplo son los lactobacilos y las bacterias acéticas cuyo crecimiento óptimo es a un pH de 5.0 y 6.0. (8) 18 La acción que ejerce el pH sobre el crecimiento de los microorganismos se da en 3 niveles: el medio, la permeabilidad de la membrana y la actividad metabòlica Algunos nutrientes disponibles en el medio de cultivo se ven modificados en función del equilibrio iónico, por ejemplo los iones metálicos como el Mg+2 a pH ácidos forman complejos insolubles, y a pH básicos lo hacen los iones zinc, calcio y los férricos. La permeabilidad de la membrana se ve afectada por las variaciones en la concentración de iones H+ y O H -. en medio ácido, las permeasas catiónicas se saturan de iones H+, lo que restringe el transporte de cationes indispensables. En el medio alcalino, los iones OH- son los que saturan la membrana impidiendo la transferencia de aniones Toda variación de pH citoplásmico provoca una disminución de la actividad enzimàtica y , por tanto, del crecimiento de los microorganismos. La capacidad tampón del medio, generalmente está asociado a la concentración de proteínas. (7). POTENCIAL REDOX. Se dice que un medio es oxidante cuando captura electrones; es reductor cuando los cede. Un medio que contenga sustancias fuertemente hidrogenadas, radicales SH, azúcares reductores u otros compuestos, tales como el ácido ascòrbico o tocoferoles, será reductor. Este es el caso de numerosos productos alimentarios. La presencia de oxigeno atmosférico hace que los productos tengan un potencial redox Eh positivo. Los diferentes medios se caracterizan por su Eh, que en condiciones normales no varia demasiado, debido al efecto tampón ejercido por muchas sustancias donadoras y/o receptoras de electrones que contienen. En general el pH puede actuar sobre el equilibrio de muchas reacciones importantes en el metabolismo. En base a las exigencias de oxigeno y/o a la toxicidad del mismo, los microorganismos se clasifican en: • Aerobios estrictos (Pseudomonas, Micrococcus, Bacillus) que necesitan oxigeno como aceptor final de electrones, no utilizan una vía fermentativa y disponen de catalasa para eliminar el peróxido de hidrógeno. • Aerobios facultativos, (Enterobacterias, Staphylococcus) que pueden desarrollarse en presencia o ausencia de 0 2 • .Anaerobios estrictos (Clostridium, Bacteroides, Peptococcus, Propionibacterium, etc.) y los microaerófilos (Lactobacillus, Streptococcus, Pedicoccus. etc.) poseen obligatoriamente un metabolismo fermentativo. Son catalasa negativos e inactivados de forma variable por la presencia de 0 2 en función de la presión parcial del mismo (7) 19 ACTIVIDAD DEL AGUA El agua es utilizada para el crecimiento de los microorganismos de las formas siguientes: • Como solvente de nutrientes, permitiendo su transporte y disponibilidad en el citoplasma. • Como agente químico que toma parte en las reacciones hidrolíticas que dan lugar a monómeros (aminoácidos, azúcares y ácidos grasos ) necesarios para la síntesis microbiana y reacciones energéticas. La actividad del agua presente en los alimentos, como son frutas, verduras, came, leche y pescados, es muy favorable para el crecimiento bacteriano (7) CONSTITUYENTES Y ESTRUCTURAS ANTIMICROBLANOS Estos antimicrobianos le sirven ai medio como defensa contra los microorganismos. La leche contiene una enzima (lisozima) que cataliza la hidrólisis de los enlaces glucosidicos existentes en el peptidoglicano, el polímero estructural responsable de la consistencia y rigidez de la pared de la célula bacteriana. (7). FACTORES AMBIENTALES Humedad Relativa. La humedad relativa se refiere esencialmente a una medida de la actividad de agua en la fase gaseosa La humedad relativa y la actividad del agua están íntimamente relacionadas, por lo que tiene la misma función al igual que la actividad del agua en el desarrollo y proliferación de los microorganismos. (8) Temperatura La temperatura es uno de los factores más importantes que actúan sobre el crecimiento de los microorganismos, ya que la temperatura determina el estado físico del agua, siendo el estado liquido el ideal. Normalmente los microorganismos proliferan a temperaturas medias superiores o iguales a 20°C. Existe una clasificación de los microorganismos en función de la temperatura que son los psicrótrofos y psicrófilos, los mesófilos y los termófilos. Los psicrófilos son microorganismos que se desarrollan a cero grados centígrados con un Optimo de crecimiento de entre 15 y 20°C. los psicrotrofos son capaces de adaptarse a temperaturas próximas a 0°C, con un optimo de crecimiento entre 25 y 35 °C, lo que los aproxima a los mesófilos. Su metabolismo es lento y son poco competitivos con otros gérmenes. Los Psicrótrofos son microorganismos dominantes en todos los alimentos refrigerados, los principales gérmenes son : Pseudomonas, Alcaligenes, Erwinia, 20 Corinebacteryum, Flavobacterium, Lactobacillus o Streptomyces. Su proliferación es lenta Estos gérmenes raramente son patógenos. Los mesófilos crecen y se multiplican a temperaturas entre + 20 y + 45°C con un optimo de 37°C, sus tazas de crecimiento son elevadas, su proliferación es corta Se encuentran en alimentos almacenados a temperatura ambiente. Los principales géneros y especies de bacterias, en general, se incluye dentro de los mesófilos, tanto especies saprofitas como patógenas para el hombre y los animales, la mayoría de ellas son saprofitas. Los termófilos se desarrollan a temperaturas entre 45 y 65°C, con un óptimo de 55°C, su tasa de crecimiento es muy elevada con una duración corta. Estos microorganismos suelen encontrarse en el agua, aire, suelo. Dentro de los termófilos se encuentran los microorganismos llamados termótrofos, que son los mesófilos capaces de desarrollarse a temperaturas elevadas como por ejemplo algunas bacterias lácticas, como Streptococcus thermophilus, Lactobacillus bulgaricus, que se multiplican activamente a 45°C o como la bacteria de origen fecal Streptococcus faecalis que puede proliferar a 50°C. Además de determinar el estado físico del agua la temperatura también actúa sobre la velocidad de las reacciones químicas y bioquímicas, también ejerce una acción diferencial sobre las distintas rutas metabólicas y provoca cambios en el tamaño celular, secreción de toxinas, formación de pigmentos, polisacaridos, etc. (8) ATMOSFERA GASEOSA El oxigeno constituye el 21 % de la atmósfera terrestre, normalmente, es el gas mas importante que se halla en contacto con los alimentos. Su presencia e influencia con el potencial redox son determinantes importantes de las asociaciones microbianas que se desarrollan y de su velocidad de crecimiento. El bióxido de carbono no ejerce un efecto uniforme sobre los microorganismos. 