Subido por Eduardo Zavala

Resumen primer parcial de cultivo

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Contenido
1
¿Qué es la célula?..................................................................................................................................................... 2
2
¿Qué es un cultivo de células? .................................................................................................................................. 2
Tipos de cultivo................................................................................................................................................. 2
Cultivo Primario ................................................................................................................................................ 2
Cultivo secundario ............................................................................................................................................ 3
Clasificación en función del medio o el tipo de célula. ....................................................................................... 3
Linaje celular .................................................................................................................................................... 3
2.5.1
Linaje continuos o transformados ............................................................................................................. 4
2.5.2
Linaje finito ............................................................................................................................................... 4
Consideraciones al elegir un linaje celular ......................................................................................................... 4
Cultivo in vitro .................................................................................................................................................. 5
2.7.1
Ventajas .................................................................................................................................................... 5
2.7.2
Desventajas .............................................................................................................................................. 5
Condiciones que debe tener un cultivo (3) ........................................................................................................ 5
Influencia del medio ambiente en cultivos de células depende de: ................................................................... 5
3
Suspensión celular.................................................................................................................................................... 5
¿Qué es un callo?.............................................................................................................................................. 5
¿Qué son las células inmovilizadas? .................................................................................................................. 5
3.2.1
Selección del material para inmovilizar células .......................................................................................... 6
3.2.2
Matrices utilizadas .................................................................................................................................... 6
3.2.3
Tipos de inmovilización ............................................................................................................................. 6
¿Qué son los protoplastos? ............................................................................................................................... 6
3.3.1
Uso de protoplastos .................................................................................................................................. 6
3.3.2
Métodos de aislamiento de protoplastos .................................................................................................. 6
3.3.3
Aislamiento exitoso................................................................................................................................... 6
3.3.4
Fusión somática ........................................................................................................................................ 7
3.3.5
Mezcla de protoplastos ............................................................................................................................. 7
1 ¿Qué es la célula?
Unidad morfológica y básica para la vida.
2 ¿Qué es un cultivo de células?
Es la propagación de células fuera del organismo de origen
Tipos de cultivo
Medios de
cultivo
Primarios
Secundario
Suspensión
Monocapa
Adherentes o
monocapa
No adherentes o
en suspensión
Linaje celular
Transformadas o
continuas
Finitas
Cultivo Primario
Cultivos preparados a partir de un tejido u órgano. Pueden iniciarse con o sin fraccionamiento previo para separar los
distintos tipos celulares.
Conservan sus características originales y su proliferación es limitada. Pueden ser removidas del recipiente de cultivo para
formar cultivos secundarios.
Se lleva acabo un proceso de disociación de células donde es más fácil hacerlo con embriones a diferencia de tejidos
adultos. Se efectúa con una enzima proteolítica, como la tripsina (fría o caliente) y colagenasa. O mecánicamente.
Se requiere un nuevo explante (tejido separado de su órgano de origen y transferido a un medio artificial) para cada
experimento.
Cultivo secundario
Es llevado a cabo con el objetivo de…
•
•
•
•
Cuando las células en cultivo adherentes ocupan todo el sustrato disponible o cuando las células en cultivos en
suspensión superan la capacidad de proliferar.
Para mantener la densidad celular optima
Para llevar un crecimiento continuo
Estimular su proliferación
Clasificación en función del medio o el tipo de célula.
Monocapa o
adherentes
Función
Celulas del tipo
fibroblasticas. celulas
de tipo epiteleal
No requieren del uso
de superficies
Independientes o
suspension
Confluencia de celulas
mas grandes
Nutrientes insuficientes
Linaje celular
Conjunto de células especializadas que proceden de una célula troncal original.
Están formadas por células que se diferencian genética y morfológicamente de las células de origen. Pueden provenir de
células tumorales o de un proceso de transformación.
Tiene características como:
•
•
•
Ser aneuploides,
no tener inhibición por contacto
Crecimiento indefinido
2.5.1 Linaje continuos o transformados
Evitan la senescencia, creciendo indefinidamente, pueden surgir de forma espontanea o induciéndolas, son el resultado
de un cambio genotípico denominado transformación.
•
•
•
•
Son inmortales
Son malignas: Invaden el tejido y dan lugar al crecimiento de tumores
Genéticamente inestables: Aberraciones cromosómicas
Crecimiento aberrante
2.5.1.1 Transformación
Puede inducirse fisiológicamente a través de hormonas como la hidrocortisona o inductores no
fisiológicos dimetilsulfoxido (DMSO).
El primer linaje reportado y aún vigente en investigación son las células HeLa, el linaje al cual pertenecen estas células
deriva de una muestra de cáncer cérvico uterino obtenida el 8 de febrero de 1951 de una paciente llamada Henrietta
Lacks (de allí el acrónimo He[nrietta] La[cks]) quien falleció el 4 de octubre de ese mismo año debido al cáncer.
