Test Enfermedad Celiaca Instructivo

TEST RÁPIDO DETECCIÓN ENFERMEDAD
CELIACA.
Test Rápido para la detección de anticuerpos IgA/IgG/IgM
contra la transglutaminasa tisular humana en sangre humana.
Para diagnostico in vitro. Almacenar entre 2-8ºC.
INSTRUCCIONES DE USO.
GEBRAX Y CIA. LTDA. ALCÁNTARA 200 P. 6 LAS CONDES, SANTIAGO. F: (56-2) 23684598
info@gebrax.com ; www.gebrax.com
1. USO
La Prueba Rápida para la detección de enfermedad celíaca es una prueba
inmunocromatográfica diseñado para la detección cualitativa de anticuerpos
(IgA / IgG / IgM) contra la transglutaminasa tisular humana en la sangre
humana.
2. RESUMEN Y EXPLICACIÓN
La enfermedad celíaca (EC) es una enteropatía causada por una intolerancia
permanente al gluten y, específicamente, a su fragmento de la proteína llamada
gliadina. La ingestión de proteínas, en personas con predisposición genética
induce una lesión severa de la mucosa intestinal que se caracteriza
histológicamente por una hiperplasia de las criptas, con un total o atrofia
subtotal de las vellosidades intestinales. Aunque el diagnóstico definitivo de
enfermedad celíaca se basa en cambios histológicos característicos
observados en biopsias intestinales, las pruebas serológicas, como la
detección de anticuerpos anti-gliadina, anti tTG y anticuerpos anti-endomisio,
ofrece costo efectivo y un método menos invasivo de detección de la
enfermedad.
Transglutaminasa es el principal auto-antígenos reconocidos por los
anticuerpos anti-endomisial. Es particularmente útil para pacientes pediátricos
(hasta 16 años de edad).
3. PRINCIPIO DEL TEST RÁPIDO.
Anticuerpos anti-tTG presentes en una muestra de sangre reaccionan con
partículas de látex de color que están recubiertos con tTG humana
recombinante. Estas partículas del complejo látex-tTG-Anti-tTG llega a la zona
de reacción a través de un proceso cromatográfico, donde la transglutaminasa
tisular humana inmovilizada captura el complejo, formando una línea roja.
4. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Para uso diagnóstico in vitro.
PRECAUCIÓN: Manipule las muestras de sangre entera como material de
riesgo biológico potencial.
Todas las muestras de sangre deben ser consideradas como potencialmente
contaminados y tratados como si fueran infecciosos. Por favor, consulte con los
EE.UU. Departamento de Salud y Servicios Humanos (Bethesda, MD.,
EE.UU.), la publicación de Bioseguridad en laboratorios microbiológicos y
biomédicos, 1999, 4 ª ed. (CDC / NIH) y N º de Enfermedades (CDC) 88-8395
en los informes de los procedimientos de seguridad en el laboratorio sobre
diferentes enfermedades o cualquier otra norma nacional o local.
GEBRAX Y CIA. LTDA. ALCÁNTARA 200 P. 6 LAS CONDES, SANTIAGO. F: (56-2) 23684598
info@gebrax.com ; www.gebrax.com
Siempre utilice guantes protectores cuando manipule muestras de pacientes.
Lea todas las instrucciones antes de realizar la prueba rápida. No utilice las
placas de prueba más allá de la fecha de caducidad. Deseche las placas de
prueba utilizados para residuos biológicos peligrosos según la normativa local y
nacional.
5. CONTENIDO DEL JUEGO Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS
Cada kit de prueba rápida celíaca contiene reactivos para 20 pruebas.
Almacenar los componentes del kit refrigerado (2-8 ° C) hasta su uso.
5.1. Dispositivos de prueba
Contenido: 20 paquetes individuales dispositivos de prueba.
Preparación: Listo para su uso.
Estabilidad: Estable hasta la fecha de vencimiento. Deseche las cintas de
prueba después de su uso.