21 M ICR O BIO LO G IA DE LACTEOS La leche es un alimento muy importante en la alimentación del hombre y de los mamíferos jóvenes, contiene proteínas, glúcidos, lípidos, sales minerales y vitaminas en concentraciones adecuadas que satisfacen las necesidades para el crecimiento y multiplicación celular. (7) El calostro es un líquido mucho mas concentrado que contiene hasta un 25 % de sólidos totales, principalmente proteínas segregadas inmediatamente después del parto. (8) La leche es un líquido opaco, blanco mate, mas o menos amarillento en función de su contenido en grasa y beta-carotenos. También es un excelente sustrato, debido a las características fisico-quimicas, para el crecimiento microbiano. (8) M1CROFLORA DE LA LECHE Y DERIVADOS Cuando la leche se obtiene en buenas condiciones de un animal sano, contiene pocos microorganismos, (menos de 5000 gérmenes por mi y menos de un coliforme por mi.) Estos gérmenes son por lo general saprofitos de la ubre y conductos galactóforos: micrococos, estreptococos lácticos y lactobacilos La leche procedente de un animal enfermo contiene microorganismos patógenos y peligrosos desde el punto de vista sanitario, como por ejemplo, los que causan la mamitis La mamitis o mastitis, se produce por una infección de la ubre del animal, provocada por Staphylococcus aureus. Streptococcus agalactiae. Streptococcus uberis, Escherichia coli, Corynebacterium bovis o pyogenes. Mycoplasma spp y Nocardia asteroides. Dentro de los microorganismos patógenos para el hombre se hallan : Mycobacterium bovis, Mycobacterium tuberculosis. Brucella abortus. Brucella melitensis. Streptococcus agalactiae, Escherichia coli. Salmonella, Leptospira, Lysteria monocytogenes. Bacillus cereus, Pasteurella multocida, Clostridium perfringes, Cloxiella bumettii, Campylobacter y Yersinia. La leche puede contaminarse por una gran variedad de microorganismos durante la ordeña, almacenamiento y transporte, pero solo una parte de ellos pueden multiplicarse cuando la temperatura y el medio son favorables, debido a esto, la flora microbiana de la leche cruda es muy compleja y variable de una muestra a otra según el grado de frescura. Las principales fuentes de contaminación son las siguientes. • Heces y tegumentos del animal coliformes, bacillus, Clostridium. Salmonella. • Suelo Streptomyces, bacterias esporuladas, esporas de hongos. • Camas y alimentos de los animales: flora banal, en particular lactobacilos, Clostridium butyricum 22 • Aire y agua: flora diversa • Equipos de ordeño y almacenamiento de la leche: flora láctica, micrococos, lactobacilos. Chromobacterium, Pseudomonas, Alcaligenes, Flavobacterium, Acinetobacter, levaduras • Manipuladores: estafilococos procedentes expectoración y de origen fecal. • de manos y otros gérmenes de Vectores diversos: particularmente insectos Entre las bacterias que destacan de la microflora de los lácteos son: BACILOS Y COCOS AEROBIOS. Las especies mas importantes son Pseudomonas aeruginosa. Pseudomonas fluorescens, Ps. putida, maltoplila, Ps. fragi, Ps. cepacia, Ps. Pseudoalcaligenes, Ps. Alcaligenes y Alteromonas putrefaciens, así como algunas especies de los géneros Alcaligenes, Flavobacterium y Brucella. BACILOS ANAEROBIOS FACULTATIVOS Enterobacteriaceae: Escherichia, Edwardsiella, Erwinia, Citrobacter, Salmonella, Shigella, Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Morganella, Proteus, Providencia, Serratia, Yersinia. Vibrionaceae: Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas. Photobacterium. Cocos y cocobacilos aerobios: Neisseriaceae COCOS GRAM + Staphylococcus, son cocos catalasa positiva, anaerobios facultativos. Streptococcaceae, cocos catalasa negativa. El género Streptococcus es el más importante y comprende numerosas especies, muchas de las cuales se hallan en la leche. Ejemplo Streptococcus agalactiae, S. equi, S. dvsagalactiae, S uberis y sobre todo S. lactis y S thermophilus. BACILOS ESPORULADOS GRAM + Son muy diversos, los Lactobacillus tienen forma de bastones derechos o curvos, individuales o en cadenas, son muy sacaroliticos y pueden liberar ácido láctico D, L o DL. Se distinguen varios grupos: Grupo I Thermobacterium homofermentativos. crecen a 45°C, no fermentan la pentosa ni gluconato. Existen 2 grupos de especies • L delbrueckii con las subespecies lactis y bulgaricus v L leichmanni. • L acidophilus, L. helveticus (jugorti), L gaseri, L. crispatos y L. jensenii Grupo II : Streptobacterium: Lactobacilos homofermentativos facultativos. Fermentan las pentosas a ácido láctico y acético: L. plamtarum, L. casei, L. brevis, L. curvatus, L. bavaricus, L. camis. 