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XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
“Caracterización de la secuencia genética codificante de la subunidad β-5 del
proteasoma 20S en el camarón blanco Litopenaeus vannamei”
Martí David Wilson Verdugo. Universidad de Sonora. wilson__md@hotmail.com. Adriana Muhlia
Almazán. Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo. amuhlia@ciad.mx
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.
En la actualidad, el conocimiento que se tiene de las proteínas del camarón blanco
Litopenaeus vannamei es escaso, esto a pesar de que el camarón forma parte una
industria pesquera y acuícola que resulta relevante en México y el mundo.
El proteasoma 20S es un complejo proteico encontrado en todas las células eucariotas
encargado de la degradación de proteínas marcadas con ubiquitina. La molécula central
20S del complejo proteasoma está formada por dos anillos exteriores constituidos por
siete subunidades α y por dos anillos interiores formados por siete subunidades β. Se
sabe
que
las
subunidades
β-1,
β-2
y
β-5
son
catalíticas.
Este trabajo tiene como objetivo la caracterización de la secuencia de ARN mensajero
que codifica a la subunidad β-5 en el proteasoma 20S del camarón blanco Litopenaeus
vannamei mediante el análisis y comparación de marcadores de secuencias expresadas
(ESTs) de camarón blanco depositados en la Penaeus Genome Database (PAGE) y
secuencias ya caracterizadas de la subunidad β-5 de otras especies.
METODOLOGÍA.
Se disectó el hepatopáncreas de un camarón blanco y se aisló su ARN total, mismo que
se cuantificó mediante espectrofotometría y se le comprobó su integridad mediante una
electroforesis en gel de agarosa al 1%. Después se eliminó el ADNg contaminante de la
muestra por medio de un kit de limpieza con desoxirribonucleasas. Por último se
sintetizó ADNc por medio de transcripción reversa usando “GoScript™ Reverse
Transcriptase kit”.
La secuencia putativa de la subunidad β-5 fue identificada mediante el diseño de
oligonucleótidos específicos para amplificarla por PCR convencional utilizando como
templado ADNc de hepatopáncreas del camarón. Al producto amplificado de 370 pares
de bases se purificó y se mandó secuenciar a la Universidad de Arizona. La secuencia
nucleotídica obtenida se analizó mediante el algoritmo Blast y se alineó con el programa
Clustal. La secuencia deducida de aminoácidos se obtuvo utilizando el software Expasy.
CONCLUSIONES.
Los resultados demuestran que el producto de PCR secuenciado tiene una cadena de
nucleótidos idéntica en un 98% a la secuencia putativa de los marcadores de secuencias
expresadas (ESTs), por lo que se puede deducir que ésta es la secuencia que codifica
para la subunidad β-5 del proteasoma 20S en el camarón blanco Litopenaeus vannamei.
© Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del Pacífico
Agosto 2014