5.2. Buffer
Contenido: Diluyente buffer 5 ml.
Preparación: Listo para su uso.
Estabilidad: Estable hasta la fecha de vencimiento.
5.3. Lancetas:
Contenido: 20 lancetas.
Preparación: Listo para su uso.
Estabilidad: Estable hasta la fecha de vencimiento. Deseche la lanceta
después de su uso.
5.4. Micropipetas
Contenido: 20 pipetas.
Preparación: Listo para su uso.
Estabilidad: Estable hasta la fecha de vencimiento. Deseche las micropipetas
después de su uso.
5.5. Instrucciones de uso
GEBRAX Y CIA. LTDA. ALCÁNTARA 200 P. 6 LAS CONDES, SANTIAGO. F: (56-2) 23684598
info@gebrax.com ; www.gebrax.com
6. MATERIALES NECESARIOS, PERO NO INCLUIDOS.
• Temporizador
• Toallitas de alcohol
• Guantes
7. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Almacenar el kit de prueba rápida celíaco refrigerado (2-8 ° C). Cuando se
almacena a estas temperaturas el kit es estable hasta la fecha de caducidad
impresa en la etiqueta del envase y la etiqueta de las bolsas de la placa de
prueba. No congelar o exponer el equipo a altas temperaturas o almacenar por
encima de 8 ° C cuando no se usa. No utilice cintas de prueba, el tampón
diluyente, lancetas o micropipetas después de la fecha de caducidad impresa
en la etiqueta.
8. PROCEDIMIENTO DE PRUEBA
Lea el procedimiento de ensayo completo antes de comenzar.
PREPARACIÓN PRELIMINAR
Coloque una cinta de prueba y el buffer diluyente a temperatura ambiente.
Sacar la placa de su bolsa sellada antes de usar y colocar sobre una superficie
plana.
PASO 1: TOMA DE MUESTRAS Y APLICACIÓN
A. La sangre debe ser extraída utilizando las lancetas y micropipetas incluidas.
Una muestra de sangre es recogida por punción en el dedo, el dedo índice,
medio o anular se pueden utilizar. Limpie el dedo con alcohol y deje secar al
aire. La posición de la palma de la mano hacia arriba y con una nueva lanceta
estéril, pinchar la yema del dedo. Para operar la lanceta:
1. Empuje la tapa amarilla en el cuerpo de la lanceta hasta que haga clic.
2. Desenrosque la tapa de la lanceta hasta que sienta que lo separan del
dispositivo, se activa la lanceta. No tire de la tapa, sólo giro.
3. Presione el extremo abierto de la lanceta en la yema del dedo del paciente y
pulse el botón de liberación.
GEBRAX Y CIA. LTDA. ALCÁNTARA 200 P. 6 LAS CONDES, SANTIAGO. F: (56-2) 23684598
info@gebrax.com ; www.gebrax.com
4. Deseche inmediatamente la lanceta en un recipiente adecuado.
Sostenga el dedo debajo del codo para aplicar una suave presión intermitente
en la base del dedo pinchado varias veces. Limpie la primera gota de sangre
(con una gasa estéril o algodón). Sostenga el micropipeta de recogida de
sangre en posición horizontal, con la salida de aire libre, y el tacto de la
muestra de sangre con la punta del tubo. No toque o raspe la piel. Llene la
micro pipeta a la línea de llenado, evitando las burbujas de aire. No apriete la
micropipeta durante la recolección. Prueba de la muestra de inmediato para
evitar la coagulación de la sangre.
Poco a poco agregar la muestra de sangre en el casete de prueba. Con
cuidado, coloque la pipeta en la ventana redonda (indicada con una flecha), y
apriete la perilla de la micropipeta en forma suave.
B. muestra de sangre recogida por otro tipo de pipeta
Utilizando una micropipeta y la punta desechable estéril poco a poco sacar 20
microlitros de muestra de sangre directamente de la punción en el dedo o de
una muestra de sangre venosa entera, y se distribuye en la ventana redonda
(indicada con una flecha) del dispositivo de prueba.