23 Grupo III: Betabacterium: Heterofermentativos, fermentan las pentosas El L. bifermentans fermenta el lactato, forma parte de este grupo también, L. brevis, L. kefir y L. buchnerii BACILOS ESPORULADOS: Bacillus y Clostridium. Bacillus cereus es un germen muy importante, sintetiza proteasas extracelulares y una fosfolipasa C (lecitinasa) que puede producir la coagulación no àcida de la leche y de las cremas amargas. Bacillus subtilis produce una coagulación no àcida de la leche con incremento de la viscosidad. Bacillus stearothermophilus puede producir alteraciones en las leches concentradas esterilizadas. Las bacterias del género Clostridium se encuentran en los sedimentos y en el tracto intestinal. Contaminan la leche mediante restos de heces, del suelo y los alimentos. El Clostridium thermosacharolyticum fermenta la lactosa y produce también la coagulación de la leche Clostridium tyrobutyricum y Clostridium butyricum están implicados en el incitamiento de los quesos. Clostridium sporogenes produce fermentaciones butiricas con digestión del coagulo por proteolisis (7) RIESGOS A continuación hablaremos un poco sobre los factores de riesgo para la salud, que pueden constituir los alimentos contaminados con microorganismos patógenos, en esta ocasión nos enfocaremos en los microorganismos patógenos más importantes que son Coliformes totales, Mesófilos totales y Staphylococcus aureus. La intoxicación alimentaria por Staphylococcus aureus, tiene un periodo de incubación corto de 2 a 4 horas Los síntomas caracteristicos son nauseas, vómito, espasmos de estomago, arcada, postración, en ocasiones diarrea, el paciente suele recuperarse completamente en uno o dos días En los casos graves puede haber deshidratación, palidez, colapso, otros individuos pueden presentar dolor de cabeza, calambres musculares y cambios transitorios en la presión sanguínea y pulso Staphylococcus aureus produce 7 exotoxinas A, B, C l, C2, C3, D y E. La sensibilidad es diferente para cada individuo, aunque se ha calculado que en los brotes de intoxicación ha sido necesario menos de un microgramo de toxina pura para desencadenar los síntomas Las toxinas del Staphylococcus aureus son neurotoxinas ya que desencadenan la respuesta emetica actuando sobre receptores existentes en el intestino que estimulan el centro del vómito en el cerebro a través de los nervios vago y simpàtico. Si estos resultan dañados, no se produce el vómito Aun se desconoce en que forma la toxina induce a la diarrea. (8) 24 El siguiente cuadro muestra una clasificación de los coliformes descritas en el manual de Bergey, parte 8 BACILOS ANAEROBIOS FACULTATIVOS, GRAM NEGATIVOS Familia I GENERO Escherichia Shigella Edwardsiella Citrobacter Salmonella Klebsiella Enterobacter Enterobacteriaceae ESPECIES coli dysenteriae flexneri boydii sonnei tarda freundii intermedius cholerae - suis typhi enteritidis arizonae otras nueve pneumoniae otras dos cloacae aerogenes Hafnia Serratia alvei márcese ens Proteus mirabilis vulgaris inconstans pestis pseudotuberculosis enterocolítica Yersinia Erwinia Trece especies. 25 Familia II. Vibrionaceae Vibrio Aeromonas Cuatro géneros más. Géneros de afiliación incierta Haemophilus Pasteurelia cholerae otras cuatro. tres especies influenzae aegyptus aphrophilus ducreyi catorce especies más. multocida Los síntomas y signos clínicos que se presentan en una infección por Coliformes son: E. coli produce diarrea en base a las propiedades de virulencia codificadas por plásmidos. En base a esto existen cuatro clases principales de E. coli E. coli enterotoxigénico, la enfermedad se presenta entre 12 y 36 horas después de la ingestión del organismo Los síntomas varían desde una ligera diarrea afebril hasta un síndrome grave parecido al cólera, con heces acuosas sin sangre ni moco, dolores de estómago y vómito. E. coli enteroinvasor, la infección origina los síntomas clásicos de una disenteria bacilar invasora normalmente asociada con Shigella. Los signos clínicos son fiebre, dolores abdominales intensos, malestar y con frecuencia diarrea acuosa que precede a la eliminación de heces que contienen sangre, moco y leucocitos fecales. E coli enteropatógeno, los síntomas de la infección son malestar, vomito, y diarrea con deposiciones que contienen moco pero rara vez sangre, aparecen 12 a 36 horas después de la ingestión del organismo E coli enterohemorrágico, es capaz de causar enfermedades que amenazan la vida como son la colitis hemorrágica, el síndrome urémico hemolitico y la púrpura trombótica trombocitopénica. Las shigelas producen la disenteria bacilar en personas y otros primates superiores. (8) 26 CAPITULO III ELABORACION DE LAS N O RM AS OFICIALES M EX IC A N A S 27 Los productos comerciales y de consumo para el ser humano, se encuentran regidos y bajo control por medio de las Normas Oficiales Mexicanas (NOMs); las cuales se elaboran con el objetivo de llevar un control sanitario para el beneficio del consumidor Para evaluar la investigación microbiológica del yogur no pasteurizado en la ciudad de Xalapa, Ver. utilizamos varias normas que se presentan más adelante. ELABORACION DE LAS NORMAS OFICIALES MEXICANAS En la vida rutinaria de todos los Mexicanos escuchamos que los alimentos, bebidas alcohólicas y no alcohólicas etc. se encuentran regidas o bajo un control por medio de las llamadas Normas Oficiales Mexicanas (NOM), pero ¿que son estas normas? . Las normas son una especificación técnica disponible al publico, elaborada con la cooperación y aprobación general de los intereses afectados por ella. Estas normas se basan en estudios de ciencia, tecnología y experiencia; tienen un objetivo que es el de beneficiar a la comunidad y son aprobados por un organismo regional, nacional, e internacional Existen dos tipos de Normas en México: OBLIGATORIAS: • Son llamadas comúnmente regulaciones o reglamentaciones • Son de cumplimiento forzoso aplicable por igual a productos nacionales o importados • En la República Mexicana son denominadas NOM (Norma Oficial Mexicana) VOLUNTARIAS: • Utilizadas por industrias y comercios básicamente, para simplificar sus transacciones, pues al estipular su cumplimiento como parte de cláusulas de un contrato, se convierte en obligatorias • En la República Mexicana se denominan NMX. La elaboración de las normas se encuentra a cargo y bajo la supervisión de comités consultivos nacionales de normalización y comités técnicos de normalización nacional Por su parte en la elaboración de las normas, participan diferentes grupos y organizaciones como lo son: 1. Centros de investigación 2. Centros de docencia superior 3 Industria privada 4 Sector público 5 Consumidores 6. Todos los interesados. 