Optimización en la utilización de vitaminas en organismos acuáticos Octubre del 2012 Claudio Larrain C. M.V. DSM NUTRITIONAL PRODUCTS CHILE S.A. Page 1 Vitaminas “Palabra mágica” para el consumidor Page 2 ¿Que son las vitaminas? Sustancias de origen orgánico esenciales en pequeñas cantidades para el normal crecimiento, salud, reproducción y sobrevivencia 14 VITAMINAS Liposoluble Vitamina A Vitamina D Vitamina E Vitamina K Hidrosolubles Complejo - B Tiamina Riboflavina Piridoxina Niacina Vitamina B12 Biotina Acido Fólico Acido Pantoténico Page 3 Vitamina C Colina FUNCION DE LAS VITAMINAS Vitamina A: Visión, protección de epitelios Vitamina D: Procesos de calcificación Vitamina E: Antioxidante celular Vitamina K: Coagulación Vitamina C: Antioxidante, Colágeno, Inmunidad Vitaminas del complejo B (B1, B2, B6, B12 y Ac. Pantoténico o Vit B5) Ac. Nicotínico (Niacina, Nicotinamida) Ac. Fólico (Ac. Pteroilglutámico o Vit B9) Biotina (Vitamina H) Colina: Metabolismo intermediario, estructural, neurotransmidor Page 4 FUNCION DE LAS VITAMINAS Regulación expresión génica Componente Estructural Sistemas Antioxidantes Regulación de vias metabolicas (coenzimas) Page 5 100% Funciones biológicas FUNCION DE LAS VITAMINAS: Regulación expresión génica Vitamina A Vitamina D3 Crecimiento, multiplicación celular, síntesis proteínas 6 Beneficios sanitarios: Función de barrera / Inmunidad Mucus • • • • El epitelio mucoso normal previene (arriba) la adherencia de bacterias potencialmente patogénicas por atrapamiento en el mucus. La deficiencia de vitamina A altera la adecuada regeneración de las barreras epiteliales mucosas durante la infección BacteriasNormal epithelia Infección Insuficiente vitamina A Epitelio durante deficiencias de Vitamina A Mayor adherencia de bacterias potencialmente patogénicas resultando en una enfermedad invasiva Metaplasia escamosa o necrosis Inflamación Vaso linfático 7 FUNCION DE LAS VITAMINAS: Desarrollo óseo BMP-4 PPAR Osteocalcina IGF-1 RAR Maduración intestinal Absorción de Ca2+ y AA indirectamente directamente Regulación de: -Diferenciación, proliferación y mineralización de osteoblastos -Síntesis de colageno Regulación de mineralización de huesos Darias et al, 2011 • Vitamina D3 y C: Rol clave en metabolismo del calcio. Page 8 FUNCION DE LAS VITAMINAS: Componente estructural Nicotinamide Adenine Nicotinamida adenina dinucleotido NAD y NADP Coenzima involucrada en todo el metabolismo de carbohidratos, proteínas y grasas 9 Niacina Nicotinamida FUNCION DE LAS VITAMINAS: Componente estructural ACP Carbohidratos pantotenato Glicólisis Acetilación de aminoazúcares Acetilación de xenobioticcs Acetilcolina Acidos grasos Ciclo de ácidos tricarboxílicos b-Oxidación Colesterol Sales biliares Vitamina D Hormonas esteroidales , phospholipids 3NADH/H 3NAD+ + FADH2 FAD+ Cadena respiratoria … nADP + Pan 10 nATP 2O2 Aminoácidos ramificados Debido a su incorporación en la CoA & ACP el ácido pantoténico juega rol fundamental en todo el metabolismo Proteinas Catabolismo proteico … 4H2O Acido pantoténico FUNCION DE LAS VITAMINAS: Sistemas antioxidantes Radicales libres Antioxidantes Especies oxígeno reativas (ROS) Antioxidantes endógenos Especies cloro reativas(RCS) Especies nitrógeno reativas(RNS Acido ascórbico Vitamina C - SOD, CAT, GPX, etc ) Antioxidantes dietarios - Vit . C, Vit . E, Carotenoides,, etc DL acetato de α- tocoferol Vitamina E 11 Beneficios sanitarios: Vitaminas y oxidación celular Page 12 Inmunidad innata Mecanismos microbicidas de los fagocitos Destrucción de Microorganismos extracelulares Fagocito oxidasa Lisosomas con enzimas Fagosoma con microorganismos ingeridos