ATENCIÓN: Colección y la aplicación de la muestra debe ser rápida, con el fin
de evitar la coagulación de la muestra en la micropipeta.
GEBRAX Y CIA. LTDA. ALCÁNTARA 200 P. 6 LAS CONDES, SANTIAGO. F: (56-2) 23684598
info@gebrax.com ; www.gebrax.com
PASO 2: Solución buffer.
Espere 30-60 segundos hasta que la sangre ha sido absorbida, y añadir dos
gotas de tampón de dilución en la misma ventana. Añadir una gota a la vez,
manteniendo el frasco gotario en posición vertical. Evitar la contaminación del
gotario con la muestra.
Si el gotario no se utiliza, añadir 80 microlitros de tampón de dilución.
PASO 3: lectura de los resultados
Lectura visual de los resultados 10 minutos después de añadir el tampón de
dilución, y no más tarde de 15 minutos.
9. RESULTADOS
Los resultados de las pruebas se han de interpretar de la siguiente manera
(Figura 1):
NEGATIVO: Sólo aparece una banda azul en la ventana de resultados cerca
de la letra "C" (línea control) del cassette de prueba. Esta banda siempre debe
aparecer.
POSITIVO: Además de la banda de control azul, una banda color rosa-rojo
también aparece en la ventana de resultados bajo la letra "T" (la línea de
prueba) de la cinta de prueba. La intensidad de la línea depende de la
concentración de anticuerpos en la muestra.
Si no hay banda azul en el área de control, la prueba no es válida y debe
repetirse con otra cinta de prueba. Cualquier línea de color que aparezca
después de 15 minutos no tiene valor diagnóstico. El diagnóstico definitivo no
debe basarse únicamente en el resultado obtenido con una prueba, sino que
debe estar basada en una correlación de los resultados con los típicos signos y
síntomas clínicos.
GEBRAX Y CIA. LTDA. ALCÁNTARA 200 P. 6 LAS CONDES, SANTIAGO. F: (56-2) 23684598
info@gebrax.com ; www.gebrax.com
Figura 1. Interpretación de los resultados de la prueba rápida celíaca.
10. LIMITACIONES
La Prueba Rápida celíaca es cualitativa, y la interpretación cuantitativa de la
magnitud de los resultados no debe hacerse con respecto a la intensidad de
una línea positiva.
Como con cualquier procedimiento de diagnóstico, el resultado prueba rápida
de enfermedad celíaca debe ser interpretada conjuntamente con la
presentación clínica del paciente y cualquier otra información disponible para el
médico.
Es muy importante agregar la cantidad correcta de la muestra. Volumen de
muestra insuficiente, no puede llegar a la zona de reacción, y la prueba no
puede funcionar correctamente. Si el volumen de la muestra es demasiado
grande, la mezcla de reacción en el dispositivo se diluye, lo que puede
provocar un resultado falso negativo.
Es muy importante controlar el tiempo de reacción. Si el tiempo de reacción es
más corto de lo recomendado, esto puede conducir a resultados falsos
negativos. Si el tiempo de reacción es más de lo recomendado, esto puede
conducir a un resultado falso.
GEBRAX Y CIA. LTDA. ALCÁNTARA 200 P. 6 LAS CONDES, SANTIAGO. F: (56-2) 23684598
info@gebrax.com ; www.gebrax.com
11. CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
1. Desempeño contra ELISA y biopsia intestinal en pacientes pediátricos
Un estudio prospectivo se llevó a cabo con 123 pacientes pediátricos (1). Estos
pacientes fueron sometidos a una biopsia intestinal para fines diagnósticos.