28 Para el diseño de las NOMs es importante la participación de la industria, academia, comercio y dependencias gubernamentales; el proyecto resultante de este trabajo debe garantizar su aplicabilidad y portar algún beneficio al consumidor. El tiempo de discusión de la norma permite a todos los actores ir conociendo y previendo la manera de aplicarla en sus procesos productivos y comerciales. Una vez publicada como definitiva, se da otro espacio para difundirla, durante el cual tengan oportunidad de prepararse para cumplir cabalmente cuando entra en vigor; las normas son publicadas finalmente para conocimiento de todos los mexicanos en el Diario Oficial de la Federación. La industria nacional tiene entre otras, la finalidad de proveer a la población alimentos nutritivos e higiénicos, por su parte la secretaria de salud y asistencia (SSA) establece normas para garantizar que su procesamiento y productos finales, tengan la calidad sanitaria adecuada, y no peijudiquen la salud de los consumidores. Estas disposiciones generalmente se basan en estudios y revisiones realizadas en conjunto por industriales, autoridades de gobierno y de manera fundamental investigadores y tecnólogos en alimentos. La Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios de la mencionada secretaria, tienen la responsabilidad de proteger la salud de los mexicanos en relación al consumo de alimentos, bebidas alcohólicas y no alcohólicas, artículos de perfumería, aseo y limpieza y tabaco, asi como aditivos y materias primas que intervienen en su elaboración. Por su parte, la Academia juega papel importante al hacer investigaciones encaminadas al desarrollo de productos y nuevas tecnologías, en tanto que la industria realiza trabajos que buscan ofrecer más y mejores productos a costo accesible para el público. El trabajo de los dos últimos sectores, tienen una meta común: la consecución de descubrimientos que ofrezcan mayores ventajas en procesos de fabricación y para el consumidor final. Sin embargo, si en función de intereses comerciales o de cualquier otro motivo generan desviaciones que redunden en detrimento del bienestar de la población, la autoridad interviene para con sustento en la Ley General de Salud, su reglamento y normas, ejercer las medidas correctivas necesarias La ley establece mecanismos de equilibrio en el comportamiento del control sanitario de bienes y servicios de la Secretaria de Salud, la Academia y la Industria, por otro lado siempre debe de haber concurso de la industria, comercio e instituciones de investigación para construir las avenidas por las que hemos de transitar Para que las disposiciones se cumplan todos debemos participar en su elaboración, conocerlas y verificar el beneficio ofrecido. En el establecimiento de las Normas Oficiales Mexicanas (NOMs). La Ley Federal sobre metrología y normalización señala que dichas normas no deben elaborarse exclusivamente por la autoridad, ya que la experiencia de los 3 sectores antes mencionados enriquece por mucho el resultado final La autoridad sanitaria tiene la obligación de vigilar el cumplimiento de las Normas Oficiales Mexicanas; sin embargo, a una sola dependencia le es muy difícil cubrir en su totalidad todo el universo de productos existentes, no obstante cerca del 90 % de los fabricantes tiene la intención de cumplir a cabalidad las disposiciones, muchas de las veces 29 no acatan las normas por desconocimiento de las mismas o por que, en ocasiones, los pasos a seguir para su implementación son extraordinariamente complicados; sin embargo, existe esfuerzo por parte del Gobierno de la República en materia de desregulación y difusión de reglamentaciones para facilitar su comprensión y cumplimiento. Las técnicas de vigilancia actuales no se enfocan a fines persecutorios, si no de monitoreo, estos nos informan quienes no están cumpliendo y se procede a corregir desviaciones. La Dirección de Control Sanitaria de Bienes y Servicios ha diseñado mecanismos de vigilancia a partir de visitas de verificación que proveen información por establecimientos o sectores Los diagnósticos generales permiten identificar problemas, en lo colectivo, y ofrecen datos que la autoridad comparte con los representantes sectoriales para tomar medidas conjuntas encaminadas a cambiar esta situación En lo particular si se identifica a una empresa infractora, se le obliga a cumplir con las disposiciones de la ley, considerando siempre la historia sanitaria que la respalda y la gravedad de la falta, se le aplican las sanciones correspondiente • NORMA OFICIAL MEXICANA NOM - 092-SSA-1994 Bienes y Servicios para la cuenta de bacterias aerobias en placa. Introducción Cuando se requiere investigar el contenido de microorganismos viables de un alimento, la técnica comúnmente utilizada es la cuenta en placa. En realidad esta técnica no pretende poner en evidencia todos los microorganismos presentes. La variedad de especies y tipos diferenciables por sus necesidades nutricionales, temperatura requerida para su crecimiento, oxigeno disponible, etc., hacen que el número de colonias contadas constituyan una estimación de la cifra realmente presente y la misma refleja si el manejo sanitario del producto ha sido adecuado. Por otra parte el recuento de termofilicos, psicrofilicos y psicrotróficos es importante para predecir la estabilidad del producto bajo diferentes condiciones de almacenamiento Objetivo v Campo de Aplicación Esta Norma Oficial Mexicana establece el método para estimar la cantidad de microorganismos viables presentes en un alimento, agua potable y agua purificada, por la cuenta de colonias en un medio sólido, incubado aerobicamente Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el territorio Nacional para las personas físicas o morales que requieren efectuar este método en productos nacionales e importados para fines oficiales Fundamento El fundamento de la técnica consiste en contar las colonias que se desarrollan en el medio de elección después de un cierto tiempo y temperatura de 30 incubación, presuponiendo que cada colonia proviene de un microorganismo de la muestra bajo estudio. El método admite numerosas fuentes de variación, algunas de ellas controlables, pero sujeto a la influencia de varios factores. Definición Para fines de esta norma se entiende p o r : Unidades Formadoras de Colonias (UFC), término que debe utilizarse para reportar la cuenta de colonias en placa, las cuales pueden surgir de una célula o de