Destrucción de microorganismos mediante enzimas lisosomales en fagolisosomas Arginina Destrucción de microorganismos fagocitados por ROIs y NO “Oxidative burst” de fagocitos: Producción interna y externa de especies reactivas oxigenadas (ROIs y NO). En peces la respuesta intracelular es más pronunciada que la extracelular Page 13 Regeneración de Vitamina E Regeneración de Vitamina E Acido ascórbico Acido L-DehidroAscórbico Reacción redox Radical peroxilo de acido graso Hidroperoxido de ácido graso Vitamina E -Tocoferol - Tocoferol – hidroquinona Radical - Tocoferol Vitamina C Radical Ascorbilo 14 Acido ascórbico FUNCION DE LAS VITAMINAS: Regulación de vias metabólicas; coenzimas Carbohidratos Proteínas Grasa Glucosa Aminas B6 Conjunto de Aminoácidos B6 FA AF B2 Ácido Úrico Page 15 B1 B6 Ácido Pirúvico B12 Purinas B6 Célula Glicógeno PP B1 B6 Dieta B2 PP Glicerol Acetil CoA B2 AP Ciclo de Krebs (del ácido cítrico) B2 PP B1 Ácidos Grasos PP B2 PP H B1 = Tiamina B2 = Riboflavina PP = Nicotinamida B6 = Piridoxina B12 = Cobalamina H = Biotina AF = Ácido Fólico AP = Ác Pantotênico Célula Urea Excreción ¿Porque suplementar Vitaminas en los alimentos? A B Minerals Vitamins Fatty acids C Biosíntesis por los animales puede no ser adecuada No existe producción propia de vitamina C en los peces Contenido muy variable en las materias primas Proceso de elaboración de alimentos degradan vitaminas de los ingredientes Necesidad de adaptar peces a demanda metabólica, condiciones Objetivo: que los peces reciban lo que necesitan, para un óptimo crecimiento y productividad Page 16 ¿Que niveles de vitaminas suplementar en los alimentos acuáticos? ¿Existen diferencias entre los requerimientos estudiados en ensayos experimentales y la realidad productiva? ? Nutrient Requirements of Fish and Shrimps, NRC 2011 Gramos Incremento en la productividad L.Vannamei; mejora en tasas de crecimiento Dias de cultivo Clave en reducción de costo: • • • FCR 2.5 to <1 from 1995 to 2010 Tiempo a la cosecha Sobrevivencia Page 18 McIntosh 2010 Productividad, % (referencia 1940) Han mejorado nuestros alimentos en la misma proporción??? Año Page 19 19 ¿Cuanto más pueden ser incrementadas las tasas de crecimiento? Enfermedades y malformaciones Crecimiento Productividad Salud Page 20 Webb et al 2010; Hodges 2010; Julian 1998; Duncan 2001; Rauw 1998 ¿Cuanto más pueden ser incrementadas las tasas de crecimiento? Los animales de cultivo, crecerán adecuadamente (incrementaran productividad) mientras se le entreguen las condiciones ambientales (Alimento) adecuadas para que puedan expresar su potencial genético. Page 21 Requerimientos Vitamínicos: ¿Que niveles vitamínicos reales requieren los organismos acuáticos en el alimento? Depende Page 22 Requerimientos Vitamínicos según Woodward, NRC 1981 y NRC 1993 en Trucha Arco Iris Page 23 Signos más importantes y visibles de deficiencias vitamínicas 24 Signos de deficiencia Signos de deficiencia A Exoftalmia, decoloración de piel, ascitis, aleta/piel hemorragicas Niacina Lesiones de aleta/piel, exoftalmia, anemia, coloración oscura D Crecimiento reducido, tetania de músculo blanco, hígado graso Acido Pantoténico Laminillas branquiales con exudado, anorexia E Distrofia muscular, hemorragias y edema Biotina Atrofia muscular, hígado palido Acido fólico Coloración oscura, branquias pálidas, exoftalmia K3 Anemia, branquias hemorragicas Vitamina C Escoliosis, espina dorsal deformada / Acortamiento opérculo / hemorragias externas B1 Signología nerviosa Colina Hígado graso, intestino hemorragico Inositol Abdomen distendido, erosión de aleta, coloración oscura, producción de mucus reducida