Dentro de los 123 pacientes 10 pacientes tenían serología normal (controles),
111 tenían lesiones Marsh 3, y 2 pacientes tenían una lesión Marsh 2. Los
marcadores séricos de la enfermedad celíaca se determinaron
simultáneamente por la Prueba Rápida celíaca y examen ELISA. En este
estudio, prueba rápida celíaca tenía 94,3% de resultados conforme con el
método ELISA. Dos pacientes con deficiencia de IgA fueron positivos con la
prueba rápida celíaca y todos los controles fueron negativos. El diagnóstico con
el test rápido de enfermedad celíaca, se realizó con una sensibilidad del
90,0%, una especificidad del 90,0%, y la eficacia de 90,2%.
2. Prueba de rendimiento contra Inmunodot ALPHADIA gliadina-tTransglutaminasa
Sensibilidad y especificidad de la prueba rápida celíaca se compararon con 101
muestras (sangre) de los pacientes celíacos (con o sin una dieta sin gluten, y
nuevos pacientes celíacos), familiares celíacos y pacientes con problemas
digestivos (diarreas, desnutrición, dolor de estómago). Estas muestras de
sangre fueron analizadas con la prueba rápida celíaca, y los sueros derivados
de las muestras de sangre entera con la inmuno-gliadina ALPHADIA
tTransglutaminase KIT DOT. Los resultados se muestran en la Tabla 1.
Table 1. Performance of the Celiac Quick Test against Immunodot
ALPHADIA gliadin-tTransglutaminase DOT KIT.
Celiac Quick
Test
Positive
Negative
Immunodot
Agreement: 99%
ALPHADIA
Sensitivity: >99%
Positive
Negative
Specificity: 98.9%
11
1
0
89
3. Desempeño contra Test de varilla CD1
El rendimiento de la Prueba Rápida celíaca se comparó con el CD1 Stick
(Operon SA, Zaragoza) prueba por medio del análisis de 106 muestras de
sangre (prueba rápida celíaca) y sus correspondientes muestras de suero
GEBRAX Y CIA. LTDA. ALCÁNTARA 200 P. 6 LAS CONDES, SANTIAGO. F: (56-2) 23684598
info@gebrax.com ; www.gebrax.com
(Stick CD1). Estas muestras procedían de pacientes celíacos (con o sin una
dieta sin gluten, y nuevos pacientes celíacos), familiares de celíacos y
pacientes con problemas digestivos (diarreas, desnutrición, dolor de
estómago). Los resultados se muestran en la Tabla 2.
Table 2. Performance of the Celiac Quick Test against the Stick CD1 test.
Positive
Celiac Quick Test
Negative
Stick CD1
Positive
Negative
11
1
0
94
Agreement: 99%
Sensitivity: >99%
Specificity: 98.9%
12. REFERENCIAS.
1.
Zhang J. etal. "Modulation of the in situ activity of tissue transglutaminase by
calcium and GTP". The Journal of Biological Chemistry (1998) 273 (4): 2288-2295.
2.
Sardy M. et al. "Recombinant human tissue transglutaminase ELISA for the
diagnosis of gluten-sensitive enteropathy". Clinical Chemistry (1999) 45(12): 21422149.
Sorell L. et al. "One-step immunochromatographic assay for screening of celiac
disease". Lancet (2002) 359: 945-946.
3.
4.
5.
Drago S. et al. "Recent developments in the pathogenesis, diagnosis and treatment
of celiac disease". Expert Opinion in Therapy Patents (2002) 12(1): 45-51.
Hansson T. et al. "Recombinant human tissue transglutaminase for diagnosis and
follow-up of childhood coeliac disease". Pediatric Research (2002) 51 (6): 700-705.
6.
Ferre-Lopez, S. et al. "A reliable generation of immunochromatographic sticks for
both t-TG and AGA screening in Coeliac Disease". Clinical Gastroenterology and
Hepatology (in press)
7.
Jennings J. et al. "New developments in celiac disease". Current Opinion in
Gastroenterology (2003) 19 (2): 118-129.
GEBRAX Y CIA. LTDA. ALCÁNTARA 200 P. 6 LAS CONDES, SANTIAGO. F: (56-2) 23684598
info@gebrax.com ; www.gebrax.com