un cúmulo de células. Modo de Preparación del Medio • La preparación de este dependerá de cada casa comercial que los elabore • NORMA OFICIAL MEXICANA NOM - 113-SSA1-1994, Bienes y Servicios Método para la cuenta de microorganismos coliformes totales en placa. Introducción El grupo de los microorganismos coliformes es el más ampliamente utilizado en la microbiología de los alimento como indicador de prácticas de higiene inadecuadas El uso de los coliformes como indicador sanitario pudo aplicarse para: a) La detección de prácticas sanitarias deficientes en el manejo y fabricación de los alimentos. b) La evaluación de la calidad microbiològica de un producto, aunque su presencia no necesariamente implica un riesgo sanitario. c) Evaluación de la eficiencia de prácticas sanitarias e higiénicas del equipo. d) La calidad sanitaria del agua y hielo utilizados en las diferentes áreas de procesamiento de alimentos. e) La demostración y la cuenta de microorganismos coliformes, puede realizarse mediante el empleo de medios de cultivos líquidos o sólidos con características selectivas o diferenciales Objetivo y Campo de Aplicación Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiològico para determinar el numero de microorganismos coliformes totales presentes en productos alimenticios por medio de la cuenta en placa Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el Territorio Nacional para las personas físicas o morales que requieran efectuar este método en productos nacionales o de importación, para fines oficiales. Fundamento El método permite determinar el numero de microorganismos colifomes presentes en una muestra Utilizando un medio selectivo (agar rojo violeta bilis) en el que se desarrollan bacteria a 35°C en aproximadamente 24 horas, dando como resultado la 31 producción de gas y ácidos orgánicos, los cuales viran el indicador de pH y precipitan las sales biliares. Definiciones Para fines de esta Norma se entiende por: Coliformes, bacilos Gram Negativos, no esporulados, aerobios o anaerobios facultativos que a 35°C fermentan la lactosa con formación de ácido, ocasionando en las colonias desarrolladas el vire del indicador rojo neutro presente en el medio y la precipitación de las sales biliares. Modo de Preparación • Medio de cultivo Soya y Tripticaseina. • La preparación de este dependerá de cada casa comercial que los elabore • NORMA OFICIAL MEXICANA NOM - 115-SSA1-1994 Bienes y Servicios Método para la determinación de Staphylococcus aureus en alimentos. Introducción El crecimiento de Staphylococcus aureus en alimentos tiene gran importancia por tratarse de un microorganismo capaz de producir una enterotoxina que al ingerirse causa intoxicaciones alimentarias Entre las razones para determinar Staphylococcus aureus en alimentos están: a) Confirmar la presencia de este microorganismo como agente causal de una enfermedad de origen alimentario. b) Determinar si un alimento o ingrediente es fuente potencial de este microorganismo enterotoxigénico c) Demostrar la contaminación postproceso la cual es usualmente debida a contacto humano o con superficies inadecuadamente sanitizadas Los alimentos sujetos a contaminación postproceso con tipos enterotoxigénicos de Staphylococcus aureus representan un riesgo por la ausencia de flora competitiva que normalmente restringe el crecimiento del Staphylococcus aureus y la producción de enterotoxinas Este tipo de alimento se vuelven más peligroso, además son sujetos a un inadecuado manejo y son mantenidos a temperaturas de conservación inapropiadas Los alimentos perecederos tales como: carnes crudas y procesadas, ensaladas, productos lácteos, son los más comúnmente asociados con intoxicación estafilococcica Objetivo v Campo De Aplicación Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiológico para determinar la cuenta de Staphylococcus aureus presente en alimentos nacionales o de importación. Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el territorio nacional para las personas físicas o morales que requieran efectuar este método en alimentos, para fines oficiales 32 Fundamento Este método permite hacer una estimación del contenido de Staphylococcus aureus en alimentos, se efectúa directamente en placas de medio de cultivo selectivo y diferencial, con la confirmación mediante las pruebas de coagulasa y termonucleasa. Este método es adecuado para el análisis de alimentos en los cuales se esperan más de cien células de Staphylococcus aureus por gramo. Definiciones Para fines de esta norma se entiende p o r : Staphylococcus aureus, microorganismo que se desarrolla en medios de cultivo y diferencial, que es capaz de dar positiva la prueba de coagulasa y termonucleasa Modo de Preparación • Agar Sal y Manitol. • La preparación de cada uno de estos medios dependerá de cada casa comercial que los produzca • NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-120-SSA1-1994, Bienes y Servicios. Prácticas de higiene y sanidad para el proceso de alimentos, bebidas no alcohólicas y alcohólicas Introducción La aplicación de practicas adecuadas de higiene y sanidad, en el proceso de alimentos, bebidas, aditivos y materias primas, reduce significativamente el riesgo de intoxicaciones a la población consumidora, lo mismo que la pérdida del producto, al protegerlo contra contaminaciones contribuyendo a formarle una imagen de calidad y , adicionalmente, a evitar al empresario sanciones legales por parte de la autoridad sanitaria. Esta norma incluye requisitos necesarios para ser aplicados en los establecimientos dedicados a la obtención, elaboración, fabricación, mezclado, acondicionamiento, envasado, conservación, almacenamiento, distribución, manipulación y transporte de alimentos y bebidas, asi como de sus materias primas y aditivos, a fin de reducir los riesgos para la salud de la población consumidora. Objetivo v Campo de Aplicación Esta Norma Oficial Mexicana establece las buenas practicas de higiene y sanidad que deben observarse en el proceso de alimentos, bebidas no alcohólicas y alcohólicas 33 CA PIT U L O IV ZONA 3 LOCALIZACION, C O L O N IA S PERTENECIENTES