B2 Cataratas, decoloración de piel, aletas hemorragicas B6 Natación errática, Signología nerviosa, tetania al manipular, boqueo B12 Anemia, coloración oscura Page 24 Factores que Influencian los Requerimientos Vitamínicos • • • • • • • • Sistema de producción (producción intensiva, stress) Régimen de alimentación (ad libitum, comida, restricción) Uso de antibióticos Condiciones ambientales (tºC, humedad, nivel de amonio, CO2, calidad del agua; desafíos imunológicos, molestias) Especie y cepa de los organismos Calidad, variabilidad y biodisponibilidad de los alimentos Antagonistas vitamínicos y efectos de otros ingredientes de la dieta (grasas, minerales) Formas vitamínicas Page 25 Requerimientos Vitamínicos: ¿Que queremos obtener? Req. determinados experimentalmente para evitar deficiencia Suplemento de corrección pérdidas proceso Suplemento de seguridad Efectos adicionales (calidad de carne, respuesta immune) Aporte recomendado Page 26 Aporte opcional tasa de crecimiento % Máxima tasa de crecimiento Requerimientos Vitamínicos: Calidad del Agua: O2 y CO2 Saturación O2 (%) O2 y/o CO2 = Concentración CO2 (mg/L) Estrés + inmunosupresión Thorarensen & Farrell 2011; Fivelstad et al. 2003; Burt et al. 2012 Requerimientos Vitamínicos: Cambios en utilización de materias primas Almidón Aceites vegetales Aceite de pescado Proteinas vegetales Harina de pescado Fuente: Fish Farming Expert, 2012. «Future feed» IFFO update Julio, 2012 Page 28 28 Retención, % de adicionado Estabilidad de diferentes formas de Vitamina C en alimento extruído para peces 100 93 91 95 88 88 86 85 80 83 80 60 45 40 26 22 20 4 2 0 Tiempo 0 AAMP-1 Gadient et al., 1997 Page 29 3 mts, TA AAMP-2 AAMP-3 3 mts, 35 °C AA Rec FCAA Estabilidad de fuentes de vitamina C monofosfato en alimento extruido de salmonídeos Retención, % de mezcla Influencia de la temperatura de secado post extrusión en la retención de Vitamina C monofosfato (tiempo secado: 5 min) 120 100 97.3 97.8 86 100 94.4 96.7 92.9 84.6 80 60 40 20 0 Pellet hundible Pellet lento hundimiento 100 °C Page 30 Gabaudan et al., 1997 120 °C Pellet flotante 150 °C analisis: HPLC directo Productos vitamínicos utilizados: Factores de conversión de fuentes vitamínicas Page 31 Requerimientos Vitamínicos: ¿Podemos ayudar a hacer peces más Stress robustos? Inflamación Resistencia a enfermedades Stress Capacidad antioxidante Comportamiento Capacidad circulatoria Crecimiento Consumo O2 Utilización alimento Calidad ósea Osmorregulación Composición corporal Calidad producto Calidad producto ¿Cómo mejorar la robustez del los peces? Calidad del agua Temperatura Densidad de cultivo Velocidad del agua Estrategias de esmoltificación Fotoperíodo Nutrición Genética Vacunación Transporte etc… Enfoque preventivo Requerimientos nutricionales: Curva respuesta productiva vs nivel dietario del nutriente Exceso No óptimo Sobre dosificación Nivel óptimo No óptimo Marginal Déficit Rendimiento productivo Requerimiento dietario Concentración en la dieta Page 34 34 Requerimientos nutricionales: Curva respuesta productiva vs nivel dietario del nutriente Ineficiencia económica OVN No óptimo Marginal Déficit Rendimiento productivo Requerimiento Dietario NRC Concentración en la dieta Page 35 35 Factores humorales producidos por células inmunes: Vitamina C y producción de anticuerpos en relación al stress por oxígeno en Trucha Arco iris 1 0.9 O.D. 405 nm 0.8 0.7 vit C 10 ppm Vit C 100 ppm Vit C 1000 ppm 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 Hypoxia Normoxia Hyperoxia Dabrowski et al, 2004 Vitamina C: Efecto sobre el número de leucocitos en trucha arco iris en condiciones normales y de