M M M O M O N G O N G Ó N N O G D O MEEEM MO ORRRIIIAAA PPPRRRIIIM MEEERRR CCCO ON NG GRRREEESSSO O EEESSSTTTAAATTTAAALLL “““LLLAAA IIIN NVVVEEESSSTTTIIIG GAAACCCIIIÓ ÓN N EEEN N EEELLL PPPO OSSSG GRRRAAAD DO O ESTABLECIMIENTO DE LA CINÉTICA DE CRECIMIENTO DE RAÍCES TRANSFORMADAS DE Lycopersicum esculentum var. RÍO FUEGO POR MEDIO DE UN SISTEMA DE INFECCIÓN CON A. RHIZOGENES EN UN BIORREACTOR AIR-LIFT. NILTON HERNÁNDEZ BARNUM, JORGE M. ALFÉREZ CHÁVEZ, JUAN JÁUREGUI RINCÓN Departamento de Ingeniería Bioquímica, Universidad Autónoma de Aguascalientes. ANTECEDENTES El cultivo de células y tejidos es un medio potencial de producir compuestos útiles de las plantas a parte de la agricultura tradicional, con todos los problemas que acarrea y sus variables que la circundan. El uso de A. rhizogenes recientemente recibe atención en la búsqueda de metabolitos secun-darios. (Flores, H.E 1986, Shimomura, K. 1986). La aplicación biotecnológica de cultivo de raíces pilosas es prometedora por un número de razones: (1) estable, altos niveles de producción; (2) crecimiento rápido independiente del uso de auxinas; y (3) la susceptibilidad para adaptarse a sistemas de un fermentador. Es, además una de las técnicas más factible desde un punto de vista industrial. Los biorreactores han sido utilizados para el cultivo de raíces pilosas y principalmente para la obtención de metabolitos secundarios (Rodríguez-Mendiola et al., 1991; Flores 1995). Se ha reportado que una columna de biorreactor air-lift es superior para el cultivo de raíces, en el que se utilizó una espuma de poliuretano en forma de retícula como un soporte apropiado tanto para el crecimiento como para la distribución de las raíces (Taya et al. 1989). OBJETIVOS Establecer la cinética de crecimiento de raíces transformadas; con Agrobacterium rhizogenes cepa A4pESC4, de jitomate (Lycopersicum esculentum) en biorreactor air-lift con malla perforada a dos VVM; 0.1 y 0.5, y comparar resultados con los obtenidos en el crecimiento de raíces normales. MATERIALES Y MÉTODOS Se utilizaron explantes de cotiledón e hipocótilo (4 a 5cm) de Lycoperscum esculenlentum germinadas in vitro en medio MS (75%) (Murashige & Skoog; 1962) un periodo de 11-13 días en luz continua; posteriormente se realizaron 4 incisiones por explante, colocándose en una disolución de medio MS con una suspensión de A. rhizogenes 10% y 0.3135mL L-1 de acetosiringona 200 mM por 30 min.; cocultivándose en medio MS con gelificante PTC® por 96 h. Después se colocaron los explantes en mismo medio con antibióticos kanamicina (750μL L-1) y PPM® 0.5% por 5 días; se colocan los explantes en medio con PPM® (20 mL L1 ) para eliminar a la bacteria con 4 lavados con agua destilada por 14 días. Se pasó las raíces a matraces con medio MS al 50% con 1% de PPM para desarrollo de biomasa. La detección de los genes foráneos se llevó a cabo por el método creado por Stomp (1992) para GUS y PCR para gen nptII y vir D1 por medio de The Extract-N-AmpTM Plant PCR Kit y el Extract-N-Amp Reagent Kit marca Sigma®. Ya obtenido el inóculo suficiente (13g aprox.)inocular el biorreactor. Medir conductividad eléc-trica (mS cm-1) del medio y determinar biomasa en base seca y húmeda, durante 30 días cada 3er. día. RESULTADOS (PARCIALES) Se logró la transformación genética de Lycopersicum esculentum y se logró la elimi-nación casi total de la bacteria; y actualmente se está verificando un buen crecimiento de las raíces transformadas en matraz. CONCLUSIONES (PARCIALES) Se ha refinado la técnica de transformación genética para esta especie y con la cepa de A. rhizogenes utilizada; con lo cual se ha visto que es posible obtener la cantidad suficiente de raíces transformadas para así obtener el inóculo necesario para el cultivo en biorreactor. BIBLIOGRAFÍA -Flores HE, 1995. Root culture and plant natural products: “unearthing” the hidden half of plant metabolism. Plant Tissue Culture Biotech. 1: 59-74. -Rodriguez-Mendiola, M.A., A. Stafford, R. Cresswell, C. Arias-Castro. 1991. Bioreactors for growth of plants roots. Enzyme Microbiol. Technol. 13: 697-702. -Shimomura, K. et al. 1986. 5th Int'l Cong. of Plant Tissue and Cell Culture. Univ. of Minnesota. Pp:250. -Taya M, Yoyama A, Kondo O, Kobayashi T (1989) J Chem Eng Jpn 22:84.