Y NIVEL SO C IO E C O N O M IC O 34 Para la realización de este estudio microbiológico, se recolectaron muestras de yogur no pasteurizado en 34 locales, los cuales se encontraron ubicados en las colonias pertenecientes a la zona 3 de la Ciudad de Xalapa, Ver. según el H. ayuntamiento. La ciudad de Xalapa Ver. ha sido dividida en 4 zonas por el H. Ayuntamiento para facilitar la ubicación de las colonias y estrato social. Esto ha sido con el fin de proporcionar un plano detallado de las colonias pertenecientes a cada zona. Este capitulo mencionará solo las colonias pertenecientes a la zona 3 de la Ciudad de Xalapa, Ver. entre las cuales se encuentran las siguientes colonias: COLONIA Fuentes de las Animas Jardines de las Animas Loma Esmeralda Lomas del Tejar Pedregal de las Animas Valle de Rubi Villa .Animas Vista Hermosa Los .Angeles Castillo de las Animas Dos Vistas Indeco, Popular Animas Industrial Linda Vista Jacarandas Misión San Carlos Pumar Unidad y Trabajo Agua Clara Agua Santa Agua Santa, 2a Sección Balcones de Xalapa I Burócratas, Ignacio de la Llave Cafetal, El Fraccionamiento Constituyentes I Crystal Residencial Fesapauv Francisco Sarabia Infonavit (El Cafetal) Infonavit Loma Alta Infonavit, Pomona lnmecafe Jardines de las flores 2000 ZONA 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 ESTRA 1 1 1 1 I 1 I 1 2 2 2 2 á?* 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Jardines de Xalapa Lomas del Puente Pastoresa El Peñascal Pomona SAHOP Sebastian Lerdo de Tejada Sipeh, Animas Volcan de Colima Aguacatal Cuauhtémoc Diez de Mayo Dos de Abril José Cardel Laureles Lázaro Cárdenas Lomas de las Américas María Esther Miguel Alemán El Mirador Modelo La Piedad Rafael Murillo Vidal Ia Sección Rivadeneyra Tatahuicapan Unidad Jardín 1 Vanguardia Revolucionaria Agrícola Agrícola Articulo 127 Alvaro Obregon Antonio Chedraui Caram Azteca Badillo Campo Nuevo Diez de Abril Encinal Francisco Villa Herón Proal, Chihoyac Herón Proal, Sacrificios Herón Proal, Zapote . Chihoyac Juan de la Luz Enriquez Julio Castro Laderas de Macuiltepetl Provipo 36 Salvador Diaz Mirón Udicev Voceadores El Cafetal Centenario Cincuentenario Higueras. Ampliación Huizachal 3 3 3 3 3 3 3 3 5 5 5 6 6 6 6 6 De las colonias pertenecientes a la zona 3 solo se recolectaron muestras de 22 de ellas. COLONIAS ESTUDIADAS 1. Hidalgo 2. Federal 3. Del Maestro 4. José Cardel 5. Progreso 6 El Mirador 7. Encinal 8 Jardines de Xalapa 9. Jardines de las Animas 10. Inmecafe 11. Sahop 12. Cuauhtémoc 13. Laureles 14 Murillo Vidal Ia Sección 15 Unidad Agua Santa I 16 Lomas del Tejar 17 Aguacatal 18 Francisco Villa 19 Unidad Agua Santa II 20. Salvador Diaz Mirón 21 Constituyentes 1 22. Tatahuicapan Todas estas colonias pertenecen a los 6 estratos de la clasificación del H Ayuntamiento. Los estratos a los cuales pertenecen las colonias involucran el nivel socioeconómico de las familias, ya que el estrato número 1 esta dado para aquellas colonias que cuentan ademas de todos los servicios públicos con un nivel económico superior. Sin embargo, los últimos estratos de esta clasificación corresponden a colonias que presentan gran carencia de estos servicios 37 TIPO DE ESTA BLEC IM IEN TO Y CO M ERCIALIZACIO N Los tipos de establecimiento estudiados fueron los fijos y móviles de la zona 3 de la ciudad de Xalapa, predominando los establecimientos fijos, el tipo de giro de la mayoría de estos establecimientos fue de tipo mixto ya que además de yogur se venden otros tipos de alimentos como son : pizzas, carnes, quesos, pan, cereales, fruta entre otros. La mayoría de los locales eran comerciales, aunque se encontraron algunos en casa particular. En la lista siguiente se muestran los locales de acuerdo a la colonia, zona, tipo de establecimiento, tipo de giro, local y estrato FOLIO COLONIA ZONA 010404 Hidalgo 3 020404 Federal 3 030404 Dd Maestro 3 040404 Del Maestro 3 050402 José Cardel 3 060402 Progreso 3 070403 José Cardel 3 080403 Mirador 3 090405 Encinal 3 100405 Encinal 3 110405 Encinal 3 120405 jardines jalapa 3 130405 Jardines jalapa 3 140403 Mirador 3 150401 Animas 3 160401 Inmecafc 3 170401 Sahop 3 180401 Cuahutemoc 3 190402 Laureles 3 200402 lera Sección 3 210401 lera Sección 3 220401 U. A Santa 1 3 230401 L del Tejar 3 240401 Laureles 3 250404 Aguacatal 3 260404 José Cardel 3 270401 U. A. Santa 3 280401 Tatahuicapan 3 290405 Feo Villa 3 300405 Diaz Mirón 3 310402 U A Santa II 3 320402 Constituyentes 3 330402 Constituyentes 3 340402 U. A Santa I 3 TIPO DE ESTAB. TIPO DE GIRO mixto Pizzas postres fijo mixto Miscelánea Fijo mixto Mini Super Fijo mixto Lácteos y carnes Fijo mixto T. Naturista Fijo mixto T. Naturista Fyo mixto T. Naturista Fijo mixto Pizzas Fijo mixto T. Naturista Fijo mixto T. Naturista Fijo mixto Lácteos Fijo mixto Mini SupeT Fijo mixto Miscelánea Fijo mixto Miscelánea Fijo mixto Mini Super Fijo mixto T. Naturista Fijo mixto Mini Super Fijo mixto Verduras Fijo mixto Pizzas Fijo mixto Mini Super Fijo mixto Tienda Fijo mixto Tortas Móvil mixto Mini Super Fijo mixto Miscelánea Fijo mixto Tortas postres Móvil mixto Mini Super Fijo mixto t. Naturista Fijo mixto Frutas y verduras Fijo mixto Tienda Fijo mixto Panadería Fijo exclusivo Fijo mixto Miscelánea Fijo mixto Miscelánea Fijo mixto Lácteos Fijo LOCAL ESTRATO casa particular casa particular comercial comercial comercial comercial comercial comercial comercial comercial comercial comercial comercial comercial comercial comercial comercial comercial comercial comercial casa particular casa particular comercial comercial comercial comercial comercial comercial comercial comercial casa particular casa particular comercial comercial 38 El tipo de establecimiento fijo es más adecuado para la venta del yogur que el móvil, ya que no transportan el yogur de un lado a otro y no corre riesgo de contaminación; en cambio en establecimientos de tipo móvil por lo general se encuentran sobre las banquetas, más cerca del tráfico vehicular y de otros factores que aumentan el riesgo de contaminación, ya que lo transportan de un lado a otro al terminar el día. El tipo de local influye directamente ya que la casa particular, muchas veces no reúne las condiciones adecuadas de almacenaje y conservación del yogur, en cambio un local comercial a parte de ser independiente de una casa, cuenta con los servicios necesarios que benefician al producto. El giro del establecimiento influye en la contaminación porque al manejar otros productos como son pizzas, carnes frías, pan , cereales , etc. al mismo tiempo corren el riesgo de contaminar al yogur sin darse cuenta; en cambio si el yogur es el único producto que se expende en el establecimiento; este no corre el mismo riesgo. 