stress por confinamiento 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 a a’ b’ b 0 24 Control dias 29 Estresados 31 10^7 células/ml 10^7 células/ml Acido Ascórbico monofosfato 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0 24 dias 29 Control 31 Estresados Verlhac et al.2007 Stay C 0 ppm Page 37 Stay C 1000 ppm Vitamina C y reparación de heridas Diseño experimental Ensayo (CRNA, Village-Neuf) • Fish: rainbow trout of IBW: 56 g • Tanques: duplicado/ tratamiento, Temperatura del agua: 15 C • Período de adaptación: 6 semanas con dieta libre de AA • Período de alimentación experimental: 4 semanas antes de la realización de incisión, hasta el fin del ensayo • Tratamientos: dietas extruídas prácticas con ROVIMIX STAY-C como fuente de AA a niveles de: 20, 150 and 1000 mg AA /kg alimento Histología Inmediatamente post incisión 10 dias post incisión 3 dias post incisión 7 dias post incisión 21 dias post incisión Vitamina C en la dieta y reparación de tejidos Indice de reparación de tejidos c Indice promedio 2 b a 1.6 20 ppm 150 ppm 1000 ppm 1.2 0.8 0.4 0 0 3 6 9 12 15 Tiempo de muestreo (dias) 18 21 Índice para estructura normal=3 (Wahli et al, 2003) ROVIMIX® E : Vitamina E Vitamina E y funciones fagocitarias Trucha arco iris suplementada por 4 meses con dietas con 50, 150 y 600 ppm de Vit E 100 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 90 phagocytic index AUC (mV x 10^5 x sec) substrate: luminol 80 70 vit E 50 ppm vit E 600 ppm ab 60 50 40 a vit E 150 ppm b 30 20 10 0 vit E 50 ppm vit E 150 ppm vit E 600 ppm Oxidative burst: Producción total de especies reactivas de oxígeno vit E 50 ppm vit E 150 ppm vit E 600 ppm Fagocitosis La vitamina E dietaria influencia las funciones macrofágicas Page 41 Efecto de suplementación de Riboflavina, sobre contenido de lípidos hepático, en dietas con diferente nivel de lípidos, Salmón del Atlántico c contenido lípidos (grs/kg tejido) 35 30 25 d a b 20 15 10 Page 42 5 0 Base 15% Suplemento 15% Base 28% Suplemento 28% Bronstad, Bjerkas y Waagbo, 2002 Requerimientos nutricionales: Curva respuesta OVN Incubabilidad en huevos de Camarón Kuruma Marsupenaeus japonicus, en dietas con distintos niveles de Vita mina E y Vitamina C 90 80 Incubabilidad % 70 0 ppm Vit E 60 300 mg Vit E 600 mg Vit E 50 40 30 20 0 ppm Vit C 500 ppm Vit C 1000 ppm Vit C Nguyen et al, 2012 Page 43 43 OVN: Niveles vitamínicos sugerido Page 44 Sinergia entre distintos productos puede modular diferentes funciones inmunes Fuente de nucleótidos para incrementar proliferación y cooperación celular Nucleótidos libres Antioxidante RESPUESTA SISTEMICA Antioxidantes Proliferación celular Vitamina E en la membrana de los leucocitos Activación celular Modulación de Microflora intestinal Aceite esenciales 45 Vitamina C en el citoplasma de los leucocitos RESPUESTA MUCOSA Activación de actividad antibacteriana de los fagocitos Beta 1,3/1,6 glucanos Enfoque multi componente para una mejor sanidad Optimización utilización vitaminas: Resumen: - Las vitaminas son absolutamente esenciales para el desarrollo, crecimiento, reproducción - Nuestro objetivo es garantizar que los requerimientos vitamínicos sean cubiertos en el organismo y no en el alimento. (Se debe considerar contenido real, estabilidad real, biodisponibilidad, materias primas, etc) - Las vitaminas han demostrado ser factores limitantes para la expresión de caracterísicas productivas deseadas. (dosis:respuesta positiva) - Las vitaminas presentan actividad sinérgica junto a otros componentes, para potenciar aspectos productivos, particularmente sanitarios. Page 46 46 Muchas Gracias! Claudio.larrain@dsm.com Page 47