LECTOR DE ELISA Estudiantes: Victor Ordeñana Valverde María José Madrigal LECTOR DE ELISA • Un Lector o analizador de ELISA es un espectrofotómetro especializado, diseñado para efectuar la lectura de los resultados de esta técnica la cual se utiliza para determinar la presencia de anticuerpos o antígenos específicos presentes en una muestra. TÉCNICA DE ELISA • El ELISA (ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas) es una técnica de laboratorio que identifica pequeñas partículas llamadas “antígenos” que causan enfermedades. • Estos antígenos se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como cambio de color o algún otro tipo. TIPOS DE ELISA Se dividen en dos grupos 1. Anticuerpos marcados: • Elisa directo, se usan enzimas. • Elisa indirecto, se usan anticuerpos conjugados. • Elisa sandwich • Doble (DAS) • Heterólogo (HADAS) 2. Antígeno marcado: • Elisa competitivo PRINCIPIO DE SU OPERACIÓN • Como ya se menciono el analizador de ELISA es un espectrofotómetro especializado. A diferencia de los espectrofotómetros convencionales que permiten efectuar lecturas en un rango amplio de longitudes de onda, este dispone de filtros o rejillas de difracción que limitan el rango de longitudes de onda a aquellas que se utilizan en la técnica ELISA • Fundamentalmente su técnica está basada en detectar un antígeno inmovilizado, mediante anticuerpos que de manera directa o indirecta, generan una reacción cuyo resultado se puede leer gracias al espectrofotómetro, que como sabemos es conocido como el Lector o Analizador de Elisa. Procedimiento analítico de gran sensibilidad y especificidad Automatización. Sencillo. Pruebas de bajo coste. VENTAJAS Equipo adaptable para cualquier laboratorio. Menor Tiempo. Disminuye los errores y permite un mejor control de calidad. Software de análisis de control y datos fácil de usar. IMPORTANCIA DE LA PRUEBA DE ELISA • En el diagnóstico médico se usa la prueba de Elisa para detectar enfermedades que son producidas por parásitos, microplasmas, bacterias y hongos. PA RA Q U E E L A N A L I Z AD OR D E E L I S A O P E RE CO RRE CTA ME N T E , E S N E CE S A RI O V E RI F ICA R • Un ambiente limpio, libre de polvo. • Una mesa de trabajo estable. Lo recomendable es que la misma esté alejada de equipos que generen vibraciones –centrífugas, agitadores–, • Que tenga un tamaño adecuado que permita ubicar, al lado del analizador de ELISA, los equipos complementarios requeridos para efectuar la técnica en mención: lavadores, incubadora, dispensador y computador con periféricos. • Una fuente de suministro eléctrico de acuerdo con las normas y estándares implementados en el país. En los países americanos se utilizan por lo general voltajes de 110 V y frecuencias de 60 Hz. La calibración de un analizador de ELISA es un proceso especializado que debe realizar un técnico o ingeniero debidamente entrenado, siguiendo las instrucciones que para el efecto brinda cada fabricante. CALIBRACIÓN Para efectuar la calibración se requiere disponer de un juego de filtros grises, los cuales se encuentran montados en una placa de igual geometría a las utilizadas para efectuar los análisis. Los fabricantes suministran dichos filtros y pueden ser utilizados para realizar calibraciones a cualquier longitud de onda de las que utiliza el equipo. Revisar que los sensores ópticos de cada canal estén limpios. Si se detecta suciedad, limpiar con un pincel la superficie de las ventanas de los emisores de luz y de los sensores. Confirmar que el sistema de iluminación esté limpio. MAN TEN I MI ENTO BÁS I CO ( FRECU EN CI A: D I ARI A) Verificar que la calibración del analizador es adecuada. Cuando se inicien las operaciones diarias, permitir que el analizador se caliente durante 30 minutos. A continuación, realizar una lectura en blanco y luego leer un módulo lleno de sustrato. Las lecturas deben ser idénticas. Si no lo son, invertir el módulo y repetir la lectura, a fin de determinar si la desviación se origina en el módulo o en el lector. Examinar el avance automático de la placa. El mismo debe ser suave y constante. Verificar la estabilidad de la lámpara. Usar el filtro de calibración, efectuando lecturas con intervalos de 30 minutos o una misma placa. Comparar las lecturas. No deben existir diferencias. MAN T EN I MI ENTO P R E V EN T I VO ( F R E CU EN CI A: T R I MES T RAL ) Limpiar los sistemas ópticos de los detectores y los sistemas de iluminación. Limpiar el mecanismo de avance de la placa. Verificar la alineación de cada pozo con los sistemas emisores y detectores de luz. El analizador Elisa es una herramienta que ayuda al diagnostico y seguimiento de muchas enfermedades infecciosas. Posee alta sensibilidad y especificidad además de exactitud y precisión. CONCLUSIONES La automatización nos ofrece una gran disminución los errores y ofrece un gran control de calidad. Se debe tener en cuenta la relación parasito-huésped en la interpretación de los resultados. GRACIAS!
