Subido por Jose

Inmunodiagnostico

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Inmunodiagnóstico y
serología
Dr. Camilo Larrazabal Reyes
Departamento de Ciencias Veterinarias y Salud Pública
Facultad de recursos naturales
Universidad Católica de Temuco
Antígenos y anticuerpos
Antígeno → Cualquier sustancia exógena que pueda unirse a receptores
específicos de linfocitos y así desencadenar una respuesta inmune adaptativa.
Hapteno → Molécula (normalmente de tamaño pequeño) no inmunogénica por
si sola → pueden unirse a otras moléculas y ↑ antigenicidad.
Tamaño
Estabilidad
Antigenicidad
Complejidad
“Foreignness”
Antígenos y anticuerpos
Anticuerpo → Inmunoglobulina sintetizada bajo la exposición a un antígeno, la
que puede unirse específicamente a este.
Reconocen un área específica del antígeno denominada epítope
Todos los anticuerpos se originan desde los receptores de antígenos de
linfocitos B (BCR)
Tipos de anticuerpos:
• IgM
• IgG (esquema)
• IgA
• IgE
• IgD
Antígenos y anticuerpos
Anticuerpo policlonal:
• Anticuerpos aislados tras la inoculación sucesiva de un antígeno a un
animal (ej. Conejo, ratón, cabra).
• Estimulación del sistema inmune genera diferentes clones de linfocitos B
(proceso de expansión clonal) → diferentes “formas” de anticuerpo con
variable especificidad hacia el antígeno.
• Anticuerpos policlonales tienen menor costo, y son menos específicos
Anticuerpo monoclonal:
• Anticuerpos aislados desde cultivo celular → mieloma (célula neoplásica
productora de anticuerpos) fusionada con poblaciones de células
plasmáticas (linfocitos B).
• Clones seleccionados producen la misma “forma” de anticuerpo con
especificidad similar hacia el antígeno.
• Anticuerpos monoclonales tienen mayor costo y son mas específicos
Antígenos y anticuerpos
Anticuerpo policlonal (expansión clonal):
Antígenos y anticuerpos
Anticuerpo monoclonal:
Introducción
Respuestas inmunes pueden usarse de dos formas:
• Uso de anticuerpos para detectar antígenos → determinar infecciones u
otras moléculas reconocidas por anticuerpos.
• Uso de antígenos para detectar anticuerpos → determinar exposición de
un animal a una determinada infección y/o caracterizar el nivel de
respuesta humoral/tiempo desde la exposición.
Tipos de técnicas inmunodiagnosticas:
• Pruebas de unión primaria (ej. ELISA)
• Pruebas de unión secundaria (ej. Precipitación
complemento, inhibición de hemaglutinación)
en
gel,
• Pruebas in vivo (ej. Seroneutralización in vivo, anafilaxis cutánea)
fijación
Pruebas de unión primaria
Se basan en permitir la unión de el antígeno con el anticuerpo y luego medir
los complejos Ag-At
Ejemplos importantes son:
• Inmunofluorescencia
• ELISA
• Radioinmunoensayos
• Westen blot
• Inmunocromatografía
Inmunofluorescencia
• Se basa en el uso de anticuerpos conjugados a moléculas fluorescentes
(ej. FITC).
• Una vez unidos a un antígeno, puede observarse un marcaje fluorescente
en un microscopio de epifluoresencia.
• Se puede usar para determinar presencia de microrganismos en muestras
de origen animal → M. avium subs paratuberculosis en heces, Virus de
rabia en cerebros de animales infectados.
• Permite caracterizar señales en una localización determinada.
• Se puede determinar títulos de anticuerpo de forma indirecta mediante
diluciones seriadas (IFAT).
• IF directa vs IF indirecta.
• Requiere equipos especializados (desventaja)
Inmunofluorescencia
Inmunofluorescencia Directa
Inmunofluorescencia Indirecta
Inmunohistoquímica
Técnica con principio similar a la inmunofluorescencia
Permite la identificación de antígenos
histológicos→ localización de la señal!
(principalmente)
Usos amplios→ desde diagnostico hasta investigación
en
cortes
ELISA
Enzyme Linked Immunoabsorbent Assay
Corresponde a una de las técnicas mas comunes y usadas para detectar y/o
cuantificar anticuerpos específicos.
Generalmente realizado en placa de 96 pocillos → múltiples muestras
procesadas al mismo tiempo.
Técnica presenta diferentes modificaciones:
• ELISA Sandwich → permite detectar antígenos
• ELISA competitivo → permite detectar haptenos o antígenos (mas rápido
y sensible) → señal es inversamente proporcional a cantidad de antigeno
Principio básico → anticuerpo secundario se encuentra unido a una enzima
→ adición de un cromógeno (sustancia de color) → cambio de color
dependiente a la cantidad de enzima presente en el pocillo.
ELISA
ELISA
ELISA Sandwich
ELISA Competitivo
Radioinmunoensayo
Principio similar a ELISA → en lugar de enzima, se usa un radioisótopo →
detección permite mucha mayor sensibilidad.
Uso de Radioinmuno para detección de antígenos
frecuentemente usado para la cuantificación de hormonas.
Requiere uso de equipo especializado y personal entrenado.
(competitivo)→
Inmunocromatografía
• Técnica
basada
en
interacción
Ag-Ac,
caracterizada
por
alta
simpleza
y
rápida
interpretación.
• Se basa en la incorporación
de antígenos que difunden
de forma pasiva por una
banda porosa, dejando una
marca (azul o violeta) de
fácil lectura.
• Múltiples test disponibles en
medicina veterinaria
Inmunocromatografía
Ejemplo inmunocromatografía → test Covid
Western blot
Técnica clásica de biología celular y molecular
Permite la identificación y cuantificación de proteínas con alta sensibilidad
analítica
Su importancia diagnostica se basa en la identificación de antígenos de un
peso molecular específico:
• Antígenos generados para ELISA normalmente son aislados de patógenos
in vitro → diferentes antígenos con diferentes implicancias diagnosticas
• Separación de antígenos por peso molecular permite diferenciar antígenos
mas relevantes para el diagnostico de una enfermedad
Técnica relativamente compleja que requiere equipo especifico y personal
mas calificado
Western blot
Western blot
Ejemplo: detección de diferentes antígenos de N. caninum en sueros fetales bovinos
Inmunodiagnóstico y
serología
Dr. Camilo Larrazabal Reyes
Departamento de Ciencias Veterinarias y Salud Pública
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