2.5.2 Linaje finito
Tienen vida limitada que va entre 20 a 80 generaciones.
2.5.2.1 El papel de la telomerasa en este linaje
La línea celular HeLa fue derivada para su uso en la investigación del cáncer. Estas células proliferan
anormalmente rápido, aún comparadas con otras células cancerígenas. En el libro The Immortal Life of
Henrietta Lacks de Rebecca Skloot, la autora explica que las células HeLa tienen una versión activa de la
telomerasa durante la división celular, que previene el acortamiento gradual de los telómeros, implicados
en el envejecimiento y eventual muerte de las células. De este modo, las células HeLa eluden el límite de
Hayflick, que es el número limitado de divisiones celulares que la mayoría de las células normales pueden
llevar a cabo antes de morir en el cultivo celular.
En el linaje finito la telomerasa en cada división celular se provoca un desgaste que la limita del
crecimiento infinito.
Consideraciones al elegir un linaje celular
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Células normales o transformadas
Especie
Fuente del tejido
Características del crecimiento
Disponibilidad
Validación
Expresión fenotípica
Línea celular central
Estabilidad
Cultivo in vitro
Definiendo “in vitro” el cual alude al significado de “fuera del organismo” consiste en el aislamiento de órganos, tejidos
o células vegetales y el ajuste de las condiciones necesarias para favorecer su crecimiento en un medio artificial.
2.7.1 Ventajas
•
•
•
•
•
Fácil manipulación durante condiciones controladas
Alternativa al uso de animales
Permite trabajar en pequeña, mediana y gran escala.
Congelación de células con mínima perdida de viabilidad
Fácil acceso a múltiples líneas celulares
2.7.2 Desventajas
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•
•
El fenotipo puede que no sea el correcto debido a cambios en el ambiente
Menor heterogeneidad
Perdida de arquitectura tridimensional
No se encuentran los mismos estímulos hormonales y nutricionales que en el lugar de origen.
Condiciones que debe tener un cultivo (3)
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Asepsia
Nutrientes
Gases
Influencia del medio ambiente en cultivos de células depende de:
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Naturaleza del sustrato
Composición fisicoquímica y fisiología del medio de cultivo
Constitución gaseosa
Temperatura de incubación
Proveer el ambiente apropiado
3 Suspensión celular
Consiste en células libres y agregados celulares distribuidos en un medio en movimiento.
•
El mejor inóculo para una suspensión de células es un callo friable con alto ritmo de división celular.
•
Presentan un rápido decaimiento en su actividad catalítica
¿Qué es un callo?
Masa desorganizada dividiéndose activamente. Son células no diferenciadas. Consiste en células somáticas de espécimen
de planta adulta.
¿Qué son las células inmovilizadas?
Células o enzimas físicamente confinadas o localizadas en una cierta región definida en el espacio donde se encuentran.
Pueden ser inmovilizadas de forma temporal o permanente.
3.2.1 Selección del material para inmovilizar células
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Material estable e inerte, biocompatible y sin reacción
Generar protección contra deterioro microbiano
No degradables, aptos para condiciones de pH y temperatura baja
Accesibilidad al sustrato
Tener alto factor de inmovilización para una eficiente bioconversión
3.2.2 Matrices utilizadas
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Pellets de gluten
Pectato
Carragenina
Poliacrilamida
Resina
Celulosa
3.2.3 Tipos de inmovilización
•
Pasiva:
•
Activa:
¿Qué son los protoplastos?
Son células vegetales que se han desprovisto de su pared celular.
3.3.1 Uso de protoplastos
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•
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Mejoramiento genético
Investigación viral de plantas
Cultivos de un medio
3.3.2 Métodos de aislamiento de protoplastos
Estos métodos se encargan de degradar la pared celular con el fin de obtener una célula desnuda, con la
característica de solo contener todos los organelos dentro de su membrana.
•
Químicos
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Enzimáticos (Pectinasa, celulosa, hemicelulosa y mezcla de ellas)
•
Mecánicos
3.3.3 Aislamiento exitoso
Contraer la pared celular, plasmolisando las células con sales, azucares, y alcoholes azucarados como el
manitol. La concentración osmótica rompe a pared y protege la célula.
3.3.4 Fusión somática
O hibridación somática, consiste en la fusión de dos células protoplastos. Células somáticas de diferentes
especies y la posterior regeneración de plantas híbridas a partir de los protoplastos fusionados. De las cuales
se describe a continuación el tipo de fusión que se pueda dar entre estas células.
3.3.5 Mezcla de protoplastos
▪
Homocarion: Fusión de protoplastos de la misma planta
▪
Intraespecífica: Fusión de protoplastos de plantas de la misma especie
▪
Interespecífica: Fusión de protoplastos de diferentes especies
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