39 CAPITULO V M ETODOLO G IA 40 1) TIPO DE ESTUDIO El método utilizado es de tipo Descriptivo Prospectivo Observacional. 2) SELECCIÓN DE ESTABLECIMIENTOS: Se seleccionaron 34 establecimientos fijos y móviles de la zona 3 de la ciudad de Xalapa, V e r, que expenden yogur no pasteurizado, de los cuales cada muestra se analizó por triplicado dando un total de 102 muestras. 3) DEFINICION DE LA UNIDAD DE ESTUDIO: Se analizaron muestras de yogur no pasteurizado en presentaciones de 250 y 500 mi. 4) CRITERIOS: • INCLUSION: • Muestra de yogur no pasteurizado en cualquier presentación. • Las muestras se recolectaran en vasos y/o bolsas de plástico • Muestras de yogur en establecimientos fijos y móviles. • EXCLUSION • Muestras de yogur mal refrigeradas durante el transporte. • ELIMINACION: • Derrame de la muestra durante el embalaje. • Contaminación externa 5) DEFINICION DE LAS VARIABLES : TIPO DE LOCAL • Local comercial establecimiento aislado y designado únicamente para la venta de diversos productos. • Local en casa habitación: parte de una casa que se abre temporal o definitivamente para la venta de varios productos. GIRO DEL ESTABLECIMIENTO • Exclusivo : venta exclusiva de productos lácteos • Mixto: venta de lácteos y otros productos no relacionados con estos. TIPO DE ESTABLECIMIENTO • Fijo: local que cuenta con todos los servicios, agua, luz, y su construcción es de cemento. • Móvil: puesto o local que no cuenta con todos los servicios; son de lámina, madera, y por lo general se encuentran sobre las banquetas 41 6) BUSQUEDA Y RECOLECCION DE MUESTRAS Se localizaron expendios que venden yogur no pasteurizado ubicados en la zona 3 de la división que realiza el H. Ayuntamiento de Xalapa, Ver., y se obtuvieron muestra en tres ocasiones; se realizó un cuestionario para determinar características sanitarias del local, y del personal. 7) ESTABLECIMIENTO Y SELECCION DE TECNICAS DE LABORATORIO: La selección de las técnicas de laboratorio se estableció según las Normas Oficiales Mexicanas NOM-113-SSA1-1994 METODO PARA LA CUENTA DE MICROORGANISMOS COLIFORMES EN PLACA, NOM-092-SSA1-1994 METODO PARA LA CUENTA DE BACTERIAS AEROBIAS Y NOM-115-SSA1-1994 METODO PARA LA DETERMINACION DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS EN ALIMENTOS. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-109-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS PROCEDIMIENTOS PARA LA TOMA, MANEJO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS DE ALIMENTOS PARA SU ANALISIS MICROBIOLOGICO El análisis microbiológico de alimentos, la adecuada selección de la muestra, la toma correcta, los medios de conservación y su transporte al laboratorio, son de primordial importancia para obtener resultados significativos y confiables. Esto implica precisar el objetivo del estudio, la naturaleza de las muestras y la cantidad, el tamaño o el volumen, en lo posible, y que sean representativos del producto y del lote o partida de donde provienen. La recolección de la muestra se efectúo evitando toda contaminación extema, tanto ambiental como humana, para asegurar la integridad de la misma. Las condiciones de conservación y transporte, tiempo comprendido entre la recolección de la muestra, su entrega al laboratorio, asi como la realización del análisis influyen notoriamente en los resultados obtenidos, ya que la población microbiana puede sufrir cambios cualitativos y cuantitativos Esto es especialmente cierto en los alimentos perecederos 8) CULTIVO Las lecturas correspondientes se realizaron en base a las Normas Oficiales Mexicanas 9) LECTURA Y ANALISIS Se realizó la lectura de las placas 24 horas después de la incubación a 37°C 42 10) ANALISIS DE RESULTADOS Los análisis de resultados están dados estadísticamente y se presentan en tablas de contingencia y gráficas de pastel. 11) RECURSOS: • Humanos: Químicos Clínicos. • Material: Laboratorio No. 2 de la Unidad de Ciencias de la Salud, Medios de Cultivo, pipetas, asas bacteriológicas de siembra, matraces, cajas petri, mechero, tripie, hielera, refrigerantes y estufa a 37°C. • Financieros: 102 muestras de yoghurt $ 420 transporte para recolección de muestras $ 300 • Tiempo. Duración 3 meses. 43 CA PITULO VI A N ALISIS DE RESULTADOS, G RAFIC O S C O N C L U SIO N E S Y SU G ERENCIAS 44 AN ALISIS DE RESULTADO S A continuación se muestra una serie de gráficas, las cuales demuestran consecutivamente los locales contaminados y no contaminados, obteniendo de ellos un valor en porcentaje. Por otro lado, también se presenta una comparación de los microorganismos encontrados en las muestras de yogur estudiado de todos los establecimientos; asi también como el total de locales fijos y móviles contaminados, además del giro del establecimiento y en base a el, la contaminación que se presenta en ellos y por último los locales que presentaron contaminación del yogur en relación al tipo de local. GRAFICA 1 TOTAL DE LOCALES 34 LOCALES CONTAMINADOS 24 70.58 % LOCALES NO CONTAMINADOS 10 29.42% G r á f i c a N° 1 Esta gráfica muestra el total de los locales estudiados, asi como el porcentaje de contaminación que presentan estos. □ Contaminados D N o Contaminados 45 G r á f i c a -N°. 2 A quí se rep resen ta el n ú m ero d e locales c o n tam in ad o s con cada u n o d e los m icroorganism o s d eterm in ad o s. 35% 0% 65% ■ MESOFILOS □ COLIFORMES B S . AUREUS 46 G r á f i c a N° 3. Esta gráfica demuestra la contaminación en locales fijos. □ Locales fijo s C o n ta m in ad o s ■ Locales fijo s no C o n tam in ad o s G r á f i c a N°. 