EL FROTIS SANGUINEO Un frotis de sangre o extensión es un método científico que consiste en extender parcialmente una gota de sangre en la superficie de un portaobjetos de manera tal que las células se dispongan formando una sola capa de ellas, con el fin de analizarla posteriormente. Es más adecuado emplear sangre que aún no ha estado en contacto con el anticoagulante, pues en algunos casos, este podría alterar la morfología celular o interferir con la fijación de los colorantes (algunos anticoagulantes tienden a deformar las células de la sangre). Su empleo es de vital importancia para obtener información de: 1. La valoración de la estimulación eritropoyetica. 2. Las anomalías en la maduración nuclear y citoplásmica de las células hemáticas. 3. Los trastornos en la arquitectura de las células al formarse en la médula ósea. 4. Las alteraciones singulares en la forma de las células, que son una identificación especifica de algunas enfermedades. 5. Algún indicador de los efectos nocivos de la quimioterapia y de la radioterapia. 6. La diferenciación y recuento de los elementos celulares de la sangre. La fidelidad de la información obtenida de ellos, depende en gran parte de la calidad de las extensiones. Estas no deben ser demasiado gruesas porque las células se amontonarían y no podrían ser reconocidas, ni diferenciarse, ni demasiado delgadas porque las células se deformarían, distorsionarían y destruirían. Por eso los frotis de sangre deben ser bien nivelados y para obtener buenos resultados es necesario que: 1. Tanto portaobjetos como cubreobjetos deben estar bien limpios y desengrasados (preferentemente nuevos). 2. La gota de sangre usada para la preparación de un frotis no debe ser muy grande ni pequeña, de preferencia del tamaño de la cabeza de un alfiler (entre 2 y 3 mm), obtenida por punción capilar. 3. La sangre no haya estado en contacto con anticoagulante, pues podría deformarse la morfología celular. 1 4. La lectura de las extensiones se hará en las zonas donde los eritrocitos "casi se tocan". PARTES DE UNA EXTENSIÓN. CABEZA. Es la zona inicial de la extensión. Es la región más gruesa. En ella se encuentra una mayor proporción de linfocitos, y los hematíes forman aglomerados (pilas de monedas). CUERPO. Es la zona media del frotis. Su espesor es el apropiado. En ella existe una adecuada proporción entre los distintos tipos de leucocitos. Contiene la "zona ideal" de observación, que corresponde a la porción que limita con la cola. COLA. Es la zona final de la extensión. Suele tener un aspecto redondeado. Es la región más fina. En ella se encuentra una mayor proporción de leucocitos grandes (granulocitos y monocitos), y además. los hematíes están deformados y presentan una tonalidad uniforme. En su porción terminal suelen ser más abundantes las plaquetas, sobre todo si son grandes. BORDES. Contienen una mayor proporción de leucocitos grandes. Si están deshilachados, en ellos las células son difíciles de reconocer por estar deformadas o destruidas CARACTERÍSTICAS DE UNA BUENA EXTENSIÓN. La cabeza ha de estar cerca de uno de los extremos del portaobjeto. La cola debe estar cercana al otro extremo del portaobjeto, pero sin llegar a él. El borde de la cola tiene que estar finamente deshilachado. Ese fino deshilachamiento recibe el nombre de "barbas". Toda la extensión ha de ser fina y homogénea. Los bordes laterales de la extensión deben estar separados de los bordes del portaobjetos por 1 mm aproximadamente. 2 Una extensión normal ha de tener una longitud de las ¾ partes del portaobjetos. UTILIDAD DE LAS EXTENSIONES. El estudio de las extensiones sanguíneas es esencial para el análisis morfológico de las células hemáticas, para la realización del recuento diferencial leucocitario (RDL) y también es útil para investigar la presencia de hemoparásitos. La investigación de las extensiones también es útil para la comprobación de las alarmas que proporcionan los autoanalizadores hematológicos Material necesario Una lanceta de aplicación manual o automática Algodón humedecidos con alcohol (torundas) 2 portaobjetos limpios y libres de grasa. Uno de ellos puede ser normal y el otro ha de ser, preferentemente. esmerilado y biselado (el porta extensor). Para mantener limpios los portas, se deben seguir las siguientes indicaciones: Un rotulador de vidrio, lápiz o marcador. Reactivos Un desinfectante: alcohol etílico (etanol) de 70°, o mejor aún, solución alcohólica de povidona yodada. Solución fijadora para el frotis Colorantes adecuados para la tinción de células sanguíneas Muestra Sangre capilar no anti coagulada o sangre venosa adecuadamente anticoagulada. La forma correcta de extraer sangre capilar es la siguiente: Técnica: Elegir el cuarto dedo de una de las manos (anular). Desinfectar el pulpejo del dedo seleccionado con un algodón embebido en un desinfectante apropiado. Dejar que el desinfectante se evapore. Con una lanceta, pinchar firme y rápidamente una cara lateral de este pulpejo. Tras lo anterior con un algodón seco retiramos la primera gota emitida. Presionamos el extremo del dedo, a nivel del lado opuesto al de la punción, hasta obtener la cantidad de sangre deseada que se coloca en el extremo del portaobjetos en el que se va a extender la gota, a unos 2 o 3 cm de uno de los extremos y este se coloca en una superficie plana y lisa. 3 Con el borde de otro portaobjeto, con el que se toca la gota de sangre, la cual se desliza por capilaridad a todo lo largo del canto de dicho portaobjeto y con un movimiento rápido y uniforme, en un ángulo de 45 grados se desliza el portaobjetos dejando una capa de sangre en la superficie del otro. El porta con el que se hace la extensión debe deslizarse bien colocado y lo más perfectamente aplicado en su borde contra el otro porta sobre el que se hace la extensión. Sólo debe pasarse una vez, de forma continua e ininterrumpida. Es conveniente realizar dos o tres extensiones, con el fin de seleccionar para la tinción la mejor lograda. Las extensiones o frotis deben secarse al aire lo más rápidamente posible. La desecación se facilita con movimiento en forma de abanico, nunca soplando o por calor. La rápida desecación evita la deformación de los glóbulos sanguíneos. El espesor del extendido debe ser delgado. Ya seco y fijado, someterlo al proceso de tinción que se esté empleando* Ya sea Wright, Leishman, Giemsa o la técnica de hemocolorante rápido. 4 Frotis de acabado defectuoso. El frotis teñido y seco esta listo para su escrutinio en el microscopio. Observar con objetivo de 40X Se recomienda emplear el objetivo de inmersión para poder observar detalladamente las características de las células observadas. 5 REPORTAR: Características de los polimorfonucleares, linfocitos, eosinófilos, monocitos, eritrocitos y plaquetas. Dibujar o fotografiar cada una de las células indicadas. 6