4. Muestra la contaminación en locales móviles, hay que tomar en cuenta que solo 2 locales eran móviles. ■ Locales Móviles Contaminados □ Locales Móviles no Contaminados 47 G r á f i c a N° 5. Aqui se pone de manifiesto los locales Mixtos contaminados. 70% 30% ■ Locales Mixtos Contaminados □ Locales Mixtos no Contaminados G r á f i c a N°. 6 Demuestra un alto porcentaje de contaminación, pero este no es significativo, pues solo se localizó un local exclusivo. 100% 0% □ Locales Exclsivos Contamindos ■ Locales Exclusivos no Contaminados 48 G r á f i c a N° 7y8 Muestra el porcentaje de contaminación en locales comerciales y en casa particular respectivamente Como se observa en ambos casos, existe un alto grado de contaminación. 73% B Locales Comerciales Contaminados ■ Locales Comerciales no Contaminados 17% □ Locales en casa particular Contaminados ■ Locales en casa particular no Contaminados 49 G r á f i c a No. 9. En la siguiente gráfica se muestra la relación existente entre la contaminación del yogur y el grado de acidez del mismo. Para esto se obtuvo una media del pH de las 3 muestras recolectadas en cada local, ubicando los resultados de cada muestra en los intervalos a continuación mencionados. Intervalo de pH 2 .4 -3 .0 3.1 -3 .5 o TT i ró 4.1 -4.5. Número de muestras Contaminadas Porcentaje de Contaminación 4.1 % 29.1 % 45.8 % 20.8 % 1 7 11 5 4.1 50 A continuación se muestran unas tablas de contingencia que tienen como objetivo el obtener la relación de los establecimientos que presentaron contaminación del yogur, en base a cálculos estadísticos. “T A B L A S Tabla No. 1 establecimiento. DE CONTINGENCIA” Muestra la contaminación del yogur de acuerdo al tipo de CONTAMl NACION -------------------------------- NO SI ' ..... -------------------------- -------- MDVTT a) 1 m FILA MARGINAL ------------------------------------ b) 1 =2 = 32 FUO c) 23 d) 9 COLUMNA MARGINAL = 24 = 10 PRUEBA EXACTA DE FISHER p= 0 .50802 Como el p= 0.50802 que se obtuvo, en este cálculo, es mayor que el nivel de significancia por lo tanto no podemos rechazar la hipótesis alterna de que el tipo de establecimiento influye directamente en la contaminación del yogur 51 Tabla No. 2 Relaciona la contaminación del yogur con el giro del establecimiento. CONT ACION MARGINAL PRUEBA EXACTA DE FISHER p= 10000. Como se obtuvo un p= 1.0000, y ya que este también se encuentra por arriba del nivel de significancia establecido, por lo que podemos concluir que esta hipótesis no debe ser rechazada en que el giro del establecimiento incide directamente en la contaminación del yogur 52 Tabla No. 3 Muestra la contaminación del yogur de acuerdo al tipo de local ■ •• ;• . -v ' ' ■ • . ■ ■ .:. : :' .■ CONTAMINACION . NO SI FILA MARGINAL b) 1 =6 c) 21 d) 7 = 28 = 26 =8 = 34 CASA PARTICULAR a) LOCAL COMERCIAL COLUMNA MARGINAL 5 PRUEBA EXACTA DE FISHER: p= 0 14783 Como se comprobó en las tablas anteriores, en esta tampoco podemos rechazar la hipótesis nula, al obtener un p= 0.14783, ya que el nivel de significancia es menor, por esta razón podemos decir que el tipo de local influye directamente en la contaminación que presenta el yogur 53 CONCLUSIONES De acuerdo a los resultados obtenidos en este estudio, y tomando en cuenta el giro del establecimiento, asi como el tipo de establecimiento, podemos decir que la contaminación del yogur esta influenciada en gran medida por los productos que venden también en esos establecimientos, ya que al manejar una amplia gama de productos no se tienen las medidas necesarias de higiene, y en algunos casos los refrigeradores son compartidos con productos como refrescos, carnes frías, etc.; y por lo tanto para conservar se introducen tal como se reciben y en ocasiones el contenedor especial del yogur se encuentra destapado Por lo que se refiere al tipo de local, podemos decir que a pesar de que la mayoría eran locales comerciales, estos presentaron un grado importante de contaminación y aunque solo 6 establecimientos se encontraban en casa habitación, 5 de ellos estaban contaminados, lo que nos indica un valor significativo de falta de higiene en el manejo del yogur. Por otro lado, en lo que se refiere al pH, podemos decir que la contaminación se presentó en aquellas muestras con un valor promedio de 3.6 a 4.0 de acidez, por lo tanto podemos concluir que las muestras que presentan un pH fuera de este rango, tienen menos probabilidad de presentar contaminación. Ya que el pH óptimo del yogur es de 4.0 a 4.5, según la SSA. SUGERENCIAS Ya que la contaminación estuvo presente en un gran número de establecimientos y en locales comerciales y casa habitación, podemos sugerir lo siguiente para tratar de prevenir en gran medida la contaminación del yogur. • Los giros de los establecimientos sean de tipo exclusivo de venta de yogur o en el caso de no ser así, que el yogur no comparta el mismo espacio designado para otros productos • El tipo de local de venta de yogur sea de tipo comercial y no de casa habitación, ya que como pudimos damos cuenta estos últimos presentaron mayor frecuencia de contaminación en relación a su numero. ( ver gráfica 5 ). • En cuanto a lo que se refiere al pH, podemos sugerir, que la SS A implante un monitoreo permanente de los establecimientos que venden este producto, para que no se vea afectada la salud del consumidor. 54 BIBLIO GRAFIA 1.- GARCIA M ;QUINTERO, R.;LOPEZ, A Leche. Procesos fermentativos. En: Biotecnologia alimentaria De. 1 Limusa, 1993. Mexico D.F pags. 163-174. 2.- TAMENE, A.;ROBINSON, R.; Yogur. Ciencia y Tecnologia Edit. Acribia, S. A Zaragoza, Esp. Pags. 9, 37, 55, 60-61. 3.- LUQUET,F.; BONJEAN,Y ; LINCZOWSKI; KEELLING,J., de WILDE,R.; : Leche y productos lácteos. Vaca, oveja cabra. La leche de la mama a la lechería. Edit Acribia S A. Zaragoza Esp 1991. pags. 7-12,211. 4- FRAZIER, W ; WESTHOFF,D.; Microbiologia de los alimentos. Edit. Acribia Zaragoza Esp. 1985 pags.4-5. 5- DORLAND: Diccionario Enciclopedico Ilustrado de Medicina. 26* edición. Edit. Interamericana/ W B SAUNDERS Mexico, D.F. 1986. Voi 5 6- Gran Diccionario Enciclopedico Ilustrado Tomo XII. 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